纤溶系统之组织型纤溶酶原活化剂t-PA介绍
血浆纤溶酶原激活物抑制剂—1、组织型纤溶酶激活物在胃癌侵袭与转移中的作用
血浆纤溶酶原激活物抑制剂—1、组织型纤溶酶激活物在胃癌侵袭与转移中的作用目的：对血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）与组织型纤溶酶激活物（t-PA）在胃癌侵袭与转移中的作用进行研究。
方法：选取28例胃癌患者设为病例组，另选取同期25例健康体检者设为对照组，采用酶联免疫吸附法检测上述检测者血浆标本PAI-1和t-PA含量。
结果：病例组血浆PAI-1含量明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.005）；t-PA含量高于对照组，但差异无统计学意义（P>0.05）。
胃癌患者血浆PAI-1含量在Ⅲ期明显高于Ⅳ期，差异有统计学意义（P＜0.05）；而血浆t-PA含量与胃癌TNM分期无关。
血浆PAI-1含量在有淋巴结转移患者中最高，无淋巴结转移患者中次之，在正常对照组中最低，三者之间差异有统计学意义（P＜0.05），说明血浆PAI-1含量与胃癌淋巴结转移相关，并随着淋巴结转移的产生而增高。
血浆t-PA含量在三者之间比较差异无统计学意义（P>0.05），说明血浆t-PA含量与胃癌淋巴结转移无关。
结论：PAI-1在胃癌的侵袭和转移中起重要的促进作用，PAI-1可以成为胃癌诊断和预后估计的指标。
标签：胃癌；纤溶酶原激活物抑制剂-1；组织型纤溶酶激活物胃癌是世界上最高发病肿瘤之一，胃癌转移是肿瘤最重要的恶性特征，也是导致肿瘤患者死亡的最主要原因[1]。
目前相关研究认为恶性肿瘤侵袭转移与纤溶活力密切相关[2]。
纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）是纤溶酶原活化系统的特异、快速的抑制物，具有多种生物学功能，参与细胞的迁移、黏附及侵袭过程，组织型纤溶酶原激活物（t-PA）是来源于血管内皮细胞的纤溶系统的主要激活剂。
国内研究表明，PAI-1浓度与结肠癌[3]、子宫内膜癌[4]、肺癌[5]密切相关。
本研究检测胃癌患者血浆PAI-1和t-PA含量，分析以上各项指标与胃癌侵袭、转移的关系，为临床判断预后、指导治疗提供依据，现报道如下。
纤溶亢进
纤溶亢进血液凝固过程中形成的纤维蛋白被分解液化的过程，叫纤维蛋白溶解[现象] fibrinolysis（简称纤溶）。
纤溶活性异常增强,即称为纤溶亢进。
纤溶亢进又分为原发性和继发性两类。
1概念原发性纤溶亢进：是由于纤溶酶原激活剂(t-PA、u-PA)增多导致纤溶酶活性增强，后者降解血浆中纤维蛋白原和多种凝血因子，使它们的血浆水平和活性下降。
临床表现常见于t-PA、u-PA增多的疾病。
原发性纤溶亢进症时，纤维蛋白原在没有大量转化成纤维蛋白之前即被降解，D-二聚体为阴性或不升高。
继发性纤溶亢进症，如血栓性疾病、DIC等，由于疾病前期凝血机制增强，纤维蛋白大量生成，继而引起纤溶亢进，因此D—二聚体阳性或显著升高。
血浆D-二聚体这是纤维蛋白降解后的特异性产物，测定血浆D-二聚体可以判断纤维蛋白是否已经生成，从而为鉴别原发性和继发性纤溶亢进症提供重要依据。
定性试验：阴性定量试验：<400μg/L。
纤溶的激活物（纤溶酶原和纤维蛋白溶解酶即纤溶酶）和抑制物以及纤溶的一系列酶促反应，总称为纤溶系统。
血浆中抑制纤维蛋白溶解的物质统称为纤溶抑制物。
它们存在于血浆、组织及各种体液中。
根据其作用可分为两类：一类是抑制纤溶酶原激活，称为抗活化素；另一类是抑制纤溶酶的作用，称为抗纤溶酶。
目前，临床上已广泛应用的止血药，如凝血酸、止血芳酸和6-氨基己酸等，就是抑制纤溶酶生成及其作用的药物。
在正常情况下，血液中的抗纤溶酶的含量高于纤溶酶的含量，因而纤溶酶的作用不易发挥。
但在血管受损发生血凝块或血栓后，由于纤维蛋白能吸附纤溶酶原和激活物而不吸附抑制物，因而纤溶酶大量形成和发挥作用，使血凝块或血栓发生溶解液化。
2纤溶系统组成及特性（1）组织型纤溶酶原激活物（t-PA）：t-PA是一种丝氨酸蛋白酶，由血管内皮细胞合成。
t-PA激活纤溶酶原，此过程主要在纤维蛋白上进行。
（2）尿激酶型纤溶酶原激活物（U-PA）：u-PA由肾小管上皮细胞和血管内皮细胞产生。
生物制药论文-组织型纤溶酶原激活剂
1引言（或绪论）组织型纤溶酶原激活剂(Tissue Type Plasminogen Activator, t-PA)激活纤溶酶原形成纤溶酶，是体内纤溶系统的生理性激动剂，在人体纤溶和凝血的平衡调节中发挥着关键性的作用，是一种新型的血栓溶解剂。
t-PA在组织和体液中含量甚微，分子量很大，从天然组织提取或人工合成药用t-PA均有很大难度。
本实验运用基因工程手法，从人胎盘染色体基因库中筛选出TPA基因，将其雨质粒结合，导入到人黑色素瘤细胞当中，组建能够表达t-PA基因的工程细胞。
