邻二氮菲分光光度法测定微量铁
实验八 邻二氮菲分光光度法测定微量铁
实验八邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的2. 掌握邻二氮菲的制备方法及其在测定微量铁中的应用。
3. 理解标准曲线的绘制方法及其在实验中的应用。
二、实验原理邻二氮菲是一种具有荧光特性的有机物，其分子结构如图1所示。
图1 邻二氮菲分子结构邻二氮菲能够与铁(Ⅲ)形成荧光化合物，而这种荧光化合物的发射峰位于535nm左右，因此可以通过测量荧光发射强度来确定铁(Ⅲ)的含量。
在实验中，首先要制备邻二氮菲溶液。
制备方法如下：取一定量的邻二氮菲与一定量的苯甲酸，加入适量的氢氧化钠溶液，煮沸并搅拌至邻二氮菲完全溶解，加入足量的水，制成1mmol/L的邻二氮菲溶液。
然后测定铁离子溶液的荧光强度，在一定波长下测定它的荧光强度，得到标准曲线。
最后将待测样品溶液与邻二氮菲溶液混合，测定混合溶液荧光强度，并用标准曲线计算出铁离子的含量。
三、实验步骤2. 制备标准曲线。
将一定量的FeCl3溶液加入邻二氮菲溶液中，混合均匀后，在535nm处测定其荧光强度。
重复上述步骤，得到一系列不同浓度的FeCl3溶液荧光强度数据。
3. 测定样品荧光强度。
将待测样品溶液与邻二氮菲溶液混合，混合均匀后，在535nm 处测定其荧光强度。
4. 计算样品中Fe离子的含量。
使用标准曲线计算样品中Fe离子的含量。
四、实验注意事项1. 实验中所用的器皿应干净，避免污染。
2. 制备邻二氮菲溶液时应注意氢氧化钠的浓度和量，以确保邻二氮菲完全溶解。
3. 实验室应尽量保持安静，避免干扰荧光信号。
4. 注意各种溶液的安全操作，如防止接触皮肤和眼睛。
五、实验结果及分析利用邻二氮菲分光光度法测定一系列不同浓度的FeCl3标准溶液，得到的测量结果如下表所示。
所得数据可用图表表示，如下图所示。
根据标准曲线可以得到如下方程：y = 0.2948x + 2.2939，其中y表示荧光强度，x表示FeCl3溶液的浓度。
六、实验总结本实验通过邻二氮菲分光光度法测定微量铁，熟悉了邻二氮菲荧光原理及其制备方法，掌握了标准曲线的制备方法和其在实验中的应用。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁
一． 实验名称：邻二氮菲分光光度法测定微量铁 二． 实验目的1. 通过分光光度法测定铁的条件实验，学会选择和确定分光光度分析的适宜条件。
2. 了解光栅分光光度计的构造和使用方法。
3. 掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的原理和方法。
三． 实验原理邻二氮菲使铁的一种优良的显色剂，在pH2～9的溶液中，Fe 2+能与其生成1：3的橙红色配合物，3lg 21.3β= 最大吸收波长510nm 处的摩尔吸光系数为4111.110L mol cm --⨯•• 。
在一定浓度范围内，Fe 2+的浓度范围内，Fe 2+的浓度与配合物吸光系数的关系遵循朗伯-比尔定律。
有关反应如下：NNFe2+33Fe2++该显色反应选择性很高，形成的配合物较稳定，在还原剂的存在下，颜色可保持数月不变。
由于Fe 3+也可与邻二氮菲生成1：3的淡蓝色配合物，3lg 14.1β=，所以，在显色反应前，需将Fe 3+全部还原成Fe 2+。
四． 实验用品1．仪器 721或722型分光光度计。
2．试剂(1)0.1 mg ·L-1铁标准液 准确称取0.702 0 g NH 4Fe(S04)2·6H 20置于烧杯中，加少量水和20 mL 1:1H 2S04溶液，溶解后，定量转移到1L 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
(2)100 g ·L-1盐酸羟胺水溶液 用时现配。
(3)1.5 g ·L-1邻二氮菲水溶液 避光保存，溶液颜色变暗时即不能使用。
(4)1.0 mol ·L-1 乙酸钠溶液。
(5)1 mol ·L-1氢氧化钠溶液。
五． 实验步骤1.准备工作。
打开分光光度计开关，预热。
2.确定最大吸收波长。
取50 mL容量瓶（1#），用吸量管加入1 mL 100 g·L-1盐酸羟胺溶液，再各加入2 mL 1.5 g·L-1邻二氮菲溶液、5 mL 1.0 mol·L-1乙酸钠溶液，以水稀释至刻度，摇匀（参比溶液）。
实验 邻二氮菲分光光度法测定微量铁
实验二 邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的1.2.3.学会722S 型分光光度计的正确使用，了解其工作原理。
4.学会数据处理的基本方法。
5.二、实验原理根据朗伯—比耳定律：A=εbc ，当入射光波长λ及光程b 一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A 与该物质的浓度c 成正比。
只要绘出以吸光度A 为纵坐标，浓度c 为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。
同时，还可应用相关的回归分析软件，将用分光光度法测定试样中的微量铁，可选用的显色剂有邻二氮菲(又称邻菲罗啉)及其衍生物、磺基水杨酸、硫氰酸盐等。
