第5章荧光分析法与化学发光分析法.
分析化学下册答案
第一章绪论2、对试样中某一成份进行五次测定，所得测定结果（单位ug /L)分别微0.36，0.38， 0.35，0.37，0.39。
（1）计算测定结果的相对标准偏差；（2）如果试样中该成份的真实含量是0.38μg /mL,试计算测定结果的相对误差。
解：（1）依题意可得： 37.0539.037.035.038.036.0=++++=X μg /mL标准偏差：0158.01537.039.037.036.037.035.01)(2222＝－）－＋（＋）－＋（）－（＝＝⋯⋯--∑n X X S n 相对标准偏差：％＝％＝＝27.410037.00158.0⨯X S S r⑵ ∵ X ＝0.37 μg /mL ，真实值为0.38μg /mL则 ％％＝－－＝＝63.210038.038.037.0⨯-μμX E r 答：测定结果的相对标准偏差为4.2％；测定结果的相对误差为－2.63％。
3、用次甲基蓝－二氯乙烷光度法测定试样中硼时，为制作标准曲线，配制一系列质量浓度ρB (单位mg /L)分别为0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0的标准溶液，测定吸光度A 分别为0.140，0.160，0.280，0.380，0.410和0.540。
试写出标准曲线的一元线性回归方程，并求出其相关系数。
解：依题意可设一元线性回归方程为 y ＝a+bx其中X ＝50.50.15.0+⋯⋯++＝2.6mg/mL 318.0＝Y则22121)6.20.5()6.25.0()6.20.5)(318.0540.0()318.0140.0)(6.25.0()X()(X b -+⋯⋯+--+⋯⋯+----∑∑==－－＝）（＝n i i i i i X Y Y X ＝0.0878则 a ＝x b y -＝0.318－0.0878×2.6＝0.0897则回归线性方程为y ＝0.0897＋0.0878x2/12/112121)1197.021.15(3358.1])()([))((⨯----∑∑∑===＝＝n i i ni i n i i i Y Y X X Y Y X X r ＝10.9911答：一元回归线性方程为：y ＝0.0897＋0.0878x ，其相关系数为10.9911。
化学发光和荧光的性质与应用
化学发光和荧光的性质与应用化学发光和荧光是一种具有独特性质和应用的化学现象。
这一现象在科学、工业、医药等领域有着广泛的应用。
化学发光，也称为化学发光分析或化学发光测定，是一种利用化学反应发生时产生的光来分析化合物的方法。
这种方法具有灵敏度高、分析速度快、对样品的数量要求低等优点，因此被广泛应用于环境监测、食品检测、医药研究等领域。
其中，最具代表性的化学发光方法是电化学发光法和化学发光酶标法。
电化学发光法利用电化学反应产生的活性中间体在后续反应中发生化学发光的方法。
这种方法对微量物质具有高度灵敏度，因此常被用于分析无机和有机化合物等微量物质。
化学发光酶标法则是利用化学发光酶标记化合物的方法进行检测。
这种方法处理简单，样品数量要求低，因此在食品、药品、环境检测等领域得到广泛应用。
荧光是一种发射可见光或紫外线的现象。
荧光分为自发荧光和诱导荧光两种类型。
其中，自发荧光通常是一些化合物在受到紫外线、X射线或自然光刺激后，从低能态激发至高能态，然后再退到低能态时发出的光。
而诱导荧光则是在化合物发生化学反应过程中，受到某些物质的激发而发出光。
荧光的应用领域广泛，如环境检测、医药研究、生物成像等。
其中，荧光成像技术则是一种用于研究生物过程和诊断疾病的重要手段。
通过对受体蛋白、细胞膜等进行染色，可以直接观察到这些物质在细胞内的动态变化。
同时，荧光成像技术在抗癌药物筛选、生物传感器等领域也有着广泛的应用。
在化学发光和荧光应用的同时，也面临着一些问题。
例如，荧光染料的选择和性能优化，化学发光方法的准确性和可靠性等。
因此，未来需要通过不断的技术创新和研究来解决这些问题，推动化学发光和荧光技术的应用和发展。
第5章 荧光分析法与化学发光分析法
散射光的影响
瑞利散射光
拉曼散射光
干扰荧光测定，应采取措施消除
30
硫酸奎宁在不同波长激发下的荧光与散射光谱
31
5.1.3
荧光分光光度计
32
1. 激发光源
高压氙灯 ——强谱线的连续光谱
连续分布在250-700nm波长范围内，尤其是300-400nm波 长之间的谱线强度几乎相等
汞灯 ——线光谱
高压：近紫外区365nm,398nm，405nm，436nm，546nm，579nm 低压:紫外区，最强254nm
－Cl、－Br、－I等
第三类取代基：－R、－SO3H、－NH3＋等
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3．影响荧光强度的外部因素
温度 溶剂 pH值的影响
荧光熄灭剂的影响
散射光的干扰
24
温度和溶剂
温度：温度升高，荧光物质的荧光效率 和荧光强度下降 溶剂：溶剂极性增大，荧光波长随着而 长移，荧光强度增强；溶剂粘度减小， 荧光强度减小
化学发光分析主要用于定量分析。 1．化学发光强度与反应物浓度的关系
I Cl （t）＝ Cl dc A dt
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2．常用发光试剂
（1）鲁米诺类 （2）光泽精类
（3）钌(Ⅱ)-联吡啶配合物
（4）其它化学发光试剂
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5.2.5 应用与示例
1．无机化合物的分析 可以利用某些具有还原性的无 机阳离子和发光试剂作用对其进行测定；有些离子对 化学发光反应有增强或抑制作用，基于此，可直接测 定此类离子。此外，可利用置换偶合反应间接测定某 些离子。 2．有机化合物的分析 可以利用物质的还原性，直接 被氧化剂氧化发光测定。
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3．液相化学发光