然后将人黑色素瘤细胞无血清连续培养，并运用高效诱导剂，从而快速、大量地获得了含组织型纤溶酶原激活剂(tPA)水平较高的培液。
经免疫亲和层析、Sephadex G-150凝胶过滤，培液中t-PA得以快速有效地纯化。
将纯化后的tPA与WHO标tPA抗体作免疫鉴定。
2组织型纤溶酶原激活剂简述2.1组织型纤溶酶原激活剂原激活剂(PA)是以丝氨酸为活性中心的蛋白酶。
它能将纤溶酶原转化为纤溶酶，在纤溶系统中有重要作用。
同时，PA与细胞转移、血液凝固、组织重建、激欣产生及原发性肿瘤的发生等生理和病理生理现象有密切的关系。
人纤溶酶原激活荆有尿激酶型（uPA）及组织型(tPA)两种主要类型。
这两种蛋白质免疫性不同，分子量有区别，由不同的基因编码。
tPA主要是由血管内皮细胞合成的单链多肽，分子量约为68000，在纤溶酶或胰蛋白酶作用下，水解Arg275-Ilu276肽键，形成由二硫键连接的双链结构。
氨基末端在重链，羧基末端在轻链。
重链有两个三角区结构，并有与纤维结合素指形结构有同源性的区域和生长因子样区域等。
轻链含有由His(322)}、Asp（371）、Ser （478）组成的酶活性中心。
tPA对纤维蛋白原亲和力很低，对纤维蛋白亲和力极高,. tPA-纤维蛋白复合物能高效且特异地激活血凝块中的纤溶酶原，形成纤溶酶，后者溶解血栓中的纤维蛋白，但几乎不激活循环血液中的纤溶系统，因此，tPA是一种较为理想的血栓溶剂。
我国重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)在肺血栓栓塞(PTE)中的应用进展
我国重组组织型纤溶酶原激活剂（rt-PA）在肺血栓栓塞（PTE）中的应用进展摘要：本文对我国溶栓药物重组组织型纤溶酶原激活剂（rt-PA）在肺血栓栓塞（PTE）中的动物实验及临床应用进行综述，表明rt-PA在PTE治疗中具有重要作用及阐述我国对rt-PA的研究状态。
关键词：肺血栓栓塞症；重组组织型纤溶酶原激活剂肺血栓栓塞症（pulmonary thromboembolism，PTE）是指来自全身静脉系统或右心的内源性或外源性栓子阻塞肺动脉或其分支，引起肺循环和呼吸功能障碍的临床和病理生理综合征，占肺栓塞的绝大多数，是最常见的肺栓塞类型，通常所称的肺栓塞（PE）即指PTE。
①目前将PTE和DVT（深静脉血栓）统称为静脉血栓栓塞症（VTE）。
对于肺栓塞的流行病学资料至今仍然缺乏，根据Heit JA、Cohen AT、Anderson FA等的研究表明，全球每年确诊的肺血栓栓塞症和深静脉血栓形成人数约数百万人。
美国致死性和非致死症状性静脉血栓栓塞症发生例数每年超过90万，其中约29.64万例死亡，其余非致死性静脉血栓栓塞症包括37.64万例深静脉血栓形成和23.71万例肺血栓栓塞症；在致死性病例中，约60%的患者被漏诊，只有7%的患者得到及时与正确的诊断和治疗。
②我国目前缺乏肺栓塞准确的流行病学调查资料，但随着临床医师诊断意识的不断提高，肺动脉造影等诊断手段的提升，目前肺栓塞的诊断及治疗得到长足的发展。
目前肺栓塞已成为一种公认的常见血管疾病。
国外对重组组织型纤溶酶原激活剂（rt-PA）在肺血栓栓塞（PTE）中的应用相关研究及报道已经比较成熟：2003年Le Conte P、Huchet L等人公布了rt-PA治疗急性肺栓塞合并休克的临床研究，该结果证实rt-PA溶栓治疗血流动力学不稳定的急性大块肺栓塞可将死亡58.3%降至23.8%，且仅有少数发生轻微出血并发症。
③1992年Dalla-Volta S、Palla A等人开展一项rt-PA溶栓治疗与肝素抗凝治疗急性肺栓塞的比较研究，结果显示与常规肝素抗凝治疗相比，使用rt-PA溶栓能够明显改善肺栓塞患者的血流动力学和肺动脉造影结果，但是会导致出血时间延长及渗血状况。
纤维蛋白溶解系统
3. 附属物A、B、C、H ：
可延长活化部分凝血活酶时间及凝血酶时间
(1)纤溶酶原激活抑制物 （PAI）
作用：能特异抑制t-PA激活PLG;
主要有两种：PAI-1、 PAI-2
①纤溶酶原激活抑制物-1(PAI-1):
来源：由血管内皮细பைடு நூலகம்和血小板合成。
作用：与t-PA或U-PA形成复合物，使它们失去活性。
②纤溶酶原激活抑制物 -2（PAI-2）
作用：对t-PA的作用较PAI-1弱。
Fb(g)降解产物(FDPs),具有抗血液凝固的作用。 1. 碎片X(X’) 、Y(Y’)、D：
有一部分与纤维蛋白单体(FM)相似的部位，都
能与FM结合形成可溶性复合物，抑制FM聚合成
可溶性纤维蛋白(尤其是X’片段)，因而起抗凝作用。
纤维蛋白(原)降解产物的作用：
2. 碎片X(X’) 、Y(Y’)、 E(E’)：
纤溶过程：是一系列蛋白酶催化连锁反应，分为两个 阶段:
激活物激活
① PLG
PL
② PL水解Fb(g)及其他蛋白质(V、VIII、XIII等)
纤溶酶原激活的途径：
