红细胞检验

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胞血红蛋白浓度(g/L)。
(1)MCV=每升血液中红细胞体积/每升血液中红
细胞个数=Hct/RB(f1)
(2)MCH=每升血液中血红蛋白含量/每升血液中 红细胞个数=Hb/RBC(pg) (3)MCHC=每升血液中血红蛋白含量/每升血液 中红细胞比容= Hb/ Hct
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[检测原理] 1.手工法 同时计数红细胞,测定血红蛋白和血细胞比容,
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临床意义
①轻度贫血,成年男性Hb<120g/L, 成年女性<110g/L; ②中度贫血<90g/L; ③重度贫血<60g/L; ④极度贫血<30g/L。
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三、 血细胞比容测定
血细胞比容(HCT),以前称为红细胞压积,是指在一定条件下经 离心沉淀压紧的红细胞在全血标本中所占体积的比值。 测定目的:1.诊断贫血、真性红细胞增多症和红细胞增多 2.测定血液稀释和血液浓缩的变化 3.计算MCV和MCHC
血红蛋白 (血色素, Hb 或 HGB) 组成 珠蛋白:4条,种属特异性 亚铁血红素:4个,无种属特异性
• 每个 Hb 分子由 2 条α类肽链和 2 条β类肽链组成, 每条珠蛋白肽链含有 1 个亚铁血红素。
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在人体不同生长时期, Hb 种类与比例不同:
血红蛋白测定
定义:血红蛋白测定是测定外周血液中各种 血红蛋白的总浓度,用g/L表示
临床意义
1.临床补液量的参考
各种原因导致脱水时,HCT都会增高,补液时可 监测HCT,HCT恢复正常表示血容量得到纠正。
2.真性红细胞增多症诊断指标
当HCT大于0.7,RBC为(7-10)X1012/L, Hb大于 180g/L,即可诊断。
临床意义
3.红细胞平均指数计算的基础数据
红细胞平均值(MCV、MCHC)可用于贫血的形态 学分类。
方法
温氏法 微量法
优点
无需特殊仪器,广泛 应用
缺点
不能完全排除残留血浆,且 单独采血,用血量大
快速(5min)标本用量 有残留血浆,但较温氏法少 小、结果准确、 重复 性好。WHO推荐的 首选参考方法 简便快速(5-15s) 白细胞、血小板增多可引 起血液导电异常,使结果不 可靠
电阻抗法
血细胞分析仪法
2.正确辨认网织红细胞
外周血中网织红细胞主要为Ⅳ型,凡含有2个以上 网织颗粒的红细胞均应计为网织红细胞。
3.网织红细胞计数方法
(1)Miller窥盘: (2)显微成像系统:计算机和细胞形态分析软件, ①HFR:粗颗粒堆积成网状。
②MFR:粗颗粒在10个以上,或细小颗粒超过15个。
③LFR:细胞内含15个以下细小颗粒
EPO
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红细胞的发育过程
成熟红细胞 120天
衰老红细胞 铁 →铁代谢 原卟啉 →胆色素代谢 珠蛋白 →蛋白质代谢
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一、 红细胞计数
检测方法
1.手工显微镜法: 2.血液分析仪法:
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手工显微镜法
定义:用等渗稀释液将血液稀释一定倍数 后,滴入改良Neubauer计数板,在显微 镜下计数一定范源自文库内的红细胞数,经换 算即可求得每升血液中的红细胞数。
4.血液流变学指标
HCT增高表明红细胞数量偏高,
全血黏度增加,严重者表现为高黏滞综合征,
微循环障碍、组织缺氧。 HCT与其他血液流变学指标联合应用,可对一些 血栓前状态进行监测。
四、 红细胞平均值
•红细胞平均体积(mean corpuscular volume,MCV),指红细 胞群体中单个红细胞体积的平均值,以飞升(f1)为单位;
适合自动化分析
质量控制
分析前质量控制:同红细胞计数 分析中质量控制 技术误差:稀释倍数、分光光度计波长、光缝、比色杯 光径需校正 HiCN转化液:棕色玻璃瓶 HiCN参考液:关键 质控物:室内质控 分析后质量控制:同红细胞计数
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参考值
• ①成年:男性:120~160g/L; • 女性:llO~150g/L。 • ②新生儿:170~200g/L。 • ③老年(70岁以上): • 男性:94~122g/L;女性87~112g/L。
[检测原理]
2.仪器法
流式细胞仪法 网织红细胞计数仪 血液分析仪法。
荧光染料与网织红细胞中RNA结合, 发出特定颜色的荧光进行RNA定量 •精确计数网织红细胞占成熟红细胞的百分数(Ret%)。
•将网织红细胞分成高、中、低荧光强度网织红细胞
比率(HFR 、MFR、 LFR) •并计算网织红细胞其他参数。
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改良牛鲍计数板
