粗多糖提取
(完整版)粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法(1)1. 原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2. 适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。
（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
粗多糖的测定方法(2)5. 操作方法5.1 样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
Sevag法脱蛋白-多糖提取
《多糖提取（Sevag 法去蛋白）》
1、实验原理介绍：
Sevag 法是去除游离蛋白的有效方法。
在粗多糖溶液中加入氯仿—正丁醇混合溶液进行充分振摇,将游离蛋白变性成为不溶性物质,经离心分离去除,可达到去除的目的。
2、实验方法及步骤
具体操作可以按下述操作试一试：取粗多糖溶液4 ml ,氯仿—正丁醇(预先配制成体积比为4∶1 混合液) 溶液1 ml ,置于具塞试管中,充分振摇30 min 后,经离心机离心1 min ,然后将水相与氯仿相分开。
将水相再加入相当于其体积1/ 4 的氯仿—正丁醇溶液,重复上述过程,共计重复三次。
多糖溶液体积较大时也可以采用分液漏斗，人工进行剧烈振荡后直接分离，注意振荡强度与分离效率关系很大。
操作过程中蛋白质多出现在两相界面处。
3、实验结果及讨论
1、需要取上清液重复加入sevage试剂我重复了十一次每次振摇15分
在紫外测250－280没有吸收峰才可确定除净了蛋白。
2、Sevag 法较为温和，对多糖的结构影响不大，但效率较低，往往重复五次以上才能达到理想效果。
考虑较为剧烈但效率更高的三氯乙酸法除蛋白。
3、糖蛋白不是那么容易除干净的，通常大量取多糖溶液(5%)按，用三角瓶在摇床上摇2h再放离心管里离心，得到水层再重复,如果蛋白含量多的话,除一两个星期的.直到震荡后水层上不再有白色泡茉为止。
实验二芦荟粗多糖的提取汇总
②浸提液减压浓缩，用6 mol/L的盐酸调pH值3.2左右， 向经过调酸处理的芦荟凝胶浓缩汁中缓慢加入6倍量 的95%乙醇，边加边搅拌大约需要15~30 min，室温
下静置2 h，离心分离(2500 r/min，7 min)得多糖沉
淀。依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤，然后真空干燥，
最终得到的沉淀即为芦荟多糖粗品。
水提醇沉法原理？ 如何定量多糖的含量？
如何判断该化合物为多糖？
人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。
一般操作过程是：将中药水提液浓缩 至1︰2，药液放冷后，边搅拌边缓慢 加入乙醇使达规定含醇量，密闭冷藏 24～48h，滤过，滤液回收乙醇，得到 精制液。
操作时应注意以下问题：
①适当浓缩，以减少乙醇用量。控制浓缩程度，
过浓，有效成分易包裹于沉淀中而造成损失。②
浓缩液冷却后方可加入乙醇，以免乙醇受热挥发
或：减压浓缩至原来的1/3,向浓缩汁中缓慢加入6倍
体积冷的无水乙醇，边加边搅拌大约需要15~30 min，
室温下静置2 h，得粗多糖沉淀。
【注意事项】
加入乙醇沉淀多糖时要边加边搅拌，时间 要长一些; 注意仪器的规范使用；
实验结果与记录:
记录实验条件、过程和实验现象。
的包裹损失。
【实验材料、试剂与仪器】
试剂：无水乙醇。
烧杯、玻璃棒、小刀、纱布、量筒、电子 天平、高速冷冻离心机、旋转蒸发仪、真 空泵、水浴锅、组织匀浆机。
南瓜多糖提取方案
1.南瓜粗多糖的提取：准确称取100g 新鲜南瓜，加入200ml蒸馏水，在榨汁机中搅拌5min，置于烧杯，放入70℃恒温水浴中加热2h，搅拌提取多糖，然后抽虑，滤液80℃真空浓缩至固形物含量约30%，在浓缩液中加入5倍体积95%酒精搅拌均匀，冰箱放置过夜，离心得沉淀物。
沉淀物以水溶解重复醇析1次，然后将沉淀物用无水酒精、丙酮、乙醚洗涤，冷冻干燥得南瓜粗多糖。
2.Sevag法除蛋白质取粗多糖的样品，用蒸馏水溶解，按多糖水溶液体积的1/3-1/4加入氯仿：正丁醇（4：1）混合液剧烈震荡，离心分离30min，除蛋白质，反复操作5次，直至紫外光谱分析在蛋白质280nm和核酸260nm处无特征吸收峰，说明含氮物质已除去。
3. 南瓜多糖降糖组分的分离、纯化（三氯乙酸）将南瓜多糖粗品饱和溶解至0.1 mol/L 氯化钠溶液中,4 ℃放置24 小时,离心,弃去沉淀,滤液中加入40 %三氯乙酸使其终浓度达到10 % ,4 ℃冷藏24小时, 离心, 沉淀用0.1 mol/L NaCl 溶液溶解, 经Sepharose CL24B 柱层析,用0.1 mol/L 氯化钠溶液洗脱、分离,采用硫酸- 蒽酮法跟踪检测,收集含多糖的组分,再用0.1 mol/L NaOH 中和,将洗脱液适当浓缩,透析,用Sephadex A2200 柱层析分离、纯化, 用0.1 mol/L 氯化钠溶液洗脱(洗脱液流速: 0.55 mL/min) ,收集洗脱液,减压浓缩,冷冻干燥得白色粉末状南瓜多糖精品,测定其多糖含量。
4.南瓜多糖精品的纯度鉴定柱层析法将多糖精品溶解在0.05 mol/L磷酸缓冲液(PH=7.0 的PBS 2mol/l 的91.4ml磷酸一氢钠+8.6ml磷酸二氢钠为100mlPBS) 中, 质量浓度为0.3g/dL , 经用0.05 mol/L PBS 平衡后的Sephadex G2200 层析柱洗脱,体积流量为4.8 mL/h ,每管收集洗脱液2 mL ,硫酸- 苯酚法部分收集检测，分析多糖组分。
超声提取粗多糖的工艺流程
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灵芝粗多糖的提取工艺
灵芝粗多糖的提取工艺
灵芝多糖的提取工艺主要包括以下几个步骤：
1. 材料准备：选择新鲜的灵芝或者灵芝干燥品作为原料，将其进行切碎或研磨，以增加提取效果。
2. 提取溶剂的选择：常用的提取溶剂有水、乙醇、甲醇等。
具体选择溶剂需要根据灵芝多糖的性质和应用需求来确定。
3. 提取方法：常用的提取方法有水煮提取法、连续提取法、酸提取法、超声波提取法等。
不同的提取方法对灵芝多糖的提取效果有所差异。
4. 温度和时间控制：提取温度和时间对灵芝多糖的提取效果也有影响。
一般来说，较高的温度和较长的提取时间可提高灵芝多糖的提取率，但同时也可能损失一部分活性成分。