1.内激活途径：血循环中内源凝血途径中某些因子。 →是继发性纤溶的理论基础 2.外激活途径：主要指体内合成的某些激活物。
→是原发性纤溶的理论基础。
3.外源激活途径：主要指外界进入体内的某些药物。
→是溶栓治疗的理论基础。
外激活途径
sct-PA
PAI-1 PAI-2
内激活途径
scu-PA PK KK XIIa、 HMWK
tct-PA
tcu-PA
PL
t-PA简介
t-PA简介目录•1检查名称•2分类•3tPA的别名•4概述•5原理•6试剂o 6.1活性测定（tPA∶A，发色底物法之一）：o 6.2活性测定（tPA∶A发色底物法之二）：o 6.3抗原测定（tPA∶Ag）ELISA法：•7操作方法•8正常值•9临床意义•10附注这是一个重定向条目，共享了组织纤维溶酶原激活物的内容。
为方便阅读，下文中的组织纤维溶酶原激活物已经自动替换为tPA，可点此恢复原貌，或使用备注方式展现1检查名称tPA2分类临床血液检查/出血和凝血检查3tPA的别名组织纤维溶酶原激活物4概述组织纤溶酶原激活物是一种单链糖蛋白，主要由血管内皮细胞合成、分泌，不断释放入血液，广泛存在于机体的各种组织内，肝脏是组织纤溶酶原激活物灭活的主要场所。
它对纤维蛋白有高度亲和力，然后将酪氨酸纤溶酶原形成纤溶酶。
降解纤维蛋白（原）和部分凝血因子。
是纤溶系统的关键物质。
5原理（1）活性测定（组织纤维溶酶原激活物∶A，发色底物法之一）：血浆优球蛋白部分含有包括组织纤维溶酶原激活物以及全部凝血因子，但不含PA抑制物。
加入过量的纤溶酶原与纤维蛋白的共价物，样品中之组织纤维溶酶原激活物易吸附于纤维蛋白，并将血纤溶酶原转变成纤溶酶，后者使发色底物显色。
血浆tP组织纤维溶酶原激活物与显色的深浅呈正相关。
（2）活性测定（组织纤维溶酶原激活物∶A发色底物法之二）：在组织纤维溶酶原激活物和加速剂作用下，纤溶酶原转变为纤溶酶，后者使发色底物S2390释放出发色基团PNA。
PNA显色的深浅与纤溶酶和组织纤维溶酶原激活物呈正比关系。
（3）抗原测定（组织纤维溶酶原激活物∶Ag）ELISA法：本试验根据双抗体夹心法原理，即将纯化的组织纤维溶酶原激活物单克隆抗体包被在固相载体上温育，然后加含有抗原的待测标本。
标本中的组织纤维溶酶原激活物抗原与固相载体上的抗体形成复合物。
此复合物与过氧化物酶标记的组织纤维溶酶原激活物单克隆抗体起抗原抗体结合反应，形成组织纤维溶酶原激活物POD复合物。
重组人组织型纤溶酶原激活物使用说明
药品名称（包括商品名、通用名）
重组人组织型纤溶酶原激活物
用法用量
本品在使用前应先用附带的稀释剂临时配制，浓度为1mg/m1。也可用等量的生理盐水或5％葡萄糖液进一步稀释成认0.5mg/ml溶液。静脉输注：成人总量为100mg，开始第1小时静滴60mg（开始1～2min可先静注6～10mg），第2和第3小时再分别静滴20mg。如体重（65kg者，总量为L25mg/kg，按上述方法在3h内滴完。当剂量>150mg时，颅内出血的危险增加，不宜采用。用本品治疗的病人早期使用肝素并不能使梗塞的血管通畅，因此肝素的使用应推迟到本品治疗后90～120min。
药理作用
本品是通过基因重组技术生产的t-pA，天然组织型纤溶酶原激活物（t-PA）的性能相同，即能激活与纤维蛋白结合的纤溶酶原，使其转化为纤溶酶的作用比激活循环血液中纤溶酶原的作用大得多。主要作用是消化局部纤维蛋白凝块。
适应症
主耍用于发病6h以内的严重心肌梗死病人。
不良反应
本品不良反应较少，可有凝血障碍和出血、血细胞比容及血红蛋白降低：注射部位出血，偶见心律失常、体温升高。罕见血压下降、颅内出血、腹膜后出血、便血、血尿等。
制剂
粉针剂：20mg，50mg，分别附有稀释剂，注意有效期。
注意项
本品无抗原性，可重复给药。70岁以上老人、出血性疾病、近3个月患消化性溃疡者、2周内进行过手术、口服抗凝药者、主动脉瘤患者、高血压患者、近期内发生过中风等应禁用或慎用。大剂量长时间给予本品，可逆转血循环中的抑制机制，而致全身性纤维蛋白原溶解。用药期间应严密观察病人，一旦发生不良反应或意外，及时抢救处理。
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临床意义：
(1)活性测定(t-PA∶A，发色底物法 之一)： ①肝坏死常伴有纤溶活性的异常， 由于消除功能障碍，故t-PA∶A往往增高。 但同时由于PAI的活性增强故t-PA的活性 实际上是降低的。在DIC和伴有血栓形成 倾向的疾病往往有t-PA活性减低。冠心病 心肌梗死患者PA活性减低。 ②先天
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临床意义：
性t-PA活性增强已有报道。急性早幼粒细 胞白血病患者t-PA往往增高。 ③遗传性 PA活性缺乏为常染色体显性遗传。患者表 现为多发性静脉血栓形成。 (2)活性测定 (t-PA∶A发色底物法之二)： ①t-PA∶A 增高：表明纤溶活性亢进，见于原发性及 继发性纤溶症，如DIC等。 ②t-PA