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计数板
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红细胞稀释液组成与作用
稀释液
Hayem液
组成
NaCl、Na2SO4、HgCl2
作用
调节渗透压、增加红细
胞悬浮性和防腐作用
备注
高球蛋白血症时, 蛋白质沉淀致红 细胞凝集
枸橼酸钠稀释液 NaCl、枸橼酸钠、甲醛
NaCl和枸橼酸钠调 节渗透压 ,枸橼酸钠 具抗凝,甲醛防腐
生理盐水
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3)相对性红细胞增多
临床意义
医学决定水平
指该项目结果如高 于或低于某一个值时 就应该采取一定的措 施,为患者处理起提 供依据的作用。
①高于6.8×l012/L,应采取相应 的治疗措施。 ②低于3.5×1012/L为诊断贫血 的界限,应继续寻找原因。 ③低于1.5×l012/L应考虑输血
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二、血红蛋白测定
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十二烷基硫酸钠血红蛋白(SDS-Hb)法
SDS
血红蛋白
SDS-Hb
540nm
吸光度
血红蛋 白浓度
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方法
HiCN
优点
操作简便、快速(5min),结果稳 定可靠, 试剂容易保存,便于
缺点
①KCN有剧毒 ②高白细胞和高球蛋白可致浑浊。 ③HbCO转化慢
质控,为参考方法 SDS-Hb 不用剧毒试剂、无公害,操作简
540nm
吸光度 血红蛋 白浓度
HiCN转化液:即文齐氏液
540 nm 处有一吸收波峰,用分光光度计测定
换算成每升血液中的血红蛋白浓度,或制备标准曲线供查阅。
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• 血红蛋白浓度计算公式:
• Hb(g/L)=A540‫ג‬HiCN/44×64458/1000×251
=A×367.7 u A540‫ג‬HiCN:测定管吸光度 u 44:毫摩尔消光系数 u 64458/1000:1mmol/L Hb溶液中所含Hb克数 u 251为稀释倍数
属于尚未完全成熟的红细胞(当嗜碱性物质消耗殆尽后才 被视为成熟红细胞),一般为8~9.5μ m。
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[检测原理]
1.普通光学显微镜法 活体染色(新亚甲蓝或煌焦油蓝)的碱性着色基团 网织红细胞RNA的磷酸基(带负电荷) RNA胶体间的负电荷减少而发生凝缩, 蓝色的点状、线状或网状结构 , 显微镜下计数 1000个红细胞中所占的网织红细胞数,以百 分比或分数数表示。
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临床意义
1.生理性变化
(1)年龄与性别的 差异 (2)精神因素 (3)剧烈体力运动 和劳动 (4)气压降低 (5)妊娠中、后期
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临床意义
2.病理性变化
(2)红细胞增多
1)原发性红细胞增多
2)继发性红细胞增多
(1)红细胞和血红蛋 白量减少
1)红细胞生成障碍 2)造血原料缺乏 3)利用障碍红细胞 4)破坏过多和失血
参考值
①网织红细胞百分数: 成人和儿童:0.005~0.025
2.血液分析仪 能直接导出MCV的值,再结 合仪器直接测定的 RBC和 Hb,计算出 MCH
和MCHC
MCH=Hb/RBC,
MCHC=Hb/(RBC×MCV)。
参考值
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临床意义
贫血分类 MCV
作为贫血的红细胞形态学分类
MCH MCHC 贫血 再生障碍性贫血、急 性失血性贫血、某些 溶血性贫血 各种造血物质缺乏或 利用不良的贫血 慢性感染、慢性肝肾 疾病性贫血 缺铁性贫血及铁利用 不良贫血,慢性失血 性贫血
• 3.分析后质量控制
• 结合临床资料
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方法学评价
1.手工显微镜法
(1)血液分析仪的校正
(2)白细胞减少时的对照核实。 (3)血小板计数受小红细胞干扰时的校正 2.血液分析仪法 • 方法精确,且操作简便、快速,已广泛应用。
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参考值
成年:男性(4~5.5)×1012/L 女性(3.5~5.0)×1012/L 新生儿: (6.0~7.0)×1012/L
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检测原理
• 1.氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法
• 2.其他测定法

十二烷基硫酸钠血红蛋白(SDS-Hb)法