而目前一般采用邻二氮菲法，该在pH=2～9的溶液中，Fe 2+与邻二氮菲(phen)生成稳定的桔红色配合物Fe(phen)32+，此配合物的lgK 稳=21.3，摩尔吸光系数ε510= 1.1×104 L ·mol -1·cm -1，而Fe 3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK 稳=14.1。
所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH 2OH ·HCl)将Fe 3+还原为Fe 2+2Fe 3+ + 2NH 2OH ·HCl → 2Fe 2+ + N 2 + H 2O + 4H + + 2Cl - 测定时控制溶液的酸度为pH ≈5较为适宜。
2+NN3Fe 2++三、仪器与试剂722/7200分光光度计6台（1cm比色皿）容量瓶50mL 7个×6组100mL 1个×6组吸量管10mL 1个×6组小量筒10mL 1个×6组小烧杯50mL 3个×6组吸耳球、洗瓶每组各一个试剂：铁标准溶液(400μg/mL)：准确称取2.8085g硫酸亚铁铵[(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O] (分子量：392.13)于小烧杯中，溶于含有2mLH2SO4的水中，移入1000mL容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度定容，摇匀。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁(同名10168)
邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的⒈学习确定实验条件的方法，掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理；⒉掌握721型分光光度计的使用方法，并了解此仪器的主要构造。
二、实验原理⒈确定适宜的条件的原因：在可见光分光光度法的测定中，通常是将被测物与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸光度，进而求得被测物质的含量。
因此，显色条件的完全程度和吸光度的测量条件都会影响到测量结果的准确性。
为了使测定有较高的灵敏度和准确性，必须选择适宜的显色反应条件和仪器测量条件。
通常所研究的显色反应条件有显色温度和时间，显色剂用量，显色液酸度，干扰物质的影响因素及消除等，但主要是测量波长和参比溶液的选择。
对显色剂用量和测量波长的选择是该实验的内容。
⒉如何确定适宜的条件：条件试验的一般步骤为改变其中一个因素，暂时固定其他因素，显色后测量相应溶液吸光度，通过吸光度与变化因素的曲线来确定适宜的条件。
⒊本试验测定工业盐酸中铁含量的原理：根据朗伯－比耳定律：A=εbc。
当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。
只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即工业盐酸中铁的含量。
⒋邻二氮菲法的优点：用分光光度法测定试样中的微量铁，目前一般采用邻二氮菲法，该法具有高灵敏度、高选择性，且稳定性好，干扰易消除等优点。
⒌邻二氮菲法简介：邻二氮菲为显色剂，选择测定微量铁的适宜条件和测量条件，并用于工业盐酸中铁的测定。
⒍邻二氮菲可测定试样中铁的总量的条件和依据：邻二氮菲亦称邻菲咯啉（简写phen），是光度法测定铁的优良试剂。
在pH=2～9的范围内，邻二氮菲与二价铁生成稳定的桔红色配合物（（Fe(phen)3）2+）。
此配合物的lgK稳=21.3，摩尔吸光系数ε510 =1.1×104 L·mol-1·cm-1，而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。
邻二氮菲分光光度法测定水中微量铁
邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的1、学会吸收曲线及标准曲线的绘制，了解分光光度法的基本原理。
2、掌握用邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。
3、学会721型分光光度计的正确使用，了解其工作原理。
4、学会数据处理的基本方法。
5、掌握比色皿的正确使用。
二、实验原理根据朗伯-比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。
只要绘出以吸光度A 为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。
同时，还可应用相关的回归分析软件，将数据输入计算机，得到相应的分析结果。
用分光光度法测定试样中的微量铁，可选用显色剂邻二氮菲(又称邻菲罗啉)，邻二氮菲分光光度法是化工产品中测定微量铁的通用方法，在pH值为2-9的溶液中，邻二氮菲和二价铁离子结合生成红色配合物：此配合物的lgK稳=21.3，摩尔吸光系数ε510= 1.1×104L·mol-1·cm-1，而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。