常用的发光物质有鲁米诺、光泽精、洛粉 碱、没食子酸、过氧草酸盐等，其中鲁米 诺是最常用的发光试剂 。
荧光分析与化学发光分析
化学发光分析是利用化学发光现象进行分析测定 的一类方法。与荧光分析一样，属于发光分析的范 畴。化学发光与荧光分子的发光相似，他的大部分 性质和荧光相同，不同点在于荧光的激发能来自外 光源的激发(照射)，而化学发光的激发能则产生自 化学反应，也即某些物质在进行化学反应时，由于 吸收了反应时产生的化学能，使分子或原子被激发， 这种受激分子或原子返回基态时，以光辐射的方式 释放能量。其光辐射的能量及光谱范围由化学反应 的物质所控制(处于可见光区)。每一个化学反应都 有其特征的化学发射光谱，其发光强度则与物质的 浓度有关，这是化学发光分析的依据。
Em En
图6-7 菲、蒽、苝的光谱图
图6-8 萘、菲、蒽、苝、 并四苯混合物的常规荧光 光谱及混合物的同步光谱 图
图6-9 工厂区大气 样品萃取物中强致癌 物苯并(α)芘及其共 存物的荧光光谱和同 步光谱
三、 荧光定量分析
1. 荧光强度与浓度的关系 荧光的发光是由于物质在吸光之后发射出波长较长的荧光，因此溶液的荧光强度 与该溶液的吸光程度以及溶液中荧光物质的荧光效率有关。溶液被入射光(I0)激 发后，可以在溶液的各个方向观察到荧光强度(F)。但由于激发光源能量的一部 分被透过，因此，在透射光的方向观察荧光是不适宜的。一般是在与激发光源垂 直的方向观测。 根据比耳定律，透过光的比例为 I -ε b C (6-1) - =10 I0 式中： I0为入射光(激发光)强度； I为透过光强度；C为浓度，b为液层厚度；ε 为摩尔吸光系数。 相应地被吸收的部分是 I -ε b C (6-2) 1- - =1-10 I0 将上式重新排列，可得被吸收的光的量为 -ε b C I0-I= I0 (1-10 ) (6-3)
已知电子激发态的自旋多重性为2S+1，S是自 旋量子数的代数和。大多数分子含有偶数电子，在 基态时这些电子成对地存在于各个原子或分子轨道 中。然而，根据保利不相容原理，在一个轨道上的 这两个电子的自旋是相反的，自旋量子数为+½(↑) 和-½(↓)。由于自旋成对的结果，大多数分子的自旋 量子数的代数和S=0，此时这个分子所处的电子能 态称为单重态(singlet state)，即2S+1=1。如果分子 中有一个未成对的电子，则S=½，而2S+1=2，此 种状态称为双重态(doublet state)。若分子中有两个 未成对的电子，此时S=1,2S+1=3，这种状态称为 三重态(triplet state)。
绪论-分子光谱习题参考答案
第一章 绪 论⒈ 解释下列名词⑴仪器分析与化学分析； ⑵标准曲线与线性范围；⑶灵敏度﹑精密度﹑准确度和检出限。
解：⑴化学分析是以物质的化学反应为基础的分析方法。
仪器分析是以物质的物理性质和物理化学性质（光﹑电﹑热﹑磁等）为基础的分析方法，这类方法一般需要使用比较复杂的仪器。
⑵标准曲线是被测物质的浓度或含量与仪器响应信号的关系曲线。
标准曲线的直线部分所对应的被测物质浓度（或含量）的范围称该方法的线性范围。
⑶物质单位浓度或单位质量的变化引起响应信号值变化的程度，称该方法的灵敏度。
精密度是指使用同一方法，对同一试样进行多次测定所得结果的抑制程度。
试液含量的测定值与试液含量的真实值（或标准值）相符合的程度称为准确度。
某一方法在给定的置信水平可以检出被测物质的最小浓度或最小质量，称为这种方法对该物质的检出限。
⒉ 对试样中某一成分进行5次测定，所得的测量结果（单位µg ﹒mL -1）分别为0.36，0.38，0.35，0.37，0.39.⑴ 计算测定结果的相对标准偏差；⑵ 如果试样中该成分的真实值含量是0.38µg ﹒L -1，试计算测定结果的相对误差解：⑴ x =n1(x 1+x 2+…+x n )=0.37； S=1)(12--∑=n x x n i i =0.0158； r s =x s ×100℅=4.27℅。
⑵ E r =μμ-x ×100℅=-2.63℅。
⒊ 用次甲基蓝–二氯乙烷光度法测定试样中硼时，为制作标准曲线，配制一系列质量浓度ρB （单位mg ﹒L -1）分别为0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0的标准溶液，测得吸光度A 分别为0.140，0.160，0.280，0.380，0.410和0.540。
试写出该标准曲线的一元线性回归方程，并求出相关系数。
解：b=∑∑==---n i i n i i i x xy y x x 121)())((=0.0878; a=y -b x = 0.0914;所以该标准曲线的一元线性回归方程为： A=0.0914+0.0878ρB r=2111221)()())((⎥⎦⎤⎢⎣⎡----±∑∑∑===n i n i i i n i i i y y x x y y x x = 0.9911。
荧光和化学发光免疫分析方法
荧光和化学发光免疫分析方法荧光和化学发光免疫分析方法是一种常用的生物分析技术，广泛应用于生命科学研究、临床诊断和药物研发等领域。
本文将详细介绍荧光和化学发光免疫分析方法的原理、应用以及优缺点等方面。
首先，荧光免疫分析方法利用标记有荧光物质的抗体或抗原与待检测物相互作用，通过检测荧光信号来定量分析目标物。
其原理是当荧光标记物被激发后，会发射出特定波长的荧光信号，利用荧光光谱仪测量荧光强度来确定目标物的浓度。
荧光免疫分析方法具有高灵敏度、高选择性和多样性的优点，可用于检测蛋白质、核酸、细胞等生物分子。
化学发光免疫分析方法则是利用特定的化学反应产生荧光信号来检测目标物。
常用的化学发光免疫分析方法有酶免疫分析和化学发光免疫分析。
在酶免疫分析中，酶标记的抗体或抗原与待检测物相互作用后，加入底物，酶催化底物发生化学反应产生荧光信号。
而化学发光免疫分析则是通过特定的化学反应产生激发态分子，激发态分子发生无辐射跃迁产生荧光信号。
化学发光免疫分析方法具有高灵敏度、快速、稳定性好的特点，常用于临床诊断和药物研发等领域。
荧光和化学发光免疫分析方法在生命科学研究中有广泛的应用。