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正常值：
(1)活性测定(t-PA∶A，发色底物法 之一)：0.3IU/ml。 (2)活性测定(tPA∶A发色底物法之二)： 1.9±0.7IU/ml。 (3)抗原测定(t-PA∶Ag)ELISA法： 1～ 12ng/ml。
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简介：
组织纤溶酶原激活物是一种单链糖蛋 白，主要由血管内皮细胞合成、分泌，不 断释放入血液，广泛存在于机体的各种组 织内，肝脏是组织纤溶酶原激活物灭活的 主要场所。它对纤维蛋白有高度亲和力， 然后将酪氨酸纤溶酶原形成纤溶酶。降解 纤维蛋白(原)和部分凝血因子。是纤溶系 统的关键物质。
人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体的研究现状及进展
１ ６０ ） １６ ０
摘要 ：人组织型纤溶酶原激活剂 （ Ｐ ）是 一种 高效特异 的溶血栓药物 ，但 天然 的 ｔＰ ｔＡ － — Ａ存在半衰期短 ，有潜在的引
起 颅内 ｍ的危 险等缺点 ，因而 限制 了它 的广泛应用 。世界各 国的科研人员利用 了分子设计 和基 因工程等技术 ，构 建了一 系列的 ｔＰ － Ａ突变体 ，旨在提高对纤维蛋 白的亲和力 ，延 长半 衰期 ，提高纤溶 效率 ，减少颅内出血 的危险。综 述 了 ｔＰ — Ａ的结构和功能 、对 ｔＰ － Ａ结构的改造 ，以及一系列 ｔＰ － Ａ突变体的研究现状及进展情况 。 关键 词 ：溶 栓 剂 ；基 因Ｔ 程 ；ｔＰ － Ａ突 变 体 ；表达
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第 ７期（ 总第 １２期） ４
２０ 年 ７月 ０８
农产 品加工 ・ 学刊
Ａｃｄ ｍｉ Ｐｒ ｄｃｌ ｆ ａｍ Ｐｏｕ ｔＰｏｅｓｎ ａｅ ｃ ｅｉ ｉａ ｏ ｒ ｒｄ ｃｓ ｒｃｓｉｇ ｏ 文章 编 号 ：１ ７— ６６（ ０ ８ ０ — １ １０ ６ １９ ４ ２０ ） ７ ０ ４ — ３
Ａ ｓ ａ ｔ Ｈｕ ｎｔ ｓ ｅ ｔｐ ｌｓ ｎ ｇ ｎａ ｔ ａｏ （－ Ａ） ｉ ａｍｅ ｉｉｅｕ ｅ ｎｔｒｍｂ ｌｔ ｒａｍｅ ｔ ｆｃｅ ｔ ． ｔ ａ ｐｉ ｂｔ ｃ： ｒ ｍａ ｉ ｕ —ｙ ｅｐａ ｍｉｏ ｅ ｃ ｖ ｔｒ ｔＰ ｓ ｉ ｓ ｄｃｎ ｓｄ ｉ ｈｏ ｏｙｉ ｔ ｔ ｎ ｉ ｉｎｌ Ｉ ｐ ｌ ｃ ｅ ｅ ｙ ｓ －
人组织型纤维溶酶激活剂(t-PA)英文说明书
Human t-PAFOR RESEARCH USE ONLYAssay range：0.2µg/L-8µg/L96determinationsPurposeThis kit allows for the determination of t-PA concentrations in Human serum,cell culture supernates and other biological fluidsPrinciple of the assayT he kit assay Human t-PA level in the sample，use Purified Human t-PA antibody to coat microtiter plate wells,make solid-phase antibody,then add t-PA to wells,Combined t-PA antibody which With HRP labeled,become antibody-antigen-enzyme-antibody complex,after washing Completely,Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed,reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of450nm.The concentration of Human t-PA in the samples is then determined by comparing the O.D.of the samples to the standard curve.Materials provided with the kit1wash solution20ml×1bottle7Stopp Solution6ml×1bottle 2HRP-Conjugate reagent6ml×1bottle8Standard（16µg/L）0.5ml×1bottle 3Microelisa stripplate12well×8strips9Standard diluent 