所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为Fe2+，其反应式如下：2Fe3+ + 2NH2OH·HCl → 2Fe2+ + N2 + H2O + 4H+ + 2Cl-测定时酸度高，反应进行较慢；酸度太低，则离子易水解。
本实验采用HAc-NaAc缓冲溶液控制溶液pH≈5.0，使显色反应进行完全。
为判断待测溶液中铁元素含量，需首先绘制标准曲线，根据标准曲线中不同浓度铁离子引起的吸光度的变化，对应实测样品引起的吸光度，计算样品中铁离子浓度。
本方法的选择性很高，相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO32-；20倍的Cr3+、Mn2+、VO3-、PO43-；5倍的Co2+、Ni2+、Cu2+-等离子不干扰测定。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁
七、思索题 ⒈邻二氮菲分光光度法测定微量铁时 为何要加入盐酸羟胺溶液？ 2参比溶液旳作用是什么？在本试验 中可否用蒸馏水作参比？
3邻二氮菲与铁旳显色反应，其主要 条件有哪些？
参比溶液旳选择应是视详细情况而定。一般 1.当试液、显色剂和所用旳其他试剂在测定波长
都无吸收时，可用纯溶剂作参比溶液； 2.当试液无吸收，而显色剂或其试剂在测定波优
四、试验环节 （一）准备工作 打开仪器电源开关，预热，调解仪 器。 配制20.00μg·mL-1铁原则溶液：移 取100.0μg·mL-1铁原则溶液10.00mL于 100mL旳容量瓶中，并用蒸馏水稀至刻 线，摇匀。
四、试验环节 （二）吸收曲线旳制作 1.在1支50mL容量瓶中，加入 20.00μg/mL铁 原则溶液， 2.再加入1 mL 100g·L-1盐酸羟胺溶液摇匀 3. 5.0 mL pH≈5缓冲溶液 4. 1 mL 1.5g·L-1邻二氮菲溶液， 5.以水稀释至刻度，摇匀。 6.测量：用1cm比色皿，以试剂空白为参比， 在440~560nm处，每隔10nm测量一次吸光度，在峰 值附近每隔 5nm 测量一次吸光度A并统计。以波 长为横坐标，吸光度为纵坐标拟定最大吸收波长。
二、试验原理
邻二氮菲法简介： 邻二氮菲亦称邻菲 咯啉为显色剂，是光度法测定铁旳优良 试剂。在pH=2～9旳范围内，邻二氮菲 与二价铁生成稳定旳橙色配合物 （（Fe(phen)3）2+）。
测定时控制溶液旳酸度为pH≈5较为合适
三、仪器试剂 ⒈仪器：普析T6型分光光度计；1cm 吸收池一套；10mL 吸量管；5mL量筒 50mL 容量瓶或比色管(1＋7个)。 ⒉试剂：100.0μg·mL-1铁原则溶液； 1.5g·L-1邻二氮菲水溶液； 100g·L-1 盐酸羟胺溶液（新配）； pH≈5缓冲溶 液； 20.00μg·mL-1铁原则溶液(自己配)
实验一 邻二氮菲分光光度法测定微量铁
实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、目的要求1．学习723型分光光度计的使用方法。
2．学习测绘吸收曲线的方法。
3．掌握利用标准曲线进行微量成分测定的基本方法和有关计算。
二、实验原理微量铁的测定有邻二氮菲法、硫代甘醇酸法、磺基水杨酸法、硫氰酸盐法等。
由于邻二氮菲法的选择性高、重现性好，因此在我国的国家标准（GB）中，许多冶金产品和化工产品中铁含量的测定都采用邻二氮菲法。
邻二氮菲又称邻菲罗啉（简写Phen），在pH值为2—9的溶液中，Fe2+离子与邻二氮菲发生下列显色反应：Fe2+ + 3Phen = [Fe（Phen）3]2+生成的橙红色配合物非常稳定，lgK稳=21.3（20℃），其最大吸收波长为510nm，摩尔吸光系数ε510=1.1×104 L•cm-1•mol-1。
显色反应的适宜pH值范围很宽，且其色泽与pH值无关，但为了避免Fe2+离子水解和其它离子的影响，通常在pH值为5的HAc-NaAc缓冲介质中测定。
邻二氮菲与Fe3+离子也能生成淡篮色配合物，但其稳定性较低，因此在使用邻二氮菲法测铁时，显色前应用还原剂将Fe3+离子全部还原为Fe2+离子。
本实验采用盐酸羟胺为还原剂：4Fe3+ +2NH2OH = 4Fe2+ + 4H++ N2O+ H2O邻二氮菲与Fe2+离子反应的选择性很高，相当于含铁量5倍的Co2+、Cu2+离子，20倍量的Cr3+、Mn2+、V（Ⅴ）、PO43-离子，40倍量的Al3+、Ca2+、Mg2+、Sn2+、Zn2+、SiO32-离子都不干扰测定。
利用分光光度法进行定量测定时，通常选择吸光物质（即经显色反应后产生的新物质）的最大吸收波长作为入射光波长，这样测得的摩尔吸光系数ε值最大，既测定的灵敏度最高。
为了找出吸光物质的最大吸收波长需绘制吸收曲线。
测定吸光物质在不同波长下的吸光度A值，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，描点绘图即得吸收曲线，曲线最高点所对应的波长为该吸光物质的最大吸收波长。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁
四、实验ห้องสมุดไป่ตู้骤
1．显色标准溶液的配制 在序号为1～6的6只50 mL容量瓶中，用吸量管分别加入0， 2.00，4.00，6.00，8.00，10.00 mL铁标准溶液(含铁0.0100 mg· -1)，分别加入2.5 mL 1%盐酸羟胺溶液，摇匀后放置 mL 2 min，再各加入5 mL HAc~NaAc 缓冲溶液、5 mL 0.1%邻 二氮菲溶液，以水稀释至刻度，摇匀。 2．吸收曲线的绘制 在分光光度计上，用2cm吸收池，以试剂空白溶液(1号)为 参比，在440～560 nm之间，每隔10 nm测定一次待测溶液 (5号)的吸光度A，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘 制吸收曲线，从而选择测定铁的最大吸收波长。
标准曲线
吸光度 A
1.2 1
A = 146.33c - 0.0017
0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 0.002 0.004 0.006 0.008
浓度 mg/mL
吸光度和透光率
入射光 I0
透射光 It
T =
It I0
T 的取值为 100.0 % ~ 0.0 %
A 的取值为 0 ~ ∞
全部透射 T = 100.0 % A=0 全部吸收 T = 0.0 % A=∞
实验一
邻二氮菲分光光度法测定铁
一、实验目的
1．掌握邻二氮菲法测定铁的原理； 2．掌握分光光度计的正确使用； 3．学会测绘物质的吸收曲线 ； 4．掌握利用标准曲线进行微量成份分析的基 本方法和有关计算。
二、实验原理
邻二氮菲(phen)和Fe2+在pH3～9的溶液中，生成一种稳定 的橙红色络合物 Fe (phen) 32+，其lgK=21.3，ε510= 1.1 × 104 L· mol -1· -1，铁含量在0.1～6μg·mL-1范围内遵守比尔定律。 cm 其吸收曲线如图所示。显色前需用盐酸羟胺或抗坏血酸将Fe3+ 全部还原为Fe2+，然后再加入邻二氮菲，并调节溶液酸度至适 宜的显色酸度范围。有关反应如下： 2Fe3+ + 2NH2OH· HC1＝2Fe2+ +N2↑+2H2O+4H++2C1－
邻二氮菲分光光度法测定水中微量铁
邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的1、学会吸收曲线及标准曲线的绘制，了解分光光度法的基本原理。
2、掌握用邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。
3、学会721型分光光度计的正确使用，了解其工作原理。
4、学会数据处理的基本方法。
5、掌握比色皿的正确使用。
二、实验原理根据朗伯-比耳定律：A= ebc，当入射光波长入及光程b 一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。
只要绘出以吸光度A 为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。
同时，还可应用相关的回归分析软件，将数据输入计算机，得到相应的分析结果。
用分光光度法测定试样中的微量铁，可选用显色剂邻二氮菲（又称邻菲罗啉），邻二氮菲分光光度法是化工产品中测定微量铁的通用方法，在pH值为2-9 的溶液中，邻二氮菲和二价铁离子结合生成红色配合物：此配合物的IgK稳=21.3，摩尔吸光系数& 510 = 1.1 X104 L mol-1 cm-1，而Fe3+能与邻二氮菲生成3 : 1配合物，呈淡蓝色，IgK稳=14.1。
所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺（NH2OH HCI）将Fe3+还原为Fe2*，其反应式如下：2Fe3+ + 2NH 2OH HCI —2Fe2+ + N 2 + H 2O + 4H + + 2CI -测定时酸度高，反应进行较慢；酸度太低，则离子易水解。
本实验采用HAc-NaAc缓冲溶液控制溶液pH -=5.0，使显色反应进行完全。
为判断待测溶液中铁元素含量，需首先绘制标准曲线，根据标准曲线中不同浓度铁离子引起的吸光度的变化，对应实测样品引起的吸光度，计算样品中铁离子浓度。
本方法的选择性很高，相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg 2+、Zn2+、SiO32-; 20 倍的Cr3+、Mn 2+、VO 3-、PO43-; 5 倍的Co2+、Ni2+、Cu2+- 等离子不干扰测定。
实验二-邻二氮菲分光光度法测定微量铁
实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的1、了解邻二氮菲测定铁的基本原理及基本条件，学习显色溶液的制备操作技术；2、掌握吸收曲线的测绘和测量波长的选择；3、掌握标准曲线法定量的实验技术；4、了解分光光度计的使用方法。
二、实验原理邻二氮菲（又称邻菲罗啉）是测定微量铁的一种较好的显色剂。