例如，在蛋白质研究中，可以利用荧光免疫分析方法检测蛋白质的表达水平、相互作用以及酶活性等。
在细胞研究中，荧光免疫分析方法可以用于检测细胞的分子分布、内源性蛋白质的表达和细胞信号传导等。
此外，荧光和化学发光免疫分析方法还可以用于检测病原体、药物残留和环境污染物等。
荧光和化学发光免疫分析方法具有许多优点。
首先，这些方法具有高灵敏度，可以检测到非常低浓度的目标物。
其次，这些方法具有高选择性，能够在复杂的样品中准确地检测目标物。
此外，荧光和化学发光免疫分析方法还可以实现高通量分析，节省时间和成本。
然而，荧光和化学发光免疫分析方法也存在一些缺点。
首先，荧光信号受到背景干扰的影响，可能导致误差的产生。
其次，荧光标记物的稳定性较差，容易受到光照和温度等因素的影响。
分子发光—荧光、磷光和化学发光法
第5章分子发光—荧光、磷光和化学发光法(Molecular Emisssion and Luminescence)（3学时）教学目的和要求：1.学会分子发光——荧光、磷光和化学发光原理。
2.了解分子发光——荧光、磷光和化学发光法的特点和应用。
教学要点和所涵盖的知识点：荧光、磷光和化学发光原理、仪器、分析方法及应用重点和难点：荧光的原理、仪器、分析方法及应用。
分子发光：处于基态的分子吸收能量(电、热、化学和光能等)被激发至激发态，然后从不稳定的激发态返回至基态并发射出光子，此种现象称为发光。
发光分析包括荧光、磷光、化学发光、生物发光等。
物质吸收光能后所产生的光辐射称之为荧光和磷光。
第一节荧光分析法一、概述分子荧光分析法是根据物质的分子荧光光谱进行定性，以荧光强度进行定量的一种分析方法。
荧光分析的特点：灵敏度高：视不同物质，检测下限在0.1~0.001μg/mL之间。
可见比UV-Vis 的灵敏度高得多。
选择性好：可同时用激发光谱和荧光发射光谱定性。
结构信息量多：包括物质激发光谱、发射光谱、光强、荧光量子效率、荧光寿命等。
应用不广泛：主要是因为能发荧光的物质不具普遍性、增强荧光的方法有限、外界环境对荧光量子效率影响大、干扰测量的因素较多。
二、基本原理1、分子荧光的产生处于分子基态单重态中的电子对，其自旋方向相反，当其中一个电子被激发时，通常跃迁至第一激发态单重态轨道上，也可能跃迁至能级更高的单重态上。
这种跃迁是符合光谱选律的，如果跃迁至第一激发三重态轨道上，则属于禁阻跃迁。
单重态与三重态的区别在于电子自旋方向不同，激发三重态具有较低能级。
在单重激发态中，两个电子平行自旋，单重态分子具有抗磁性，其激发态的平均寿命大约为10-8s;而三重态分子具有顺磁性，其激发态的平均寿命为10-4~1s以上(通常用S和T分别表示单重态和三重态)。
处于激发态的电子，通常以辐射跃迁方式或无辐射跃迁方式再回到基态。
辐射跃迁主要涉及到荧光、延迟荧光或磷光的发射；无辐射跃迁则是指以热的形式辐射其多余的能量，包括振动弛豫( VR)、内部转移(IR)、系间窜跃(IX)及外部转移(EC)等，各种跃迁方式发生的可能性及程度，与荧光物质本身的结构及激发时的物理和化学环境等因素有关。
化学发光免疫分析与荧光免疫分析的差别
化学发光免疫分析与荧光免疫分析的差别
在体外诊断领域，化学发光免疫分析CLIA与免疫荧光分析IFA都是常⽤的检测⽅法，最终也都是以光度计进⾏检测，不过两者的原理是有本质区别的。
化学发光免疫分析相⽐于放射免疫、荧光免疫、酶联免疫，这种⽅法更有优势，它具有灵敏度⾼、特异性强、线性范围宽、操作简便、不需要⼗分昂贵的仪器设备等特点，⽽且⽆辐射、
标记物有效期长并可实现全⾃动化。
化学发光试剂吖啶酯
化学发光免疫与荧光免疫区别：
虽然两者都是发光反应，最直观的区别就是，化学发光是试剂⾃⾝发光，⽽荧光是⽤光源照射（通常是紫外线）后再发光。
两者的发光原理是不⼀样的，因此检测的结果也会产⽣差异。
化学发光是利⽤化学反应产⽣的能量促使产⽣能级跃迁，从⽽发光，典型的如鲁⽶诺检测⾎迹；荧光是⼀种光致发光现象，必须提供光源去激发分⼦产⽣能级跃迁，进⽽发光。
化学发光⽐荧光免疫⼲扰⼩：
使⽤这两种⽅法进⾏免疫分析时，区别很明显，化学发光⽆需外加光源，背景⼲扰⼩；⽽荧光则需要外加光源，在垂直光源的⽅向上检测，⽣物样品中的蛋⽩质、氨基酸等分⼦也会产⽣
背景荧光，背景稍⾼⼀些，需要选择合适的荧光试剂，以及样品处理⽅法以减少⾮特异性吸附
蛋⽩的影响。
直接法是每个抗原的抗体都要荧光标记，⽽且荧光标记后可能会影响抗体效价甚⾄失效。
间接法只要对相应的抗原做出相应的抗体，再⽤标记好的⼆抗结合上就⾏了，不⽤每个抗体都要
荧光标记，⽽且对⼀抗的效价影响甚微。
化学发光⼲扰很⼩，特异性⾮常⾼，整个⽅法的使⽤
受到化学分析本⾝不特异性的制约。
磁珠材料的发展使化学发光技术的发展越来越成熟。
第五章分子发光—荧光、磷光和化学发光法
2.化学发光效率
发射光子的分子数 cl ce em 参加反应的分子数
激发态分子数 化学效率： ce 参加反应分子数
发光效率：
em
产生光子数 激发态分子数
时刻t 的化学发光强度(单位时间发射的光量子数)：
dc I cl t cl dt
dc/dt 分析物参加反应的速率；
目 录
5-1 荧光和磷光光谱法
5-1-1 5-1-2 5-1-3 5-1-4 基本原理 荧光分析仪器 荧光分析方法的特点与应用 磷光分析法
5-2 化学发光与生物发光分析法
5-1-1 基本原理
5-1-1-1 5-1-1-2 5-1-1-3 5-1-1-4 荧光和磷光的产生 光谱曲线 荧光的影响因素 荧光强度的定量关系
5-1-1-4 荧光强度的定量关系
根据Parker方程，荧光强度F与荧光物质的浓度c 之间的关系是：
F 2.3kI 0 Fcl[1 (2.3cl) / 2! (2.3cl) 2 / 3! ]
k 与仪器有关的常数
I0 激发光的强度 F 荧光量子产率 荧光物质在激发波长处的摩尔吸光系数 l 光程长度。
当cl项很小时，括号内第二项及以后的高次项均 可忽略不计，Parker方程可简化为： F 2.3kI 0 Fcl F = Kc
5-1-2 荧光分析仪器
5-1-2-1 荧光分析仪器框图
光源
消除溶液中可能共存的其它 光线的干扰,以获得所需要 的荧光.