1.5ml×1bottle 4Sample diluent6ml×1bottle10Instruction15Chromogen Solution A6ml×1bottle11Closure plate membrane26Chromogen Solution B6ml×1bottle12Sealed bags1 Specimen requirements1.extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevantliterature,and should be experiment as soon as possible after the extraction.If it can’t, specimen can be kept in-20℃to preserve,Avoid repeated freeze-thaw cycles.2.Can’t detect the sample which contain NaN3,because NaN3inhibits HRP active.Assay procedure1.Dilute and add sample:Dilute Original density Standard as follow table:8µg/L5Standard150µl Original density Standard+150µl Standard diluent4µg/L4Standard150µl5Standard+150µl Standard diluent2µg/L3Standard150µl4Standard+150µl Standard diluent1µg/L2Standard150µl3Standard+150µl Standard diluent0.5µg/L1Standard150µl2Standard+150µl Standard diluent2.add sample：Set blank wells separately(blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent,other each step operation is same).testing sample well.add standard50µl in the Microelisa stripplate accurately,add Sample dilution40µl to testing sample well,then add testing sample10µl(sample final dilution is5-fold),add sample to wells,don’t touch the well wall as far as possible,and Gently mix.3.Incubate:After closing plate with Closure plate membrane,incubate for30min at37℃.4.Configurate liquid:30-fold(or20-fold)wash solution diluted30-fold(or20-fold)with distilled water and reserve.5.washing：Uncover Closure plate membrane,discard Liquid,dry by swing,add washing buffer to every well,still for30s then drain,repeat5times,dry by pat.6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent50µl to each well,except blank well.7.incubate：Operation with3.8.washing：Operation with5.9.color：Add Chromogen Solution A50ul and Chromogen Solution B to each well,evade the light preservation for15min at37℃10.Stop the reaction：Add Stop Solution50µl to each well,Stop the reaction(the blue colorchange to yellow color).11.assay：take blank well as zero,Read absorbance at450nm after Adding Stop Solution andwithin15min.Steps descriptionStandard,Sample diluentcalculateCalculateTake