各种酶活定义
胶原酶Ⅱ(来源于溶组织梭菌)
胶原酶Ⅱ（来源于溶组织梭菌）货号：C8150保存：-20°C，至少1年。
溶解性：胶原酶Ⅱ可以用TESCA buffer（50mM TES，0.36mM氯化钙，pH7.4，37°C）配制成1-2mg/ml。
也可以用含钙镁的PBS、含钙镁的hanks或不含血清的培养基配制。
配完后分装，避免反复冻融。
酶活定义：1个胶原消化单位（CDU）：在pH7.4，37℃以及钙离子存在的条件下，以每5小时从胶原中释放的多肽相当于茚三酮显色1微摩尔亮氨酸量为一个活性单位。
1FALGPA单位：在pH7.5、25℃以及钙离子存在的条件下，一个FALGPA水解单位每分钟可水解 1.0μmol呋喃基丙烯酰基-Leu-Gly-Pro-Ala。
产品说明：胶原酶Ⅱ为粗品，用于分离脂肪细胞，也可以用于分离各种组织、肿瘤，尤其是上皮组织。
外观为黑棕色粉末。
分子量68,000到125,000，最适PH为6.3-8.8。
胶原酶能够特异性结合-R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-序列中的中性氨基酸（X）和甘氨酸之间的肽键。
该粗品是溶组织梭菌分泌的混合酶。
主要为胶原酶、中性蛋白酶和梭菌蛋白酶。
其中梭菌蛋白酶是被氧化的、最不活泼的酶，组织的分离必须依靠胶原酶和中性蛋白酶两者共同作用。
激活剂：Ca2+，每摩尔酶需要4g钙离子激活。
抑制剂：EGTA、还原性谷胱甘肽、β-巯基乙醇、巯基乙酸钠、8-羟基喹啉、2,2'-联吡啶等。
底物：不同类型的胶原是其天然底物，而一些合成的多肽也可以作为其底物，比如：第1页，共2页N-CBZ-gly-pro-gly-gly-pro-ala(Km=0.71mM)、N-CBZ-gly-pro-leu-gly-pro、N-(3-(2-furyl)acryloyl)-leu-gly-pro-ala(FALGPA)、4-Phenylazo benzyloxycarbonyl-pro-leu-gly-pro-D-arg、O-N-2,4-Dinitrophenyl-pro-gln-gly-ile-ala-gly-gln-D-arg。
食品酶学考试重点
食品酶学重点1、酶活概念定义：在一定条件下，一定时间内将一定量的底物转化为产物所需要的酶量。
可以用每克酶制剂或每毫升酶制剂含有多少酶单位来表示（U/g或U/ml）。
2、生长因子概念功能生长因子是指某些微生物不能用普通的碳源、氮源物质进行合成，而必须另外加入少量的生长需求的有机物质。
分类：化学结构分成维生素、氨基酸、嘌呤（或嘧啶）及其衍生物和类脂等四类功能：以辅酶与辅基的形式参与代谢中的酶促反应3、酶活性部位活性部位：酶分子中直接与底物结合，并和酶催化作用直接有关的部位。
4、酶有几种诱导物诱导物一般可以分为3类：酶的作用底物如纤维素酶、淀粉酶、蛋白酶等酶的催化反应产物如纤维二糖诱导纤维素酶作用底物的类似物蔗糖甘油单棕榈酸诱导蔗糖酶5、PAGE电泳几类PAGE根据其有无浓缩效应，分为：连续电泳:采用相同孔径的凝胶和相同的缓冲系统不连续电泳:采用不同孔径的凝胶和不同缓冲体系不连续PAGE分为：电荷效应、分子筛效应、浓缩效应6、果胶酶几种（1）聚半乳糖醛酸酶（PG）：a.内切PG b.外切（exo-PG）（2）聚甲基半乳糖醛酸裂解酶（PMGL）：即果胶裂解酶。
（3）聚半乳糖醛酸裂解酶（PGL）（4）果胶酯酶（PE）7、几类酶包埋法(1)凝胶包埋法天然凝胶：条件温和，操作简便，对酶活影响小，强度较差。
合成凝胶：强度高，耐温度、pH值变化强，因需聚合反应而使部分酶变性失活。
适用性：不适用于底物或产物分子很大的酶类的固定化。
(2)半透膜（微胶囊）包埋法将酶包埋在由各种高分子聚合物制成的小球内。
半透膜：聚酰胺膜、火棉膜等，孔径几埃至几十埃，比酶分子直径小。
适用性：底物和产物都是小分子物质的酶。
微胶囊：直径一般只有几微米至几百微米。
8、单体酶、寡聚酶、多酶复合体单体酶（monomeric enzyme)：一般由一条多肽链组成，如溶菌酶；但有的单体酶是由多条肽链组成，肽链间二硫键相连构成一整体。
寡聚酶(oligomeric enzyme)：由几个或多个亚基组成，亚基牢固地联在一起，单个亚基没有催化活性。