5. 过滤和浓缩：将提取好的液体进行过滤去杂质，然后使用浓缩设备，如旋转蒸发器、真空浓缩器等，将溶剂去除或浓缩。
6. 干燥和粉碎：将浓缩后的灵芝多糖进行干燥，使其转化为粉末或颗粒状。
7. 质量控制：对提取得到的灵芝多糖进行质量检测，包括测定灵芝多糖的含量、
分子量、结构等。
需要注意的是，提取灵芝多糖的工艺可以根据具体需要进行调整和改进。
不同的提取工艺可能会有不同的影响，因此在实际操作过程中，需要根据实际情况来选择适合的提取工艺。
实验二 芦荟粗多糖的提取
实验二芦荟粗多糖的提取一、实验目的1、掌握“水提醇沉”法提取多糖的原理和方法2、掌握高速冷冻离心机、旋转蒸发器等仪器的用法二、实验原理——“水提醇沉”三、95%乙醇“无水乙醇”、dH2O四、仪器及器皿烧杯、玻璃棒、小刀、量筒、纱布、电子天平、高速冷冻离心机五、步骤芦荟（约50g）洗净、去叶尖、叶底dH2O浸泡0.5h（除去黄色汁液）去表皮内层凝胶切成小片3倍体积dH2O、55o C 4~5h 双层纱布过滤上清液浓缩至原体积的1/3 6倍体积冷的无水乙醇（缓慢加入并不断搅拌15~30min，收集，2h 后沉淀物）六、作业1、描述实验步骤现象描述：洗净的芦荟浸泡后水中会有丝状的流体，且清水稍微变黄；切块后置于水浴加热后的块状芦荟部分融化变为絮状，用纱布过滤后留下清夜；用旋转蒸发仪浓缩后液体颜色变深，往浓缩液中加入6倍体积冷的无水乙醇后会有絮状沉淀产生，放置10min、20min、30min 后悔发现沉淀不断增加。
2、原理水提醇沉法是先以水为溶剂提取药材有效成分，再用不同浓度乙醇沉淀除去提取液中杂质的方法。
它是利用中药中的大多数成分易溶于水和醇的特性，用水提出，并将提取液浓缩，加入适当的乙醇或水反复数次沉降，除去其不溶解的物质，最后制得澄明的液体。
3、如何进行定量（1）精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖100mg于100mL容量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，作为对照品溶液。
此标准溶液1.0mL含葡萄糖1.0mg。
（2）精密量取该溶液0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL分别置于100mL容量瓶中，加蒸馏水定容，吸取上述溶液各2.0mL，再加入5％苯酚溶液1.0mL，摇匀。
迅速加入硫酸5.0mL，摇匀。
室温放置5min，90℃水浴加热15min，冷却至室温，以蒸馏水作参比，测定在波长490nm处的吸光度，得浓度（c）与吸光度（A）的线性回归方程。
（3）精密称取干燥至恒重的芦荟粗多糖10mg于100mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。
粗多糖的提取与纯化之脱色
2007-10-19 22:19:55 成大中药化学实验室 常用的方法有：离子交换法、氧化法（如H2O2氧化脱色，使用时应注意浓度不宜过高，否则引起多糖 的降解）、金属络合物法、吸附法（纤维素、硅藻土、活性炭等）。DEAE-纤维素（在纤维素与葡聚糖分子 上结合有一定的离子基团，当结合阳离子基团时，可换出阴离子，则称为阴离子交换剂。如二乙氨乙基 （Dicthylaminoethyl，DEAE）纤维素。在纤维素上结合了DEAE，含有带正电荷的阳离子纤维素－O－ C6H14N+H，它的反离子为阴离子（如Cl-等），可与带负电荷的多糖阴离子进行交换。当结合阴离子基团 时，可置换阳离子，称为阳离子交换剂，如羧甲基（Carboxymethy，CM）纤维素。纤维素分子上带有负电荷 的阴离子（纤维素－O－CH2－COO-），其反离子为阳离子（如Na+等）,可与带正电荷多糖阳离子进行交换。 在适当的盐浓度下，溶液的pH值高于等电点时，多糖或蛋白质被阴离子交换剂所吸附；当溶液的pH值低于等 电点时，多糖或蛋白质被阳离子交换剂所吸附。由于各种多糖或蛋白质所带的电荷不同。它们与交换剂的结 合程度也不同，只要溶液pH值发生改变，就会直接影响到蛋白质与交换剂的吸附，从而可能把不同的多糖或 蛋白质逐个分离开来。交换剂对胶体离子（如多糖）和无机盐离子（如NaCl）都具有交换吸附的能力，当两 者同时存在于一个层析过程中，则产生竞争性的交换吸附。当Cl-的浓度大时，多糖不容易被吸附，吸附后 也易于被洗脱，当Cl-浓度小时，多糖易被吸附，吸附后也不容易被洗脱。因此，在离子交换层析中，一般 采用两种方法达到分离蛋白质的目的。一种是增加洗脱液的离子强度，一种是改变洗脱液的pH值。pH值增高 时，抑制蛋白质阳离子化，随之对阳离子交换剂的吸附力减弱。pH值降低时，抑制蛋白质阴离子化，随之降 低了蛋白质对阴离子交换剂的吸附。当使用阴离子交换剂时，增加盐离子，则降低pH值。当使用阳离子交换 剂时，增加盐离子浓度，则升高溶液pH值。 综上述，一般情况下，DEAE-纤维素用于分离酸性多糖，而CM纤维素用于分离碱性多糖）是目前最常用 的脱色方法，不仅能达到脱色的目的，而且可以分离多糖；对于同时含有游离蛋白质和色素的多糖，可通过 生成金属络合物的方法，同时除去蛋白和色素，方法是加入费林试剂（费林试剂是还原糖测定的主要试剂之 一，是一种铜盐的碱性溶液，由甲液与乙液二部分组成，原理是费林试剂中的二价铜(Cu2＋)，使具有还原 性的单糖氧化，二价铜被还原成一价铜(Cu＋)，再用重量法或容量法测定一价铜的量，通过系数换算成多糖 含量。配制方法：费林氏甲液——称取分析纯硫酸铜(CuSO4•5H2O)15g及四甲基蓝(次甲基蓝)0.05g， 用蒸馏水溶解，定容至1000mL；费林氏乙液——称取分析纯酒石酸钾钠50g，分析纯氢氧化钠54g及分析纯亚 铁氰化钾4g，用蒸馏水溶解，定容至1000mL）生成不溶性络合物，经分离后用阴离子交换树脂分解络合物。 季宇彬. 《中药多糖的化学与药理》. 北京: 人民卫生出版社. 2005.5
多糖的提取和纯化
多糖的提取和纯化Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT多糖的提取和纯化→粉碎→脱脂→粗提（2－3次）→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥首先除去表面脂肪。
原料经粉碎后加入甲醇、乙醚、乙醇、丙酮或1：1的乙醇乙醚混合液，水浴加热搅拌或回流1－3小时，脱脂后过滤得到的残渣一般用水作溶剂（也有用氢氧化钾碱性水液、氯化钠水液、1％醋酸和1％苯酚或－1M氢氧化钠作为提取溶剂）提取多糖。
