常用培养基配制word版
110种培养基配方共21页word资料
110种培养基配方THE COMPOSITION OF MEDIA培养基及成分1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基)Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10gCaCO3 20g Agar (琼脂) 15gDistilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8适用范围:恶臭醋酸杆菌混浊变种2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂)Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30gNaCl 5g Agar (琼脂) 15gDistilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2[Note]:When cultivation of Bacillus,5mg of to MnSO4.H2O may be added .It is favorable to promote spore formation .适用范围:产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(青虫菌)、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌(大肠杆菌)、铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基)KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8gMgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O 0.1gNa2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5gMannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量)Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15gAdjust (调) pH to 7.2适用范围:固氮菌、胶质芽孢杆菌4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基)Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1gGlucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml[Note]:Boil the mixture in autoclave at 121℃for 1 hr. distribute the medium into 18ⅹ18 mm tubes , each contains 10 ml of the liquid , then autoclave at 121℃for 1 hr . again (15磅蒸煮1小时,分装入18ⅹ18毫米试管,每管深度达6厘米。
常用培养基配方汇总
常用培养基配方汇总1. 营养琼脂培养基 (Nutrient Agar)- 夏洛特奥康纳 (Charlote A. O'Connor) 配方:-蛋白胨:5克-麦芽提取物:3克-胰蛋白酶胨:1.5克-硫酸镁:0.2克-地膜:15克-pH值调整到7.2-7.4-用1L水来溶解以上成分,加热煮沸后冷却并灭菌。
2. 肉蔗糖琼脂培养基 (Tryptic Soy Agar, TSA)- 条件反射琼脂 (孟德尔和赛尼·特鲁斯 ('Sneath and Tres') 配方):-牛肉蛋白胨:17克-大豆酪蛋白胨:3克-肉汤提取物:5克-葡萄糖:2.5克-地膜:15克-pH值调整到7.2-7.4-用1L水来溶解以上成分,加热煮沸后冷却并灭菌。
3. MAC琼脂培养基 (MacConkey Agar)- 麦康奈 (MacConkey) 配方:-紫胆杆菌胨:17克-葡萄糖:1.5克-硫酸盐:1.5克-中性红:0.03克-石蕊:0.3克-氯化钠:5克-地膜:10克-pH值调整到7.1-7.5-用1L水来溶解以上成分,加热煮沸后冷却并灭菌。
4. LB琼脂培养基 (Luria-Bertani Agar)- 古斯塔夫·诺维斯 ('Gustaf Novis') 配方:-研磨大豆饼粉:10克-酵母提取物:5克-部分脱脂酪蛋白:5克-氯化钠:1克-地膜:15克-pH值调整到7.2-7.4-用1L水来溶解以上成分,加热煮沸后冷却并灭菌。
5. 马铃薯葡萄糖琼脂培养基 (Potato Dextrose Agar, PDA)- 林登麦卡蒂 ('Lindenmuth and McCarty') 配方:-马铃薯提取物:4克-葡萄糖:20克-地膜:15克-pH值调整到5.6-5.8-用1L水来溶解以上成分,加热煮沸后冷却并灭菌。
这些是一些常用的培养基配方,适用于细菌和真菌的培养。
各种培养基配方范文
各种培养基配方范文以下是一些常见的培养基配方:1.LB培养基配方:-水:1000mL-蛋白胨:10g-酵母提取物:5g-NaCl:10g*将以上成分溶解在水中,并调节pH至7.0。
加热至沸腾,搅拌溶解完全后,用纸质过滤器过滤消毒,装入培养瓶中。
2.TSB培养基配方:-水:1000mL-蛋白胨:17g-酵母提取物:3g-葡萄糖:2.5g-NaCl:5g*将以上成分溶解在水中,并调节pH至7.0。
加热至沸腾,搅拌溶解完全后,用纸质过滤器过滤消毒,装入培养瓶中。
3.M9盐基培养基配方:-水:1000mL-Na2HPO4:6g-KH2PO4:3g-NaCl:0.5g-NH4Cl:1g*将以上成分溶解在水中,并调节pH至7.0。
加热至沸腾,搅拌溶解完全后,用纸质过滤器过滤消毒,装入培养瓶中。
4. MacConkey琼脂培养基配方:-水:1000mL-蛋白胨:17g-胆盐混合物:1.5g-红薯提取物:10g-中性红:0.03g-结晶紫:0.001g-蔗糖:10g-氯化钠:5g*将以上成分溶解在水中,并调节pH至7.1、加热至沸腾,搅拌溶解完全后,用纸质过滤器过滤消毒,装入培养瓶中。
5. Sabouraud琼脂培养基配方:-水:1000mL-葡萄糖:40g-氯化钠:5g-氯化钾:1g-磷酸二氢钾:1g-氯化镁:0.5g-氯化钙:0.01g-硫酸亚铁:0.5g-红曲霉素:0.05g*将以上成分溶解在水中,并调节pH至5.6、加热至沸腾,搅拌溶解完全后,用纸质过滤器过滤消毒,装入培养瓶中。
以上是一些常见的培养基配方,不同的微生物或细胞需要不同的培养基来提供适合它们生长和繁殖的营养条件。
因此,在实际使用时,需要根据具体需求和文献资料进行配方的选择和调整。
常用培养基配方范文
常用培养基配方范文培养基(Culture medium)是一种用于细菌、真菌、植物细胞、动物细胞和其他微生物的繁殖和生长的营养物质。
常用的培养基可分为发酵培养基、微生物培养基和细胞培养基。
下面列举了一些常用的培养基配方。
1. LB培养基(Luria-Bertani medium)成分:-牛肉提取物:10克-酵母提取物:5克-热可溶性淀粉:10克-氯化钠:10克-水:1升2. NB培养基(Nutrient broth)成分:-牛肉提取物或肉蔻精:8克-酵母提取物:4克-葡萄糖:4克-水:1升3. MacConkey培养基成分:-水解动物蛋白:17克-中和胆盐:1.5克-中性红:0.03克-水:1升4. TSB培养基(Tryptic soy broth)成分:-大豆胨:17克-酵母提取物:3克-水:1升5. BHIA培养基(Brain Heart Infusion Agar)成分:-脑心汤固体:37克-水:1升6.R2A培养基成分:-水解酵母提取物:0.5克-蛋白胨:0.5克-葡萄糖:0.5克-脱脂乳粉:0.5克-黄豆粉:0.5克-高氯酸钠:0.3克-多聚体1466:0.05克-水:1000毫升7.比尔斯氏培养基(BHI培养基)成分:-大豆胨:37克-脑心汤固体:2克-水:1升8. 培养基199(Medium 199)成分:-高锰酸钾:0.015克-硫酸:1.55克-磷酸一氢钠:0.184克-高氯酸钠:8.0克-溴酚蓝:0.4克-d-葡萄糖:5.55克-l-谷氨酸:40.525克-苏打粉:0.84克-水:1升9. DMEM培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)成分:-苔藓胶原酸:1克-乳糖:1克- 谷氨酸:584mg- 水:1000ml这只是一小部分常见的培养基配方,实际上有很多种不同的培养基,它们根据不同的生物特性和培养需求来设计。
不同的培养基可以提供细菌、真菌、细胞等微生物生长需要的各种营养物质。
常用培养基配方汇总
常用培养基配方汇总培养基是微生物学研究和实验室工作中常用的一种培养微生物的基础环境,其主要组成包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
下面是一些常用的培养基配方汇总。
1.琼脂培养基琼脂培养基是最常用的固体培养基之一,其主要成分为琼脂、蔗糖、牛肉膏粉和无机盐。
其配方如下:-琼脂:15g-蔗糖:10g-牛肉膏粉:3g-磷酸二氢钾:1g-氯化钠:5g-氯化镁:0.5g-氯化钾:0.2g-高锰酸钾:0.0001g-蛋白胨:3g-酵母提取物:3g- 菜子油:0.5ml- 蒸馏水:1000ml2.肉汤培养基肉汤培养基是一种常用的液体培养基,其主要成分为牛肉膏粉和蛋白胨。
其配方如下:-牛肉膏粉:3g-蛋白胨:5g-葡萄糖:2g-氯化钠:5g-磷酸二氢钾:2g-氯化镁:0.5g- 蒸馏水:1000ml3.紫砂培养基紫砂培养基是一种用于真菌培养的培养基,其主要成分为紫砂和蔗糖。
其配方如下:-紫砂:15g-蔗糖:30g-蛋白胨:2g-磷酸二氢钾:1g-氯化钠:5g-氯化钙:0.1g4.麦芽培养基麦芽培养基是一种用于酵母和酵母菌类培养的培养基,其主要成分为麦芽粉和蔗糖。
其配方如下:-麦芽粉:10g-蔗糖:30g-蛋白胨:5g-氯化钠:5g-氯化钙:0.1g- 蒸馏水:1000ml5.铁蛋白培养基铁蛋白培养基是一种用于菌类和细菌培养的培养基,其主要成分为铁蛋白和蔗糖。
其配方如下:-铁蛋白:10g-蔗糖:10g-蛋白胨:2g-氯化钠:5g-磷酸二氢钾:1g-氯化钙:0.1g这些常用的培养基配方可根据实验需要进行适当调整和改良,以提高微生物的生长和培养效果。
同时,在制备培养基的过程中要注意消毒和无菌操作,以避免试验的污染和杂质的干扰。
培养基的配方
培养基的配方培养基是一个特殊的化学组合物,它提供了生命体的生长和繁殖所需的营养物和环境。
培养基的配方需要考虑生长物种的生态和代谢需求,因此在制备不同类型的培养基时,需要考虑多个因素,例如酸碱度、离子浓度、碳源和氮源等。
以下是一些常见的培养基及其配方:1. Luria-Bertani(LB)培养基常用于大肠杆菌等细菌的生长。