在pH4~6的溶液中，邻二氮菲与Fe2+生成稳定的橙红色络合物，反应式如下：Fe2++ 3phen → ［Fe(phen)3］2+橙红色络合物的最大吸收波长在510nm 处，摩尔吸光系数ε510 =1.1×104，反应的灵敏度、稳定性、选择性均较好。
此反应可用于微量Fe2+的测定，如果铁以Fe3+的形式存在，则应预先加入还原剂盐酸羟胺或对苯二酚将Fe3+还原成Fe2+，2Fe3+ +2NH2OH·HCl → 2Fe2+ + N2 + 2H2O + 4H+ + 2Cl-（盐酸羟胺）三、仪器与试剂1、仪器分光光度计、容量瓶（50 mL 7个）、吸量管（5 mL 4 支）、吸量管（10 mL 1 支）2、试剂（1）10 μg/mL 铁标准溶液：准确称取0.8634 g NH4Fe（SO4）2•12H2O，置于烧杯中，以50 mL 1mol •L-1 HCl 溶液溶解后转入1000 mL 容量瓶中，用水稀释到刻度，摇匀。
从中吸取50 mL 该溶液于500 mL 容量瓶中，加50 mL 1mol •L-1 HCl 溶液，用水稀释到刻度，摇匀；（2）10g/L 盐酸羟胺溶液（临用时配制）；（3）1g/L 邻二氮菲溶液（临用时配制）：应先用少许酒精溶液，再用水稀释；（4）NaAc-HAc 缓冲溶液（pH=4-6）：将30mL冰醋酸和30g无水醋酸钠溶于100mL 水中，稀释至500mL；（5）铁试样溶液：其中含铁0.02~0.06 mg/10 mL。
四、实验步骤1、显色溶液的配制：取50mL 容量瓶7 个，分别准确加入10μg/mL 的铁标准溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00（mL）及试样溶液10.00mL，再于各容量瓶中分别加入10g/L 盐酸羟胺2.5mL，摇匀，稍停2min，再各加入NaAc-HAc缓冲溶液5mL 及1g/L 邻二氮菲溶液5mL，每加一种试剂后均摇匀再加另一种试剂，最后用水稀释到刻度，摇匀。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁
实验六 邻二氮菲分光光度法测定微量铁1．实验要求（1）了解可见分光光度计结构及工作原理及使用方法； （2）掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的基本原理及方法； （3）掌握标准系列的配制及标准曲线的制作方法； （4）掌握吸收曲线的制作方法。
2．实验原理4Fe 3+ + 2NH 2OH4Fe 2+ + N 2O + H 2O + 4H +NNFe32+NNFe 2++ 3（显色剂） （橙红色） 1,10-邻二氮杂菲 1,10-邻二氮杂菲亚铁3．仪器和试剂（2）试剂① 铁标准溶液 =ρ10.0μg /mL●铁标准储备液=ρ100.0μg/mL准确称取0.8634g优级纯的铁铵矾NH4Fe(SO4)2·12H2O于小烧杯中，加水溶解，加入3mol/L H2SO4溶液10mL，酸化后的溶液转移到1000mL 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
●铁标准溶液=ρ10.0μg/mL移取100.0μg/mL铁储备液10.00 mL于100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
②盐酸羟胺水溶液（用时配制）100g/L③邻二氮菲（又称邻菲罗啉）溶液 1.5 g/L称取0.75g邻二氮菲于小烧杯中，加入2～3 mL95%乙醇溶解，再用蒸馏水稀释到500mL。
避光保存，两周内有效。
④ NaAc溶液 1.0mol/L称取41g分析纯醋酸钠，加水溶解后，稀释至500mL。
⑤广泛pH试纸和不同范围的精密pH试纸。
4．实验步骤及数据记录（1）标准系列及试液的配制容量瓶编号245680.0mL2.0mL4.0mL5.06.0mL8.0mL试液25mL1*邻二氮菲摇匀NaAc H2O稀释摇匀刻度10%,1.0mL摇匀A（2）吸收曲线的测绘0号5号吸收池1cmA440～540nm10～1nm/隔5．实验结果计算（1）水样中铁的质量浓度 ρ（Fe ）=00.5mV m =（mg/L ） 式中 m ——5.00mL 水样中铁的质量（从标准曲线上查得） V ——水样体积（5.00mL ）（2）bcA =ε6．思考题（1）吸收曲线与标准曲线各有何使用意义？（2）测绘吸收曲线时，在510nm 附近，测量点间隔为什么要密一些？ （3）实验所用的参比溶液为什么选用试剂空白，而不用蒸馏水？ （4）配制500m L100μg /mL 的铁标准溶液需称取多少克的NH 4Fe(SO 4)2•12H 2O?。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁
邻二氮菲分光光度法测定微量铁分光光度法测铁含量一、实验目的⒈学习确定实验条件的方法，掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理；⒉掌握721型分光光度计的使用方法，并了解此仪器的主要构造。