温度控制在90－100℃，搅拌4－6小时，反复提取2－3次。
得到的多糖提取液大多较粘稠，可进行吸滤。
也可用离心法将不溶性杂质除去，将滤液或上清液混合（得到的多糖若为碱性则需要中和）。
然后浓缩，再加入2－5倍低级醇（甲醇或乙醇）沉淀多糖；也可加入费林氏溶液或硫酸铵或溴化十六烷基三甲基铵等，与多糖物质结合生成不溶性络合物或盐类沉淀。
然后依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤。
将洗干后疏松的多糖迅速转入装有五氧化二磷和氢氧化钠的真空干燥器中减压干燥（若沉淀的多糖为胶状或具粘着性时，可直接冷冻干燥）。
干燥后可得粉末状的粗多糖。
微波辅助提取法：其原理为利用不同极性的介质对微波能的不同吸收程度，使基体物质中的某些区域和萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使萃取物质从基体或体系中分离出来，进入到介电常数小，微波吸收能力较差的萃取剂中[14]。
由于微波能极大加速细胞壁的破裂，因而应用于中草药中有效成分的提取能极大加快提取速度，增加提取产率。
而且由于其选择性好，提取后基体能保持良好的性状，提取液也较一般的提取方法澄清[15]。
聂金源等在柴胡多糖和黄酮化合物的提取[18]中对微波辅助提取法、超声辅助法和索氏提取法进行比较，发现微波辅助提取法所需时间最短（10min），多糖的提取率最高（％）。
超声辅助法：其原理是利用超声波的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外超声波的次级效应，如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合，利于提取[16]。
多糖提取实验报告
一、实验目的1. 了解多糖的基本概念、性质和分类；2. 掌握多糖提取的基本原理和实验方法；3. 学习利用水提法、醇沉法等方法提取多糖；4. 掌握多糖的纯化、鉴定和含量测定方法。
二、实验原理多糖是一类由单糖分子通过糖苷键连接而成的天然高分子化合物，广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖具有多种生物活性，如免疫调节、抗肿瘤、降血糖、抗病毒等。
本实验主要采用水提法、醇沉法等方法提取多糖，并对其纯化、鉴定和含量进行测定。
三、实验材料1. 实验材料：植物样品（如玉米、小麦、胡萝卜等）；2. 实验试剂：蒸馏水、乙醇、丙酮、苯酚、硫酸、蒽酮、葡萄糖标准品等；3. 实验仪器：组织捣碎机、离心机、分光光度计、磁力搅拌器、容量瓶、移液管、试管等。
四、实验方法1. 植物样品预处理：将植物样品洗净、晾干、磨碎，过筛，得到植物粉末。
2. 水提法提取多糖：（1）称取一定量的植物粉末，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀；（2）在80℃条件下加热提取2小时；（3）冷却后，用离心机分离溶液和沉淀；（4）取上清液，加入乙醇，使多糖沉淀；（5）离心分离，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀，干燥，得到粗多糖。
3. 醇沉法提取多糖：（1）称取一定量的植物粉末，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀；（2）在80℃条件下加热提取2小时；（3）冷却后，用离心机分离溶液和沉淀；（4）取上清液，加入丙酮，使多糖沉淀；（5）离心分离，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀，干燥，得到粗多糖。
4. 纯化多糖：（1）将粗多糖溶解于适量的蒸馏水中；（2）加入适量的苯酚，使多糖与苯酚形成复合物；（3）离心分离，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀，干燥，得到纯多糖。
5. 多糖鉴定：（1）采用苯酚-硫酸法鉴定多糖：取一定量的多糖样品，加入苯酚和硫酸，观察溶液颜色的变化；（2）采用蒽酮法鉴定多糖：取一定量的多糖样品，加入蒽酮，观察溶液颜色的变化。
6. 多糖含量测定：（1）采用硫酸蒽酮法测定多糖含量：取一定量的多糖样品，加入蒽酮，在特定波长下测定吸光度；（2）以葡萄糖标准品为对照，绘制标准曲线，根据样品吸光度计算多糖含量。
灰树花粗多糖提取和重金属去除工艺
灰树花粗多糖提取和重金属去除工艺灰树花（Callicarpa macrophylla）作为中草药的典型原料，有广泛的应用前景，它具有较丰富的活性物质，如粗多糖等，可开发多种药物产品。
灰树花粗多糖是灰树花植物中一种有效成分，广泛存在于植物细胞壁上，有促进生长发育、抗病毒、抗衰老等生物活性，重要的功能用药价值和临床治疗作用，需要提取得到的灰树花粗多糖已被研究到有益的作用。
灰树花粗多糖提取工艺主要分成：细胞壁制备处理、提取、精制等三个步骤。
从灰树花的细胞壁制备处理开始，根据灰树花原料的不同地区以及其本身特性，可以研究选择合理的蒸馏水浸泡或汽提炼提取相应有效物，如植物膜被液抽提法、微波药物测定法等，其好处在于不仅可以有效地提取灰树花粗多糖，而且能够有效去除重金属杂质，达到市售药物质量标准。
提取好的灰树花粗多糖液在适当分子量和疏水性的条件下，经滤液变浓处理，得到灰树花粗多糖的浓缩粉末。
然后，在必要的条件下，浓缩的灰树花粗多糖在精制流程中经过过滤、脱色、干燥等步骤，从而得到最终的灰树花粗多糖粉末。
此外，为了减少外界污染和重金属杂质含量，灰树花粗多糖提取过程还可存在淘汰工艺，即在预先加入磁性材料的清洗系统中进行清洗、分离、惰性离合和精制，使湿润物、有机物和粗多糖等有效成分完全分离。
碱性改性也是一种有效的重金属去除工艺，在这种工艺过程中，灰树花粗多糖溶液施用氢氧化钠，使灰树花粗多糖呈色改变，使重金属离子中和反应，从而能有效地去除重金属杂质。
此外，利用离子交换树脂对提取的灰树花粗多糖悬浮液进行萃取，并且可以进行多次反复萃取，达到更高的重金属去除效果。
综上所述，灰树花粗多糖提取及重金属去除工艺，通过细胞壁制备、细胞壁提取、滤液精制、碱性改性及离子交换等多种工艺技术，可以有效提取出灰树花粗多糖，并去除重金属杂质，为中草药的研发、生产及临床治疗提供了很好的材料基础。
真菌发酵产物胞内粗多糖测定的实验结果
真菌发酵产物胞内粗多糖测定的实验结果
一、实验目的
本实验旨在通过对真菌发酵产物胞内粗多糖测定，掌握粗多糖的提取和测定方法，了解真菌发酵产物中粗多糖的含量。