多种酶酶活测定方法
木聚糖酶活力的测定方法1.木聚糖酶活力单位定义在37℃、pH值为5.5的条件下，每分钟从浓度为5mg/ml的木聚糖溶液中降解释放1umol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位u。
2.测定原理木聚糖酶能将木聚糖降解成寡糖和单糖。
具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与DNS试剂发生显色反应。
反应液颜色的强度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中木聚糖酶的活力成正比。
因此，通过分光比色测定反应液颜色的强度，可以计算反应液中木聚糖酶的活力。
3.试剂与溶液除特殊说明外，所用的试剂均为分析纯，水均为符合GB/T6682中规定的三级水。
3.1 乙酸溶液，c（CH3COOH）为0.1mol/L：吸取冰乙酸0.60ml。
加水溶解，定容至100ml。
3.2 乙酸钠溶液，c（CH3COONa）为0.1mol/L：称取三水乙酸钠1.36g。
加水溶解，定容至100ml。
3.3 氢氧化钠溶液，c（NaOH）为200g/L：称取氫氧化鈉20.0g。
加水溶解，定容至100ml。
3.4 乙酸——乙酸钠缓冲溶液，c（CH3COOH—CH3COONa）为0.1mol/L，pH值为5.5：称取三水乙酸钠23.14g，加入冰乙酸1.70ml。
再加水溶解，定容至2000ml。
测定溶液的pH值。
如果pH值偏离5.5，再用乙酸溶液（3.2）或乙酸钠溶液（3.3）调节至5.5。
3.5木糖溶液，c（C5H10O5）为10.0mg/ml：称取无水木糖1.000g，加缓冲液（3.4）溶解，定容至100ml。
3.6 木聚糖溶液：1.0%（w/v）称取木聚糖（Sigma X0672）1.00g，加入氢氧化钠0.34 g，磁力搅拌再加入60ml水，磁力搅拌至木聚糖完全溶解。
再加入冰乙酸0.5 ml，再用乙酸溶液（3.1）调节pH值至5.5。
继续搅拌30min，用缓冲液（3.4）定容至100ml。
木聚糖溶液能立即使用，使用前适当摇匀。
酶
第一章1.酶是具有生物催化功能的生物大分子。
2.酶活力是指在一定条件下，酶所催化的反应初速度。
3酶活力单位：在特定条件下（温度可采用25℃，pH值等条件均采用最适条件），每1min催化1µmol的底物转为产物的酶量定义为一个酶活力单位，这个单位称为国际单位（IU）。
4酶转换数Kp，又称为摩尔催化活性，是指每个酶分子每分钟催化底物转化的分子数。
即每摩尔酶每分钟催化底物转化为产物的摩尔数，是酶催化效率的一个指标。
5转换数的倒数称为酶的催化周期，即催化周期是指酶进行一次催化所需的时间，单位为毫秒（ms）或微秒（µs）的。
6酶结合效率又称为酶的固定化效率，是指酶与载体结合的百分率。
酶结合效率的计算一般由固定化的总活力减去未结合的酶活力所得到的差值，再除以用于固定化的总酶活力而得到。
7酶活力回收率是指固定化酶的总活力与用于固定化的总酶活力的百分率。
8.核酸酶（ribozyme）：即具有催化活性的RNA。
抗体酶（Abzyme）：具有催化活力的抗体。
9.酶催化作用的特点（一）、酶催化作用的专一性强：酶的专一性是指在一定的条件下，一种酶只能催化一种或一类结构相似的底物进行某种类型反应的特性。
①绝对专一性：一种酶只能催化一种底物进行一种反应，这种高度的专一性称为绝对专一性。
②相对专一性：一种酶能够催化一类结构相似的底物进行某种相同类型的反应，这种专一性称为相对专一性。
（二）、酶催化作用的效率高：酶催化效率高，比非酶催化反应的速度高107～1013倍。
（三）、酶催化作用的条件温和：酶的催化作用一般都在常温、常压、pH值近乎中性的条件下进行。
（四）酶活性受到调节和控制10. 影响酶催化作用的因素①、底物浓度的影响②、酶浓度的影响③、产物浓度的影响④、温度的影响⑤、pH值的影响⑥、抑制剂的影响⑦、激活剂的影响11从如下实验方法和结果分析酶生物合成的调节作用。
实验方法：将大肠杆菌细胞接种于营养肉汤培养中，于37℃振荡培养，当OD550达到0.3左右时，将培养液分装到4个小三角瓶中，每瓶17ml培养液。
