植物油DNA的高效提取方法研究

合集下载

提取植物DNA方法

提取植物DNA方法

提取植物DNA方法植物DNA的提取方法是将植物细胞中的DNA分离出来,以便进行进一步的研究。

以下是常用的植物DNA提取方法:1. CTAB法:CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)是一种表面活性剂,可以溶解脂质,破坏细胞膜,从而释放DNA。

首先,将植物样品粉碎,加入CTAB缓冲液中并进行润湿,然后加入蛋白酶,破坏细胞膜。

接下来,加入CTAB-蛋白酶混合液,室温静置,使DNA与CTAB结合。

之后,将混合液经过苯酚-氯仿提取,将DNA从其他组分中分离出来。

最后,使用异丙醇沉淀法将DNA沉淀,洗涤并溶解。

2. 硅胶柱法:硅胶柱法适用于小规模提取和纯化植物DNA。

首先,将植物样品粉碎,加入提取缓冲液中,并加入蛋白酶进行细胞壁降解。

接下来,将溶有脂质的提取液加载到硅胶柱上,使用重力流动分离DNA。

然后,使用洗涤缓冲液去除残余的污染物。

最后,使用低盐缓冲液将DNA从硅胶柱上洗脱,并收集纯化的DNA。

3. 高盐法:高盐法适用于粗提植物DNA。

首先,将植物样品细碎,加入高盐缓冲液中,其中含有高浓度的盐和蛋白酶。

高盐浓度可以破坏细胞膜,并使DNA 从蛋白质中解离出来。

然后,使用异丙醇沉淀法将DNA沉淀,洗涤并溶解。

4. 快速提取法:快速提取法是一种高效和便捷的方式,适用于大规模提取植物DNA。

首先,将植物样品经过快速研磨处理,将DNA释放到提取缓冲液中。

然后,使用聚乙二醇或盐酸沉淀方法使DNA沉淀,然后洗涤并溶解。

这些方法在植物科学研究中被广泛使用。

在选择提取方法时,需要考虑样品量、样品类型、实验目的和所需纯度等因素。

植物DNA的提取方法的选择也可以根据实验室设备和研究经验进行调整,以获得满意的结果。

需要注意的是,植物样品在提取DNA之前需要进行适当的贮存和处理。

样品应在低温下保存,以保持DNA的完整性。

此外,处理样品时要避免污染和酶解,以确保提取的DNA质量。

植物基因组dna的提取实验报告

植物基因组dna的提取实验报告

植物基因组dna的提取实验报告植物基因组DNA的提取实验报告。

植物基因组DNA的提取是分子生物学研究中的重要步骤,本实验旨在通过提取植物细胞中的DNA,为后续的PCR扩增、基因克隆、基因组测序等实验打下基础。

本报告将详细介绍植物基因组DNA提取的实验步骤、方法和结果。

实验材料和仪器。

1. 实验材料,植物叶片样品、液氮、细胞裂解缓冲液、蛋白酶K、异丙醇、等离子体膜、异丙醇沉淀液、乙醇、夹板、离心管、PCR管等。

2. 实验仪器,搅拌器、冰箱、冷冻离心机、显微镜、紫外可见分光光度计等。

实验步骤。

1. 取少量植物叶片样品置于液氮中,研磨成细碎的粉末状。

2. 将研磨好的植物叶片样品加入细胞裂解缓冲液,混合均匀后浸泡于65°C水浴中。

3. 加入蛋白酶K,继续65°C水浴裂解。

4. 加入等体积的异丙醇,轻轻摇晃离心管,使溶液混合均匀后放置于室温。

5. 加入等体积的等离子体膜,轻轻摇晃离心管,使溶液混合均匀后放置于室温。

6. 加入等体积的异丙醇沉淀液,轻轻摇晃离心管,使溶液混合均匀后放置于室温。

7. 将混合液转移至PCR管中,加入等体积的乙醇,轻轻摇晃离心管,使溶液混合均匀后放置于室温。

8. 离心沉淀后,弃上清液,加入70%乙醇洗涤。

9. 将洗涤后的DNA溶解于TE缓冲液中,用紫外可见分光光度计检测DNA浓度和纯度。

实验结果。

通过上述步骤,成功提取了植物基因组DNA,并进行了浓度和纯度的检测。

实验结果显示,提取的DNA浓度为120 ng/μl,纯度(A260/A280)为1.8,符合后续实验的要求。

结论。

本实验通过简单、快速、高效的方法成功提取了植物基因组DNA,为后续的分子生物学实验提供了可靠的基础。

通过本实验,我们对植物基因组DNA的提取过程有了更深入的了解,为今后的科研工作积累了宝贵的经验。

总结。

植物基因组DNA的提取是分子生物学研究中的重要步骤,本实验通过简单、快速、高效的方法成功提取了植物基因组DNA,并进行了浓度和纯度的检测。

一种有效的油脂DNA的提取方法

一种有效的油脂DNA的提取方法