显示
激发光单色器
信号处理
I0
样品池 F 发射光单色器 (荧光单色器) 检测器
4.化学发光反应的类型
（1）气相化学发光反应 a. 一氧化氮与O3的发光反应(可测定空气中NO2的含量） NO + O3 → NO2* NO2* → NO2 + h
荧光分析与化学发光分析
已知电子激发态的自旋多重性为2S+1，S是自 旋量子数的代数和。大多数分子含有偶数电子，在 基态时这些电子成对地存在于各个原子或分子轨道 中。然而，根据保利不相容原理，在一个轨道上的 这两个电子的自旋是相反的，自旋量子数为+½(↑) 和-½(↓)。由于自旋成对的结果，大多数分子的自旋 量子数的代数和S=0，此时这个分子所处的电子能 态称为单重态(singlet state)，即2S+1=1。如果分子 中有一个未成对的电子，则S=½，而2S+1=2，此 种状态称为双重态(doublet state)。若分子中有两个 未成对的电子，此时S=1,2S+1=3，这种状态称为 三重态(triplet state)。
3. 化合物的荧光和化学结构的关系 产生荧光必须具备两个条件。首先，物质分子必须具有 能吸收紫外或可见光的生色基团；其次该物质应具有一定的 荧光效率。分子中能发射荧光的基团，称为荧光基团。荧光 基团一定是生色基团，但生色基团未必一定是荧光基团。这 是由于它的荧光效率不高，而将所吸收的能量消耗于与溶剂 分子或其他溶质分子之间的相互碰撞，因此不能发射荧光。 荧光效率(ΦF)又称为荧光量子产率，是荧光物质吸光后所 发射的荧光量子数与所吸收的激发光的量子数的比值，即
化学发光分析是利用化学发光现象进行分析测定 的一类方法。与荧光分析一样，属于发光分析的范 畴。化学发光与荧光分子的发光相似，他的大部分 性质和荧光相同，不同点在于荧光的激发能来自外 光源的激发(照射)，而化学发光的激发能则产生自 化学反应，也即某些物质在进行化学反应时，由于 吸收了反应时产生的化学能，使分子或原子被激发， 这种受激分子或原子返回基态时，以光辐射的方式 释放能量。其光辐射的能量及光谱范围由化学反应 的物质所控制(处于可见光区)。每一个化学反应都 有其特征的化学发射光谱，其发光强度则与物质的 浓度有关，这是化学发光分析的依据。
化学发光法
化学发光法1. 简介化学发光法（Chemiluminescence）是利用化学反应产生的光信号进行分析的一种方法。
与其他光谱分析技术相比，化学发光法具有高灵敏度、快速响应和宽线性范围等优势，因此在生物医学、环境监测、食品安全等领域得到广泛应用。
2. 原理化学发光法的原理主要包括两个步骤：化学反应和光发射。
•化学反应：在化学发光法中，通常采用氧化还原反应或化学反应生成中间体，并在激发态的中间体复合过程中释放能量。
这些中间体可以是激发态的氧分子、有机过氧化物或者其他能量丰富的物质。
•光发射：中间体复合过程中释放的能量以光的形式发射出来，从而形成发光现象。
这种发光现象是由于化学反应释放的能量远远超过光学辐射所致。
3. 应用3.1 生物医学领域化学发光法在生物医学领域中得到了广泛应用，其中最典型的应用之一是酶联免疫吸附试验（ELISA）。
ELISA利用化学发光作为信号的产生，可用于检测体内蛋白质、抗体、细胞和基因等，被广泛应用于临床诊断、疫苗研发和药物筛选等方面。
3.2 环境监测化学发光法在环境监测中也有着重要的应用。
例如，利用化学发光法可以对水体中的重金属离子进行检测，通过分析发光强度可以得到重金属离子的浓度。
这种方法具有快速、灵敏的特点，被广泛应用于水质监测和环境保护中。
3.3 食品安全在食品安全领域，化学发光法也发挥着重要的作用。
例如，可以利用该方法检测食品中的农药残留、重金属和生物毒素等。
通过分析发光信号，可以快速、准确地获得食品样品中有害物质的含量，为食品质量安全提供参考。
4. 实验步骤化学发光法的实验步骤通常包括以下几个方面：1.试剂准备：根据实验需求，准备好所需的试剂，包括底物、催化剂、氧化剂等。
2.样品处理：将待检样品进行预处理，如样品的稀释、提取等，以便得到准确的分析结果。
3.反应体系搭建：将试剂按照一定比例加入到反应体系中，使其达到最佳反应条件。
4.光信号检测：利用光谱仪、荧光光度计等设备对发光信号进行检测和定量分析。
荧光和化学发光免疫分析方法
荧光和化学发光免疫分析方法荧光和化学发光免疫分析方法是现代生物医学研究和临床诊断中常用的分析方法。
这两种方法在原理和应用中有一些差异，但都具有高灵敏度、高选择性和高自动化程度的特点。
以下将详细介绍荧光和化学发光免疫分析方法的原理、应用和优缺点。
荧光免疫分析方法是基于荧光分子的发射特性进行分析的一种方法。
其原理是，通过标记抗体或抗原的荧光物质，使其具有荧光，并与待测物发生特异性的免疫反应。
然后，通过荧光测定仪器对免疫反应产生的荧光进行检测和分析。
荧光免疫法具有高灵敏度、高选择性、多样化的荧光标记物选择以及可通过多色荧光分析多个指标等特点。
因此在生物医学研究、肿瘤标志物筛查、病毒感染和免疫补体等方面具有广泛的应用。
荧光免疫分析方法主要分为直接荧光免疫分析和间接荧光免疫分析。
直接荧光免疫分析通过将荧光标记物直接结合到抗体或抗原上，实现荧光信号的检测和分析。