酶活计算
比活：每毫克酶蛋白所具有的酶活力。
单位是u/mg。
比活越高则酶越纯。
酶活单位一般都是自己定义的，或是根据行业标准、国家标准定义，一般定义成在适宜的温度PH下，每分钟(或每小时)催化生成1克(或1毫克，或1毫摩尔，等等)产物的酶量。
酶的比活力1、在特定条件下，单位重量（mg）蛋白质或RNA所具有的酶活力单位数。
2、比活力(性)(Specific Activity)是酶纯度的量度,即指:单位重量的蛋白质中所具有酶的活力单位数,一般用IU/mg蛋白质来表示.一般来说,酶的比活力越高,酶越纯.。
3、比活力为每毫克蛋白质所具有的酶活力单位数，一般用酶活力单位/mg蛋白质表示。
酶的比活力在酶学研究中用来衡量酶的纯度，对于同一种酶来说，比活力越大，酶的纯度越高。
利用比活力的大小可以用来比较酶制剂中单位质量蛋白质的催化能力，是表示酶的纯度高低的一个重要指标。
酶活力(酶活性)，就是指：酶催化底物化学反应的能力。
因此，测定酶活力，实际上就是测定酶促反应进行的速度，酶促反应速度越快，酶活力就越大；反之，速度越慢，酶活力就越小。
二、酶活力单位酶活力单位是衡量酶活力大小的计量单位。
历史上，对于酶活力单位的规定，没有统一的标准。
对于不同的酶或者同一种酶，由于测定方法的不同，对酶活力的单位，常常有不同的规定。
例如：蛋白酶的活力单位，规定为：1min 内，将酪蛋白水解，产生1μg 酪氨酸所需要的酶量，定为一个单位(1U=1μg 酪氨酸／min)；淀粉酶的活力单位，规定为：每小时催化1g 可溶性淀粉液化所需要的酶量，定为一个单位(1U=1g 淀粉／h)；或者，每小时催化1ml 2％可溶性淀粉液化所需要的酶量，定为一个单位(1U=1×2％淀粉／1h)。
为了统一酶活力单位的计算标准，1961 年，国际生物化学协会酶学委员会对酶活力单位作了下列规定：在指定的反应条件下，1min 内，将1 微摩尔( /4m01)的底物转化为产物所需要的酶量，定为一个国际单位(1U=1 mol/min)。
酶活测定原理
酶活测定原理酶活测定是通过测定酶反应产物生成的物质量或反应速率来确定酶活性的一种方法。
这种测试被广泛应用于生物、医学、环境和食品科学领域。
本文将重点介绍酶活测定的原理和方法。
一、酶的定义和分类酶是一类具有催化生物反应能力的蛋白质，在生物体内担任调节代谢过程的重要角色。
酶的活性被认为是其特异性、选择性和效率的关键因素。
酶根据其催化反应类型，可以分为六类：1. 氧化还原酶：例如过氧化物酶和葡萄糖氧化酶，可以将还原剂氧化成相应的氧化物。
2. 转移酶：例如乙醛酸酯酶和谷氨酰胺转移酶，可以将一个基团从一个分子转移到另一个分子。
3. 加水酶：例如酯酶和葡萄糖苷酶，可以加入水分子切断化学键。
4. 合成酶：例如DNA聚合酶和RNA聚合酶，可以将单体结合成聚合物。
5. 裂解酶：例如蛋白酶和纤维蛋白溶解酶，可以降解大分子化合物。
6. 引导酶：例如酰基载体蛋白，可以在代谢过程中向该蛋白基团上结合或从该基团上解离。
二、酶活测定的原理酶活性通常通过测量酶反应的速率来评估。
酶反应速率与底物浓度、酶浓度、反应温度和pH值等条件有关。
在酶活测定中，这些条件必须被控制和标准化。
测量酶活性可以通过直接测量酶反应产物生成的量或测量反应底物消耗的量来进行。
下面介绍常用的酶活测定方法。
1. 进行光学密度测定酶活测定可以通过光学测量来实现。
在酯类水解反应中，酶催化酯水解为醇和羧酸。
在这种反应中，测量分离的醇透过率或吸光度变化，可以计算出相应的反应产物含量。
这种方法可以适用于其他酶反应，例如测定酒精脱氢酶催化的乙醛氧化反应。
2. 进行电化学测定另一种常用的酶活测定方法是电动势测定。
该方法用于测量电位差的变化以检测酶催化反应过程中电子的流动。
在氧化还原酶催化的反应中，测量体系中的电位差可以告诉我们酶的活性程度。
3. 进行放射性测定有些酶活性测定需要使用放射性示踪剂。
在DNA聚合酶催化下进行DNA复制实验中，可以使用放射性示踪剂来测量酶反应产物的数量。
C酶活定义杂谈
掀开饲用酶酶活定义的猫腻
例1.常见的3种酶活定义方法