大豆中转基因成分的定性pcr检测方法2003改良ctab法和高盐低ph法提取花生dna的效果期刊论文花生学报200203从大豆食用油中提取用于转基因成分检测的dna的方法20057dellaportawoodhicks采用sds法提取植物基因组dna2007pcr法检测食品和动物饲料中的转基因成分期刊论文卫生研究200506pcrelisa方法在转基因大豆检测中的应用期刊论文大豆通报200601pcr定性检测转基因大豆的探讨期刊论文职业与健康20070711
联, 使得黏度有所 升高。
经剪 切时 间为 1 i 0mn以及更 长时 间处理后 的样
品溶液 , 静置一段时间后 其黏度变化波动不大 。 这说 明 在 1 0 m n 750d i 剪切 1 i 0mn以上时, 薜荔籽果胶分 子链 发生 较高程度 的断裂, 剪切时间越长 , 果胶分子 降解程 度越大。 但是 由于断裂后的较小分子 之间不足以更高一 级的构象 , 静置后黏度几乎不发生变化 。当经过 3 i 0m n 处理后溶 液表现为牛顿流体 , 果胶降解程度达到最大。
1 在相 同剪切 时间 5 n 01 ) ,. %的薜荔 籽果胶 溶 mi 液 的黏度 随剪切速度 的增 大而减小 。 当剪切转速小 于
【 段翰英. 蕉果酱 的加工工艺及其流变性质的变化【 】 5 】 香 D. 华南农业 大学硕士学位论文 ,0 2 20
油脂经过多道 加工工序后 ,倩 (98 )女 ( )硕士研究生 , 17一 , 汉 , 讲师 , 究方向 : 研 食 品生物技术。
之油脂对 于很多 D A提取试 剂呈不溶性 , N 因此油脂 中 D A的提取 非常困难l N ‘ 1 。同时 , 对于成 品油的转基 因成 分检测 方法 , 无论定性还 是定量 , 大都需 要 D A, N 因此 籽果胶溶液 的黏度随剪切时间 的延长而减小 。剪 切时 间为 2 n时 , mi 果胶 即发生降解 。剪 切时间越长 , 果胶

植物DNA提取实验方案

植物DNA提取实验方案

植物DNA提取实验方案一、实验目的本实验旨在通过提取植物组织中的DNA,了解DNA的结构和功能,学习DNA提取技术。

二、实验原理DNA提取实验基于DNA的特性进行,主要包括以下几个步骤:1.组织破碎:通过物理或化学方法将植物组织破碎,使DNA暴露出来。

2.细胞溶解:使用细胞溶解液使细胞膜破裂,释放DNA。

3.蛋白质消化:加入蛋白酶等物质,将DNA周围的蛋白质降解。

4.DNA沉淀:通过加入乙醇等溶剂,使DNA沉淀。

5.洗涤和纯化:通过洗涤和纯化步骤去除杂质。

6.分析和测定:利用凝胶电泳等技术对提取得到的DNA进行分析和测定。

三、实验材料1.植物材料(如香蕉、草莓等)2.液氮或冰块3.细胞溶解液(如PBS缓冲液、CTAB溶液等)4.蛋白酶K溶液5.乙醇6.盐溶液7. DNase-free水8.1.5mL离心管9.离心机10.电磁振荡器11.热水浴12.紫外分光光度计四、实验步骤1.将所需植物材料切碎,放入离心管中。

2.将离心管放入液氮或冰块中,立即研磨材料,直至完全破碎。

3.加入适量的细胞溶解液,如PBS缓冲液,将混合物混合均匀。

4.将混合物置于电磁振荡器中,振荡5分钟。

5.加入适量的蛋白酶K溶液,混合均匀。

6.将离心管置于热水浴中,温度为55℃,孵育1小时。

7.加入相同体积的酒精,轻轻摇匀离心管,将DNA沉淀。

9.倒出上清液,加入适量的盐溶液,轻轻摇匀离心管,使DNA残留在离心管底部。

10.使用离心机将离心管离心,离心条件同上,离心10分钟。

11.倒出上清液,加入适量的乙醇,轻轻摇匀离心管,使DNA沉淀。

12.使用离心机将离心管离心,离心条件同上,离心10分钟。

13.倒出上清液,加入适量的盐溶液,轻轻摇匀离心管,使DNA残留在离心管底部。

14.使用离心机将离心管离心,离心条件同上,离心10分钟。

15. 倒出上清液,用DNase-free水洗涤DNA三次,每次离心5分钟。

16. 将离心管中的DNA溶解于适量的DNase-free水中。

植物dna提取实验报告

植物dna提取实验报告

植物dna提取实验报告
植物DNA提取实验报告。

实验目的,通过本实验,掌握植物DNA提取的方法,了解DNA的结构和性质,培养实验操作技能。

实验材料与方法:
1. 实验材料,新鲜的植物叶片样本、浸泡液(含有盐、洗涤剂和酒精)、离心管、试管、离心机、冰箱等。

2. 实验步骤:
a. 取一片新鲜的植物叶片,放入离心管中;
b. 加入适量的浸泡液,用玻璃棒捣碎叶片,使细胞破裂,释放DNA;
c. 将离心管放入离心机中,进行离心,使DNA沉淀于离心管底部;
d. 倒掉上清液,加入酒精,轻轻摇晃离心管,观察DNA的沉淀。