二、实验原理
1. 粗多糖提取原理：
将真菌发酵产物经过酸碱处理后，使其细胞壁分解，胞内组分释放出来。
然后通过离心、洗涤等步骤将细胞壁残渣去除，得到纯化的粗多糖。
2. 粗多糖测定原理：
利用硫酸-苯酚法可以将粗多糖转化为含有硫酸根离子的多糖硫酸盐。
然后再与苯酚反应生成红色复合物，在特定波长下测定吸光度，从而计算出样品中粗多糖的含量。
三、实验步骤
1. 粗多糖提取步骤：
（1）称取一定量真菌发酵产物样品加入适量0.05mol/L NaOH溶液中，在60℃下水浴加热30min；
（2）加入适量0.05mol/L HCl溶液中，使溶液pH=2左右；
（3）离心收集胞内组分，洗涤去除细胞壁残渣；
（4）将纯化后的粗多糖样品冷冻干燥备用。
2. 粗多糖测定步骤：
（1）取一定量粗多糖样品加入适量0.5mol/L H2SO4溶液中，在室温下水浴加热30min；
（2）加入适量0.5%苯酚溶液中，混合均匀；
（3）在特定波长下测定吸光度，并根据标准曲线计算出样品中粗多糖的含量。
四、实验结果
经过实验测定，得到真菌发酵产物中粗多糖的含量为XXmg/g。
五、实验注意事项
1. 实验过程中要注意安全，避免接触强酸和强碱。
2. 离心时要注意离心速度和时间。
3. 测定吸光度时应该选取合适的波长，并进行空白对比。
4. 实验前要对所有仪器设备进行检查和校准。
粗多糖提取
** 学院本科生毕业论文龙葵粗多糖提取工艺条件的优化院(部)、专业生命科学学院生物科学研究方向生物化学学生姓名学号指导教师姓名指导教师职称讲师2014年06月01日大庆师范学院本科生毕业论文摘要本实验以龙葵为实验材料，通过单因素和正交法相结合的实验方法对龙葵粗多糖提取工艺进行优化，考察因素分别是料液比、冲泡时间、水浴时间和水浴温度，最终确定最优工艺条件为料液比1:25、冲泡时间50℃、水浴时间25min、水浴温度90℃，粗多糖的提取率为0.1%。
关键词：龙葵；粗多糖；条件优化AbstractThis experiment by morel as experiment material, using single factor and orthogonal method, experimental method of solanum nigrum polysaccharide extraction process was optimized, examine factors are respectively and solid-liquid ratio, brewing time, water bath time and water bath temperature, and ultimately determine the optimal process conditions for the material liquid ratio, the brewing time 50℃, and water bath time 25min, water bath temperature 90℃, the coarse polysaccharide extraction yield of 0.1%.Key words：morel；crude polysaccharide；condition optimization中文摘要 (I)英文摘要 (II)目录...................................................................................................................... I II 1 前言 (1)1.1龙葵简介 (1)1.2龙葵的药用价值 (1)1.3中药代茶饮 (1)2 材料及方法 (3)2.1实验材料 (3)2.2实验器材与药品 (3)2.2.1 实验器材 (3)2.2.2 实验药品 (3)2.2.3 实验器具 (3)2.3实验方法 (3)2.3.1 制取粗多糖主要流程 (3)2.3.2 萄糖标准曲线的确定 (3)2.3.3 粗多糖提取率计算公式 (4)2.3.4 龙葵粗多糖提取单因素实验 (4)2.3.5 正交试验设计 (5)3 结果与讨论 (6)3.1单因素实验结果与讨论 (6)3.1.1 料液比单因素实验结果与讨论 (6)3.1.2 冲泡温度单因素实验结果与讨论 (7)3.1.3 水浴温度单因素实验结果与讨论 (8)3.1.4 水浴时间单因素实验结果与讨论 (9)3.2正交实验结果与讨论 (10)4 结论与展望 (12)[参考文献] (13)5 致谢 (14)1.1龙葵简介龙葵（Solanum nigrum L.），俗称黑天天，野葡萄、老鸦眼睛草、苦菜、苦葵等，属茄科茄属龙葵种，是一年生草本植物[1,6]。
粗多糖提取及纯化方法
粗多糖水提醇沉提取方法第一种方法：（1）玉米须原料用80%乙醇在78℃提取三次，去除色素、单糖和脂溶成分。
过滤，合并滤渣，使乙醇挥发干净，粉碎滤渣。
用100℃热水浸提干燥玉米须一小时，料液比1：15，提取三次。
合并提取液、过滤和浓缩，利用三倍体积80%乙醇醇沉。
（2）离心收集醇沉物(3000 ×g，10min)，然后用水溶解，并利用Sevag 方法去除游离蛋白质。
（3）脱去蛋白质的溶液再次用80%乙醇醇沉。
收集沉淀，先后用无水乙醇和丙酮溶液冲洗三次。
最后冷冻干燥，获得玉米须粗多糖。
Hot water extraction of crude polysaccharidesAll the corn silk raw materials were immersed in 80% (v/v) ethanol at 78℃ for three times to remove colored materials, monosaccharide and liposoluble constituents. The organic solvent was volatilized and the pretreated corn silk was obtained to crush. Dried ground corn silk (100 g) was extracted with water at 100℃(1:15 (w/v), 1 h, 3 times). The ext raction solutions were combined, filtered and concentrated, precipitate d by the addition of anhydrous ethanol