- 水:1升- 蛋白胨:10克- 酵母浸出物:5克- 氯化钠:10克2. 玉米粉蔗糖琼脂培养基(MSA)用于分离和鉴定溶血性金黄色葡萄球菌。
- 水:1升- 葡萄糖:1克- 蛋白胨:2.5克- 氯化钠:5克- 琼脂:13.5克- 鲜红色表面指示剂:0.025克3. 营养琼脂培养基用于多种细菌和真菌的生长。
- 水:1升- 蛋白胨:5克- 酵母浸出物:1克- 葡萄糖:10克- 氯化钠:5克- 磷酸二氢钾:2.5克- 琼脂:15克4. 大肠杆菌液体培养基(LB Broth)与LB培养基类似,但用于液体培养。
- 水:1升- 酵母浸出物:5克- 氯化钠:10克5. 洁净液体培养基(tryptic soy broth)普遍用于微生物学实验。
- 水:1升- 蛋白胨酶胨水解物:17克- 大豆胨酸盐:3克- 氯化钠:5克- 氯化钾:2.5克- 磷酸氢二钠:2.5克- 琼脂:3克以上是一些常见的培养基配方。
每种培养基的配方都有特定的应用和优点,为微生物学研究和应用提供了广泛的选择。
当然,在不同实验条件下,可能需要微调培养基的成分和比例,以获得最佳的生长和生物学特性。
102种培养基配方
1.营养肉汤成分:蛋白胨10g,牛肉膏3g,氯化钠5g,蒸馏水1000mL,pH7.4。
制法:按上述成分混合,溶解后校正pH,121℃高压灭菌15min。
2.营养琼脂培养基成分:蛋白胨10g,牛肉膏3g,氯化钠5g,琼脂17g,蒸馏水1000mL,pH7.2。
制法:将除琼脂外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH,加入琼脂,分装于烧瓶内,121℃,15min高压灭菌备用。
3.MRS培养基成分:蛋白胨10g,牛肉膏10g,酵母粉5g,K2HPO4 2g,柠檬酸二铵2g,乙酸钠5g,葡萄糖20g,吐温80 1mL,MgSO4 .7H2O 0.58g,MnSO4 4H2O 0.25g,(琼脂15~20g),蒸馏水1000mL。
制法:将以上成分加入到蒸馏水中,加热使完全溶解,调pH至6.2~6.4,分装于三角瓶中,121℃,灭菌15min。
4.脱脂乳培养基成分:牛奶,蒸馏水。
制法:将适量的牛奶加热煮沸20~30min,过夜冷却,脂肪即可上浮。
除去上层乳脂即得脱脂乳。
将脱脂乳盛在试管及三角瓶中,封口后置于灭菌锅中在108℃条件下蒸汽灭菌10~15min,即得脱脂乳培养基。
5.培养基A成分:蛋白胨10.0g,酵母提取物1.0g,葡萄糖10.0g,NaCL5.0g,琼脂15.0g,水1000mL。
制法:将以上成分加入到蒸馏水中,加热使完全溶解,调pH至7.0~7.2,分装于三角瓶中,121℃,灭菌15min。
6.PTYG培养基成分:胰胨Tryptone(Oxoid)5g,大豆蛋白胨5g,酵母粉(Oxoid)10g,葡萄糖10g,吐温80 0 1mL,琼脂15~20g,L-半胱氨酸盐酸盐0.05g,盐溶液4mL。
制法:将以上成分加入到蒸馏水中,加热使完全溶解,调pH至6.8~7.0,分装于三角瓶中,115℃灭菌30min。
盐溶液制备:无水氯化钙0.2g,K2HPO4 1.0g,KH2PO4 1.0g,MgSO4 。
7H2O 0.48g,NaCO3 10g,NaCL 2g,蒸馏水1000mL,溶解后备用。
各种培养基配方
146种培养基配方1、牛肉膏蛋白胨培养基(培养细菌用)牛肉膏3g蛋白胨5g氯化钠10g琼脂15~20gpH 7.0~7.2水1000mL2、2、高氏(Gause)1号培养基(培养放线菌用)可溶性淀粉20g硝酸钾1g氯化钠0.5g磷酸氢二钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g琼脂20g水1000mLpH 7.2~7.4配制时,先用少量冷水将淀粉调成糊状,倒入煮沸的水中,在火上加热,边搅拌边加入其他成分,溶化后,补足水分至1000mL。
121℃灭菌20min。
查氏(Czapek)培养基(培养霉菌用)硝酸钠2g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂15~20g水1000mLpH自然121℃灭菌20min。
4、马丁氏(Martin)琼脂培养基(分离真菌用)葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氢钾1g七水合硫酸镁0.5g1/3000孟加拉红100mL(rose bengal,玫瑰红水溶液)琼脂15—20gpH自然蒸馏水800mL112℃灭菌30min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL,使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、马铃薯培养基(简称PDA)(培养真菌用)马铃薯200g蔗糖(或葡萄糖)20g琼脂15—20gpH自然培养基的配制:马铃薯去皮,切成块煮沸30min,然后用纱布过滤,再加糖及琼脂,熔化后补足水至1000mL。
121℃灭菌30min。
6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制:(1)、取大麦或小麦若干,用水洗净,浸水6—12小时,至15℃阴暗处发芽,上面盖纱布一块,每日早、中、晚淋水一次,麦根伸长至麦粒的两倍时,即停止发芽,摊开晒干或烘干,贮存备用。
(2)、将干麦芽磨碎,一份麦芽加四份水,在65℃水浴中糖化3—4小时,糖化程度可用碘滴定之。
加水约20mL,调匀至生泡沫时为止,然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤,滤液如混浊不清,可用鸡蛋白澄清,方法是将一个鸡蛋白加水约20mL,调匀至生泡沫时为止,然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
常用培养基及染料的配制.doc
常用培养基的配制1、牛肉膏蛋白胨培养基(培养细菌用)牛肉膏3g蛋白胨5g氯化钠 10g琼脂15~20gp H 7.0~7.2水1000mL121℃灭菌20min。
2、高氏(Gause)1号培养基(培养放线菌用)可溶性淀粉20g硝酸钾1g氯化钠 0.5g磷酸氢二钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁 0.01g琼脂20g水1000mLp H 7.2~7.4配制时,先用少量冷水将淀粉调成糊状,倒入煮沸的水中,在火上加热,边搅拌边加入其他成分,溶化后,补足水分至1000mL。
121℃灭菌20min。
3、查氏(Czapek)培养基(培养霉菌用)硝酸钠2g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂15~20g水1000mLp H 自然121℃灭菌20min。
4、马丁氏(Martin)琼脂培养基(分离真菌用)葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氢钾1g七水合硫酸镁0.5g1/3000孟加拉红(rose bengal,玫瑰红水溶液)100mL琼脂15—20gp H 自然蒸馏水800mL112℃灭菌30min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL,使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、马铃薯培养基(简称PDA)(培养真菌用)马铃薯200g蔗糖(或葡萄糖)20g琼脂15—20gp H 自然培养基的配制:马铃薯去皮,切成块煮沸30min,然后用纱布过滤,再加糖及琼脂,熔化后补足水至1000mL。
121℃灭菌30min。
6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制:(1)、取大麦或小麦若干,用水洗净,浸水6—12小时,至15℃阴暗处发芽,上面盖纱布一块,每日早、中、晚淋水一次,麦根伸长至麦粒的两倍时,即停止发芽,摊开晒干或烘干,贮存备用。
(2)、将干麦芽磨碎,一份麦芽加四份水,在65℃水浴中糖化3—4小时,糖化程度可用碘滴定之。
加水约20mL,调匀至生泡沫时为止,然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤,滤液如混浊不清,可用鸡蛋白澄清,方法是将一个鸡蛋白加水约20mL,调匀至生泡沫时为止,然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
各种培养基配方范文
各种培养基配方范文培养基是一种用于微生物培养的基础物质,能够为微生物提供所需的营养和环境条件。
不同的微生物在其生长过程中需要不同的养分和环境条件,因此培养基的配方需要根据微生物的需求来进行调整。
下面是几种常见的培养基配方。
1.大肠杆菌液体培养基配方:-蛋白胨或复合氮源:10g-酵母浸出物:5g-葡萄糖:1g-NaCl:5g-K2HPO4:2g-MgSO4:0.2g-pH调节至7.0后加水至1000mL2.牛心提取物琼脂糖培养基配方:-牛心提取物:3g-高级琼脂糖:15g-葡萄糖:10g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL3.玉米浸出物琼脂糖培养基配方:-玉米浸出物:4g-高级琼脂糖:15g-酵母浸出物:1g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL4.LB琼脂糖培养基配方:-液体LB培养基:10mL-高级琼脂糖:15g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL 5.血寒养基配方:-羊血:50mL-肉浸出物:3g-酵母浸出物:3g-肉汤培养基:1L-红细胞素:5g-高级琼脂糖:3g-pH调节至7.0后加水至1000mL6.厌氧培养基配方:-肉浸出物:5g-酵母浸出物:5g-NaCl:5g-蒸馏水:900mL- 加入0.1%的L-cysteine:10mL-pH调节至7.0后用氮气替换空气注意事项:-培养基中的成分应严格按照配方比例加入,并保持无菌。
-配制好的培养基需要高温高压灭菌以保证无菌。
-不同的微生物可能对一些成分非常敏感,需要根据实际情况进行微调。
-培养基的pH值应根据微生物环境要求进行调整,一般在7.0左右。
-配好的培养基应存放在4℃的冰箱中,避免阳光直射以防止成分分解。
这只是一些常见的培养基配方,不同的微生物有不同的需求,可以根据具体的情况进行配方的调整。
在实际使用中,还需要根据微生物的特性和实验目的来选择合适的培养基。
实验室常用培养基配方