间接荧光免疫分析则是先将抗体与细胞或蛋白质结合，然后再用荧光标记的二级抗体结合到一级抗体上，以增强荧光信号。
这两种方法各有优缺点，可以根据具体需要选择使用。
化学发光免疫分析方法是基于化学发光反应进行分析的一种方法。
其原理是，在特定的化学反应条件下，荧光标记的抗体或抗原与待测物发生免疫反应，产生化学发光信号。
然后通过化学发光仪器对化学发光信号进行检测和分析。
化学发光免疫方法具有高灵敏度、快速、特异性高、背景干扰低等优点，因此在临床诊断和分子生物学研究中得到广泛应用。
化学发光免疫分析方法主要分为催化化学发光和基因工程发光两种类型。
催化化学发光是通过特定的酶促发光底物，在酶的作用下产生化学发光信号。
催化化学发光免疫分析方法常用于免疫分析和临床诊断。
基因工程发光则是通过将荧光基因植入生物体内，利用生物体自身的酶促发光反应产生化学发光信号。
基因工程发光免疫分析方法主要用于分子生物学研究领域。
荧光和化学发光免疫分析方法在临床诊断和生物医学研究中具有广泛的应用。
它们可以用于检测血液中的肿瘤标志物、感染性疾病的病原体抗原和抗体、免疫系统功能等指标。
分析化学-分子发光分析法
3. 流式细胞术（FCM） 对悬液中的单细胞或其他生物粒子,通过检测
标记的荧光信号，实现高速、逐一的细胞定量 分析和分选的技术。
§4 化学发光分析法
Chemiluminescence Analysis
基本原理 化学发光反应类型 化学发光测量仪器 化学发光分析法的应用
一、基本原理
化学发光是由于化学反应而导致的光发射。 发生于生命体系的化学发光称为生物发光。 生物发光均有酶（荧光素酶）参加。
最大化学发光强度与发光物质浓度成正 比： Icl max = Kc
化学发光的积分值与发光物质浓度成正 比： Icl = Kc
二、化学发光反应的类型
直接化学发光
A 十 B C＊ ， C＊ C 十 hν
间接（敏化）化学发光 A 十 B C＊ + D ， C＊+ F C 十 F＊
F＊ F 十 hν
三、New technique of fluorescence analysis
1. 激光荧光分析 F 与 I0 成正比，激光的强度大，可提高
荧光法的灵敏度。
2.时间分辨荧光分析
由于不同分子的荧光寿命不同，在激发 和检测之间延缓一段时间，使不同荧光寿命 的物质达到分别检测的目的。
时间分辨荧光免疫法 将稀土元素的螯合物标记抗体，与体液中 的抗原结合。当加入一种增效剂时，稀土 元素被释放出来，形成新的螯合物，能产生 长寿命的 荧光（10 ~1000 μs)。待样品中 蛋白质等物质所发荧光完全衰减后进行测定， 可有效消除背景干扰。 已用于测定甲胎蛋白、促性腺绒毛激素、 皮质醇等体内微量物质的测定。
2.化学发光免疫分析仪
化学发光免疫分析是将化学发光分析和 免疫分析相结合而建立的一种超微量分析 技术。兼具发光分析的高灵敏性和抗原抗 体反应的高特异性的特点。
化学发光荧光检测法
化学发光荧光检测法引言化学发光荧光检测法是一种基于物质发出的荧光或化学发光现象进行分析和检测的方法。
该方法具有灵敏度高、选择性好、操作简便等优点，被广泛应用于生命科学、环境监测、食品安全等领域。
本文将介绍化学发光荧光检测法的原理、应用及前景。
一、化学发光原理化学发光是指物质在化学反应过程中释放出的光。
在化学发光反应中，发光物质（发光剂）在激发态被激发后，经历从激发态返回基态的过程，释放出光能。
这种光能的释放可以是瞬时的一次性释放，也可以是持续的周期性释放，形成连续的光信号。
二、化学发光荧光检测方法1. 荧光探针法荧光探针法是一种常用的化学发光荧光检测方法。
通过选择合适的荧光探针，可以对目标物质进行高灵敏度、高选择性的检测。
荧光探针的选择要考虑到目标物质的特性和检测要求，常见的荧光探针包括有机染料、金属络合物等。
2. 酶标记法酶标记法是一种利用酶与底物反应产生化学发光的方法。
在酶标记法中，酶与特定的抗原或抗体结合，形成酶-抗原或酶-抗体复合物，然后通过酶底物的作用，产生化学发光。
这种方法可以用于蛋白质、核酸等生物大分子的检测。
3. 电化学发光法电化学发光法是一种利用电化学方法产生化学发光的技术。
在电化学发光中，通过电化学反应使得发光物质发生激发，从而产生化学发光。
这种方法可以用于金属离子、小分子有机物等的检测。
三、化学发光荧光检测的应用1. 生命科学领域化学发光荧光检测法在生命科学领域得到了广泛应用。
在细胞实验中，可以利用荧光探针对细胞内的蛋白质、核酸等进行检测，以研究细胞的功能与代谢。
此外，化学发光荧光检测法在基因测序、免疫分析等方面也有重要应用。
2. 环境监测化学发光荧光检测法在环境监测中具有重要作用。
例如，可以利用荧光探针检测水中的重金属离子、有机污染物等，以评估水质的安全性。
此外，化学发光荧光检测法还可以用于大气污染物的检测、土壤污染的评估等。
3. 食品安全食品安全是近年来备受关注的问题，化学发光荧光检测法在食品安全领域发挥了重要作用。
荧光分析法
2.3ECl (2.3ECl) 2 (2.3ECl) 3 1 1! 2! 3!
2.3ECl (2.3ECl) 2 (2.3ECl)3 F K I 0{1 [1 ]} 1! 2! 3! (2.3ECl) 2 (2.3ECl) 3 K I 0 [2.3ECl ] 2! 3!