实验结果与分析:
通过实验操作,我们成功地从植物叶片中提取到了DNA。

在浸泡液的作用下,叶片细胞破裂,释放出DNA,经过离心和酒精沉淀,我们观察到了白色的DNA
沉淀物。

这表明我们的提取方法是成功的。

实验结论:
通过本次实验,我们掌握了植物DNA提取的方法,了解了DNA的结构和性质。

在实验过程中,我们也培养了实验操作的技能,提高了对实验操作的熟练度。

实验注意事项:
1. 实验中需要注意卫生和安全,避免污染样本和实验环境;
2. 实验操作要细心,避免操作失误导致实验失败;
3. 实验后要及时清理实验台和器材,保持实验环境整洁。

实验改进方向:
在今后的实验中,我们可以尝试不同的提取方法,比较不同方法的提取效果,找出更加高效的提取方法。

通过本次实验,我们对植物DNA提取有了更深入的了解,也为今后的实验操作积累了经验。

希望通过不断的实验实践,我们能够更好地掌握实验技能,为科研工作打下坚实的基础。

一种快速、 便提取大豆油 DNA 的方法及转基因大豆油的检测 简

一种快速、 便提取大豆油 DNA 的方法及转基因大豆油的检测 简
摘要:【目的】DNA 的提取是 GMO(Genetically modified organism)作物检测中重要步骤,DNA 的质量关 系到 GMO 检测的成败。【方法】本研究以大豆油为材料,探索出一种快速、简便的提取大豆油 DNA 的方法。【结 果】该方法能从 10 ml 大豆油中提取 0.4 μg 高纯度 DNA,可用于 PCR 检测。提取市场上出售的十几种精练大豆 油的 DNA, 针对 35S、Nos、EPSPS 和 Lectin 基因进行了 PCR 检测,分别扩增出不同的目的片段。【结论】大豆 油中有残存的 DNA 碎片,在转基因大豆油中能扩增出外源基因的片段。本研究为大豆油的外源基因的检测提供了 可行方法。
min,(94℃30 s,62℃30 s,72℃30 s)×35 个循环, 72℃10 min。
2 结果与分析
2.1 大豆油 DNA 的提取方法 目前国内外的 GMO 提取试剂盒都不能从油中提
取 DNA,本研究经反复试验,开发出离心柱法提取精 炼大豆油 DNA 的试剂盒,已从 10 ml 油中提取出 0.4 μg DNA。人工手提法也能在 500 ml 油中提取 0.4 μg DNA。
1 材料与方法
1.1 材料 市售的大豆色拉油,品牌有:北鹰(2001-5-15)、
红 灯 ( 2001-7-12 ) 、 金 龙 鱼 ( 2001-6-12 ) 、 元 宝
(2001-9-3)、火鸟(2001-10-9)、绿宝(2001-8-4)、 四海(2001-8-27)、福临门(2001-7-11)、大满贯 (2001-7-19)、贝特力(2001-7-27)。中昌转基因大 豆油作为阳性对照。 1.2 试剂
收稿日期:2005-10-20;接受日期:2006-11-28 基金项目:国家“863”计划资助项目 2001AA212311 和 2004AA212222 作者简介:程红梅(1967-),女,河南信阳人,研究员,博士,研究方向为棉花抗病基因工程及转基因生物安全性研究。Tel:010-62130148;010-

食用植物油DNA提取和检测研究进展

食用植物油DNA提取和检测研究进展

食用植物油DNA提取和检测研究进展王鸣秋S李诗瑶S刘艳S杨硕S马弋1,高冰2*(1.湖北省食品质量安全监督检验研究院,湖北武汉430000;2.湖北工业大学轻工学部,湖北武汉430000)摘要:基于DNA的食用油检测技术广泛应用于掺假检测、转基因检测、品种溯源鉴定等领域,但食用植物油的DNA提取技术一直 是其应用和发展的瓶颈。

该文对常用食用植物油的DNA提取方法和检测技术研究进展进行了综述,探讨了各技术的优势和缺陷以 及食用植物油DNA检测的未来发展方向,以期为开展后续研究提供思路。

关键词:食用植物油;DNA提取;DNA检测技术;研究进展中图分类号:TS227 文章编号:0254-5071 (2018)05-0005-05 doi:10.11882/j.issn.0254-5071.2018.05.002Research progress o f DNA extraction and detection for edible vegetable oilsWANG Mingqiu1, LI Shiyao1, LIU Yan1, YANG Shuo1, MA Yi1, GAO Bing2*(l.H ubei Provincial Institute for Food Supervision and Test,Wuhan 430000, China;2.Department o f L ight Industry,Hubei University o f Technology,Wuhan 430000, China)Abstract:The detection technique of edible vegetable oil based on DNA was widely used in the field of adulteration detection, genetically modified detection and identification of cultivars traceability. However, the technique of DNA extraction was the bottleneck of its application and development. This review summarized the research progress of DNA extraction methods and detection techniques which were commonly used in edible vegetable oils. Furthermore, the advantages and disadvantages as well as its future development were discussed, so as to provide ideas for follow-up research.Key words:edible vegetable oil; DNA extraction; DNA detection technique; research progress随着我国对食用植物油日益增长的消费需求,其产品 呈现多样化、层次化和细分化的局面,市场上流通各种植 物油品类,包括大豆油、花生油、芝麻油、玉米油、菜籽油、葵花籽油、橄榄油、植物调和油等[1]。