定义A:在37℃、pH值为5.5的条件下，每分钟从浓度 为3mg/ml的甘露聚糖（Sigma M7504）溶液中降解 释放1µmol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位U。 定义B:在37℃、pH值为5.5的条件下，每分钟从浓度 为3mg/ml的甘露聚糖（Sigma M7504）溶液中降解 释放1微克还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位U。 定义C:在37℃、pH值为5.5的条件下，每分钟从浓度 为3mg/ml的甘露聚糖（Sigma M7504）溶液中降解 释放1nmol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位U。
禾本甘露聚糖复合酶5000 型颗粒 定义A 定义B 定义C 5，000U 910，000U 910 000U （5000*180分子量） 5，000，000U （5000*1000）
按照不同的单位酶活定义方法测定禾本甘露聚糖复合酶5000型颗粒
• 如果改变反应的温度或者反应的 pH值，同 一产品测得的酶活都会不同； • 甚至将底物甘露聚糖（Sigma M7504）改 成从其他公司购买，同一产品测得的酶活 也会不同；
分子量
• • • • 葡萄糖 180 甘露糖 180 木糖 150 半乳糖醛酸 ~200
谢谢！
pH对酶反应的影响 pH对酶反应的影响
某黑曲霉植酸酶pH曲线 120 相对酶活力 相对酶活力（%） 100 80 60 40 20 0 0 2 4 pH 6 8 系列1
（三）激活剂对酶促反应的影响
1. 激活剂(activator) 激活剂(activator)
• 激活剂：凡是能提高酶活性的物质。其 激活剂： 中大部分是无机离子或简单有机化合物。 • 金属离子有K+、Na+、Ca2+、Mg2+等离子， 如Mg2+是多数激酶及合成酶的激活剂， • 无机阴离子如：Cl—、Br—、I—等都可作 为激活剂。如Cl—是唾液淀粉酶的激活剂 • 简单的有机化合物：Cys对某些含巯基的 酶有激活作用
酶活性检测
④分光光度法利用底物和产物光吸收性质的不同，可直接测定反应混合物中底物的减少量或产物的增加量。
几乎所有的氧化还原酶都使用该法测定。
如还原型辅酶Ⅰ(NADH2)和辅酶Ⅱ(NADPH2)在340nm有吸收，而NAD和NADP在该波长下无吸收，脱氢酶类可用该法测定。
该法测定迅速简便，自动扫描分光光度计的使用对酶活力的快速准确的测定提供的极大的方便。
酶在食品加工中的作用就像一把双刃剑，我们要趋利避害。
酶的积极作用我们要加强，在食品加工过程中添加酶制剂，使其作用充分发挥;消极作用我们要尽量避免，可以通过加热等方法将酶灭活，消除其不利影响。
为了将酶更好地应用于食品加工，研究酶的性质是十分必要的。
而紫外-可见分光光度法是研究酶性质的重要方法之一。
下面我们来介绍用-可见分光光度计测定酶活的具体方法。
紫外-可见分光光度法测定酶活：1. β一半乳糖苷酶β一半乳糖苷酶，又称乳糖酶(Lactase)。
能水解乳糖来降低乳制品的乳糖含量，从而提高乳制品的可消化性，用于低乳糖牛奶和非结晶型浓缩牛奶的生产及奶酪风味的改变，同时还可用于生产低聚半乳糖。
【酶活测定】以ONPG为底物测定β-半乳糖苷酶活力。
【酶活定义】以ONPG为底物，37℃保温酶解，每分钟释放lμmol/L邻硝基酚的酶量，定义为1个酶活力单位。
2. 超氧化物歧化酶超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，简称SOD)是一种十分重要的生物体防止氧化损伤的酶类，是生物体内超氧阴离子清除剂，保护细胞免受损伤。
SOD广泛存在于各类生物体内，所有好氧微生物细胞中都含有SOD。
自1969年Mccord等人首次发现了SOD 生物活性后，医学界对其医疗作用做了许多研究，证明它具有抗衰老、抗肿瘤、抗辐射、抗缺血、提高人体免疫力等作用，被专家称为21世纪最有前途的药用酶。
欧美国家已开始将其应用于医疗、食品、保健、化妆品等领域。
【酶活测定】在25℃4.5ml 50mmol/L pH8.3的K2HPO4- KH2PO4缓冲液中加入待测SOD样液，再加入10ul 50mmol/L的连苯三酚，迅速摇匀，倒人光径lcm 的比色杯，在325nm波长下每隔30s测一次A值。