the standard density as the horizontal,the OD value for the vertical,draw the standard curve on graph paper,Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve,multiplied by the dilution multiple,or calculate the straight lineregression equation of the standard curve with the standard density and the OD value,with the sample OD value in the equation,calculate the sample density,multiplied by the dilution factor, the result is the sample actual density.Important notes1.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced15-30minutes inthe room temperature,ELISA plates coated if has not use up after opened,the plate should be stored in Sealed bag.2.washing buffer will Crystallization separation,it can be heated the water helps dissolvewhen dilute.Washing does not affect the result.3.add Sample with sampler Each step,And proofread its accuracy frequently,avoids theexperimental error.add sample within5min,if the number of sample is much,recommend to use Volley.4.if the testing material content is excessively higher(The sample OD is bigger than the firststandard well),please dilute Sample(n-fold),Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.5.Closure plate membrane only limits the disposable use,to avoid cross-contamination.6.The substrate evade the light preservation.7.Please according to use instruction strictly,The test result determination must take themicrotiter plate reader as a standard.8.All samples,washing buffer and each kind of reject should according to infective materialprocess.9.Do not mix reagents with those from other lots.Storage and validity1．Storage：2-8℃.2．validity：six months。
t-pa基因-概述说明以及解释
t-pa基因-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分的内容：引言中的概述部分旨在介绍T-PA基因的背景和相关信息。
T-PA基因，全称为组织型纤溶酶原激活剂基因（tissue-type plasminogen activator gene），是编码相关蛋白质的基因。
该基因编码的蛋白质被称为t-PA，是一种能够将纤溶酶原激活为纤溶酶，参与并调节血液凝固与溶解的重要因子。
随着生物医学研究的深入，人们对T-PA基因的发现、结构、功能以及在疾病中的作用越来越感兴趣。
T-PA基因被广泛研究，通过了解这一基因的特点和功能，可以更好地理解其在血栓溶解、血管新生和其他疾病中的作用机制。
本文将分为引言、正文和结论三个部分。
引言部分将简要介绍T-PA 基因的概念、文章的结构以及研究目的。
正文将详细探讨T-PA基因的发现与作用、结构与功能，以及其在疾病中的作用。
结论部分将总结T-PA 基因的研究意义和应用前景。