实验室常用培养基配方1. 营养琼脂培养基(Nutrient Agar)营养琼脂培养基是最为常用的一种培养基,用于微生物的一般培养、分离和鉴定,其配方如下:-水:1000mL-肉浸膏或胨:三到五克-水解酪蛋白:五克-氯化钠:五克-琼脂:十五克2. 培养基ONE(BHI Agar)培养基ONE用于灭菌后的微生物收集、保存和复苏,配方如下:-砂糖:十五克-胨:二十克-水:1000mL-酵母膏:二十克-酵母蛋白胨:十克-溶血素:十克-十%NaCl:五百毫升-甘油:百毫升3. 霍乱弧菌选择性琼脂培养基(TCBS Agar)TCBS Agar用于霍乱弧菌的分离和检测,配方如下:-水:1000mL-TCBS粉:一百克4. MacConkey琼脂培养基(MacConkey Agar)MacConkey琼脂培养基是一种选择性琼脂培养基,用于大肠杆菌的分离和检测,配方如下:-水:1000mL-肉浸膏:十七克-水解酪蛋白:十五克-氯化钠:五克-紫蘑菇素:六十毫克-琼脂:十五克5. Sabouraud琼脂培养基(Sabouraud Agar)Sabouraud琼脂培养基用于真菌的分离和培养-水:1000mL-葡萄糖:四十克-琼脂:十五克-氯化钠:五克-氯已二维硫酸钾:二十克这些仅仅是一些常见的培养基配方,实验室常根据不同微生物的要求而有所调整。
此外,还有许多特殊的培养基用于特殊微生物的培养和分离,如MRS培养基用于乳酸菌、EC培养基用于大肠杆菌O157:H7等。
在使用培养基时,需要注意权威的文献和生产厂家的指导。
培养基配方——精选推荐
一、LB培养基:Yeast extract 5 g/LTryptone 10g/LNacl 10g/LPH为7.0 若配制固体培养基加入1.5%的琼脂。
二、YEB培养基:Yeast extract1 g/LPeptone(或Tryptone) 5 g/LBeef extract 5 g/LSucrose 5 g/LMgSO4 2 mmol/LPH为7.0 若配制固体培养基加入1.5%的琼脂。
三、N6D2培养基(2,4D浓度2mg/L):① N6大量母液1:20×大量元素(1L)50mlKNO3 56.6g(NH4)2SO4 9.26gKH2PO4 8g②N6大量母液2:40×大量元素(500ml) 25mlCaCl2·2H2O 3.32g③N6大量母液3:40×大量元素(500ml) 25mlMgSO4∙7H2O 3.7g④B5微量元素I:100×微量元素(1L) 10ml溶液A:MnSO4∙H2O 781mgZnSO4∙7H2O 200mg溶于400ml无菌水溶液B:H3BO3 300mgKI 75mg溶于400ml无菌水然后缓慢将溶液A和溶液B混合,定容至1L⑤B5微量元素II:1000×微量元素(500ml) 1mlNa2MoO4·2H2O 125mgCuSO4·5H2O 12.5mgCoCl2·6H2O 12.5mg⑥B5维生素I:100×维生素(500ml) 10ml盐酸硫胺素 500mg盐酸吡哆醇 50mg烟酸 50mg⑦B5维生素II:100×维生素(500ml)10ml甘氨酸 100mg⑧200×铁盐(500ml) 5mlNa2-EDTA 3730mgFeSO4·7H2O 2780mg⑨ 2,4 D:100×2,4 D10ml200mg 2,4 D,先溶于1ml 无水乙醇中,再定容到1L。
常用培养基配方范文
常用培养基配方范文培养基配方是微生物学研究的基础,它们提供了养分和条件,促进微生物的生长和繁殖。
常用培养基配方有多种,以下是几个常用的配方范文。
一、莱文斯坦-鲍德尔培养基(Luria-Bertani agar)配方:成分:1.蛋白胨:10克2.酵母提取物:5克3.食盐:10克4.琼脂:15克5.蒸馏水:1000毫升6.高氯酸钠(0.1M):2毫升(pH7.2)制备方法:1.将蛋白胨、酵母提取物和食盐加入蒸馏水中,加热至溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀,再加入高氯酸钠调节pH值。
3.煮沸1~2分钟,然后分装入培养皿中。
注意事项:1.注意消毒操作,以防止污染。
2.琼脂的煮沸时间通常为15~20分钟。
二、营养琼脂培养基(Nutrient agar)配方:成分:1.蛋白胨:5克2.细胞色素:1克3.维生素B1:0.1克4.卵黄:10克5.食盐:5克6.琼脂:15克7.蒸馏水:1000毫升制备方法:1.将蛋白胨、细胞色素、维生素B1、卵黄和食盐加入蒸馏水中并加热溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀。
3.煮沸1~2分钟,然后分装入培养皿中。
注意事项:1.注意消毒操作,以防止污染。
2.煮沸时间可根据需要适当延长,但不要超过20分钟。
三、马尿素琼脂培养基(MacConkey agar)配方:成分:1.蛋白胨:17克2.硼砂:1.5克3.细胞色素:2.5克4.氯化钠:5克5.水合甲基红:0.03克6.钴绿:0.015克7.红绿二色砂:0.15克8.琼脂:13.5克9.蒸馏水:1000毫升制备方法:1.将蛋白胨、硼砂、细胞色素、氯化钠、水合甲基红、钴绿和红绿二色砂加入蒸馏水中并加热溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀。
3.煮沸1~2分钟,然后分装入培养皿中。
注意事项:1.注意消毒操作,以防止污染。
2.此培养基适用于选择肠道革兰氏阴性杆菌。
以上是常用的几个培养基配方范文,供参考使用。
在制备培养基时,需要注意消毒操作,以防止污染。
另外,不同微生物对培养基的要求也有所不同,可以根据实际需要进行配方的修改和优化。
各种培养基配方
146种培养基配方1、牛肉膏蛋白胨培养基培养细菌用牛肉膏3g蛋白胨5g氯化钠10g琼脂15~20gpH 7.0~7.2水1000mL2、2、高氏Gause1号培养基培养放线菌用可溶性淀粉20g硝酸钾1g氯化钠0.5g磷酸氢二钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g琼脂20g水1000mLpH 7.2~7.4配制时;先用少量冷水将淀粉调成糊状;倒入煮沸的水中;在火上加热;边搅拌边加入其他成分;溶化后;补足水分至1000mL..121℃灭菌20min..查氏Czapek培养基培养霉菌用硝酸钠2g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂15~20g水1000mLpH 自然121℃灭菌20min..4、马丁氏Martin琼脂培养基分离真菌用葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氢钾1g七水合硫酸镁0.5g1/3000孟加拉红rose bengal;玫瑰红100mL水溶液琼脂15—20gpH 自然蒸馏水800mL112℃灭菌30min..临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL;使每毫升培养基中含链霉素30μg..5、马铃薯培养基简称PDA培养真菌用马铃薯200g蔗糖或葡萄糖20g琼脂15—20gpH 自然培养基的配制:马铃薯去皮;切成块煮沸30min;然后用纱布过滤;再加糖及琼脂;熔化后补足水至1000mL..121℃灭菌30min..6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制:1、取大麦或小麦若干;用水洗净;浸水6—12小时;至15℃阴暗处发芽;上面盖纱布一块;每日早、中、晚淋水一次;麦根伸长至麦粒的两倍时;即停止发芽;摊开晒干或烘干;贮存备用..2、将干麦芽磨碎;一份麦芽加四份水;在65℃水浴中糖化3—4小时;糖化程度可用碘滴定之..加水约20mL;调匀至生泡沫时为止;然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤..3、将糖化液用4—6层纱布过滤;滤液如混浊不清;可用鸡蛋白澄清;方法是将一个鸡蛋白加水约20mL;调匀至生泡沫时为止;然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤..4、将滤液稀释到5—6波美度;pH约6.4;加入2%琼脂即成..121℃灭菌30min.. 7、无氮培养基自生固氮菌、钾细菌甘露醇或葡萄糖10g磷酸二氢钾0.2g七水合硫酸镁0.2g氯化钠0.2g二水合硫酸钙0.2g碳酸钙5g蒸馏水1000mLpH 7.0—7.2113℃灭菌30min..8、半固体肉膏蛋白胨培养基肉膏蛋白胨液体培养基100mL琼脂0.35—0.4gpH 7.6121℃灭菌20min..9、合成培养基偏磷酸铵1g氯化钾0.2g七水合硫酸镁0.2g豆芽汁10mL琼脂20g蒸馏水1000mLpH 7.0加12 mL0.04%的溴钾酚紫pH5.2—6.8;颜色由黄变紫;作指示剂..121℃灭菌20min..10、豆芽汁蔗糖或葡萄糖培养基黄豆芽100g蔗糖或葡萄糖50g水1000mLpH 自然培养基的配制:称新鲜豆芽100g;放入烧杯中;加入水1000mL;煮沸约30min;用纱布过滤..用水补足原量;再加入蔗糖或葡萄糖50g;煮沸熔化..121℃灭菌20min ..11、油脂培养基蛋白胨10g牛肉膏5g氯化钠5g香油或花生油10g1.6%中性红水溶液1mL琼脂15—20g蒸馏水1000mLpH 7.2121℃灭菌20min注:1、不能使用变质油..2、油和琼脂及水先加热..3、调好pH值后;再加入中性红..4、分装时;需不断搅拌;使油均匀分布于培养基中..12、淀粉培养基蛋白胨10g牛肉膏5g氯化钠5g可溶性淀粉2g蒸馏水1000mL琼脂15—20g121℃灭菌20min13、明胶培养基牛肉膏蛋白胨液100mL明胶12—18gpH 7.6在水浴锅中将上述成分溶化;不断搅拌..溶化后调pH7.2—7.4..121℃灭菌30min..14、蛋白胨水培养基蛋白胨10g氯化钠5g蒸馏水1000mLpH 7.6121℃灭菌20min..15、糖发酵培养基蛋白胨水培养基1000mL1.6%溴钾酚紫乙醇溶液1—2mLpH 7.6另配制20%糖溶液葡萄糖、乳糖、蔗糖等各10mL..培养基的配制:1、将上述含指示剂的蛋白胨水培养基pH7.6分装于试管中;在每管内放一倒置的小玻璃管Durham tube;使之充满培养液..2、将已分装好的蛋白胨水和20%的各种糖溶液分别灭菌;蛋白胨水121℃灭菌20min;糖溶液112℃灭菌30min..3、灭菌后;每管以无菌操作分别加入20%无菌糖溶液0.5 mL按每10mL培养基中加入20%的糖液0.5mL;则成1%的浓度..配制用的试管必须洗干净;避免结果混乱..16、葡萄糖蛋白胨水培养基蛋白胨5g葡糖糖5g磷酸氢二钾2g蒸馏水1000mL将上述各成分溶于1000mL水中;调pH7.0—7.2;过滤..分装试管;每管10mL;112℃灭菌30min..17、麦氏Meclary琼脂酵母菌葡萄糖1g氯化钾 1.8g酵母浸膏 2.5g醋酸钠8.2g琼脂15—20g蒸馏水1000mL113℃灭菌20min..18、柠檬酸盐培养基磷酸二氢铵1g磷酸氢二钾1g氯化钠5g硫酸镁0.2g柠檬酸钠2g琼脂15—20g蒸馏水1000 mL1%溴麝香草酚蓝乙醇液10 mL培养基的配制:将上述各成分加热溶解后;调pH6.8;然后加入指示剂;摇匀;用脱脂棉过滤..制成后为黄绿色;分装试管;121℃灭菌20min后制成斜面;注意配制时控制好pH;不要过碱;以黄绿色为准..19、醋酸铅培养基pH7.4的牛肉膏蛋白100 mL胨琼脂硫代硫酸钠0.25g10%醋酸铅水溶液 1 mL培养基的配制:将牛肉膏蛋白胨琼脂100 mL加热溶解;待冷却至60℃时加入硫代硫酸钠0.25g;调至pH7.2;分装于三角瓶中;115℃灭菌15min..