酶活的定义
酶活的定义酶活是指酶分子在特定条件下能够催化化学反应的能力。
酶是一类特殊的蛋白质，其分子结构复杂且具有高度的立体构象，使得其具备催化反应的能力。
酶活的定义包括酶的催化速率、催化效率和催化特异性等方面。
酶的催化速率是指在单位时间内酶能够催化的底物转化量。
酶通过特定的催化机制，可以显著加速底物的转化速率。
例如，酶可以将底物的转化时间从数小时或几天缩短到几秒钟或几分钟，实现快速而高效的反应。
这种高速转化的能力是酶活的一个重要特征。
酶的催化效率是指在特定条件下，酶对底物转化的效率。
催化效率可以通过酶的催化常数来表示，催化常数是酶与底物之间的亲和力和催化速率的乘积。
酶活的高低与酶的催化效率密切相关，高活性酶具有更高的催化效率，能够更有效地催化反应，降低反应的能量耗费。
酶的催化特异性是指酶只对特定的底物进行催化反应。
酶通过与底物的特异性结合，形成酶底物复合物，从而实现底物的选择性转化。
酶的催化特异性是由酶的活性位点和底物的结构特征决定的。
不同的酶对应不同的底物，这种特异性使得酶在生物体内起到了高度选择性催化的作用。
酶活的定义还包括酶的催化条件。
酶的催化活性受到多种因素的影响，包括温度、pH值、底物浓度等。
酶在特定的温度和pH值下表现出最佳的催化活性。
温度过高或过低，或者pH值偏离酶的最适范围，都会影响酶的催化活性。
此外，底物浓度对酶活也有影响，当底物浓度过高时，酶可能会饱和，反应速率不再增加。
酶活是酶分子在特定条件下能够催化化学反应的能力。
酶活的定义包括酶的催化速率、催化效率和催化特异性等方面。
酶活的高低与酶的催化效率、催化特异性以及催化条件密切相关。
酶活的研究对于理解生物体内的代谢过程和开发新的生物技术具有重要意义。
酶类药物
药领域的用途越来越广泛。
随着核酸类酶，抗体酶和端粒酶等新酶的研究开发，以 及酶分子修饰，酶固定化和酶在有机介质重的催化作用 等酶技术的发展，将不断扩大酶在医药方面的应用。
当今世界酶类药物的研究热点
研究和开发基因工程酶类药物业 对酶进行分子改造，以提高酶的稳定性 瞄准国际市场、提高产品质量、降低生产成本， 研制和开发具有竞争力的优势品种
*
治疗遗传疾病
腺苷脱氨酶类-SCID(1990 年，第一个罕用 药法案） 玻璃酸酶-粘多糖储积病 葡萄糖苷酶-庞氏症
*
溶菌酶 （球蛋白Ｇ）
【适应症】 有抗菌、抗病毒、止血、消肿 及加快组织恢复功能等作用，
故临床用于慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口 腔溃疡、水痘、带状皰疹和扁平疣等。
*
诊断类
2.用于治疗和预防各种纤维蛋白溶解所引起的急性出血、 各种严重休克状态。
3.本品在腹腔手术后直接注入腹腔，能预防肠粘连。
尿激酶（UK）
是一种具有溶解血栓功能的碱性蛋白酶。主要存在于人和其他哺乳 动物的尿液中，可以从尿液中分离得到。 UK可以激活纤溶酶原成为有溶解血纤维蛋白活性的纤溶酶。催化血 纤维蛋白、血纤维蛋白原、凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ等蛋白质或多
胰蛋白酶:俗称结晶胰蛋白酶 ,胰蛋白酶
类 别：酶类及生化药物 【适应症】 1.用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤、娄管
等所产生的局部水肿、血肿、脓肿。
2.用于呼吸道疾病。 3.用于治疗毒蛇咬伤，曾试用于竹叶青、银环蛇、眼镜 蛇、蝮蛇等毒蛇咬伤的各型病人８００余例，均获治 愈。
谷 谷 γ －
丙转氨酶 草转氨酶 -谷 氨 酰 转 肽 酶 (γ GT)
第6章酶化学 第五节 酶的活力测定
第六章 酶化学
• 第一节 概述 • 第二节 酶的命名和分类 • 第三节 酶催化反应的机理 • 第四节 影响酶促反应速率的因素——酶促反应动力学 • 第五节 酶的活力测定 • 第六节 食品工业中重要的酶及其应用
食品生物化学
学习目标
1.掌握酶的化学本质及作用特点。 2.了解酶的命名及分类。 3.掌握酶催化反应的机理。 4.掌握温度、pH、酶浓度、底物浓度、竞争性抑制、非竞 性抑制物及激活剂对酶促反应速率的影响。 5.掌握酶活力的概念及测定酶活力的方法。 6.熟悉食品工业中重要的酶及其应用，了解固定化酶。