植物油DNA提取和基因检测研究进展

植物油DNA提取和基因检测研究进展

植物油DNA提取和基因检测研究进展齐玲倩;刘秀;丁梦璇;刘远远;柯润辉;尹建军【摘要】Methods for gene detection have been widely used in the authentication and GMO detection for vegetable oils because of their rapidity, efficiency, sensitivity and accuracy. While, as for vegetable oils, the low quantity and integrity of DNA caused by being refined increase the difficulties of DNA extraction and gene detection. In this paper, we review the progress of DNA extraction and gene detection for vegetable oils and make some respect for their future , so as to provide theoretical reference for the researchers in some degree.%基因检测方法以其快速、高效、灵敏、准确的特点而广泛应用在植物油真实性和转基因成分鉴定中。

但植物油大都经过精制加工,DNA含量极少且完整度低,这对植物油的基因提取和检测造成了极大的困扰。

本文对植物油DNA提取和基因检测进展进行了综述,并对以后的发展进行了展望,以期为研究者提供一定的理论参考。

【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2016(000)001【总页数】5页(P220-224)【关键词】植物油;DNA提取;基因检测【作者】齐玲倩;刘秀;丁梦璇;刘远远;柯润辉;尹建军【作者单位】中国食品发酵工业研究院,北京100015;中国食品发酵工业研究院,北京100015;中国食品发酵工业研究院,北京100015;中国食品发酵工业研究院,北京100015;中国食品发酵工业研究院,北京100015;中国食品发酵工业研究院,北京100015【正文语种】中文植物油是人类日常生活的重要组成部分,但是近年来植物油市场出现了较多的掺假植物油和转基因植物油,例如掺杂大豆油、棕榈油的花生油,掺杂榛子油、杏仁油、玉米油的橄榄油和转基因大豆油,转基因菜籽油等[1-2],这严重损害了消费者的利益,侵犯了消费者的知情权和选择权。

茶籽油DNA提取方法的比较

茶籽油DNA提取方法的比较
Ke y wor ds: a li i; x r ci n o c mela o l e ta to fDNA ;e l— tme P ra i CR
油茶 籽是 中国特 有 的一 种 木 本 带壳 油 料 , 脂 其 肪酸组 成 、 化 特 性 、 养 价 值 和 生 理 功 效 等 接 近 理 营 “ 物油 皇 后 ” —橄 榄 油 , 有 预 防 心 血 管 硬 化 、 植 — 具
Ab t a t A e meho o x r ci g DNA r m d b e o lwa sa ls e y c mp rn e e a t s r c : n w t d fr e ta tn fo e i l i s e tb ih d b o a i g s v r lmeh— o s, i e DNA n e i l i h d t e f au e o o c n e t s o tfa me ta e n e iu l sry d. d snc i d b e ol a h e t r fl w o t n , h r r g n nd b i g s ro syde to e Th RNAL u c ud b ee t d i h d be olb he r a et e o l e d t ce n t e e i l i y t e l—t i PCR t o Re u t h we h tt e me me h d. s lss o d t a h i r v d meh d c u d e ta tDNA n h g rc n e ta d p rt o a e t o mp o e t o o l x r c i ihe o t n n u i c mp r d wih c mmo t o ss g e — y n meh d u g s t d i e o e n r p ts, i h c n b s d a h wh c a e u e st e PCR e lt o p o i e a smp e a d ef cie me h d frd tc t mp ae t r v d i l n fe tv t o o ee — tn ce c a i s s b tn e i d b e ol i g nu l i cd u sa c n e i l i.