取出后待冷却至55—60℃;加入10%醋酸铅水溶液无菌的1mL;混匀后倒入灭菌试管或平板中..20、血琼脂培养基pH7.6的牛肉膏蛋白胨琼脂100 mL脱纤维羊血或兔血10 mL培养基的配制:将牛肉膏蛋白胨琼脂加热熔化;待冷却至50℃时;加入无菌脱纤维羊血或兔血摇匀后倒平板或制成斜面..37℃过夜检查无菌生长即可使用..21、玉米粉蔗糖培养基玉米粉60g磷酸二氢钾3g维生素B1 100mg蔗糖10g七水合硫酸镁 1.5g水1000 mL121℃灭菌30min;维生素B1单独灭菌15min后另加..22、酵母膏麦芽汁琼脂麦芽粉3g酵母浸膏0.1g水1000 mL121℃灭菌30min..24、棉籽壳培养基培养基的配制:棉籽壳50%;石灰粉1%;过磷酸钙1%;水65%—70%;按比例称好料;充分搅拌均匀后装瓶;较薄地平摊盘上..25、复红亚硫酸钠培养基远藤氏培养基蛋白胨10g乳糖10g磷酸氢二钾 3.5g琼脂20—30g蒸馏水1000 mL5%碱性复红乙醇溶液20 mL培养基的配制:先将琼脂加入900 mL蒸馏水中;加热溶解;再加入磷酸氢二钾及蛋白胨;使溶解;补足蒸馏水至1000 mL;调pH至7.2—7.4..加入乳糖;混匀溶解后;115℃灭菌20min..称取亚硫酸钠置一无菌空试管中;加入无菌水少许使溶解;再在水浴中煮沸10min 后..立刻滴加于20 mL 5%碱性复红乙醇溶液中;直至深红色褪成淡粉红色为止..将此亚硫酸钠与碱性复红的混合液全部加至上述已灭菌的并仍保持熔化状态的培养基中;充分混匀;倒平板;放冰箱中备用;贮存时间不宜超过2周..26、伊红美蓝培养基EMB培养基蛋白胨水培养基100 mL20%乳糖溶液 2 mL2%伊红水溶液 2 mL0.5%美蓝水溶液 1 mL培养基的配制:将已灭菌的蛋白胨水培养基pH7.6加热熔化;冷却至60℃左右时;再把已灭菌的乳糖溶液;伊红水溶液及美蓝水溶液按上述量以无菌操作加入..摇匀后;立即倒平板..乳糖在高温灭菌易被破坏必须严格控制灭菌温度;115℃灭菌20min..27、乳糖蛋白胨培养液“水的细菌学检查”用蛋白胨10g牛肉膏3g乳糖5g氯化钠5g1.6%溴甲酚紫乙醇溶1 mL液蒸馏水1000 mL培养基的配制:将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠加热溶解于1000 mL蒸馏水中;调pH至7.2—7.4..加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1 mL;充分混匀;分装于有小倒管的试管中..115℃灭菌20min..28、石蕊牛奶培养基牛奶粉100g石蕊0.075g水1000 mLpH 6.8121℃灭菌15min..29、LBLuria-Bertani培养基蛋白胨10g酵母膏5g氯化钠10g蒸馏水1000 mLpH 7.0121℃灭菌20min..30、基本培养基磷酸氢二钾10.5g磷酸二氢钾 4.5硫酸铵1g二水合柠檬酸钠0.5g蒸馏水1000 mL121℃灭菌20min..需要时灭菌后加入:糖20% 10 mL维生素B1硫胺素1% 0.5 mL七水合硫酸镁20% 1 mL链霉素50mg/ mL4 mL;终浓度200μg/ mL氨基酸10mg/ mL4 mL;终浓度40μg/ mLpH 自然—7.031、庖肉培养基培养基的配制:1、取已去肌膜、脂肪之牛肉500g;切成小方块;置1000 mL蒸馏水中;以弱火煮1小时;用纱布过滤;挤干肉汁;将肉汁保留备用..将肉渣用绞肉机绞碎;或用刀切成细粒..2、将保留的肉汁加蒸馏水;使总体积为2000 mL;加入蛋白胨20g;葡萄糖2g;氯化钠5g;及绞碎的肉渣;置烧瓶摇匀;加热使蛋白胨溶化..3、取上层溶液测量pH;并调整其达到8.0;在烧瓶壁上用记号笔标示瓶内液体高度;121℃灭菌15min后补足蒸发的水分;重新调整pH值8.0;再煮沸10—20min;补足水量后调整pH7.4..4、将烧瓶内容物摇匀;将溶液和肉渣分装于试管中;肉渣约占培养基的1/4左右..经121℃灭菌15min后备用;如当日不用;应以无菌操作加入已灭菌的石蜡凡士林;以隔绝氧气..32、乳糖牛肉膏蛋白胨培养基乳糖5g牛肉膏5g酵母膏5g蛋白胨10g葡萄糖10g氯化钠5g琼脂粉15gpH 6.8水1000mL33、马铃薯牛乳培养基培养基的配制:200g马铃薯去皮煮出汁;脱脂鲜乳100mL;酵母膏5g;琼脂粉15g;加水1000mLpH7.0..制平板培养基时;牛乳与其他成分分开灭菌;倒平板前再混合..34、尿素琼脂培养基尿素20g琼脂15g氯化钠5g磷酸二氢钾2g蛋白胨1g酚红0.012g蒸馏水1000mLpH 6.8±0.2培养基的配制:在蒸馏水或去离子水100mL中;加入上述所有成分除琼脂外..混合均匀..过滤灭菌..将琼脂加入900mL蒸馏水或去离子水中;加热煮沸腾..在15磅121℃灭菌15min..冷却至50℃;加入灭菌好的基本培养基;混匀后;分装于灭菌的试管中;放在倾斜位置上使其凝固培养基及成分1. Acetobacter Medium 醋酸菌培养基Glucose 葡萄糖100g Yeasst extract 酵母膏10gCaCO3 20g Agar 琼脂15gDistilled water 蒸馏水1000ml Adjust 调pH to 6.8适用范围:恶臭醋酸杆菌混浊变种2. Nutrient Agar 营养肉汁琼脂Pepton 蛋白胨5g Beef extract 牛肉膏30gNaCl 5g Agar 琼脂15gDistilled water 蒸馏水Adjust 调pH to 7.0-7.2Note:When cultivation of Bacillus;5mg of to MnSO4.H2O may be added .It is favorable to promote spore formation .适用范围:产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种青虫菌、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌大肠杆菌、铜绿假单胞菌绿脓杆菌、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌3. Azotobacter Medium 固氮菌培养基KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8gMgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O0.1gNa2MoO4.2H2O Trace微量Yeast axtract酵母膏0.5gMannitol甘露醇20g FeCl3 Tract微量Distilled water 蒸馏水1000ml Agar 琼脂15gAdjust 调pH to 7.2适用范围:固氮菌、胶质芽孢杆菌4. Corn Meal Medium 玉米粉培养基Maize flour 玉米粉5g Peptone 蛋白胨0.1gGlucose 葡萄糖1g Tap water 自来水1000mlNote:Boil the mixture in autoclave at 121℃for 1 hr. distribute the medium into 18ⅹ18 mm tubes ; each contains 10 ml of the liquid ; then autoclave at 121℃for 1 hr . again 15磅蒸煮1小时;分装入18ⅹ18毫米试管;每管深度达6厘米..15磅再次灭菌15小时..5. Lactic-bacteria Medium I 乳酸菌培养基IYeast extract 酵母膏7.5g Peptone 蛋白胨7.5gGlucose 葡萄糖10g KH2PO4 2gTomato juice 西红柿汁100ml Tween 吐温80 0.5mlDistilled water 蒸馏水900ml pH 7.0适用范围:植物乳杆菌胚芽乳杆菌、嗜热乳酸链球菌6. Lactic-bacteria Midium Ⅱ乳酸菌培养基ⅡLacto-casein peptone 乳酪蛋白胨10gBeef extract 蛋白胨10gYeast extract 酵母膏5g Glucose 葡萄糖5gTween 吐温80 1g K2HPO4 2gNa-acetate 醋酸钠5g Diamine citrate 柠檬酸二胺2gMgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05gDistilled water 蒸馏水1000m pH 6.5-6.8适用范围:植物乳杆菌胚芽乳杆菌7. Peotone Glucose Yeast extract Medium PGY 蛋白胨、酵母膏、葡萄糖培养基Peptone蛋白胨10g Yeast extract 酵母膏5gGlucose 葡萄糖1g Distilled water 蒸馏水1L8. Glycerol Agar 甘油琼脂Peptone 蛋白胨5g Beef extract 酵母膏3gGlycerol 甘油20g Top water 自来水1000mlAgar 琼脂15g pH 7.0-7.29. Rhizobium medium 根瘤菌培养基AS 9Yeast eztract 酵母膏1g Soil eztract 土壤浸提液200mlMannitol 甘露醇10g Agar 琼脂15gDistilled water 蒸馏水800ml pH 7.2Note:Soil extract:Suspend 50g finely and dried gardon soil in 200ml of tap water. Autoclave at 121℃for 1 hr. Decant through cotton-cloth; filler though paper; make up volume to 200ml. Resterilize for 20 minutes at 121℃; then mixed with othringredients and distributed. 土壤浸提液的制法:取土壤50克;加水200毫升;15磅蒸煮1小时;经滤纸过滤后加水补足到200毫升..适用范围:大豆根瘤菌慢生型、豇豆慢生根瘤菌、花生根瘤菌、紫云英根瘤菌、大豆根瘤菌快生型、大豆根瘤菌、豌豆根瘤菌、苜蓿根瘤菌、田菁根瘤菌10. Mannitol Agar 甘露醇琼脂Yeast extract 酵母膏5g Peptone 蛋白胨3gMannitol 甘露醇25g Agar 琼脂15gDistilled water 蒸馏水1000ml11. Glucose Asparagine 葡萄糖、天门冬素琼脂Glucose 葡萄糖10g Asparagine 天门冬素0.5gK2HPO4 0.5g Water 水1000mlpH 7.2-7.4适用范围:刺孢小单孢菌绛红变种、紫色小单孢菌绛红小单孢菌12. Gause′s Synthetic Agar 高氏合成一号琼脂KNO3 1g Soluble starch可溶性淀粉20gK2HPO4 0.5g MgSO4.7H2O 0.5gNaCl 0.5g FeSO4 0.01gAgar 琼脂20g water 水1000mlpH 7.2-7.4适用范围:刺孢小单孢菌绛红变种、紫色小单孢菌绛红小单孢菌、白黄链霉菌、白色链霉菌、抗生链霉菌、双重轮丝链霉菌、产色链霉菌、烬灰链霉菌、天蓝色链霉菌、灭蚊链霉菌、红霉素链霉菌、青色链霉菌、球孢链霉菌、浅灰链霉菌、灰色链霉菌、吸水链霉菌、淡紫灰链霉菌、黄色长孢链霉菌、藤黄色链霉菌、细黄链霉菌、黑化链霉菌、玫瑰色链霉菌、华美链霉菌、嗜热链霉菌、委内瑞拉链霉菌、紫色直丝链霉菌、紫色链霉菌、绿色链霉菌13. Wort Agar 麦芽汁琼脂Dilute the world without hop to 12 Brix. Add 15g agar into 1000ml of the diluted word..Melt the agar by heating; then distribute the medium into tubes. Autoclave at 110 for 30 minutes. 