食品生物化学
第五节 酶的活力测定
一、酶的活力和活力单位
1．酶活力
通常用单位时间内酶催化某一化学反应的能力来表示酶的 催化能力，即用酶活力大小来表示酶的催化能力。酶活力的大 小可以用在一定条件下所催化的某一化学反应的反应速率来表 示，两者呈线性关系。酶催化的反应速率愈大，酶的活力愈高； 反应速率愈小，酶的活力就愈低。所以测定酶的活力就是测定 酶促反应的速率。由于酶催化某一反应的速度受多种因素限制， 故一般规定在某一条件下(恒温、使用缓冲溶液)用反应速率的 初速率来表示酶活力。
60 20 2% 1 1000 4800单位/ 克酶制剂
10
0.5
2．测定一定时间内所起的化学反应量
这是酶活力测定的主要方式，用测定反应量来计算酶活力。 主要是根据在一定条件下，酶反应速率与酶浓度成正比，测定 反应速率就可求出酶的浓度。
食品生物化学
测定结果的正确与否，即能否真实地反映酶活力，是和酶 反应的条件是否适宜密切有关。适宜的条件是使所有的酶分子 都能正常地发挥作用，反应条件中应使酶浓度是影响反应速率 的唯一因素，而其他条件如pH和温度应保持最适水平。此外测 定用的底物应当使用足够高的浓度，使酶催化的反应速率不受 底物浓度的限制。为了测定简便，选用的底物最好在物理或化 学性质上和产物有所区别。
酶工程(第三版)知识要点
1、酶的定义与分类定义：酶是具有生物催化功能的生物大分子。
分类：蛋白类酶（P酶）和核酸类酶（R酶）2、生物催化剂的特点①易失活（温和性）：酶是由细胞产生的生物大分子，凡能使生物大分子变性的因素，如高温、强碱、强酸、重金属盐等都能使酶失去催化活性。
②高效性：反应速度是无酶催化/普通人造催化剂催化反应速度的106——1016倍。
且无副反应③专一性：酶对催化的反应和反应物（底物）有严格的选择性，只能催化一种或一类反应，作用于一种或一类物质，而一般催化剂没有这样严格的选择性。
绝对专一性：一种酶只能催化一种底物进行一种反应，甚至只能作用于异构体的一种（立体异构专一性）相对专一性：一种酶能够催化一类结构相似的底物进行某种相同类型的反应。
④可调节性：（1）酶浓度的可调性（诱导或抑制酶的合成; 调节酶的降解）（2）通过激素调节酶活性（与细胞膜或细胞内受体相结合）（3）反馈抑制调节酶活性（如终端产物抑制）（4）抑制剂和激活剂对酶活性影响（5）别构调控、酶原的激活、共价修饰、同工酶等3、米氏常数Km的意义Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，单位是mol/L。
意义：①Km是酶的特性常数：与pH 、温度、离子强度、酶及底物种类有关，与酶浓度无关，可以鉴定酶。
②可以判断酶的专一性和天然底物。
1/Km近似表示酶对底物的亲和力：1/Km越大、亲和力越大—— Km较小者为主要底物③根据Km：判断某[s]时v与Vmax的关系判断抑制剂的类型④ Km可帮助判断某代谢反应的方向和途径催化可逆反应的酶对正/逆两向底物Km不同4、可逆抑制作用分类、特点（书）P8（1）.不可逆抑制作用：抑制剂与酶的必需基团以共价键结合而引起酶活力丧失，不能用透析、超滤等物理方法除去抑制剂而使酶复活。
分为非专一性不可逆抑制剂，和专一性不可逆抑制剂。
很多为剧毒物质，如重金属、有机磷、有机汞、有机砷、氰化物、青霉素、毒鼠强等。
（2）、可逆抑制作用：抑制剂与酶以非共价键结合而引起酶活力降低或丧失，能用物理方法除去抑制剂而使酶复活。
酶活的定义
酶活的定义
酶活是生物体内一种重要的生物化学活动，它在维持生命活动中起着至关重要的作用。
酶活是指酶在特定条件下对底物进行催化反应的能力。
酶作为生物体内的催化剂，可以加速化学反应的速率，降低反应所需的能量，使生物体内的生化代谢更加高效。
酶是一种具有高度特异性的蛋白质，通常在生理条件下能够高效地催化底物的反应。
酶活受到多种因素的影响，包括温度、pH值、离子浓度、底物浓度等。
在适宜的条件下，酶可以发挥最佳的催化活性，进而促进生物体内各种生化反应的进行。
温度是影响酶活的重要因素之一。
一般来说，酶活在适宜的温度范围内会增加，随着温度的升高，酶活也会增加，但是当温度超过一定范围时，酶的构象会发生改变，导致酶活性下降甚至失活。