影响荧光强度的主要因素
浓度：稀溶液，F∝c OH 酸度：
pH～1,有荧光
(εbc≤0.05)
O-
pH～13,无荧光
OH 无荧光
O有荧光
温度：t 低，φ增加。
溶剂：溶剂极性增大，荧光波长长移，荧光强度 增强。 温度：升高温度，增加非辐射跃迁的概率，荧光 效率降低。 表面活性剂：保护激发单重态的荧光物质，减少 非辐射跃迁的概率，提高荧光效率。
荧光和磷光分析基本原理
1 荧光和磷光的产生
激发态分子返回基态的途径
振动弛豫(vibrational relexation) 内部能量转换(internal conversion)
荧光(fluorescence)发射
外部能量转换(external conversion)
体系间跨越(intersystem crossing)
吸收光谱、荧光光谱和磷光光谱
磷＞ 荧＞ 激
3 荧光效率
φ —荧光物质的荧光效率(量子产率)：
发射荧光的量子数 吸收激发光的量子数
荧光效率越高，辐射跃迁概率就越大，物质 发射的荧光也就越强。通常在0.1—1之间。
荧光效率(fluorescence efficiency) 荧光量子产率(fluorescence quantum yield)
分析化学第四版-习题答案
分析化学第四版-习题答案第一章绪论1、仪器分析和化学分析：仪器分析是以物质的物理性质和物理化学性质（光、电、热、磁等）为基础的分析方法，这类方法一般需要特殊的仪器，又称为仪器分析法；、化学分析是以物质化学反应为基础的分析方法。
2、标准曲线与线性范围：标准曲线是被测物质的浓度或含量与仪器响应信号的关系曲线；标准曲线的直线部分所对应的被测物质浓度（或含量）的范围称为该方法的线性范围。
3、灵敏度、精密度、准确度和检出限：物质单位浓度或单位质量的变化引起响应信号值变化的程度，称为方法的灵敏度；精密度是指使用同一方法，对同一试样进行多次测定所得测定结果的一致程度；试样含量的测定值与试样含量的真实值（或标准值）相符合的程度称为准确度；某一方法在给定的置信水平上可以检出被测物质的最小浓度或最小质量，称为这种方法对该物质的检出限。
第三章光学分析法导论1、原子光谱和分子光谱：由原子的外层电子能级跃迁产生的光谱称为原子光谱；由分子的各能级跃迁产生的光谱称为分子光谱。
2、原子发射光谱和原子吸收光谱：当原子受到外界能量（如热能、电能等）的作用时，激发到较高能级上处于激发态。
但激发态的原子很不稳定，一般约在10-8 s内返回到基态或较低能态而发射出的特征谱线形成的光谱称为原子发射光谱；当基态原子蒸气选择性地吸收一定频率的光辐射后跃迁到较高能态，这种选择性地吸收产生的原子特征的光谱称为原子吸收光谱。
3、线光谱和带光谱：4、光谱项和光谱支项；用n、L、S、J四个量子数来表示的能量状态称为光谱项，符号为n 2S + 1 L；把J值不同的光谱项称为光谱支项，表示为n 2S + 1 L J。
5、统计权重和简并度；由能级简并引起的概率权重称为统计权重；在磁场作用下，同一光谱支项会分裂成2J＋1个不同的支能级，2J＋1称为能级的简并度。
6、禁戒跃迁和亚稳态；不符合光谱选择定则的跃迁叫禁戒跃迁；若两光谱项之间为禁戒跃迁，处于较高能级的原子具有较长的寿命，原子的这种状态称为亚稳态。
化学发光荧光检测法
化学发光荧光检测法一、引言化学发光荧光检测法是一种常用于分析检测的方法，通过利用物质的发光性质来测定目标物质的含量或检测目标物质的存在与否。
该方法具有高灵敏度、高选择性和非破坏性等特点，已广泛应用于生物医学、环境监测、食品安全等领域。
二、原理化学发光荧光检测法的原理基于荧光物质的激发与发射过程。
荧光物质在激发光的照射下，吸收光能并处于激发态，之后从激发态跃迁回基态时会放出特定波长的荧光。
这种荧光可以通过光谱仪或荧光显微镜等仪器进行检测和测量。
三、应用1. 生物医学领域在生物医学领域，化学发光荧光检测法被广泛用于分析检测生物标志物、药物代谢产物、细胞活性等。
例如，通过标记荧光染料或荧光标记抗体，可以实现对特定蛋白质、核酸或细胞的定量分析和成像。
2. 环境监测领域化学发光荧光检测法在环境监测领域中具有重要的应用价值。
例如，通过荧光探针检测水体中的重金属离子、有机污染物等，可以实现对水质的快速准确分析和监测。
3. 食品安全领域化学发光荧光检测法在食品安全领域中也得到了广泛应用。
例如，通过荧光标记的抗体或DNA探针检测食品中的残留农药、重金属、致病菌等有害物质，可以保障食品质量和食品安全。
四、优势与挑战1. 优势化学发光荧光检测法具有高灵敏度和高选择性的优势，可以实现对微量目标物质的检测。
此外，该方法还具有非破坏性、简便快速和多样性的特点，可以适用于不同样品的分析检测。
2. 挑战在应用化学发光荧光检测法时，也面临一些挑战。
例如，荧光信号的干扰、背景噪声的影响以及标记物的稳定性等问题需要克服。
此外，荧光物质的选择、标记方法的优化等也是需要注意的方面。
五、发展趋势化学发光荧光检测法正朝着更高灵敏度、更高选择性和更多样化的方向不断发展。
随着纳米技术的发展，纳米荧光探针的研究也日益成熟，将为化学发光荧光检测法带来更多的应用潜力。
此外，结合机器学习和人工智能等技术，可以进一步提高分析检测的准确性和效率。
六、结论化学发光荧光检测法作为一种重要的分析检测方法，已在生物医学、环境监测、食品安全等领域发挥着重要作用。
药物分析中电化学发光法与荧光光谱法的比较研究
药物分析中电化学发光法与荧光光谱法的比较研究一、引言在药物分析领域，检测方法的选择对于确保分析结果的准确性和可靠性至关重要。
本文将对药物分析中常用的两种方法——电化学发光法和荧光光谱法进行比较研究，探究它们的优势和局限性。
二、电化学发光法1. 原理简介电化学发光法是一种使用电化学方法与发光技术相结合的分析方法。
其基本原理是通过在电极表面引入物质，使其发生电化学反应并产生电化学发光。
该方法具有灵敏度高、选择性好、响应时间短等优点。
2. 应用领域电化学发光法在药物分析中具有广泛的应用。
例如，可以用于药物的含量测定、药物质量控制、代谢产物的检测等。
其高灵敏度和较低的检测限使其成为药物分析领域中重要的手段之一。
3. 优势（1）高灵敏度：电化学发光法对于药物的微量检测具有很高的灵敏度，可以满足分析的需求。
（2）选择性好：该方法可以通过调整电极材料和电催化剂的种类，提高分析物的选择性。
（3）响应时间短：电化学发光法具有较快的响应速度，可以实现快速准确的分析。
4. 局限性（1）适用性较窄：电化学发光法只适用于部分有发光性质的物质，对于大部分药物以及非发光性质的物质不适用。
（2）复杂性：电化学发光法在操作上相对复杂，需要一定的仪器和技术支持，对操作人员的要求较高。
三、荧光光谱法1. 原理简介荧光光谱法是一种基于物质分子在激发态和基态之间跃迁的发光现象进行药物分析的技术。
荧光光谱法具有较高的灵敏度和选择性，被广泛应用于药物检测和分析。
2. 应用领域荧光光谱法在药物分析中也有着重要的应用。
例如，可以用于药物的质量控制、定量分析、药物研究等，特别是对于具有荧光性质的药物，荧光光谱法是一种非常有效的检测手段。
3. 优势（1）高选择性：荧光光谱法可以通过选取适当的激发光波长和检测光波长，提高分析物的选择性。
（2）灵敏度高：荧光光谱法对于荧光物质具有较高的灵敏度，可以准确测定药物的含量。
（3）简便易行：荧光光谱法操作简单，不需要复杂的实验条件和仪器设备。
第5章荧光法与化学发光法解读.