二、实验原理⒈确定适宜的条件的原因：在可见光分光光度法的测定中，通常是将被测物与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸光度，进而求得被测物质的含量。
因此，显色条件的完全程度和吸光度的测量条件都会影响到测量结果的准确性。
为了使测定有较高的灵敏度和准确性，必须选择适宜的显色反应条件和仪器测量条件。
通常所研究的显色反应条件有显色温度和时间，显色剂用量，显色液酸度，干扰物质的影响因素及消除等，但主要是测量波长和参比溶液的选择。
对显色剂用量和测量波长的选择是该实验的内容。
⒉如何确定适宜的条件：条件试验的一般步骤为改变其中一个因素，暂时固定其他因素，显色后测量相应溶液吸光度，通过吸光度与变化因素的曲线来确定适宜的条件。
⒊本试验测定工业盐酸中铁含量的原理：根据朗伯－比耳定律：A=εbc。
当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。
只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即工业盐酸中铁的含量。
⒋邻二氮菲法的优点：用分光光度法测定试样中的微量铁，目前一般采用邻二氮菲法，该法具有高灵敏度、高选择性，且稳定性好，干扰易消除等优点。
⒌邻二氮菲法简介：邻二氮菲为显色剂，选择测定微量铁的适宜条件和测量条件，并用于工业盐酸中铁的测定。
⒍邻二氮菲可测定试样中铁的总量的条件和依据：邻二氮菲亦称邻菲咯啉（简写phen），是光度法测定铁的优良试剂。
在pH=2～9的范围内，邻二氮菲与二价铁生成稳定的桔红色配合物（（Fe(phen)3）2+）。
此配合物的lgK= 21.3，摩尔吸光系数ε510 = 1.1×104 L·mol-1·cm-1，而Fe3+稳能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。
实验八-邻二氮菲分光光度法测定微量铁
实验七邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的：（1）掌握研究显色反应的一般方法。
（2）掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的原理和方法。
（3）熟悉绘制吸收曲线的方法，正确选择测定波长。
（4）学会制作标准曲线的方法。
（5）通过邻二氮菲分光光度法测定微量铁在未知式样中的含量，掌握721型，723型分光光度计的正确使用方法，并了解此仪器的主要构造。
二、原理：可见分光光度法测定无机离子，通常要经过两个过程，一是显色过程，二是测量过程。
为了使测定结果有较高灵敏度和准确度，必须选择合适的显色条件和测量条件，这些条件主要包括入射波长，显色剂用量，有色溶液稳定性，溶液酸度干扰的排除。
（1）入射光波长：一般情况下，应选择被测物质的最大吸收波长的光为入射光。
（2）显色剂用量：显色剂的合适用量可通过实验确定。
（3）溶液酸度：选择适合的酸度，可以在不同PH缓冲溶液中加入等量的被测离子和显色剂，测其吸光度，作DA-PH曲线，由曲线上选择合适的PH范围。
（4）有色配合物的稳定性：有色配合物的颜色应当稳定足够的时间。
（5）干扰的排除：当被测试液中有其他干扰组分共存时，必须争取一定的措施排除干扰。
邻二氮菲与Fe2+在PH2.0-9.0溶液中形成稳定橙红色配合物。
配合无的ε =1.1 ×104 L· mol ·cm-1。
配合物配合比为3：1，PH在2-9（一般维持在PH5-6）之间。
在还原剂存在下，颜色可保持几个月不变。
Fe3+与邻二氮菲作用形成淡蓝色配合物稳定性教差，因此在实际应用中加入还原剂使Fe 3+还原为Fe2+与显色剂邻二菲作用，在加入显色剂之前，用的还原剂是盐酸羟胺。
此方法选择性高Br3+、Ca2+、Hg 2+、Zn2+及Ag+等离子与邻二氮菲作用生成沉淀，干扰测定，相当于铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、Sio32-，20倍的Cr3+、Mn2+、VPO3-45倍的Co2+、Ni2+、Cu2+等离子不干扰测定。
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实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁的条件一、实验目的1、掌握分光光度计的原理、构造和使用方法。
2、学习分光光度计分析中如何确定最佳实验条件。
二、实验原理在可见光区分光光度法测量中，通常是将被测物质与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸光度，进而求得被测物质的含量。
显色反应的程度受显色剂用量、显色时间，显色液酸度等条件的影响，通过实验，确定合适的显色条件。
三、仪器及试剂分光光度计；1cm吸收池；10mL移液管； 25mL容量瓶,100ml容量瓶1．铁标准溶液100μg·mL-1（即0.01 mg·mL-1）铁标准溶液：准确称取0.3511g（NH4）2 Fe（SO4）2·6H2O于烧杯中，用2 mol·L-l盐酸15 mL溶解，移入500 mL容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。