因此，保持适宜的温度对于维持酶活是非常重要的。
除了温度外，pH值也是影响酶活的重要因素之一。
不同的酶对于pH值的适应范围不同，一些酶在酸性环境下活性较高，而另一些酶在碱性环境下活性较高。
维持适宜的pH值可以保持酶的构象和功能，从而保持酶活性。
离子浓度和底物浓度也会影响酶活。
适量的离子浓度可以促进酶与底物的结合，从而增加酶活性，但是过高或过低的离子浓度会影响酶的构象和功能。
底物浓度的增加可以增加酶活性，但是当底物浓
度过高时，酶的活性会受到抑制。
总的来说，酶活受到多种因素的影响，只有在适宜的条件下，酶才能发挥最佳的催化作用。
通过调控温度、pH值、离子浓度和底物浓度等因素，可以有效地维持酶的活性，促进生物体内各种生化反应的进行。
酶活的研究不仅有助于揭示生物体内的生化代谢过程，还对医药、生物工程等领域具有重要的应用前景。
酶活的定义
酶活的定义
酶是一种生物催化剂，可以加速化学反应的速率，但不影响反应的热力学性质。
酶催化反应时，它们与底物结合，形成酶底物复合物，然后通过降低活化能来促进反应的进行。
酶的活性可以通过许多因素来影响，例如pH值，温度，离子强度和底物浓度等。
在最佳条件下，酶可以表现出最高的活性，而在不适宜的环境下，酶的活性会受到抑制。
酶活性的定义可以是指酶在一定条件下催化反应的速率。
酶活性可以通过测量底物转化的速率来确定，在实验室中，常见的酶活性测定方法包括光谱法、比色法、荧光法和放射性同位素标记法等。
这些方法可以用于定量测量酶的活性，并与其他因素进行比较，以确定它们如何影响酶催化反应的速率。
除了实验室测量酶活性的方法，还有许多生物化学应用程序可以利用酶活性。
例如，酶活性可以用于检测特定的疾病标记物，如心肌酶和肝酶等。
此外，酶活性也可以用于分析食品和饮料中的成分，以确定它们是否达到标准质量和安全性要求。
总之，酶的活性是指它们在特定条件下催化反应的速率。
酶活性可以通过多种实验室方法进行测量，并可以用于许多生物化学应用程序中。
了解酶活性的定义和测量方法可以帮助我们更好地理解酶的作用，并指导我们在实验室和实际应用中使用酶。
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酶活方法
对于分批发酵，在其对数生长期取样，而对于连续发酵，在培养达到稳态持续4个停留时间以后取样。
在4℃、10000rpm下离心15min 收获菌体，用粗酶制备缓冲液洗2次，然后悬浮于同样的缓冲液中，用超声波破碎仪破碎细胞，间隔30s共计5min。
离心除去细胞碎片，得到的上清液即为粗酶液，可即刻或暂保存于-20℃冰箱，用于酶活的测量。
所有的实验操作均在冰浴中进行。
酶活的测量在控温30℃的分光光度计中进行。
所有的反应混合物加入到光程为1cm的石英比色皿中，通过最后加入细胞抽提液或者底物引发反应，反应终体积为1ml。
NAD+、NADH、NADP+和NADPH的检测波长为340nm，毫摩尔消光系数为6.22cm-1mM-1;乙酰辅酶A的检测波长为412nm，毫摩尔消光系数为13.6cm-1mM-1;延胡索酸的检测波长为24Onm，毫摩尔消光系数为1.62cm-1mM-1。
定义每单位酶活为每分钟每毫克蛋白质转化1μmol底物为特定产物所需的酶量。
酶活的具体测量方法如下:1、己糖激酶（Glk）己糖激酶葡萄糖+ATP————————葡糖-6-磷酸+ADP葡糖-6-磷酸脱氢酶葡糖-6-磷酸+NADP+————————————葡糖酸-6-磷酸+NADPH监测340nm处NADP的减少，反应物包括：0.1M Tris-HCl缓冲液(PH7.5)，60mM MgCl2,1mM DTT,0.5mM NADP,2mM ATP,15mM 葡萄糖,细胞提取物，2U 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。
2、磷酸葡萄糖异构酶(Pgi):0.1M Tris-HCI(PH7.8)，10mM MgCl2，0.5mM NADP+，1U 6-磷酸葡萄糖脱氢酶，2mM F-6-P(F6P)。