一种快速高效的油茶叶片dna提取方法

一种快速高效的油茶叶片dna提取方法

一种快速高效的油茶叶片dna提取方法油茶是一种重要的经济和生态作物,其茶叶含有丰富的营养和药用成分。

研究油茶基因组和遗传变异对其品质和产量提高具有重要意义。

然而,油茶基因组研究的难点之一是高质量的DNA提取。

传统的油茶DNA提取方法通常需要使用大量的样品并耗时复杂。

为了克服这些问题,我们开发了一种快速高效的油茶叶片DNA提取方法。

该方法使用简单的化学试剂和标准实验操作步骤,可以在30分钟内获得高质量的DNA。

将0.1克油茶叶片切碎并放入离心管中,加入适量的CTAB提取缓冲液,混匀后在65℃下孵育30分钟。

接着,加入等体积的氯仿和混匀,离心后将上清液转移到新的离心管中,加入等体积的异丙醇,混匀后冷藏20分钟。

离心后将上清液丢弃,加入70%的乙醇洗涤,再次离心后将上清液丢弃。

将沉淀干燥后加入去离子水重溶即可得到高质量的DNA。

该方法具有简单、快速、高效的特点,可以有效地提高油茶基因组研究的效率。

- 1 -。

高效方式提取天然植物精油的研究与应用

高效方式提取天然植物精油的研究与应用

高效方式提取天然植物精油的研究与应用天然植物精油是一种具有广泛应用价值的天然产物,具有丰富的活性成分和独特的香气特性。

提取天然植物精油的研究及其应用方面一直备受关注,对于高效提取天然植物精油的方法与技术的研究对于进一步挖掘植物资源的活性成分、优化提取工艺、提高提取效率等方面具有重要意义。

一、传统提取方法1. 蒸馏法:蒸馏法是目前最常用的提取天然植物精油的方法之一。

其基本原理是利用水蒸气将精油从植物中分离出来。

这种方法提取精油的效率相对较高,但也存在一些问题,如提取时间长、设备复杂、能耗较高等。

2. 溶剂提取法:溶剂提取法是通过有机溶剂将植物中的精油溶解出来再蒸发溶剂得到精油。

这种方法相对于蒸馏法来说,提取效率较高,但需要使用有机溶剂,对环境有一定影响。

二、新型高效提取方法1. 超临界流体提取法:超临界流体提取法是在高压和高温下,利用超临界流体(如二氧化碳)对植物进行提取。

这种方法具有提取效率高、对活性成分的损伤小、操作简便等优点,被广泛应用于天然植物精油的提取。

2. 微波提取法:微波提取法是利用微波对植物材料进行加热,促使其中的活性物质迅速释放,然后通过水蒸气将其分离。

这种方法具有提取速度快、能耗低、操作简便等优点,被广泛应用于天然植物精油的提取。

三、高效提取的应用1. 医药领域:天然植物精油中含有大量的活性成分,在医药领域中可以应用于中药研究、新药开发等方面。

例如,薰衣草精油可以用于缓解焦虑和失眠,薄荷精油可以用于缓解头痛和消化不良等。

2. 食品工业:天然植物精油可以用作食品添加剂,为食品赋予特殊的香气和味道。

例如,柠檬精油可以用于制作柠檬味食品,香草精油可以用于制作香草味食品等。

3. 化妆品工业:天然植物精油具有丰富的活性成分和独特的香气特性,被广泛应用于化妆品工业中。

例如,玫瑰精油可以用于护肤品中,薰衣草精油可以用于沐浴露和洗发水中等。

总之,高效提取天然植物精油的研究与应用对于挖掘植物资源潜力、优化提取工艺、提高提取效率以及应用于医药、食品和化妆品等领域具有重要意义。

植物DNA提取方法总结

植物DNA提取方法总结

植物DNA的提取分离技术摘要:主要介绍了近年来国内外几种常用的DNA提取方法:CTAB法、SDS法等,并在对其进行了简单的归纳总结与比较分析同时,并介绍了一些新的改良方法和其他植物提取方法关键词:植物DNA 提取方法研究进展市售中药材大多为干品,而中药材的加工和贮藏整个过程,如日晒、高温烘干等都不利于DN的完整性, 为达到要求目前国内外研究发现并使用的DNA提取方法有很多[1-12],其中被最为广泛应用的DNA提取方法是传统的CTAB法和SDS法[13]。

由于不同植物的材料组分和干湿程度各异,因此对不同植物DNA的提取存在着不同的效果。

目前许多学者都在致力于研究不同的植物DNA提取方法。

他们在探索新方法的同时,也针对不同的植物,在传统的提取方法上进行着一些新的改良。

1.十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法在目前众多的DNA提取方法中,CTAB法是其中最为广泛应用的一种。

它既可以裂解细胞,又可以有效地去除多酚类和多糖类物质的沉淀,因而经常被应用于植物的DNA提取工作中。

1.1方法及原理CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。

在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB 与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸。

通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。

1.2 CTAB提取缓冲液的经典配方Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏;EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性;NaCl 提供一个高盐环境,使DNP 充分溶解,在于液相中; CTAB溶解细胞膜,并结合核酸,使核酸便于分离。

β-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物,能与多酚形成一种不溶的络合物质,有效去除多酚,减少DNA中酚的污染;同时它也能和多糖结合,有效去除多糖。

油脂DNA的提取方法

油脂DNA的提取方法

油脂DNA的提取方法人工手提法一、试剂植物油;PBS缓冲溶液:NaC1(138mmo1/L ),KCI(2.7 mmo1/L ),Na2HPO4(10 mmo1/L ),NaH2PO4 (1.8 mmo1/L ) ;正己烷,硫酸铵溶液,酚,氯仿,无水乙醇。