to a final concentration of 80% (v/v). Precipitates were collected by centrifugation (3000 × g, 10 min), then dissolved with water, and subjected to the Savage method (chlorofor m: butyl alcohol, 4:1) to remove free proteins. The deproteinized solutio n was re-precipitated in 80% (v/v) ethanol. The precipitates were collect ed and successively washed with anhydrous ethanol and acetone. After freezing dried, the hot water extraction corn silk polysaccharides (PS) we re obtained.第二种方法Preparation of ILPSThe preparation of crude ILPS was carried out according to thereported method with some modifications (Xu e t al., 2012). Briefly,the powder of I. latifolia Thunb was pre-extract ed two times with85% aqueous ethanol solution (v/v) in a ratio of 1:15 (materialto ethanol solution, g/mL) at 80◦C for 1 h each, and the super-natant (containing colored materials, oligosaccharides and s mallmolecule compounds) was removed. The resulting residues were extracted three times with distilled water in a ratio of materialto wa ter 1:20 (g/mL) at 90◦C for 3 h each, and the extracts werecentrifu ged at 5000 rpm for 15 min. The supernatants were com-bined and concentrated by a rotary evaporator to a proper volume.The resulti ng concentrate was mixed with three times volume ofabsolute ethan ol, stirred vigorously and kept overnight at 4◦C. Theprecipitates wer e then collected by centrifugation at 5000 rpm for15 min, dissolved in distilled water, dialyzed 透析against distilled waterand lyophiliz ed, affording the crude ILPS.纯化：The crude ILPS was purified by chromatography of DEAEcellu lose-52 according to the reported method (Qiao et al., 2009a;Ye, W ang, Zhou, Liu, & Zeng, 2008). Briefly, 150 mg of crude ILPS wa s dissolved in 7.5 mL deionized water, and the solution was filtere d through a 0.45 _m membrane filter. The resulting ILPS solution wasthen loaded onto a column (2.6 cm ×30 cm) of DEAE cellu lose-52,and the column was stepwise eluted with deionized water, 0. 1,0.3 and 0.5 M sodium chloride (NaCl) solution at a flow rate of1.0 mL/min. The eluate was collected automatically (10 mL/tube)and the carbohydrate in each tube was determined by the phenol-sulfuric acid method (Dubois, Gilles, Hamilton, Rebers, & Smith,1956). The resulting fractions were pooled, concentrated, dialyzed 透析against deionized water and lyophilized, respectively, affording four fracti ons, named ILPS-1, ILPS-2, ILPS-3 and ILPS-4.2.3。
灰树花粗多糖提取和重金属去除工艺
灰树花粗多糖提取和重金属去除工艺采用L 9(34)正交试验设计,考察灰树花(Grifola frondosa)子实体粉碎粒度、料液比、提取时间和提取次数对粗多糖得率和样品中总糖含量的影响;同时考察了不同种类和不同使用量的絮凝剂对灰树花粗多糖中重金属的去除效果。
试验结果表明,在4个考察因素中,原料粉碎粒度对两个考察指标均有显著影响,优化的水提工艺条件为超细粉(150 目,2.8125 μm),料液比1/30,提取时间1 h,提取2次,此提取工艺条件下的粗多糖得率和样品中总糖含量均较高;絮凝剂M(添加量为0.05%)对灰树花粗多糖中Pb,As,Hg,Cd的去除率分别为76.6%,93.6%,>99.9%和97.9%,处理后的灰树花多糖产品中重金属含量符合出口要求。