• 叠氮高铁血红蛋白(HiN3)法
• 碱羟血红蛋白法
• 沙利(Sahli)酸化血红蛋白法
• 溴代十六烷基三甲胺血红蛋白测定法(CTAB)等
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高铁氰 化钾 血红蛋白 高铁血 红蛋白
CN氰化高铁 血红蛋白
参考值
男性:0.42—0.49; 女性:0.37—0.48
临床意义
•HCT的临床意义与红细胞计数相似。
HCT减低是诊断贫血的指标, HCT的高低与红细
胞数量及平均体积、血浆量有关
主要用于贫血、真性红细胞增多症和红细胞增多的
诊断、血液稀释和血液浓缩变化的测定、计算红细胞
平均体积和红细胞平均血红蛋白浓度等。
计算出红细胞3个平均指数。 例:RBC为3.50X1012/L,Hct为0.36,Hb为120g/L
Hct 0.36 MCV=—— (fl)=—————— =103(fl) RBC 3.50X1012/L
Hb Hb MCH=—— (pg), MCHC=——( g/L ) RBC Hct
[检测原理]
血液分析仪法
提供与网织红细胞相关的多个参数, 网织红细胞绝对值、 网织红细胞百分比、 网织红细胞平均体积、
网织红细胞血红蛋白分布宽度、
网织红细胞血红蛋白浓度、
网织红细胞平均血红蛋白浓度、
LFR、MFR、HFR、 网织红细胞成熟指数。
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【质量保证】 以手工计数法为重点。
1.染料选择
【质量保证】
正细胞贫血 大细胞贫血 单纯小细胞贫血 小细胞低色素贫 血
正常 增高 减低
正常 增高 减低
正常 正常 正常
减低
减低
减低
五、 网织红细胞计数
网织红细胞(reticulocyte,Ret)是晚幼红细胞脱核后到 完全成熟红细胞间的过渡细胞
胞质中残存嗜碱性物质核糖核酸(RNA),经煌焦油蓝等活
体染色后,嗜碱性物质凝聚成蓝黑色颗粒,连缀成线, 线连接成网。
简便快速、精密度高, 准确性稍低,结果仅供参考 无需单独采血
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质量保证
1.操作规范化
避免操作误差,如抗凝量不准,混匀不充分,离心 速度不均等。
2.注意干扰因素
①假性增高:红细胞形态异常和红细胞增多时应注明, (细胞变形性减低和数量增多 血浆残留量增加);
高网织红细胞或高白细胞等
②假性降低:体外溶血、自身凝集等。
•平均红细胞血红蛋白含量(mean corpuscular he-moglobin,
MCH),指红细胞群体中单个红细胞血红蛋白含量的平均值,以 皮克(pg)为单位; •平均红细胞血红蛋白浓度 (mean corpuscular Hemoglobin concentration , MCHC) ,指测定红细胞比容时被压紧的红细
--红细胞检验
主讲人:丁肖华 医学技术学院
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红细胞检查
红细胞计数 血红蛋白测定 血细胞比容 红细胞平均指数计算
网织红细胞计数
嗜碱性点彩红细胞计数
红细胞沉降率测定
红细胞检查
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红细胞的发育过程

红系祖细胞→原始红细胞 造血干细胞 →早幼红细胞→中幼红细胞→晚幼红细胞 →网织红细胞→成熟红细胞
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检测原理
1.常量法(Wintrobe法)和微量法(microhematocrit)
将抗凝血液标本置于孔径统一的温氏管或毛细玻璃管中,
以一定转速离心一定时间后,计算红细胞层占全血的体积比。
5层:血浆层、血小板层、白细胞和有核红细胞层、还原
红细胞层和氧合红细胞层。
2.血液分析仪法
由红细胞平均体积和红细胞计数两项指标后导出, Hct=红细胞计数×红细胞平均体积。
生理盐水
急诊时用 急诊时用
1%甲醛生理盐水 甲醛、生理盐水
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【操作】
1.准备计数板
2.加稀释液:2ml
3.加血:10μl混匀
4.充池
5.计数
6.计算:红细胞数=N/5*25*10*200*106/L
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质量控制
• 1.分析前质量控制
• 患者准备、标本采集、存储温度和时间
• 2.分析中质量控制
• 计数误差(技术误差和固有误差)、白细胞影响
便,呈色稳定,准确度和精度高
①SDS-Hb消光系数未确定
②SDS质量差异性大。 ③SDS溶血活力大,不适于同时
进行自动化分析
AHD575 同HiCN法,不用剧毒试剂 不便于自动检测、氯化血红素纯度
达不到标准
HiN3 CTAB
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准确度和精密度高,试剂毒性低 溶血活力强,但不破坏白细胞,
HbCO转化慢 精密度和准确性低
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