用前，准确稀释10倍成为含铁10 ug·mL-1标准溶液。
2. 1g.L-1邻二氮菲：1.0 g邻二氮菲于小烧杯中，加入5-10ml 95%乙醇溶液溶解，再用水稀释到1000 mL。
3. 10％盐酸羟胺水溶液：10％水溶液（现用现配，避光保存）4. 醋酸钠溶液1mol/L5. 0.8 mol/L氢氧化钠溶液四、实验步骤1、吸收曲线的制作和测量波长的选择用移液管吸取0.0ml、2.0mL 10 ug·mL-1标准溶液，分别注入二个25 mL容量瓶中，加入1.0mL10%的盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2 min；再加2 mL邻二氮菲溶液，2.5mL醋酸钠溶液溶液，用水稀释至刻度，摇匀。
放置5min后，用1cm比色皿，以试剂空白为参比，在440~560nm之间，每隔10nm测一次吸光度，其中在500-520 nm之间，每隔5nm测一次吸光度。
然后以波长为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制吸收曲线，找出最大吸收波长。
2、显色剂用量影响在7只25mL容量瓶中，各加2.0 mL10 ug·mL-1铁标准溶液和1.0 mL 盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2 min。
分别加入0.1、0.25、0.5、1.0、2.0、3.0 、4.0ml 1g.L-1邻二氮菲溶液，再各加2.5mL 1mol/L醋酸钠缓冲溶液，以水稀释至刻度，摇匀。
放置5min后，以水为参比，在510 nm测量各溶液的吸光度。
其中，加2.0 mL 1g.L-1邻二氮菲溶液的显色溶液不要倒掉，用于时间影响的测定。
3、显示时间的影响取上述1中加2.0 mL 1g.L-1邻二氮菲溶液的容量瓶，在显色时间为10min、20min、30min、40min、50min、60min分别测定吸光度值。
4、溶液酸度的影响在7只25mL容量瓶中，各加入2.0 mL 10 ug·mL-1铁标准溶液和1.0 mL 盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2 min，再各分2.0ml邻二氮菲溶液，摇匀。
然后，分别用移液管准确吸取加人0.8 mol·L-1氢氧化钠溶液0.0、0.5、1.0，2.0，3.0，4.0、5.0ml于容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀，放置10min。
用精密pH试纸测定上述溶液pH值，同时在分光光度计上，波长为510 nm，以水为参比测定各溶液的吸光度。
五、数据记录1.最大吸收波长的确定六、结果讨论与思考1. 分别以波长、显色剂体积、显色时间、溶液pH为横坐标、相应的吸光度为纵坐标，绘制曲线，确定最大吸收波长、合适的显色剂用量、显色时间、溶液pH是多少？2．分光测定中比色皿盛放溶液的体积为多少，用手拿比色皿时应注意什么？实验二 邻二氮菲分光光度法测定微量铁的浓度一、实验目的1．掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的方法 2．了解分光光度计的构造、性能及使用方法 二、实验原理邻二氮菲（又称邻菲罗啉）是测定微量铁的较好试剂，在pH=2～9的条件下，二价铁离子与试剂生成极稳定的橙红色配合物。
配合物的稳K lg ＝21.3，摩尔吸光系数510 ＝11000 L·mol -1·cm -1。
在显色前，用盐酸羟胺把三价铁离子还原为二价铁离子。
4Fe 3+＋2NH 2OH →4Fe 2+ ＋ N 2O ＋ 4H ＋＋ H 2O测定时，控制溶液pH ＝5较为适宜，酸度高时，反应进行较慢，酸度太低，则二价铁离子水解，影响显色。
用邻二氮菲测定时，有很多元素干扰测定，须预先进行掩蔽或分离，如钴、镍、铜、铅与试剂形成有色配合物；钨、铂、镉、汞与试剂生成沉淀，还有些金属离子如锡、铅、铋则在邻二氮菲铁配合物形成的pH 范围内发生水解；因此当这些离子共存时，应注意消除它们的干扰作用。
三、仪器与试剂l mol·L -1醋酸钠、10%盐酸羟胺、0.1%邻二氮菲溶液、10 μg·mL -1铁标准溶液、分光光度计等。
四、实验步骤1、 标准曲线的绘制 取25 mL 容量瓶6个，分别准确吸取的10μg·mL -l 铁标准溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0和5.0 mL 于各容量瓶中，各加10％盐酸羟胺溶l mL ，摇匀，2 min 后再各加醋酸钠溶液2.5 mL 和0.1％邻二氮菲溶液2 mL ，以水稀释至刻度，摇匀。
10min 以后，在分光光度计上用l cm 比色皿，在最大吸收波长510 nm 处以试剂空白为参比测定各溶液的吸光度。
记录实验数据。
（2）吸取未知液5 mL ，按上述与标准曲线相同条件和步骤测定其吸光度。
做3个平行，记录实验数据。