本试验优化的提取工艺已用于灰树花粗多糖生产,0.05%使用量的絮凝剂M可有效去除粗多糖产品中的重金属。
灰树花; 多糖; 提取工艺优化; 重金属去除灰树花(Grifola frondosa)多糖具有抗肿瘤、提高免疫、降血糖和抗病毒等作用[1~6],已有保健品保力生及药品麦特消在市场销售。
然而重金属超标问题是目前制约多糖产品出口的一个重要因素,有关灰树花多糖中重金属去除的研究尚未见报道。
本文针对优化灰树花粗多糖提取工艺和去除粗多糖中重金属的方法进行了探讨。
1 材料与方法1.1材料灰树花(G. frondosa)(菌种编号:庆灰151)子实体于2008年11月采自浙江方格药业有限公司灰树花基地,60 ℃烘干,以通过不同筛网来打粉,获得粗粉(20目,0.375 μm)、细粉(80目,1.5 μm)和超细粉(150目,2.8125 μm)。
1.2试剂絮凝剂M(食品级)购自上海献捷化工有限公司,硅藻土和树脂001×7购自安徽三星树脂有限公司;其他试剂为分析纯。
1.3试验方法1.3.1粗多糖提取工艺优化试验结合浙江方格药业有限公司的生产情况,以粗多糖得率和样品总糖含量为考察指标,选取原料粉碎粒度、料液比、提取时间和提取次数作为考察因素,用L 9(34)正交表,对灰树花多糖水提工艺条件进行优化,因素水平设计见表1。
海带粗多糖的提取与鉴定实验报告
海带多糖的提取和鉴定实验报告—0943713 王欢实验伙伴：0943623魏爽蛋白质、酶、核酸、多糖等生物大分子的结构与功能的研究是探求生命奥秘的中心课题。
为了进行结构与功能的研究，首先必须解决制备问题，制备完毕要进行鉴定。
一、实验目的1，掌握酶法提取海带硫酸多糖的原理和操作流程；2，了解多糖物质的常规纯化方法及原理；3，熟悉多糖含量测定的常用方法和原理；4，掌握硫酸－蒽酮法测定多糖的原理及操作流程、注意事项；二、实验原理本实验综合利用细胞匀浆和纤维素酶水解，破碎海带细胞壁，释放细胞内容物，包括多糖、海藻酸以及蛋白、核酸等；随后通过海藻酸与Ca2+的结合沉淀形成不溶性海藻酸钙，以去除其中的海藻酸；继而通过CTAB与多糖络合后溶解度下降的特性，将多糖与其他成份分离；最后在盐溶液中回溶多糖，并通过乙醇沉淀法获得多糖沉淀，即为海带粗多糖。
可采用硫酸－蒽酮法测定多糖的含量三、实验材料及试剂实验材料：干海带实验试剂：纤维素酶、1mol/L氯化钙溶液、硫酸、蒽酮、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、葡萄糖、DE-23、DE-41、Sepharose(2B 4B 6B)等仪器：组织匀浆机、水浴锅、台式高速离心机、分光光度计等(下面是一些仪器和设备的照片)四、实验步骤海带多糖的提取1．干海带加水浸泡过夜，充分溶胀后，加入1/3体积的水，放入组织匀浆机中，粉碎成海带浆。
取约100ml海带浆，调PH值为4.5-5.0，加入0.3g纤维素酶，于50度温浴水解4-6小时，间或搅拌，促进细胞壁水解。
（这个过程我们的指导老师已经提前做好）2..在海带浆中加入50ml水，搅拌均匀，沸水浴5min，使纤维素酶失活，冷至室温，用6层纱布过滤，收集滤液（注：1、这个时候一定不要混入海带渣，防止对后面测量结果的影响，2、过滤过程中可戴手套挤纱布，但是不要太用力使海带渣意外流出）(下面是过滤现场照片)3．向滤液中加入1/4体积1mol/L氯化钙溶液，搅拌均匀后，4层纱布过滤，去除海藻酸钙。
粗多糖提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解粗多糖的基本性质和提取方法。
2. 掌握水提醇沉法提取粗多糖的原理和操作流程。
3. 通过实验验证粗多糖提取效果，并对其含量进行测定。
二、实验原理粗多糖是一类高分子碳水化合物，广泛存在于植物、动物和微生物中。
水提醇沉法是一种常用的粗多糖提取方法，其原理是利用多糖在水中的溶解度较高，而在乙醇中的溶解度较低的特点，通过加水提取多糖，然后用乙醇沉淀多糖，从而实现多糖的分离纯化。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：植物材料（如大麦、玉米等），乙醇，蒸馏水，硫酸铵，苯酚，浓硫酸等。
2. 实验试剂：95%乙醇，NaOH，FeCl3，浓盐酸，氯仿，乙酸乙酯等。
四、实验仪器1. 实验室常用仪器：电子天平，恒温加热器，水浴锅，旋转蒸发仪，离心机，移液器等。
2. 特殊仪器：分光光度计，真空干燥箱等。
五、实验步骤1. 植物材料预处理：将植物材料洗净、晾干，然后研磨成粉末。
2. 水提：将研磨好的植物粉末加入适量蒸馏水，加热煮沸，提取多糖。
3. 醇沉：将提取液冷却至室温，加入95%乙醇，使多糖沉淀。
4. 沉淀分离：将沉淀物用离心分离，弃去上清液。
5. 沉淀干燥：将沉淀物用无水乙醇洗涤，然后在真空干燥箱中干燥至恒重。
6. 粗多糖含量测定：采用苯酚-硫酸法测定粗多糖含量。
六、实验结果与分析1. 粗多糖提取率：根据实验数据计算粗多糖提取率，并与文献报道进行比较。
2. 粗多糖含量测定：根据苯酚-硫酸法测定粗多糖含量，并与理论值进行比较。
3. 结果分析：分析实验结果，探讨影响粗多糖提取率的因素，如提取时间、提取温度、乙醇浓度等。
七、实验讨论1. 粗多糖提取率的影响因素：实验结果表明，提取时间、提取温度、乙醇浓度等因素对粗多糖提取率有显著影响。
在实验条件下，最佳提取时间为2小时，提取温度为80℃，乙醇浓度为95%。
2. 粗多糖提取方法的优化：通过实验，对水提醇沉法进行了优化，提高了粗多糖提取率。
3. 粗多糖的应用前景：粗多糖具有多种生物活性，如抗炎、抗氧化、降血糖等，具有广泛的应用前景。
粗多糖的提取、分离及结构研究
粗多糖的提取、分离及结构研究多糖是由二十多个到上万个单糖组成的大分子,自然界中植物、动物、微生物都含有多糖,生物体内多糖除以游离状态存在外，也以结合的方式存在。
结合型多糖有与蛋白质结合在一起的蛋白多糖和与脂质结合在一起的脂多糖等。
已发现不少多糖物质及其衍生物具有药用价值，尤其在抗凝、抗血栓、调血脂、调节免疫功能和抗肿瘤、抗放射方面都有显著的药理作用与疗效，多糖的研究日益受到重视。
1粗多糖的提取与纯化1.1提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位不同决定在提取之前是否作预处理,对于动物多糖一般采用丙酮、乙醚、乙醇进行预处理,目的是脱脂［1］。
脱脂后的残渣或不需要脱脂的原料常用水作溶剂来提取多糖［2］，此外用碱性水液［3，4］，氯化钠水液作提取溶剂，也有用水、3%的碱溶液、10%的碱溶液依次提取［5］，所得的多糖提取液有的可直接过滤或者用离心法除去不溶物。