将发酵啤酒的原料未加酒花;稀释至12柏林;加琼脂15克;溶化后分装..15磅灭菌30分钟..适用范围:克鲁斯假丝酵母、郎比可假丝酵母、解脂假丝酵母、马其顿假丝酵母、拟热带假丝酵母、粗壮假丝酵母、皱褶假丝酵母、热带假丝酵母、产朊假丝酵母、阿舒假囊酵母、白地霉、果香地霉、地霉属、异常汉逊酵母、异常汉逊酵母变种、阿拉伯糖醇汉逊酵母、施氏汉逊酵母、菅囊酵母、伯顿毕赤酵母、膜醭毕赤酵母、粘红酵母、小红酵母、胶红酵母、深红酵母、卡尔斯伯酵母、酿酒酵母、椰园酿酒酵母、发酵性酵母、洛格酵母、罗斯酵母、鲁氏酵母多形鲁氏酵母、威尔酵母、酵母、路德类酵母、栗酒裂殖酵母、掷抱酵母、贝雷丝孢酵母、皮状丝孢酵母、糙孢曲霉、无壳曲霉、鲜橙曲霉、红曲霉、紫红曲霉、红色红曲霉、红曲霉菌14. Potato Dextrose Agar PDA 马铃薯、葡萄糖琼脂Potato extract 马铃薯汁1000ml Dextroseglucose 葡萄糖20gAgar 琼脂20gNote: Potato extract: Slice potatoes thin. Add 1000ml of water; immediately to prevent Oxidtion of juice and boil until soft. approximately 30min.. Filter through cotton-cloth. Autoclave at 115℃for 20 minutes.注:取去皮马铃薯200克;切成小块;加水1000毫升煮沸30分钟;滤去马铃薯块;将滤液补足至1000毫升;加葡萄糖20克;琼脂15克;溶化后分装;15磅灭菌30分钟..适用范围:酵米面假单胞菌酵米面黄杆菌、白色链霉菌、烬灰链霉菌、青色链霉菌、球孢链霉菌、灰色链霉菌、龟裂链霉菌、伞枝梨头霉、雅致放射毛霉、棒曲霉、米曲霉、出芽短梗霉、白僵霉、灰葡萄孢、顶头孢霉、巴西毛壳、长刺毛壳、橄榄包毛壳、反曲毛壳、琥珀毛壳、圆酵毛壳、束状刺盘孢、新月弯孢霉、奇异翅孢壳、地生翅孢壳、串珠镰孢、尖镰孢、盘长孢菌鲁保一号、银白杨盘长孢、玉蜀黍长蠕孢、深黄被孢霉、小被孢霉、多头被孢、拉曼被孢霉、葡萄色被孢霉、生香毛霉、卷枝毛霉、两型孢毛霉、直立毛霉、球孢毛霉、丝球毛霉、大毛霉、多型孢毛霉、总状毛霉、鲁氏毛霉、五通桥毛霉、黑球漆斑菌、露湿漆斑菌、玫烟色拟青霉、棉铃虫拟青霉、拟青霉、球形阜孢、白腐菌、少根根霉、华根霉、科恩根霉、戴尔根霉、日本根霉、爪哇根霉、米根霉、点头根霉、绿穂霉、簇孢匍柄霉、雅致枝霉、康宁木霉、绿色木霉、黄萎轮枝孢、大丽花轮枝孢15. Czapek′s Agar察氏琼脂Sucrose 蔗糖30g NaNO3 3gMgSO4.7H2O 0.5g KCl 0.5gFeSO4.7H2O 0.01g K2HPO4 1gAgar 琼脂13g Distilled water 蒸馏水1000mlpH 7.2适用范围:红霉素链霉菌、洋葱曲霉、金头曲霉、泡盛曲霉、泡盛曲霉烟色变种、亮白曲霉、炭黑曲霉、鹿皮色曲霉、棒曲霉、无花果曲霉、黄柄曲霉、黄曲霉、烟曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、赭曲霉、米曲霉、寄生曲霉、酱油曲霉、土曲霉、宇佐美曲霉、焦曲霉、杂色曲霉、温特曲霉、阿达青霉、产黄青霉、黄绿青霉、桔青霉、顶青霉、园弧青霉、绳状青霉、灰黄青霉、岛青霉、淡紫青霉、特异青霉、赭绿青霉、产紫青霉、娄地青霉、小刺青霉、荨麻青霉、16. Concentrated Sucrose Czapek′s 浓糖察氏琼脂Sucrose 蔗糖200g NaNO3 3gMgSO4.7H2O 0.5g KCl 0.5gFeSO4.4H2O 0.01g K2HPO4 1gAgar 琼脂13g Distilled water 蒸馏水1000ml适用范围:谢瓦曲霉17. Synthetic Potato Medium 综合马铃薯培养基20%Potato extract 马铃薯汁1L Glucose 葡萄糖20gKH2PO4 3g MgSO4.7H2O 1.5gVitanib B1 硫胺素Trace 微量Agar 琼脂15gpH 6适用范围:米曲霉、酱油曲霉、栖土曲霉、宇佐美曲霉、出芽短梗霉、白僵霉、灰葡萄孢、顶头孢霉、巴西毛客、长刺毛壳、球毛壳、橄榄包毛壳、反曲毛壳、琥珀毛壳、圆酵毛壳、多主枝孢、束状刺盘孢、葫芦科刺盘孢、新月弯孢霉、奇异翅孢壳、地生翅孢壳、串珠镰孢、蚀脉镰孢霉、盘长孢菌鲁保一号、银白杨盘长孢、瓶毛壳、金龟子绿僵菌、生香毛霉、卷枝毛霉、两型孢毛霉、直立毛霉、球孢毛霉、丝球毛霉、大毛霉、多型孢毛霉、总状毛霉、鲁氏毛霉、五通桥毛霉、黑球漆斑菌、露湿漆斑菌、玫烟色拟青霉、棉铃虫拟青霉、淡紫色拟青霉、拟青霉、白腐菌、少根根霉、根霉属的菌、华根霉、科恩根霉、戴尔根霉、台湾根霉、日本根霉、爪哇根霉、黑根霉、雪白根霉、少根根霉、米根霉、点头根霉、三宝垄根霉、根霉属的种、绿穂霉、康宁木霉、木素木霉、拟康氏木霉、木霉、粉红木霉、绿色木霉、黄萎轮枝孢、大丽花轮枝孢、双孢蘑菇、大肥菇、发光假蜜环菌、木耳、皱木耳、毛木耳、大秃马勃、长根菇、金针菇、棘托竹荪、短裙竹荪、短裙竹荪东北变种暂定、长裙竹荪、白鬼笔、无裙竹荪、宽鳞大孔菌、凸圆灵芝白芝、紫芝、灵芝红芝;赤芝;日本灵芝;韩国灵芝、灰树花、猴头菌、香菇、粗毛斗菇、洁丽香菇、豹皮菇、玉蕈、真姬菇、安络小皮伞菌、鬼毛针、黑柄皮伞菌、尖顶羊肚菌、圆锥羊肚菌、高羊肚菌、黑脉羊肚菌、羊肚菌、滑菇、光帽黄伞、尖鳞黄伞、金顶側耳、榆黄磨、金顶磨、白黄側耳、紫孢平菇、姬菇、裂皮側耳、拟囊体側耳鲍鱼菇、真线側耳短孢变种、真线側耳、扇形平菇、扁形平菇、佛罗里达无孢子側耳、佛罗里达側耳、蚝菇、糙皮側耳、平菇、贝形側耳、鹰翅菌、肺形側耳、柳树菌、树窝、扁柄側耳、美味側耳、紫孢側耳、粉褶側耳、粉红側耳、凤尾菇、漏斗状側耳、榆干側耳、大榆磨、側耳、茯苓、黑菇、烟色红菇、裂褶菌、鸡纵、金耳、黄木耳、银耳、白木耳、紫晶口磨、银丝菇、丝盖小包脚菇、草菇18. Corn Meal Medium 玉米粉培养基Mix corn meal with water 20:100W/V well . Distribute the mixture into 100ml bottles ; each bottle contains about 30ml of the mixture . Autoclave at 121℃for 30minutes . 20%玉米粉装瓶;15磅灭菌30分钟..19. Filter Paper Medium 滤纸培养基NH42SO4 1g KH2PO4 1gMgSO4.7H2O 0.7g NaCl 0.5gDistilled water 蒸馏水1000ml A strip of filter paper 滤纸条6ⅹ1cm 厘米20. Soybean Cake Meal Agar 黄豆饼粉琼脂10% infusion of soybean cake meal 10%黄豆饼粉浸汁1000mlGlucose 葡萄糖10g NaCl 2.5g21. Sawdust; Wheat-bran Medium 木屑、麸皮培养基Sawdust of broad leaf tree 75g Wheat bran 25gPreparation:Mix these two ingredients well . Add appropriate water and blend the amount of water added may be becided by kneading with fingers . Fill the mixture into broad mouth of bottles . Stick a hole on the filling; put the cotton pulg in bottle mouth .壳斗科植物或阔叶树的木屑75克麸皮25克制法:加水适量充分混匀;水量以手捏时指间有水珠为宜;装瓶并压紧;在中心处扎一小洞;堵上棉塞;20磅灭菌1小时..22. Pine Block or Pine Sowdust Medium 松木条或松木屑培养基1. Cut 1021 cm pine biocks and immerse them in 1-2% sucrose solution . Alow the biocks fully absorbing suger solution .Fill the biocks into broad month of bottle . Park the bottle with paper . Autoclave at 20 lbs for 1 hr . 将10ⅹ2ⅹ1厘米的松木条浸泡在1-2%的蔗糖水中..使木条吸足糖水;装瓶不宜过紧;用纸包好;20磅灭菌1小时..2. Pine Sawdust MediumPine Sawdust 松木屑75% Rice bran 米糠23-24%Socrose 蔗糖1-2% Water appropriate水适量Autoclave at 20 lbs for 1 hr.20磅灭菌1小时23. Rice Straw. Dung Medium 稻草、马粪培养基Dried horse dung or cow dung 干马粪或牛粪65%Died straw 干稻草35% Urea 尿素0.5%Calcium superhosphate 过磷酸钙0.7% Gypsum powder石膏粉1%Ammonium sulphate 硫酸铵0.3%Note: Add appropriate water; pile them up and cause them fermentation. 水适量进行堆积发酵24. Straw Rice Bran Medium 稻草、米糠培养基Dried straw 干稻草75-80% Rice bran 米糠20-25%Note:Select no mouldy straw and cut them about 3 cm in length. Immerse them in fresh water for 12 hr. Allow the straw fully the amount of water added may be decided by kneading with fingers. It is right when a drop of water appeared between fingers. 