通过深入研究T-PA基因，我们能够更好地认识和理解其在生物学和医学领域中的重要性，为相关疾病的预防、诊断和治疗提供更有效的策略和方法。
同时，我们也能够探索其在生物技术和药物研发方面的广阔应用前景。
本文旨在全面介绍T-PA基因及其相关领域研究的进展，为读者提供一个全面了解和掌握该基因的机会。
文章结构是指整篇文章的组织框架和布局方式。
一个良好的文章结构可以使读者更容易理解文章的内容和逻辑关系。
本文的文章结构如下：一、引言1.1 概述：介绍有关T-PA基因的背景和意义，以及其在医学及遗传学领域的重要性。
1.2 文章结构：本部分，将详细介绍文章的整体结构和各个章节的内容。
1.3 目的：说明本文的研究目的和意义。
二、正文2.1 T-PA基因的发现与作用：介绍T-PA基因的发现历程，以及其在机体内的作用机制。
2.2 T-PA基因的结构与功能：探讨T-PA基因的基因序列、氨基酸序列及其所编码的蛋白质的功能。
2.3 T-PA基因在疾病中的作用：详细描述T-PA基因在某些疾病中的变异与突变对相应疾病的影响及作用机制。
医院检验中心组织型纤溶酶原激活剂活性测定发色底物法
医院检验中心组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）活性测定（发色底物法）
（1）原理：
纤溶酶原———————→纤溶酶
t-PA ↓水解
释放
发色底物（S2251）→硝基苯胺（PNA）—405nm
（2）标本处理：
2ml血置于含200ul抗凝剂（0.109 mol/L枸橼酸钠）的硅化管或塑料管中，3000ｒpm离心×10分钟—立即取200ul血浆+等量酸化剂—混匀—置2-8℃（保存12小
时）；或置-20℃保存一个月
（3）方法：
标准品的制备：t-PA标准品用2.2ml稀释缓冲液溶解，然后再稀释100倍(取50ul，加稀缓冲液4950ul)此
时t-PA标准品活性为2.5×10-2IU/ml。
按下表加入到平底酶标板上。
（浓缓冲液，用24ml蒸馏水稀释）。
稀释血浆的制备：用缓冲液将经酸化的待测血浆再稀释15倍。
（50ul酸化血浆，加700ul稀缓冲液）。
发色底物的制备：用2ml稀缓冲液将发色底物、共价物、纤溶酶原混合溶解在一起。
以1号孔调零点,在酶标仪上测定各孔A405值
（4）数据处理：
以A405对t-PA标准品活性作标准曲线，待测样品t-PA活性可从标准曲线上查出乘以15，再乘以2，再乘以1.1。
t-PA活性(×10-2IU/ml) [正常值]
0.3～0.6IU/ml。
脑梗塞溶栓T-PA
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• 护送患者到CT室 • 确认CT扫描可以尽快完成 • 在监视器上看脑CT图像
问题7
Are there any abnormalities on this exam?
控制，出血性转化风险高。
tPA使用后的血压管理
• 积极控制血压于180/105以下。(较治 疗前入组标准低 5 mm Hg) • 对于不使用 tPA的患者，AHA建议
– 允许患者血压自动调节 – 只有当血压高于 220/120 时才使用降压
药物。
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• 2:10 pm 完成脑CT扫描（距发病 时间130 min) • 重复查体:
–岛叶皮层受累 –深部灰质幸免
• 早期缺血表现占 据MCA区2/3以上
脑CT的缺血早期征
Early Ischemic CT Signs
• 右侧苍白球低 密度 • 外侧裂闭合
• 岛叶“飘带” 结构消失
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患者来诊时的血压为200/95， 在急诊室安顿下来之后，再次 测量结果为180/90。
三个月后
• 独立行走 • 右手活动受限 • 非流利性失语：语速缓慢，部分 找词困难，但可以有效交流 • 他对你的治疗表示感谢
tPA适应症小结
• 缺血性脑卒中，发病≤3小时（4.5h） • 无外伤或大手术（2W）、GI或UI出血 （3W）、重度颅脑外伤／手术／脑卒 中（3M）、脑出血 • 症状无迅速改善（TIA?） • 发病时无抽搐（Todd’s Paralysis？）
Case continued
小鼠组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)酶联免疫分析试剂盒使
小鼠组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用预期应用ELISA法定量测定小鼠血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中t-PA含量。
实验原理组织型纤溶酶原激活物（tissue-type plasminogen activator,t-PA）是由血管内皮细胞合成并分泌的一种丝氨酸蛋白酶。