1.1.1除蛋白。
除蛋白的技术主要应用于动物多糖的提取,以新鲜组织或丙酮脱脂脱水的组织或丙酮脱脂脱水为原料，可用水或盐溶液提取部分粘多糖。
但因大部分粘多糖是与蛋白质结合的，需用酶降解蛋白质部分或（和）用碱使多糖蛋白质间的键裂开以促进粘多糖在提取时的溶解［3，4，6］。
在碱性提取的同时用蛋白酶处理组织，可将提取过程简化［7，8］。
多糖中的游离蛋白质可用蛋白沉淀剂如三氯乙酸、鞣酸等除去［1，9］，少量蛋白则用Sevag 法除去［10～12］。
1.1.2去离子。
去离子是为以后进一步纯化及色谱分析作准备,最古老的去离子方法是透析法,必需选择一种规格适宜的透析膜以免样品损失,透析方法不仅能去盐也可以除去各种小分子物质［1，11，13］。
使用柱离子交换法如用G-25以达到去离子作用，本法比较简单，但是增大了溶液的体积，影响多糖的沉淀结果。
纤维滤器透析法是根据膜技术而新发展起来的，以这种方式对大多数样品进行浓缩速度很快，而且温和，所以即使发生失活也是很小的。
利用不同孔径的膜有可能使大小不同的分子分级。
Sevag法脱蛋白-多糖提取
《多糖提取（Sevag法去蛋白）》
1、实验原理介绍：
Sevag法是去除游离蛋白的有效方法。
在粗多糖溶液中加入氯仿—正丁醇混合溶液进行充分振摇,将游离蛋白变性成为不溶性物质,经离心分离去除,可达到去除的目的。
2、实验方法及步骤
具体操作可以按下述操作试一试：取粗多糖溶液4 ml ,氯仿—正丁醇(预先配制成体积比为4∶1混合液)溶液1ml,置于具塞试管中,充分振摇30min后,经离心机离心1min,然后将水相与氯仿相分开。
将水相再加入相当于其体积的氯仿—正丁醇溶液,重复上述过程,共计重复三次。
多糖溶液体积较大时也可以采用分液漏斗，人工进行剧烈振荡后直接分离，注意振荡强度与分离效率关系很大。
操作过程中蛋白质多出现在两相界面处。
3、实验结果及讨论
1、需要取上清液重复加入sevage试剂我重复了十一次每次振摇15分在紫外测250－280没有吸收峰才可确定除净了蛋白。
2、Sevag法较为温和，对多糖的结构影响不大，但效率较低，往往重复五次以上才能达到理想效果。
考虑较为剧烈但效率更高的三氯乙酸法除蛋白。
3、糖蛋白不是那么容易除干净的，通常大量取多糖溶液(5%)按，用三角瓶在摇床上摇2h再放离心管里离心，得到水层再重复,如果蛋白含量多的话,除一两个星期的.直到震荡后水层上不再有白色泡茉为止。
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** 学院本科生毕业论文龙葵粗多糖提取工艺条件的优化院(部)、专业生命科学学院生物科学研究方向生物化学学生姓名学号指导教师姓名指导教师职称讲师2014年06月01日大庆师范学院本科生毕业论文摘要本实验以龙葵为实验材料，通过单因素和正交法相结合的实验方法对龙葵粗多糖提取工艺进行优化，考察因素分别是料液比、冲泡时间、水浴时间和水浴温度，最终确定最优工艺条件为料液比1:25、冲泡时间50℃、水浴时间25min、水浴温度90℃，粗多糖的提取率为0.1%。
关键词：龙葵；粗多糖；条件优化AbstractThis experiment by morel as experiment material, using single factor and orthogonal method, experimental method of solanum nigrum polysaccharide extraction process was optimized, examine factors are respectively and solid-liquid ratio, brewing time, water bath time and water bath temperature, and ultimately determine the optimal process conditions for the material liquid ratio, the brewing time 50℃, and water bath time 25min, water bath temperature 90℃, the coarse polysaccharide extraction yield of 0.1%.Key words：morel；crude polysaccharide；condition optimization中文摘要 (I)英文摘要 (II)目录...................................................................................................................... I II 1 前言 (1)1.1龙葵简介 (1)1.2龙葵的药用价值 (1)1.3中药代茶饮 (1)2 材料及方法 (3)2.1实验材料 (3)2.2实验器材与药品 (3)2.2.1 实验器材 (3)2.2.2 实验药品 (3)2.2.3 实验器具 (3)2.3实验方法 (3)2.3.1 制取粗多糖主要流程 (3)2.3.2 萄糖标准曲线的确定 (3)2.3.3 粗多糖提取率计算公式 (4)2.3.4 龙葵粗多糖提取单因素实验 (4)2.3.5 正交试验设计 (5)3 结果与讨论 (6)3.1单因素实验结果与讨论 (6)3.1.1 料液比单因素实验结果与讨论 (6)3.1.2 冲泡温度单因素实验结果与讨论 (7)3.1.3 水浴温度单因素实验结果与讨论 (8)3.1.4 水浴时间单因素实验结果与讨论 (9)3.2正交实验结果与讨论 (10)4 结论与展望 (12)[参考文献] (13)5 致谢 (14)1.1龙葵简介龙葵（Solanum nigrum L.），俗称黑天天，野葡萄、老鸦眼睛草、苦菜、苦葵等，属茄科茄属龙葵种，是一年生草本植物[1,6]。
分布很广泛，在全国很多地区都有分布。
在中国，龙葵存在3个种和1个变种，即龙葵（Solanum nigrum L.）、红果龙葵（S.alatum Moench）、少花龙葵（S.paucifloum(Liou) H.Y.Zhang)以及变种黄果龙葵（S.nigrum L.var.flavovirens S.Z.Liou et W.Q.Wang）[8]。
龙葵全草的化学成分分析，其中含有生物碱、维生素、多糖、氨基酸、矿物质、色素、树脂等，龙葵浆果中也有很多的成分，例如酯、羧基化合物、甾醇、酚性化合物、多种矿物质以及多糖等。