注:选无霉稻草;切成长约3厘米的小段;用清水浸泡12小时;使充分吸水;然后倾去水;加米糠和水;水量以用手捏时指间有水珠为宜..25. Rice Medium 米饭培养基Fill 10g of rice into a 50ml of Erlenmeyer flask. Add 20-30ml water. Autoclave at 121℃for 30 minutes or fill 2g of rice into a 15ⅹ150mm tube. Add 6 ml of water. Autoclave at 121℃for 30 minutes. 取大米10克;入50毫升椎形瓶中;水20-30毫升于15磅灭菌30分钟即成;或取大米2克;装入15ⅹ150毫米试管中;加水6毫升;于15磅灭菌30分钟..26. Filter Paper Medium 滤纸条培养基NH42SO4 1g KH2PO4 1gMgSO4.7H2O 0.5g Yeast Extract 酵母膏0.1gDistilled Water 蒸馏水1000mlStrip of filter paper 1ⅹ7 cm 滤纸条1ⅹ7 厘米Note:Siddolve the above ingredients. Distribute the liqid medium into tubes each tube contains 1ml of the broth. Autoclave at 121℃for 30 minutes. Then put one or two sterilized strips of filter paper into a tube aseptically. 将上述溶液分配成溶液后分装入试管;每管1毫升;15磅灭菌30分钟..再将灭菌的滤纸条1条或2条投入试管中即好使用..27. Yeast Extract-Medium Extract Agar I 酵母膏、麦芽膏琼脂Yeast extract 酵母膏10g Mall extract 麦芽膏10gGlucose 葡萄糖4g Distilled water 蒸馏水1000mlAgar 琼脂20g pH 7.0适用范围:红霉素链霉菌28. Yeast Extract Peptone 酵母膏、蛋白胨琼脂Yeast extract 酵母膏1g Multi-peptone多蛋白胨2gBeef extract 牛肉膏1g Glucose 葡萄糖10gAgar 琼脂20g Distilled water 蒸馏水1LpH 7.029. Glucose Yeast Extract Starch Agar 葡萄糖、酵母、淀粉琼脂Glucose 葡萄糖10g Yeast extract 酵母膏10gStarch 淀粉10g NaCl 5gCaCO3 3g Agar 琼脂20gDistilled water 蒸馏水1L pH 7.030. Wheat Bran Medium 麸皮培养基Wheat bran 麸皮36g NH42HPO4 10gK2HPO4 0.2g MgSO4..7H2O 0.1gAgar 琼脂20g Distilled water 蒸馏水1LpH 7.031. Yeast Sporulation Medium 酵母菌产生子囊孢子培养基1 Kleyn MediumKH2PO4 0.012% K2HPO4 0.02%Sodium acetate 醋酸钠0.5% Glucose 葡萄糖0.062%NaCl 0.062% Peptone 蛋白胨0.25%Biotin 生物素2μg% Agar 琼脂2%Trace element solution 混合盐类1ml/100mlNote: Trace element solution 混合盐类溶液:MgSO4.7H2O 0.4%; NaCl 0.4%; CuSO4.5H2O 0.002%; MnSO4.4H2O 0.2%; FeSO4.4H2O 0.2%2 Gorodkowa MediumGlucose 葡萄糖0.1% Peptone 蛋白胨1%NaCl 0.5% Agar 琼脂2%3 McClary MediumGlucose 葡萄糖0.1% KCl 0.18%Yeast juice 酵母汁0.25% Sodium actate 醋酸钠0.82%Agar 琼脂1.5%32. BPY Medium BPY 培养基Beef extract 牛肉膏5g Prptone 蛋白胨10gNaCl 5g Yeast extract 酵母膏5gGlucose 葡萄糖5g Agar 琼脂1-2%Distilled 蒸馏水1000ml pH 7.0适用范围:大肠埃希氏菌大肠杆菌、恶臭假单胞菌33. LB Medium LB 培养基Yeast extact 酵母膏5g Peptone 蛋白胨10gNaCl 10g Agar 琼脂1-2%Distilled water 蒸馏水1000ml pH 7.0适用范围:大肠埃希氏菌大肠杆菌34. Penssay Broth Penssay 肉汤Beef extract 牛肉膏1.5g Yeast extract 酵母膏1.5gTryptone 胰蛋白胨5g NaCl 3.5gGlucose 葡萄糖1g K2HPO4.3H2O 4.8gDistilled water 蒸馏水1000ml pH 7.235. Blond Agar 血琼脂培养基Peptone 蛋白胨10g Glucose 葡萄糖2gNaCl 5g NaH2PO4 2.5gSodium citrate 柠檬酸钠5g Brain infusion 脑浸汁800mlPig heart infusion 猪心浸200ml Sleep Blood 羊血10%pH 7.2Note:Preparation of pig brain and pig heart infusion:1 Smash up 100g fresh pig heart without fat and blood vessel.Add distilled water up to 1000ml;2 Cut 200g fresh pig brain without blood vessel. Add distilled water up to 1000ml;3 Keep the two infusions at 50℃for 1 hr ; then boil for 15 minutes;4 Cool and filtrate through gauze . 注猪心和猪脑浸汁法:1新鲜猪心除去心头和脂肪;搅碎100克加蒸馏水至1000毫升;2新鲜猪脑除去血管;取200克加蒸馏水至1000毫升;350℃保温1小时;然后煮开15分钟;4冷却后用纱布过滤备用..36. Cellulose﹣decomposing Bacteria Synthetic Medium 纤维细菌合成培养基NaCl 6g MgSO4.7H2O 0.1gKH2PO4 0.5g CaCl2 0.1gK2HPO4 2.0g Yeast extract 酵母膏1.0gNH42SO4 2.0g Distilled water 蒸馏水1000mlFilter paper strip: one strip 滤纸条:一片pH 7.0-7.4Note: So;id medium for cellulose-decomposing bacteria: Carboxymethyl Cellulose 2% Agar 2%. 斜面培养基去滤纸条用2%琼脂及2%羧甲基纤维素钠CMCNa37. Clostridium Pasreurianum Synthetic Medium 巴氏梭状芽孢杆菌合成培养基Glucose 葡萄糖1% MnSO4 0.001%KH2PO4 0.05% FeSO4 0.001%K2HPO4 0.05% Yeast extract酵母膏0.1%MgSO4.7H2O 0.02% Peptone 蛋白胨0.01%NaCl 0.001% CaCO3 0.5%Distille water 蒸馏水100% pH 7.038. Yeast Extract-Medium Extract Agar Ⅱ酵母膏、麦芽膏琼脂ⅡYeast extract 酵母膏4g Mall extract 麦芽膏10gGlucose 葡萄糖4g Agar 琼脂17gDistilled water 蒸馏1000ml pH 7.339. Oatemeal Agar 燕麦粉琼脂Oatemealinfusion燕麦粉浸液20g Agar 琼脂18%Trace element solution 迹量盐溶液1mlDistilled water up to 用蒸馏水补充至1000毫升1000ml pH 7.2Note:Trace element solution 迹量盐溶液:FeSO4.7H2O 0.1g MnCl2.4H2O 0.1gZnSO4.7H2O 0.1g Distilled water 蒸馏水100ml40. Calcium Malate Agar 苹果酸钙琼脂Calium malate 苹果酸钙10g K2HPO4 0.5gNH4Cl 0.5g Glycerol 甘油10gAgar 琼脂15g Distilled water 蒸馏水1000ml41. Thiobacillus Ferrooxidans Medium 氧化亚铁硫杆菌培养基NH42SO4 0.15g KH2PO4 0.05gKCl 0.05g MgSO4.7H2O 0.5gCaNO32.4H2O 0.01g FeSO4.7H2O 50gDistilled water 蒸馏水1000ml pH 2.042. Thiobacillus Thiooxidans Medium 氧化硫硫杆菌培养基NH42SO4 0.3g KH2PO4 3-4gCaCl2 anhydrous 无水0.25g MgSO4.7H2O 0.5gFeSO4.7H2O 0.001g Distilled water 蒸馏水1000mlpH 3.5-443. Plasma Substitute Medium 代血浆培养基Sucrose 蔗糖12.5-15% Peptone 蛋白胨0.5%KH2PO4 0.03% Na2HPO4.12H2O 0.14%pH 7.0-7.244. Skim Milk Medium 脱脂牛奶培养基A TCC 183脱脂牛奶100g 去离子水1000ml适用范围:保加利亚乳杆菌、嗜热乳酸链球菌45. Pea Agar 豌豆琼脂Glucose 葡萄糖1% Peptone 蛋白胨0.5%NaCl 0.5% Agar 琼脂2.0%Pea infusion counted by NH2 豌豆浸汁以NH2计12-14 mg∕100pH before sterilization 消前7.2-7.5Note: Preparetion of pea infusion 豌豆浸汁的制法:Preparetion 900g of pea. Put them into a 5L bottle; and add 3L of tap water. Adjust pH to 4.3-4.5 by using of sulphuric acid. Add 30ml of chloroform for antisepsis. Plug with rubber stopper and bind up the bottle mouth with gauge in order to avoid that the stopper fall off due to gas pressure. Place the bottle at 37℃for 7-10 days. Filter the infusion; then boil the filtrate to escape the chloroform. Filter again Distribution and autoclave at 120℃for 30 minutes. Store at cool contition . 