二、仪器磁力搅拌器,离心机。

三、步骤1.500 ml精炼植物油加入500ml正己烷,在磁力搅拌器中充分混匀,4 h;2.加入1000ml PBS缓冲溶液在磁力搅拌器中充分混匀,6 h;3.12O00xg离心20 min,小心取出下层水相.加入(NH4)2SO4沉淀过夜。

12O00xg离心20 min,保留沉淀;4.在沉淀中加入800 μl水,充分溶解沉淀后,加入等体积的酚和氯仿抽提,12 O00xg离心10 min,取上清,加入二倍体积的无水乙醇,4 摄氏度20 min,12 000xg离心10min,保留沉淀,自然风干后,加50μl的水溶解沉淀,4摄氏度保存备用。

离心柱法一、试剂植物油,异丙醇;PBS缓冲溶液:NaC1(138mmo1/L ),KCI(2.7 mmo1/L ),Na2HPO4(10 mmo1/L ),NaH2PO4 (1.8 mmo1/L ) ;二、仪器磁力搅拌器,离心机,离心柱。

三、步骤1、取10m1精炼植物油加入10m1正己烷,在磁力搅拌器中充分混匀,2 h;2、加入20 ml PBS在磁力搅拌器中充分混匀,2~3 h;3、12 O00xg离心20min,小心取出下层水相;4、加入等体积的异丙醇,混匀,常温置lOmin后,12 000×g离心10 min,去上清,保留沉淀;5、加入1 ml H2O溶解沉淀,加入1 ml异丙醇,混匀,常温置10 min 后,12 000×g离心10 min,去上清,保留沉淀;6、在沉淀中加入60μl水,充分溶解沉淀,5 min后过离心柱,分别加入配套试剂,最后离心获得的溶液即得DNA。

多种.植物总DNA提取方法及详细步骤

多种.植物总DNA提取方法及详细步骤

植物总DNA提取一、常用方法改良CTAB法(改良自精编分子生物学实验指南,原蓝猪耳实验方案,拟采用)植物基因工程,王关林,2002 SDS法(植物基因工程,王关林,2002)高盐低pH值法(邹喻萍,植物学报,1994)材料预处理:从野外采集的新鲜叶片若比较衰老,运回后可放在4℃的黑暗中饥饿1~2d,以消耗淀粉和其他多糖。

材料预处理:从野外采集的新鲜叶片若比较衰老,运回后可放在4℃的黑暗中饥饿1~2d,以消耗淀粉和其他多糖。

材料预处理:从野外采集的新鲜叶片若比较衰老,运回后可放在4℃的黑暗中饥饿1~2d,以消耗淀粉和其他多糖。

材料预处理:从野外采集的新鲜叶片若比较衰老,运回后可放在4℃的黑暗中饥饿1~2d,以消耗淀粉和其他多糖。

试剂:(1)2-巯基乙醇(2-ME)(2)CTAB抽提液(3)CTAB/ NaCl溶液(4)24:1(V/V)氯仿/异戊醇(5)CTAB沉淀液(6)高盐TE缓冲液(7)70%乙醇(8)TE缓冲液试剂:(1)2×CTAB提取缓冲液试剂:(1)提取缓冲液:100mmol/LTris·Cl(pH8.0)、50mmol/LEDTA(pH8.0)、500 mmol/LNaCl、10 mmol/L 2-巯基乙醇(2-ME)(2)10% SDS(3)5mol/L KAC试剂:(3)提取缓冲液:100mmol/LNaAC(pH 4.8)、50 mmol/LEDTA(pH 8.0)、500 mmol/LNaCl、1.4%SDS,此种介质刚好为pH 5.5。