其中，关键作用的化学成分主要为生物碱和多糖[1,6]。
1.2龙葵的药用价值大量的研究表明，龙葵多糖在医药方面具有极其重要的潜在价值。
表现为拥有使血管透性及透明质酸酶的生物活性下降，推动抗体的形成，使血液的凝固性降低，以及抑制心脏的兴奋等免疫功能的作用。
[1]K. S．Heoa等提出龙葵多糖具有促进肿瘤细胞凋亡的作用。
[2]并且在治疗风湿痛、肝炎、癌症、艾滋病等疾病方面提供了有力的治疗依据，具有使机体免疫功能和抗肿瘤的功能提高的作用。
1.3中药代茶饮中药代茶饮，是我国传统的一种调理身体和养生的药剂，特别受到中老年人的喜爱。
中药代茶饮，又称药茶或茶剂，利用中草药和茶叶配合或者是只用中草药进行冲泡饮用的一种方式。
利用此方式饮用中药，方便快捷，省时省力，省去了熬药的复杂过程，并且用量较小，只用汤剂剂量的半量或三分之一，甚至更少。
药性温和，不会有伤胃之顾虑，味道比较淡，大部分人都能接受。
在熬药的过程中，有些成分会随着蒸汽或者由于沥汁的过程中不彻底而损耗，用饮茶的方法则完全没有这些忧虑。
中药代茶饮是可以一直饮用的，不会对身体产生伤害，反而达到养生的目的。
这种药茶长时间服用，它的药用成分在体内维持较高浓度，而使药效持续时间长，效果明显。
中药代茶饮不仅可以用于疾病的防治，还可以用于病后的调理，补益正气，调和脏腑，促进康复。
中药可以作为茶来饮用，究竟中药中是什么有着预防和治疗疾病的作用。
[10-12]经过查找文献，了解到多糖是溶于温水，中药代茶饮是将中药浸在热水中，必然有些多糖会溶解在水中。
饮用这种水达到了一定的治疗效果，这种治疗效果是和龙葵多糖的药用价值很吻合，所以中药代茶饮中龙葵中粗多糖起到了一定的疗效。
多糖的药用价值是近年来探究的热点话题。
本实验通过对龙葵粗多糖的提取条件进行优化，得到较优的提取条件，为以后对多糖的提取提供了依据。
2材料及方法2.1实验材料大庆药材店购买的龙葵,烘干粉碎备用。
2.2实验器材与药品2.2.1实验器材表2-1实验仪器、型号及厂家仪器名称厂家型号水浴锅HH-6江苏金坛市亿通电子有限公司紫外分光光度计UV725N上海科学精密仪器厂电子分析天平广州市正一科技公司FA2004N2.2.2实验药品（1）主要试剂：无水乙醇、葡萄糖、浓硫酸、苯酚溶液（2）配制试剂：4%苯酚溶液、1mg/mL葡萄糖标准溶液2.2.3实验器具烧杯、三角烧瓶、量筒、移液管、玻璃棒、试管等。
2.3实验方法2.3.1粗多糖提取主要流程干燥龙葵→粉碎→称重→按料液比冲泡过夜→水浴→过滤去渣→等体积过夜醇沉→过滤去上清液→取沉淀定容→苯酚硫酸法测定OD490。
2.3.2萄糖标准曲线的确定（1）准确称取无水葡萄糖0.5000g，至500ml容量瓶稀释定容，成为1mg/ml 葡萄糖标准溶液。
（2）用移液管分别吸取0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml、0.8、0.9ml 、1.0ml ，至试管，每样需平行三次，分别加蒸馏水至2ml 、6%苯酚2ml 、浓硫酸2ml ，每样需平行三次，振荡，置于沸水浴中加热15min ，取出后在流动自来水中冷却至室温。
另在一试管中加蒸馏水2ml ，加苯酚和硫酸，同上操作作空白对照。
于分光光度仪上于490nm 处测定吸光度，横坐标代表浓度，纵坐标代表吸光度，绘制葡萄糖的标准曲线(如图2-1所示)，得线性回归方程如公式2-1：()20.01869(0.99807)2-12.35694A C R -==公式式中：C ——表示葡萄糖浓度（mg/ml ）A ——表示吸光度O D 490图2-1葡萄糖浓度(mg/mL)2.3.3 粗多糖提取率计算公式()()100%2-2V C W =⨯⨯⨯多糖提取率公式式中：C ——表示葡萄糖浓度（mg/mL ）V ——表示样品定容后的溶液体积（mL ）W ——表示称取的龙葵粉末的质量（mg ）2.3.4 龙葵粗多糖提取单因素实验文献表明多糖可溶于温热的水，可采用水提醇沉的方法来提取多糖。
因此实验将料液比1:20，水浴温度60℃，水浴时间20min，冲泡温度60℃为单因素实验最初设定的实验条件。
采用控制变量法，分别对水浴时间、水浴温度及料液比和冲泡温度这四个因素进行不同水平实验，以此获得较优的单因素提取水平。
（1）料液比单因素实验分别称取一定质量干燥的龙葵，设定料液比的梯度为1:15、1:20、1:25、1:30、1:35五个水平，60℃冲泡过夜，60℃水浴20min，过滤去渣，等体积无水乙醇过夜醇沉，过滤取粗多糖沉淀，定容，使用苯酚硫酸法测OD490，计算粗多糖提取率，并进行讨论。
（2）冲泡温度单因素实验分别称取一定质量干燥的龙葵，料液比为1:20，加20m l水。
设定冲泡温度的梯度为50℃、60℃、70℃、80℃、90℃五个水平，冲泡过夜，60℃水浴20min，过滤去渣，等体积无水乙醇过夜醇沉，过滤取粗多糖沉淀，定容，使用苯酚硫酸法测OD490，计算粗多糖提取率，并进行讨论。
（3）水浴温度单因素实验分别称取一定质量干燥的龙葵，料液比为1:20，加20m l水。
60℃冲泡过夜。
设定水浴温度梯度为50℃、60℃、70℃、80℃、90℃五个水平，水浴时间为20min，过滤去渣，等体积无水乙醇过夜醇沉，过滤取粗多糖沉淀，定容，使用苯酚硫酸法测OD490，计算粗多糖提取率，并进行讨论。
（4）水浴时间单因素实验分别称取一定质量干燥的龙葵，料液比为1:20，加20ml水，60℃冲泡过夜。
设定水浴温度梯度为10min、15min、20min、25min、30min五个水平，水浴时间为20min，过滤去渣，等体积无水乙醇过夜醇沉，过滤取粗多糖沉淀，定容，使用苯酚硫酸法测OD490，计算粗多糖提取率，并进行讨论。
2.3.5正交试验设计通过以上单因素实验结果，查找文献，设计L9（34）最终确定提取龙葵粗多糖的最优工艺。
3 结果与讨论3.1 单因素实验结果与讨论3.1.1 料液比单因素实验结果与讨论通过单因素料液比实验2.3.4.1，得到龙葵粗多糖提取率如下所示：表3-1料液比的单因素实验结果序号料液比 获得平均粗多糖重量（g ） 粗多糖提取率（%） 11:15 0.0008 0.0813 21:20 0.0010 0.0952 31:25 0.0011 0.1096 41:30 0.0008 0.0828 5 1:35 0.0004 0.0376粗多糖提取率(%)料液比(m/v)图3-1料液比单因素实验结果由表3-1和图3-1可以看出，随着料液比的增加，龙葵与溶剂的接触面积不断增大，糖分子易于扩散，析出的多糖量多，粗多糖的提取率不断提高。