称取白豌豆900克;置于5公升广口瓶中;加自来水3公升;用硫酸调pH至4.3-4.5;再加氯仿30毫升防腐;加胶塞并用纱布扎口防止冲脱;放37℃恒温室7-10天..取出用滤纸过滤;滤液煮沸20分钟;以除氯仿;并再次以滤纸过滤;除沉淀..滤液分装;于120℃30分钟灭菌..后冷藏备用..The standard quality of pea infusion as following 豌豆浸汁质量标准:Aminonitrogen氨基酸: 160-200 mg∕100mlSoluble phosphoruse溶磷: 400-600 μg∕mlColor色泽: auratus;transparent 金黄、透明46. Wheat Bran Medium 麦麸琼脂Wheat bran 麦麸3.6% NH42HPO4 0.3%K2HPO4 0.02% MgSO4.7H2O 0.01%Agar 琼脂2% pH 7.0适用范围:金霉素链霉菌、红霉素链霉菌47. Glucose Yeast Extract Agar 葡萄糖、酵母膏琼脂Glucose 葡萄糖10g Yeast extract 酵母膏10gWater 水1000ml Agar 琼脂15gpH 7.248. MMN Medium MMN培养基CaCl2 0.05g MgSO4 0.15gNaCl 0.025g FeCl3 1% 1.2mlKH2PO4 0.5g Vitamib B1 硫胺素100μgNH42HPO4 0.25g Wort 12 Be′100mlGlucose 葡萄糖10-15g Citric acid 柠檬酸0.2g Distilled water 蒸馏水900ml pH 5.5 左右适用范围:蜜环菌49. Starch Agar 淀粉琼脂Soluble starch 可溶性淀粉10g NaNO3 1gMgCO3 1g K2HPO4 0.3gNaCl 0.5g Agar 琼脂20gDistilled water 蒸馏水1000ml50. 5 Be′Wort Agar 5 Be′麦芽汁琼脂适用范围:园弧青霉、少根根霉、日本根霉、爪哇根霉51. 5 Be′Koji Extract Agar 5 Be′米曲汁琼脂适用范围:华根霉、三宝垄根霉52. 发根农杆菌培养基YEBBeef extract 牛肉浸膏5g/L Yeast extract 酵母膏1g/LPeptone 蛋白胨5g/L Sucrose 蔗糖5g/L MgSO4.7H2O 0.4g/100ml Agar 琼脂1.5g/100ml pH 7.4适用范围:青枯假单胞菌53. 青枯菌培养基TmPeptone 蛋白胨10g Casein 干酪素水解物产1g Glucose 葡萄糖5g Ddhro 纯水1000mlAgar琼脂15g pH 7.054. YM Yeast Malt Agar酵母膏3.0g 麦芽汁3.0g蛋白胨5.0g 琼脂20.0g蒸馏水1000ml55. ISP 4可溶性淀粉10.0g K2HPO4 1.0gMgSO4.7H2O 1.0g NaCl 1.0gNH42SO4 2.0g CaCO3 2.0gFeSO4.7H2O 0.001g MnCl2.7H2O 0.001g琼脂20.0g 蒸馏水1000ml56. Trypton Soy Agar胰蛋白胨17.0g 大豆胨3.0g葡萄糖2.5g 琼脂20.0gNaCl 5.0g K2HPO4 2.5g。
常用培养基配制方法
常用培养基配制方法:(1)基础盐培养基(MSM):(NH4)2SO42.0g,MgSO4·7H2O0.2g,CaCl2·2H2O 0.01g,FeSO4·7H2O0.001g,Na2HPO4·12H2O1.5g,KH2PO41.5g,蒸馏水1000 mL。
(2)LB培养基:蛋白胨10g,酵母提取物5g,氯化钠5g,蒸馏水1000 mL,pH7.5。
(3)高氏合成1号培养基:硝酸钾1g,磷酸氢二钾0.5g,硫酸镁0.5g,氯化钠0.5g,硫酸亚铁0.01g,可溶性淀粉20g,蒸馏水1000mL。
(4)查彼氏培养基:硝酸钠2g,氯化钾0.5g,硫酸镁0.5g,磷酸氢二钾1g,硫酸亚铁0.01g,蔗糖30g,蛋白胨0.5g,蒸馏水1000mL。
(5)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20 g,蒸馏水1000mL。
将无病马铃薯洗净去皮切碎,加蒸馏水1000mL,煮沸0.5 h,纱布过滤,滤液加蒸馏水补足1000mL,再加入葡萄糖,然后分装三角瓶灭菌备用。
(6)铵察氏琼脂培养基:氯化铵2g,氯化钾0.5g,硫酸镁0.5g,磷酸氢二钾1g,硫酸亚铁0.01g,蔗糖30g,蛋白胨0.5g,琼脂20g,蒸馏水1000 mL。
(7)克氏合成1号琼脂培养基:磷酸氢二钾1g,碳酸镁0.3g,氯化钠0.2 g,硝酸钾1g,硫酸亚铁0.01g,碳酸钙0.5g,葡萄糖20g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
(8)葡萄糖天门冬素琼脂培养基:葡萄糖10g,天门冬素0.5g,磷酸氢二钾0.5g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
(9)葡萄糖酵母膏琼脂培养基:葡萄糖10g,酵母膏10g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
(10)瓦氏肉汁琼脂培养基:蛋白胨5g,葡萄糖10g,牛肉膏10g,氯化钠5g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
(11)淀粉琼脂培养基:可溶性淀粉10g,碳酸镁1g,磷酸氢二钾0.3g,氯化钠0.5g,硝酸钠1g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
常用25种培养基详细配方
常用25种培养基详细配方以下是常用的25种培养基的详细配方:1. LB培养基(Luria-Bertani medium)-天然培养基:10g蛋白胨,5g酵母粉,10gNaCl,添加适量蒸馏水,pH值调至7.0。
- 固体培养基:添加15g agar。
2. TSA培养基(Tryptic Soy Agar)-17g蛋白胨,3g酵母提取物,5gNaCl,添加适量蒸馏水,pH值调至7.3-7.5- 固体培养基:添加15g agar。
3. NB培养基(Nutrient Broth)-8g蛋白胨,2g胰蛋白胨,5gNaCl,添加适量蒸馏水,pH值调至7.4 - 固体培养基:不添加agar。
4. R2A培养基(Reasoner's 2A medium)- 0.5g peptone,0.5g casein hydrolysate,0.5g yeast extract,0.5g glucose,0.5g soluble starch,0.3g dipotassium phosphate,0.05g magnesium sulfate,0.3g sodium pyruvate,10μg m anganese sulfate,添加适量蒸馏水,pH值调至7.2-7.4- 固体培养基:添加15g agar。
5. BHIS培养基(Brain Heart Infusion with 20% Sucrose)- 37.5g BHIS培养基,10g sucrose,添加适量蒸馏水,pH值调至7.5- 固体培养基:添加15g agar。
6. PDA培养基(Potato Dextrose Agar)-200g马铃薯,20g葡萄糖,添加适量蒸馏水,pH值调至5.6- 固体培养基:添加20g agar。
7. MRS培养基(de Man Rogosa Sharpe medium)- 10g peptone,10g beef extract,4g yeast extract,20g glucose,5g sodium acetate,2g dipotassium phosphate,0.02g magnesium sulfate,添加适量蒸馏水,pH值调至6.2-6.6- 固体培养基:添加20g agar。
培养基配方及配制方法
培养基配方1 斜面菌种保存培养基1.1PDA培养基〔马铃薯葡萄糖琼脂培养基〕称取200g马铃薯,洗净去皮切碎,加水1000ml煮沸0.5h,纱布过滤,滤液补足1000ml,再加15g葡萄糖和15-20g琼脂,充分溶解后趁热纱布过滤,分装试管,每试管约5-10ml〔视试管大小而定〕,121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。
1.2麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备:干麦芽首先进展粉碎〔不能太粗,也不必太细。
太粗影响糖化效率,过细影响过滤速度〕,按麦芽重量的3~4倍加水,搅拌均匀后,37℃左右浸泡1小时,然后缓缓加温至55~63℃〔在升温过程中应不断搅拌使温度均匀〕,保温4~6小时〔用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时〕,糖化完毕。
在糖化过程中,应每小时搅拌一次。
取过滤后的清液,加1.8%琼脂,分装试管,每试管约5-10ml 〔视试管大小而定〕,121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。
2 基菌落总数检测2.1平板计数琼脂培养基将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g参加蒸馏水1000ml中,煮沸溶解后,调pH,然后在121℃下灭菌15min,取出,稍微冷却后,带热倒入培养皿中。
3志贺氏菌检测3.1 GN增菌液成分:胰蛋白胨:20g,葡萄糖:1g,甘露醇:2g,柠檬酸钠:5g,去氧胆酸钠0.5g,磷酸二氢钾4g,磷酸氢二钾1.5g,氯化钠5g,蒸馏水1000ml。
pH7.0制法:将上述物品参加蒸馏水中,加热溶解煮沸,调pH为7.0,分装,在115℃高压灭菌15min。
3.2 HE琼脂成分:胨:12g,牛肉膏3g,乳糖12g,蔗糖12g,水杨素2g,胆碱20g,氯化钠5g,琼脂18~20g,蒸馏水1000ml0,0.4%溴麝香草酚蓝溶液16ml,Andrade指示剂20ml.,甲液20ml,乙液20ml。
pH7.5 制法:将上述前七种成分参加400ml蒸馏水中作为根底液,将琼脂参加到600ml蒸馏水中加热溶解,参加甲液乙液到根底液中,调pH,再参加指示剂,并与琼脂液合并,待冷却至50~55℃,倾注浇平板。