目前的研究表明，t-PA具有促进纤溶酶原转化为纤溶酶、使纤维蛋白降解而具有防治血栓病及血管移植术后血栓形成等作用;但还具有诱导细胞外基质降解及胶原酶原激活为胶原酶、促使血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC）的迁移与增殖。
本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中t-PA水平。
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入t-PA抗原、生物素化的抗小鼠t-PA抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的t-PA呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为10000pg/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成10000pg/mL，5000pg/mL，2500pg/mL，1250pg/mL，625pg/mL，312pg/mL，156pg/mL，其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0pg/mL，临用前15分钟内配制。
如配制5000pg/mL标准品：取0.5ml10000pg/mL的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3.样品稀释液：1×20ml/瓶。
人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)(1354-1802)的原核表达及抗血清制备
责任编辑
金苹
责任校对
李 岩
人 组 织 型 纤 溶 酶 原 激 活 剂 （－Ａ） １ ５ －８ ２ 的原 核 表 达 及 抗 血 清 制 备 ｔ Ｐ （ ３４ １０ ）
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关键词 ｔ Ａ； 核 表 达 ； 血 清 － 原 Ｐ 抗
中图分类号
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纤溶系统之组织型纤溶酶原活化剂t-PA介绍近年来，由于血栓性疾病的逐年上升，对溶栓药物的需求量逐年增加，使对溶栓药的研究成为热点，而又以对组织型纤溶酶原激活物（tPA）及其突变体、嵌合体的研究最多。
今天，我们就来一起了解一下什么是t-PA。
t-PA又称纤溶酶原激活因子，是体内纤溶系统的生理性激动剂，在人体纤溶和凝血的平衡调节中发挥着关键性的作用。
是人类血液中存在的两种纤溶酶原活化剂之一。
血浆中的浓度很低，但几乎所有的组织中都含有数量不等的t-PA，其中以子宫、肺、前列腺、卵巢、甲状腺和淋巴结中的含量最高，但肝中无t-PA。
t-PA合成部位
t-PA主要由内皮细胞合成，与血管性血友病因子vWF一起储存在Weibel-Palade小体中，其他细胞如单核细胞、巨核细胞、间皮细胞、肥大细胞、血管平滑肌细胞、心肌成纤维细胞、神经元也可合成t-PA。
许多
药物、物理因素及药物可影响t-PA产生。
下肢静脉流体静力压增高时，t-PA的产生减少。
t-PA的半衰期很短，只有5-7分钟，在血浆中很快被清除。
游离的
t-PA通过肝脏内皮细胞及肝巨噬细胞的甘露糖受体被清除，与纤溶酶原活化抑制物-1（PAI-l）结合的t-PA是通过肝细胞的低密度脂蛋白受体相关蛋白（LRP）清除。
雌激素可诱导甘露糖受体表达，增加t-PA的清除率。
t-PA基因及蛋白结构
t-PA位于8p11-pI2，全长32.7kb，含14个外显子和13个内含子，cDNA含2530bp。
成熟的t-PA是一种含527个氨基酸的糖蛋白，分子量约为68-72kD。
分泌至细胞外时，t-PA呈单链（sct-PA），但很容易被纤溶酶在精氨酸275-异亮氨酸276处水解，转化为由二硫键相连的双链t-PA（tct-PA）。
二者的结构虽发生转化，但均具有酶切活性。
二者生物学特征区别在于：
①单链t-PA与纤维蛋白之间的亲和力比双链高。
②双链t-PA的纤溶酶原激活能力比单链t-PA高10-50倍。
③双链t-PA被PAI-11灭活比单链快100倍。
tct-PA氨基端为重链，亦称为A链，竣基端称为轻链或B链。
重链依次含有指状结构（Fl）、上皮生长因子（EG）区及两个环饼状区（KRl和KR2），氨基端可以是甘氨酸或丝氨酸。
轻链是蛋白酶区，与其他丝氨酸蛋白酶有同源性（指状结构区，由6-43位氨基酸残基构成，此区的功能与t-PA和纤维蛋白结合有关。
尿激酶无此结构区，故与纤维蛋白不能结合。
如果用蛋白酶将t-PA氨基酸末端除去一个12kD的片段，则较野生型。