散射光的影响
瑞利散射光
拉曼散射光
干扰荧光测定，应采取措施消除
30
硫酸奎宁在不同波长激发下的荧光与散射光谱
31
5.1.3
荧光分光光度计
32
1. 激发光源
高压氙灯 ——强谱线的连续光谱
连续分布在250-700nm波长范围内，尤其是300-400nm波 长之间的谱线强度几乎相等
汞灯 ——线光谱
高压：近紫外区365nm,398nm，405nm，436nm，546nm，579nm 低压:紫外区，最强254nm
27
荧光熄灭剂
荧光熄灭是指荧光物质分子与溶剂分子或溶质 分子相互作用引起荧光强度降低的现象。
引起荧光熄灭的物质称为荧光熄灭剂。
28
常见的荧光熄灭剂
卤素离子、重金属离子、氧分子、硝基化合物、 重氮化合物、羰基化合物、羧基化合物
Байду номын сангаас
荧光熄灭的形式：
a、碰撞、 b、生成不发光配位化合物 c、荧光物质氧化
29
（2）产生荧光的必备条件
强紫外-可见吸收 一定的荧光效率
π→π*跃迁
强吸收带
n →π*跃迁
弱吸收带
存在共轭的π→π*跃迁， φf高，荧光强度大。
18
2．影响荧光强度的结构因素
(1)共轭效应 (2)分子的刚性与共平面性 (3)取代基效应
19
(1)共轭效应
绝大多数能产生荧光的物质都含有芳香环或杂 环，因为芳香环或杂环分子具有长共轭的 π→π*跃迁。π电子共轭程度越大，荧光强度 （荧光效率）越大，而荧光波长也长移。
5.1.3 荧光分光光度计 5.1.4 分析方法 5.1.5 应用示例
4
5.1.1
(完整版)荧光和化学发光免疫分析方法
荧光和化学发光免疫分析方法免疫分析是利用抗原抗体反应进行的检测方法，即利用抗原与抗体的特异性反应, 应用制备好的抗原或抗体作为试剂，以检测标本中的相应抗体或抗原.由于免疫的特异性结合，免疫分析方法具有很好的选择性，荧光免疫分析和化学发光免疫分析是其中典型的两种。
本文将对这两种免疫分析方法进行详细的介绍。
一、免疫免疫是指机体免疫系统识别自身与异己物质,并通过免疫应答排除抗原性异物,以维持机体生理平衡的功能。
免疫是人体的一种生理功能，人体依靠这种功能识别“自己”和“非己”成分，从而破坏和排斥进入人体的抗原物质，或人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等，以维持人体的健康.特异性免疫系统，是一个专一性的免疫机制,针对一种抗原所生成的免疫淋巴细胞（浆细胞）分泌的抗体,只能对同一种抗原发挥免疫功能.而对变异或其他抗原毫无作用。
1、抗原1。
1抗原的定义抗原：是一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答（免疫原性) ，并能与相应抗体在体内或体外发生特异性结合的物质(免疫反应性)。
抗原一般为大分子物质，其分子量在10kD以上.1。
2抗原的分类完全抗原：同时具有免疫原性和免疫反应性的抗原，如细菌、病毒、异种动物血清等。
半抗原：仅具有与相应抗原或致敏淋巴细胞结合的免疫反应性，而无免疫原性的物质。
如大多数的多糖、类脂及一些简单的化学物质，它们本身不具免疫原性，但当与蛋白质大分子结合后形成复合物，便获得了免疫原性，1。
3抗原的性质决定簇是指抗原分子表面的基团,它直接决定免疫学反映的特异性.抗原通过抗原决定簇与相应淋巴细胞表面抗原受体结合，从而激活淋巴细胞，引起免疫应答，抗原也藉此与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合。
因此,抗原决定簇是被免疫细胞识别的靶结构，也是免疫反应具有特异性的物质基础。
2、抗体2.1抗体的定义抗体：是机体受抗原刺激后，由淋巴细胞合成的一类能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白。
2.2抗体的结构抗体是机体受抗原刺激后，由淋巴细胞特别是浆细胞合成的一类能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白，因其具有免疫活性故又称作免疫球蛋白。
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化学发光：基于化学反应产生能量来激发分子，分子由激发
态回到基态时产生的光辐射现象。
2
特点
荧光分析法：灵敏度高、选择性好
化学发光分析法：灵敏度高；线性范围宽；分析
速度快；仪器设备简单，不需要光源及单色器 等；没有散射光及杂散光等引起的背景值。
3
5.1 荧光分析法
5.1.1 基本原理
5.1.2 影响荧光强度的因素
15
5.1.2 影响荧光强度的因素
1．荧光效率与荧光产生的条件 2．影响荧光强度的结构因素 3．影响荧光强度的外部因素
16Leabharlann (1)荧光效率激发态分子发射荧光的光子数与基态分子吸收激发
光的光子数之比，常用φf表示：
发射荧光的光子数 f 吸收激发光的光子数
φf (0~1)
φf 大的有荧光发射
17
20
苯
λ ex 205nm
萘
268nm 321nm
蒽
356nm 404nm
λ em 278nm
φf
0.11
0.29
0.36
21
(2)分子的刚性与共平面性