五、数据记录与处理1．以铁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，用EXCEL绘制标准曲线、线性方程、相关系数。
2．计算未知液3份平行样的铁浓度和平均浓度（g·L-1）。
六、思考1. 在实验中盐酸羟胺和邻二氮菲的作用分别是什么？2、实验中试剂空白的作用是什么？3、简述可见光分光光度计的操作步骤。
实验三土壤中水溶性盐的提取及原子吸收光谱法测定土壤中水溶性镁一、实验目的1.了解土壤中水溶性盐的提取方法2.了解和掌握原子吸收光谱法的原理、结构及操作方法。
二、实验原理含金属离子的试液被雾化后并进入乙炔—空气火焰时，金属离子被原子化，产生基态原子蒸气。
该蒸气能吸收相应金属元素空心阴极灯发射出来的共振发射线的辐射能，其吸收情况服从比尔定律。
样品测得的吸光度，根据标准溶液计算的标准曲线计算相应的浓度。
一、仪器与试剂原子吸收光谱仪AA-7000、10ug/mL镁标液、SrCl2溶液、去离子水二、实验步骤1、土壤水溶性盐的提取称取20.0g过1mm筛的土壤，加去离子水100ml，在振荡机上振荡3分钟，或用手摇荡3min，然后过滤。
2、镁标准溶液的配置分别取0、0.25、0.5、1.0、1.5、2.0ml的镁标液于6个25ml容量瓶中，加1ml SrCl2溶液，用去离子水定容至刻度，摇匀待测。
3、样品溶液的配置分别取滤液0.5ml于3个容量瓶中，加1ml SrCl2溶液，用去离子水定容至刻度，摇匀待测。
三、原子光谱仪测定AA-7000测定步骤见附件。
四、结果计算根据测定结果计算标准曲线和相关系数。
2、根据测定结果计算土壤提取液中镁的平均浓度、土壤中水溶性镁的百分含量。
六、思考题1、简述原子吸收光谱仪的构成与工作原理。
2、如果测水溶性钙，能不能用镁元素的空心阴极灯作光源？附:SHIMADZU AA-7000原子吸收操作步骤（一）火焰连续法一、开机顺序：①打开电脑；②打开AA-7000主机电源；③启动WizAArd软件，选择“操作”，点击“测量”；④在ID栏输入“Admin”，登陆系统；⑤弹出“向导选择”对话框，点击“取消”，进入下一步。
二、仪器初始化在“仪器”下拉式菜单中，点击“连接”，仪器进入初始化状态。
弹出“气体调节”页面时，根据提示，打开通风设备，乙炔钢瓶主阀（逆时针旋转1圈为宜）和空压机开关。
（乙炔气体分压要求为0.08-0.10 MPa，空气压力要求为 0.35 MPa）检测完成后，点击“确定”。
弹出“火焰分析日常监测项目”页面时，请对每个项目一一进行检查并勾选，点击“确定”。
等待漏气检测结束，若不存在漏气现象，点击“确定”，完成初始化。
三、设置参数在“参数”下拉式菜单中，选择“元素选择向导”，进行元素选择。
①选择“火焰连续法”、“普通灯”，单击“下一步”；输入元素灯位；点击“谱线搜素”；谱线搜素完成后，点击“关闭”。
②校准曲线设置：输入“浓度单位”，编辑“校准曲线测量次序”。
③样品组设置：输入“浓度单位”、“样品数量”，点击“更新”；在样品ID 栏输入样品名称或编号，点击“下一步”。
④点击“连接/发送参数”，完成参数设置。
四、点火同时按下两键，直至火焰点燃，松开。
五、测量步骤①校零：把进样吸管放入去离子水中，雾化1min，点击页面底部的②测量标准样品：吸入溶液，待信号稳定后，按页面底部的，读③测量空白溶液：方法同②。
④测量未知溶液：方法同②。
测量过程中，每测完一种未知样品，应吸入去离子水雾化30s。
每测5-6个样品，应校零一次。
⑤所有样品测量完毕，吸入去离子水雾化2min，取出进样吸管，按键熄灭火焰，并关闭乙炔钢瓶主阀和空压机开关。
六、关机顺序①在“仪器”下拉式菜单中，点击“连接”，切断主机与电脑的通讯；②保存或打印数据，退出WizAArd程序；③关闭AA-7000主机电源；④关闭计算机，⑤关闭抽风设备。
实验四 电位滴定法测定醋酸的含量和解离常数一、实验目的1、熟悉电位滴定的基本原理和操作技术；2、学习电位滴定曲线确定滴定终点。
二、实验原理醋酸为有机酸（5108.1-⨯=a K ），与NaOH 的反应为：O H NaAc NaOH HAc 2+→+。
用与已知浓度的NaOH 滴定未知浓度的HAc 溶液在终点时产生pH （或mV ）值的突跃，因此根据滴定过程中pH （或mV ）值的变化情况来确定滴定的终点，进而求得各组份的含量。
滴定终点可由电位滴定曲线（指示电极电位或该原电池的电动势对滴定剂体积作图）来确定，也可以用二次微商曲线法求得。
确定滴定体积以后，从pH ～V 曲线上查出HAc 被中和一半时（1/2Ve ）的pH 值。
此时，pH=pKa,从而计算出Ka 。
醋酸在水溶液中电离如下：其离解常数为][]][[Ka HAc Ac H -+=当醋酸被中和了一半时，溶液中：[Ac -]=[HAc]，根据以上平衡式，此时Ka=[H +]，即pKa=pH 。
因此，pH ～V图中12Ve 所处的pH 值即为pKa ，从而可求出醋酸的酸常数Ka 。
三、仪器和试剂1、仪器 pHS-3C 型酸度计（含复合电极）电磁搅拌器（含搅拌子） 滴定管 铁架台（含滴定管夹） 100ml 玻璃烧杯 2、试剂 NaOH 溶液0.1mol/L ：称取4g 固体NaOH ，加入新鲜的或煮沸的除去二氧化碳的蒸馏水，完全溶解后，定容至1L ，充分摇匀标定。