(4) 2.5mol/L KAc(pH 4.8)操作:(1)称取样品0.2g,去除表面的DNA污染,置于研钵中与液氮共研成细粉。

(2)将冻粉转入2ml离心管中,立即加入1000µl(980+20)预热至65℃的CTAB抽提操作:(1)2ml离心管中加入1ml提取缓冲液,65℃预热。

(2)取0.2g新鲜幼嫩叶片,于液氮中迅速研磨成粉。

《植物总DNA的提取》课件

《植物总DNA的提取》课件
生物技术应用
植物总DNA的提取也是植物生物技术应用的基础,如基因克隆、基因编辑、基因 转化和基因表达分析等。通过对植物总DNA的提取和操作,可以实现植物遗传改 良和新品种的培育,推动农业生产的可持续发展。
植物总DNA提取的应用
遗传资源保护
通过对不同植物种类的基因组分析,可以了解植物的遗传多 样性和进化关系,为植物种质资源的保护和利用提供科学依 据。同时,通过基因组学的研究,可以实现濒危植物的保护 和复壮。
废弃物处理
实验结束后,应将使用过的废弃物按照规定分类 处理,避免对环境造成污染。
防火防爆
远离火源和易燃物品,避免使用明火,存放和使 用易燃易爆试剂时需特别小心。
实验操作注意事项
试剂配制
严格按照试剂盒说明书或指导手册配制试剂,避免浓度和比例错误 导致实验失败。
样品处理
植物样品需新鲜且无菌,避免样品中存在杂质和微生物污染,影响 DNA提取质量。
使用酸性或碱性溶液使细胞膜破裂,释放出细胞内 的DNA。
离心分离
将破碎后的细胞悬浮液进行离心,使细胞碎 片和DNA沉降,上清液中的其他成分如蛋 白质和RNA得以去除。
DNA的沉淀与洗涤
盐析法
向离心后的上清液中加入高盐溶液,使 DNA沉淀析出。
VS
乙醇沉淀法
在上清液中加入无水乙醇,使DNA沉淀 析出。洗涤沉淀以去除残留的盐分和其他 杂质。
植物总DNA提取的步骤
植物材料的准备
选择适当的植物组织
根据实验需求选择适合的植物组织, 如叶片、根、茎等。确保植物材料新 鲜且无污染。
清洗与剪切
将植物材料清洗干净,剪切成适当大 小的组织块,以便后续操作。
细胞破碎与分离
物理破碎法
使用研磨棒、玻璃珠或匀浆器等工具破碎细 胞,释放出细胞内的DNA。

植物油DNA的高效提取方法

植物油DNA的高效提取方法

T logy科技工艺技术近年来,食品安全问题越来越得到社会各界的关注与重视,尤其是人们每天接触的食用植物油。

近年来,转基因原料滥用、原料掺假、地沟油违法使用等方面的问题频发,在鉴定检测中,就逐渐突显出分子生物学检测的重要作用。

检测食用植物油的DNA时,首要工作是将其中的DNA提取出来。

然而,由于食用植物油生产加工过程中采用的工艺使其中的核酸发了生严重降解,DNA 含量极低,再加上混杂多种其他成分,更增加了DNA提取的难度。

尽管国内外提出了众多提取食用植物油DNA的方法,但大多操作繁琐、提取效率低、无法实现通用。

所以,积极构建能够避免这些问题的高效提取方法,在实际检测过程中是急需解决的问题。

1 植物油DNA高效提取方法概述近年来,掺假植物油、转基因作物制成的植物油较多出现在消费市场中。

植物油掺假不仅会影响消费者的身体健康,而且也会严重损害及侵犯消费者的利益及权利。

2015年,颁布实施的《食品安全法》更加要求所有以转基因产品为原料生产加工的食品必须在包装上有明确的标识[1]。

基于此种现状,本文以非转基因大豆、转基因大豆、市售食用植物油为研究材料,分析硅膜吸附柱法对提高植物油DNA的提取效果的可行性。

本文使用的非转基因大豆、转基因大豆均来源于农科院;食用植物油购买于超市中,共涉及5个品牌11种产品,其中分别为深海鱼油调和油(转基因)、谷维多稻米油、食用调和油(转基因)、菜籽油(转基因与非转基因2种)、天然谷物调和油(转基因)、一级大豆油(转基因)、压榨玉米油(非转基因)、一级大豆油(转基因)、食用调和油(转基因)和有机压榨大豆油(非转基因)。

1.1 提取方法利用硅膜吸附柱法提取植物油DNA 过程中,使用的试剂主要包含CTAB缓冲液、MgSO4、TE缓冲液、70%乙醇和Taqman DNA聚合酶等;利用离心柱、水浴锅、电泳设备等实验仪器开展。

将1 mL食用植物油、400 μL TE缓冲液共同加入1.5 mL离心管中,经5 min颠倒混匀后,室温下12 000r/min离心1 min。

食用植物油中DNA提取和基因检测研究进展

食用植物油中DNA提取和基因检测研究进展
植物油中 D N A的不 同提取 方 法和基 因检 测 方法进 行 综述 , 对 比 了各 种 方 法 的优 缺 点 , 展 望 了该领
域 的发 展趋 势 。
关 键词 : 食 用植 物 油 ; 食 品安全 ; D N A提 取 ; 基 因检 测 中图分 类号 : T S 2 2 7 文献标 识码 : A 文章 编号 : 1 0 0 7— 7 5 6 1 ( 2 0 1 7 ) 0 6— 0 0 5 0— 0 6
Gr o u p, Z be n g z h o u He na n 4 5 00 0 3;
2 . C o l l e g e o f L i f e S c i e n c e , H e n a n A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y , Z h e n g z h o u He n a n 4 5 0 0 0 2 )
e d i b l e v e g e t a b l e o i l , wh i c h w a s a c c u r a t e, r a p i d, s i mp l e o p e r a t i o n a n d h i g h s e n s i t i v i t y . Ho w t o e x t r a c t h i g h
Re s e a r c h p r o g r e s s o f DNA e x t r a c t i o n a nd g e ne d e t e c t i o n i n e d i bl e v e g e t a bl e o i l
WU Q i o n g . S O N G A n—d o n g ( 1 . C e n t r a l P l a i n s A g i r c u l t u r a l P r o d u c t s &F o o d T e s t i n g ( H e n a n ) C o . , L t d , C h i n a C e r t i i f c a t i o n& I n s p e c t i o n