在同样的长共轭分子中，分子的刚性和共 平面性越大，荧光率越大，并且荧光波 长产生长移。
C H2
22
(3)取代基效应
第一类取代基：－NH2、－OH、－OCH3、 －NHR、－NR2、－CN等 第二类取代基：－COOH、－NO2、－C＝ O、－NO、－SH、－NHCOCH3、－F、
5.1.3 荧光分光光度计 5.1.4 分析方法 5.1.5 应用示例
4
5.1.1
基本原理
1．分子中电子的激发过程 2．分子荧光的产生 3．荧光光谱的类型和特征
5
1．分子中电子的激发过程
6
2.分子荧光的产生
振动弛豫 内部能量转换 荧光发射
外部能量转换
体系间跨越 磷光发射
7
3．荧光光谱的类型和特征
第5章 荧光分析法与 化学发光分析法
基本内容
5.1 5.2 荧光分析法 化学发光分析法
1
相关定义
光致发光：分子、原子吸收光辐射时被激发，然后再发射出
与吸收的波长相同或更长光的现象。
荧光：物质分子吸收光子能量被激发后从激发态的最低振动 能级返回到基态时所发射出的光。 分子荧光分析法 ：研究物质分子的荧光谱线位置及其强度进 行物质鉴定和含量测定的方法 ，简称荧光分析法 。
33
2. 单色器
激发单色器---除去不需要的光线 发射单色器---选择不同的荧光发射波长
34
3. 样品池
低荧光的玻璃或石英
方形适用于90°测量
35
4.检测器
光电倍增管
36
5.读出系统
数字电压表 记录仪 带有计算机控制的读数装置
37
5.1.4 分析方法
溶液产生荧光的光路示意图
38
1．荧光强度与物质浓度的关系
－Cl、－Br、－I等
第三类取代基：－R、－SO3H、－NH3＋等
23
3．影响荧光强度的外部因素
温度 溶剂 pH值的影响
荧光熄灭剂的影响
散射光的干扰
24
温度和溶剂
温度：温度升高，荧光物质的荧光效率 和荧光强度下降 溶剂：溶剂极性增大，荧光波长随着而 长移，荧光强度增强；溶剂粘度减小， 荧光强度减小
F=K’·φf· I0（1-e-εbC）
K’——仪器常数，φf——激发光强度
当C很小时，A=εbC≤0.05时，
e-εbc=1-εbc
F=k’·φf· I0εbC=KC
39
2．定量分析方法
标准曲线法 比例法 多组分混合物的荧光分析
40
3．荧光分析新技术简介
（1）激光荧光分析 （2）时间分辨荧光分析
散射光的影响
瑞利散射光
拉曼散射光
干扰荧光测定，应采取措施消除
30
硫酸奎宁在不同波长激发下的荧光与散射光谱
31
5.1.3
荧光分光光度计
32
1. 激发光源
高压氙灯 ——强谱线的连续光谱
连续分布在250-700nm波长范围内，尤其是300-400nm波 长之间的谱线强度几乎相等
汞灯 ——线光谱
高压：近紫外区365nm,398nm，405nm，436nm，546nm，579nm 低压:紫外区，最强254nm
25
pH值的影响
当荧光物质本身是弱酸或弱碱时，溶液的pH 值对该荧光物质的荧光强度有较大影响，
这主要是因为弱酸弱碱分子和它们的离子
结构有所不同，在不同酸度中分子和离子 间的平衡改变，因此荧光强度有差异。
26
苯胺在不同pH值下有下列平衡关系
NH3+ OH－ H＋ NH2 OH－ H＋ NH－
苯胺在pH7～12的溶液中主要以分子形式存在，由于 -NH2为提高荧光效率的取代基，故苯胺分子会发生 蓝色荧光。但在pH<2和pH>13的溶液中均以苯胺离 子形式存在，故不能发射荧光。
（2）产生荧光的必备条件
强紫外-可见吸收 一定的荧光效率
π→π*跃迁
强吸收带
n →π*跃迁
弱吸收带
存在共轭的π→π*跃迁， φf高，荧光强度大。
18
2．影响荧光强度的结构因素
(1)共轭效应 (2)分子的刚性与共平面性 (3)取代基效应
19
(1)共轭效应
绝大多数能产生荧光的物质都含有芳香环或杂 环，因为芳香环或杂环分子具有长共轭的 π→π*跃迁。π电子共轭程度越大，荧光强度 （荧光效率）越大，而荧光波长也长移。
1）激发光谱和发射光谱 2）荧光光谱特征
8
1）激发光谱和发射光谱
激发λ、ε 荧光λ 图形 激发光谱 发射光谱 变 不变 不变 变 F~λex图 F~λem图
9
硫酸奎宁的激发光谱（a） 及荧光光谱（b）
10
2）荧光光谱特征
（1）Stokes位移 （2）荧光发射光谱的形状与激发波长无关 （3）荧光光谱与激发光谱的镜像关系
27
荧光熄灭剂
荧光熄灭是指荧光物质分子与溶剂分子或溶质 分子相互作用引起荧光强度降低的现象。
引起荧光熄灭的物质称为荧光熄灭剂。
28
常见的荧光熄灭剂
卤素离子、重金属离子、氧分子、硝基化合物、 重氮化合物、羰基化合物、羧基化合物
荧光熄灭的形式：
a、碰撞、 b、生成不发光配位化合物 c、荧光物质氧化
29
11
蒽的激发光谱和荧光光谱
12
蒽的能级跃迁
13
与UV比较
相同点 λ区段：Vis-UV区 适用性：均可用于定性定量，多用于定量 定量方法：相似 样品性质、量：以液体为主、均少 分析时间：均快
操作难易程度：易
14
与UV比较
不同点
UV 性 质 分子吸收光谱 广 不高 10-7 透射光 1 应用范围 选择性 灵敏度 g/ml 仪器观察角度 谱线数目 FL 分子荧光光谱 有荧光的物质，较少 高 10-10~10-12 90° 2