3、磷酸果糖激酶(Pfk):50mM imidazol-HCl(pH7.0)，0.05mM ATP，5mM MgC12，1mM EDTA，0.25mM NADH，0.25mM F6P，0.5U醛缩酶，0.5U 3-磷酸甘油醛脱氢酶，0.5U磷酸丙糖异构酶。
酶活力单位的定义
酶活力单位的定义好啦，今天咱们就聊聊一个看似有点高深，但其实说起来也没那么复杂的东西——酶活力单位。
要是你听到这个词，可能会想：“这又是啥新鲜玩意儿？活力？酶？是不是做饭用的？”别急，咱慢慢聊，保证让你听得懂。
酶，大家都知道，它其实就是一种能加速化学反应的小帮手。
就像你做饭时，锅里的油热得快，火候也得控制好，酶的作用也是一样。
它们能让一些反应发生得更快，哪怕这些反应本来是得花很长时间才能完成。
举个简单例子，就好像你要把一堆菜切好做成大餐，正常来说，得花个半小时，而如果有个帮手帮你切菜，你可以迅速把事情搞定，节省出更多时间去做其他事。
酶就是这样的“帮手”。
酶活力单位就是用来衡量这个“帮手”工作效率的一个标准。
啥意思呢？简单说，就是酶在单位时间内，能催化多少反应。
比如说，某种酶能在一分钟内把一堆底物（反应物）转化成产物，那我们就用单位来表示它的活力。
你可以理解为，就像你一小时能搬多少箱子，酶的活力单位也是类似的衡量标准。
要不然你可能会觉得：“我是不是吃了酶就能变聪明、变快？”哈哈，倒是没有那么夸张，酶的作用虽然强大，但也得看具体的酶是什么样的。
不同的酶，做的事也不一样。
举个例子，胃里的消化酶和你体内帮助分解食物的酶，作用都不一样。
它们的“活力”也有区别。
有的酶，可能一个小单位就能干好大事；有的，可能得加大力度，才能看得出效果。
所以，酶活力单位其实是个相对的标准，拿它来比喻不同酶的“功率”，就好像车的马力一样。
不过，酶活力单位到底是怎么算的呢？这个嘛，得看实验的方法。
简单的说，酶活力单位通常是通过实验室测量某种酶在特定条件下转化底物的速率来确定的。
你可以想象一下，像是赛车比赛，赛道上，每辆车的速度不一样，咱就通过测速来看看谁跑得快，酶活力单位就类似这种方式，能清楚地知道哪个酶速度更快，哪个酶又慢悠悠的。
你可能还会想：“是不是酶活力单位越大，酶就越厉害？”这倒也未必。
因为酶活力大不一定代表它就是最适合某个反应的酶。
酶工程——名词解释
酶工程—名词解释1.酶：生物体内进行新陈代谢不可缺少的受多种因素调节控制的具有催化能力的生物催化剂。
2.酶工程：是酶学和工程学相互渗透结合形成的一门新的技术科学。
从应用目的出发研究酶，在一定的生物反应装置中利用酶的催化性质，将相应原料转化成有用的物质。
3.单体酶（monomeric enzyme）：由一条多肽链组成，如溶菌酶；由多条肽链组成，肽链间二硫键相连构成一整体。
4.寡聚酶（oligomeric enzyme）：由两个或两个以上的亚基组成的酶。
5.多酶复合体（multienzyme complex）：由几种酶非共价键彼此嵌合而成。
6.催化转换数：每个酶分子每分钟催化底物转化的分子数。
7.酶活力(酶活性)：指酶催化一定化学反应的能力。
8.酶活力的大小：一定条件下所催化的某一化学反应的反应速度，9.酶反应速度：单位时间内底物的减少量或产物的增加量。
10.酶的活力单位（U，activity unit）：酶活力的大小及酶含量的多少。
11.酶单位：在一定条件下，一定时间内将一定量的底物转化为产物所需要的酶量。
这样酶的含量可以用每克酶制剂或每毫升酶制剂含有多少酶单位来表示（U/g或U/ml）。
12.Katal（Kat）单位：一个katal单位是指在最适反应条件下，1秒钟催化1moL底物转化为产物所需要的酶量。
13.酶的比活力（specific activity）：代表酶的纯度，比活力用每mg蛋白质所含有的酶活力单位数表示。
对同一种酶比活力愈大，纯度愈高。
14.酶的转换数：以一定条件下每秒钟每个酶分子转换底物的分子数来表示酶的催化效率。
15.酶动力学：是研究酶促反应的速度以及影响此速度的各种因素的科学。
16.抑制剂:任何分子直接作用于酶使他的催化速度降低即称为~。
17.不可逆抑制作用：抑制剂与酶的必需基团以共价键结合而引起酶活性丧失，不能用透析，超滤或凝胶过滤等物理方法去除抑制剂而使酶复活。
18.可逆抑制作用：抑制剂与酶以非共价键结合而引起酶活性的降低或丧失，能用物理的方法除去抑制剂而使酶复活。