植物油DNA的高效提取方法研究

植物油DNA的高效提取方法研究

检测分析植物油DNA 的高效提取方法研究蔡翠霞,肖维威,吴慧慧,周琳华,吴永彬,耿启斌,马文丽( 南方医科大学基因工程研究所,广州510515)摘要: 针对植物油中DNA 含量极低、DNA 序列片段短、破坏严重的特点,以食用植物油为原料,旨在建立一种从植物油中稳定、高效提取DNA 的方法。

实验采用硅膜吸附柱法提取植物油基因组DNA,PCR扩增其相应内源基因进行质量鉴定,再针对通用的外源基因CaMV35S 启动子进行PCR、LAMP 和实时荧光PCR检测对该方法进行评价。

结果表明: 该方法提取的DNA 质量可靠,采用PCR、LAMP 和实时荧光PCR技术成功地检测出了植物油中的CaMV35S 启动子。

因此,硅膜吸附柱法提取的植物油DNA 可以作为PCR、LAMP、实时荧光PCR扩增模板用于转基因成分的检测,该方法经济、稳定、安全,为植物油的基因检测奠定了基础。

关键词: 植物油; DNA 提取; 转基因检测中图分类号: TS225〃1; TQ646文献标志码: A文章编号: 1003 - 7969( 2014) 01 - 0069 - 04 High efficient extraction of DNA from plant oilCAI Cuixia,XIAO Weiwei,WU Huihui,ZHOU Linhua,WU Yongbin,GENG Qibin,MA Wenli( Institute of Genetic E ngineering,Southern Medical University,Guangzhou 510515,China) Abstract: According to the features of low content,short sequence fragment and serious destruction of DNA in plant oil,a stable and high efficient extraction m ethod of DNA from edible plant oil was estab-lished〃 DNA was extracted from plant oils using silicon film adsorption column method,and the endoge-nous genes in the DNA were amplificated by PCR to identify DNA quality,then the exogenous gene pro-moter CaMV35S was detected by PCR,LAMP and real -time fluorescent PCR to evaluate themethod〃The results showed that the DNA extracted by the method had reliable quality and it wassuccessful to de-tect the promoter CaMV35S by PCR,LAMP and real -time fluorescent PCR〃The DNA extracted from plant oil by the method could be used as the am plif ication template of PCR,LA MP and real -time fluo-rescent PCR for genetically modified ingredients detection〃The method had items of stableness,effective-ness and safety which could provide the f oundation for plant oil gene detection〃Key words: plant oil; DNA extraction; transgene detection自20 世纪80 年代世界第一例转基因作物诞生以来,转基因作物在提高产量、改良品质、抗逆能力等方面越来越显示出巨大作用[1],但是由于转基因作物存在的安全性问题使得转基因产品的标签问题成为公众关注的热点[2]。

植物油DNA 提取和基因检测的研究进展

植物油DNA 提取和基因检测的研究进展
1.2 提取方法
植物油 DNA 提取中,常用方法包括十二烷基磺 酸钠(SDS)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)等。 SDS 是一种阴离子去污剂,可在高温下,促使细胞裂 解和蛋白质变性,结合蛋白质、糖类等形成多重物, 分离 DNA 和其他成分。可提升盐浓度,降低温度,以 降低 SDS 多重物溶解度,沉淀多糖、蛋白质,进而纯 化 DNA。SDS 方法是当前提取 DNA 常用的方法之一, 操作简单,成本较低,提取 DNA 完整性较好。CTAB 是一种阳离子去污剂,也可和 DNA 形成多重物。在高 盐浓度下,多重物溶解,低盐浓度下,溶解度降低, 产生沉淀,多糖、蛋白质仍在溶液中溶解,采取离心 操作,分离多糖、蛋白质与 DNA 多重物,进而纯化 DNA,将 CTAB 去除得到 DNA[3]。CTAB 在裂解液中 作为主要成分,能够对细胞裂解,并将杂质成分去除。 对裂解液成分优化,能够提高植物油 DNA 提取效率。
46 / 现代食品 XIANDAISHIPIN
Copyright©博看网 . All Rights Reserved.
Food Science and Technology 食品科技
DNA 提取的不同方法中,主要差异存在于裂解、纯化 等过程,可以对裂解、纯化方法加以优化,进而使植 物油 DNA 提取效率提升。不同于其他物质,植物油属 于高度深加工纯化产品,含有较高的油脂类物质,严 重破坏 DNA,并大幅降低含量。所以,植物油 DNA 提取中,使用乳化法等方法在裂解前需要做好前处理, 将其中油类物质去除,将更多残留 DNA 分离出。
◎ 李晓萌 (沈阳食品检验所微生物检验室,辽宁 沈阳 110000)
Li Xiaomeng (Microbiological Laboratory of Shenyang Food Inspection Institute, Shenyang 110000, China)
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
相关文档
最新文档