常用培养基配方
常用培养基配方 02onpg培养基03西蒙氏柠檬酸盐培养基04缓冲器葡萄糖蛋白胨水(mr和vp试验用)05克氏柠檬酸盐培养基06丙二酸钠培养基07葡葡糖铵培养基08hugh-leifson培养基(o/f试验用)09马尿酸钠培养基11苯丙氨酸培养基12氨基酸脱羧酶试验培养基13蛋白胨水(靛基质试验用)14硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)15尿素琼脂16氰化钾(kcn)培养基17氧化酶试验18硝酸盐培养基19细胞色素氧化酶试验20过氧化氢酶试验21过氧化物酶试验22磷酸盐缓冲液23明胶磷酸盐缓冲液24乳酸-苯酚溶液25肉浸液肉汤26肉浸液琼脂27牛肉(或牛心)消化汤33乳糖胆盐发酵管34乳糖蒸煮管35ec肉汤36缓冲器蛋白胨水(bp)37氯化镁孔雀绿增菌液(mm)38四硫磺酸钠煌蓝减菌液(ttb)39四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法) 40亚硒酸盐胱氨酸减菌液(sc)41gn增菌液42肠道菌增菌肉汤43亚硫酸铋琼脂(bs)44dhl琼脂45he琼脂46ss琼脂47ws琼脂48麦康凯琼脂49伊红美蓝琼脂(emb)50三糖铁琼脂(tsi)51三糖铁琼脂(换用方法)52克氏双糖铁琼脂(ki)53克氏双糖铁琼脂(换用方法)54葡萄糖半液态蒸煮管555%乳糖发酵管56caye培养基57honda氏产毒肉汤58elek氏培养基(毒素测量用)59氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基60胰蛋白胨水61rustigian氏尿素培养液62氯化钠结晶紫增菌液63氯化钠蔗糖琼脂64嗜盐菌选择性琼脂653.5%氯化钠三糖铁琼脂66氯化钠血琼脂673.5%氯化钠生化试验培养基68改进磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用)69cin-1培养基70嗜盐性试验培养基01糖发酵管蛋白胨10g磷酸氢二钠(na2hpo4·12h2o)2g0.2%滇麝香草酚蓝溶液12ml蒸馏水1000ml1葡萄糖蒸煮管及按上述成分配不好后,按0.5%重新加入葡萄糖,灌装于存有一个倒转小管的小试管内,121℃高压杀菌15min.2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶100ml,121℃高压灭菌15min.另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌.将5ml糖溶液加入于100ml培养基内,以无菌操作分装小试管.备注:蔗糖不氢铵,冷却后可以自行水解者,应当使用过滤法除菌.试验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于36℃±1℃培养,一般观察2~3d.迟缓反应需观察14~30d.02onpg培养基邻硝基酚β-d-半乳糖昔(onpg)60mg(o-nitrophenyl-β-d-galactopyranoside)0.01mol/l磷酸钠缓冲液(ph7.5)10ml1%蛋白胨水(ph7.5)30ml制法:将onpg溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于10mm×75mm试管,每管0.5ml,用橡皮塞塞紧.试验方法:自琼脂斜面上挑取培育物1八十环注射,于36±1℃培育1~3h和24h观测结果.如果β-半乳糖苷酶产生,则于1~3h变黄色,如无此酶则24h不变色.03西蒙氏柠檬酸盐培养基硫酸镁(mgso4·7h2o)0.2g磷酸二氢铵1g磷酸氢二钾1g柠檬酸钠5g蒸馏水1000ml0.2%溴麝香草酚蓝溶液40ml制法:先将盐类熔化于水内,校正ph,再提琼脂,冷却熔化.然后重新加入指示剂,混合光滑后灌装试管,121℃高压杀菌15min.放成斜面.试验方法:挑取少量琼脂培养物接种,于36±1℃培养4d,每天观察结果.阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿04缓冲器葡萄糖蛋白胨水(mr和vp试验用)磷酸氢二钾5g蒸馏水1000ml制法:溶化后校正ph,分装试管,每管1ml,121℃高压灭菌15min.甲基白(mr)试验:自琼脂斜面挑取少量培育物注射本培养基中,于36±1℃培育2~5d,哈夫尼亚菌则应当在22~25℃培育.碱液甲基白试剂一滴,立即观测结果.鲜红色为阳性,黄色为阴性.甲基白试剂配法:10mg甲基白溶30ml95%乙醇中,然后重新加入20ml蒸馏水.v-p试验:用琼脂培养物接种本培养基中,于36±1℃培养2~4d.哈夫尼亚菌则应在22~25℃培养.加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5ml和40%氢氧化钾溶液0.2ml,充分振摇试管,观察结果.阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在36±1℃下培养4h再进行观察.05克氏柠檬酸盐培养基柠檬酸钠3g葡萄糖0.2g酵母浸膏0.5g单盐酸半胱氨酸0.1g磷酸二氢钾1g0.2%酚红溶液6ml蒸馏水1000ml制法:冷却熔化,灌装试管,121℃高压杀菌15min.放成斜面.试验方法:用琼脂培养物接种整个斜面,在36±1℃培养7d,每天观察结果.阳性者培养基变为红色.06丙二酸钠培养基酵母浸膏1g磷酸氢二钾0.6g磷酸二氢钾0.4g丙二酸钠3g0.2%溴麝香草酚蓝溶液12ml蒸馏水1000ml制法:先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正ph后再加入指示剂,分装试管,121℃高压灭菌15min.试验方法:用新鲜的琼脂培育物注射,于36±1℃培育48h,观测结果.阳性者由绿色变成蓝色.07葡葡糖铵培养基硫酸镁(mgso4·7h2o)0.2g磷酸二氢铵1g磷酸氢二钾1g蒸馏水1000ml0.2%溴麝香草酚蓝溶液40ml制法:先将盐类和糖溶解于水内,校正ph,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min,放成斜面.试验方法:用注射针轻轻跌破培育物的表面,在盐水管内制成藻酸的悬液,肉眼观测不见踪影浑浊,以每一注射环路附带菌数在20~100之间为宜.将注射环路杀菌后挑取菌液注射,同时再以同法注射普通斜面一支做为对照.于36±1℃培育24h.阳性者葡萄糖铵斜面上存有正常大小的菌落生长;阴性者不生长,但在对照培养基上生长较好.如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可以视作阴性结果.注:容器使用前应用清洁液浸泡.再用清水,蒸馏水冲洗干净,并用新棉花做成棉塞,干热灭菌后使用.如果操作时不注意,有杂质污染时,易造成假阳性的结果.08hugh-leifson培养基(o/f试验用)磷酸氢二钾0.3g葡萄糖10g0.2%溴麝香草酚蓝溶液12ml蒸馏水1000ml制法:将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正ph至7.2.加入葡萄糖,琼脂煮沸,溶化琼脂,然后加入指示剂.混匀后,分装试管,121℃高压灭菌15min,直立凝固备用.试验方法:从斜面上挑取小量培育物作外科手术注射,同时注射两支培养基,其中一支于注射后碱液熔化的1%琼脂液于表面,高度约1cm,于36±1℃培育.09马尿酸钠培养基马尿酸钠1g肉浸液100ml制法:将马尿酸钠熔化于肉浸液内,灌装于小试管内,并于管壁画一横线.以标志管内液面高度,高压杀菌121℃20min.试剂:三氯化铁(fecl3·6h2o)12g,溶于2%盐酸溶液100ml中即成.试验方法:用氢铵培育物注射,于42℃培育48h,观测培养液与否抵达试管壁上记号处,例如严重不足时,用蒸馏水补齐至原量.经Vergt结晶,汲取上清液0.8ml,重新加入三氯化铁试剂0.2ml,立即混合光滑,经10~15min,观测结果.结果:发生永恒之沉淀物为阳性.明胶120g蒸馏水1000mlph6.8~7.0制法:冷却熔化,校正至ph7.4~7.6,灌装小管,121℃高压杀菌10min,抽出后快速加热,并使其凝结.复查最终ph应属6.8~7.0.试验方法:用琼脂培养物穿刺接种,放在22~25℃培养,每天观察结果,记录液化时间.或放在36士1℃培养,每天取出,放冰箱内30min后再观察结果.11苯丙氨酸培养基酵母浸膏3gdi-苯丙氨酸(或l-苯丙氨酸1g)2g磷酸氢二钠1g蒸馏水1000ml制法:加热溶解后分装试管,121℃高压灭菌15min,使成斜面.试验方法:自琼脂斜面上挑取大量培育物,移种于苯丙氨酸琼脂,在36±1℃培育4h或18~24h.碱液10%三氯化铁溶液2~3几滴,自斜面培育物上泣不成声,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈圆形深绿色.12氨基酸脱羧酶试验培养基酵母浸膏3g蒸馏水1000ml1.6%滇甲酚紫-乙醇溶液1mll-氨基酸或dl-氨基酸0.5或1g/100ml制法:除氨基酸以外的成分冷却熔化后,灌装每瓶100ml,分别重新加入各种氨基酸:赖氨酸,精氨酸和鸟氨酸.l-氨基酸按0.5%重新加入,dl-氨基酸按1%重新加入.择机校正ph至6.8.对照培养基不提氨基酸.灌装于杀菌的小试管内,每管及0.5ml,上面碱液一层液体石蜡,115℃高压杀菌10min.试验方法:从琼脂斜面上挑取培养物接种,于36±1℃培养18~24h,观察结果.氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色.阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色.对照管应为黄色.13蛋白胨水(靛基质试验用)蛋白胨(或胰蛋白胨)20g蒸馏水1000ml制法:按上述成分配制,分装小试管,121℃高压灭菌15min.柯凡克试剂:将5g对二甲氨基苯甲醛熔化于75ml戊醇中.然后缓慢重新加入淡盐酸25ml.欧-波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95ml95%乙醇内.然后缓慢加入浓盐酸20ml.试验方法:挑取小量培育物注射,在36±1℃培育1~2d,必要时可以培育4~5d.重新加入柯凡克试剂约0.5ml,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;或重新加入欧-波试剂约0.5ml,沿管壁泣不成声,全面覆盖于培养液表面,阳性者于液面碰触处呈圆形玫瑰红色.注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用.14硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)酵母浸膏3g蛋白胨10g硫酸亚铁0.2g硫代硫酸钠0.3g蒸馏水1000ml制法:冷却熔化,校正ph,灌装试管,115℃高压杀菌15min,抽出四肢祗其凝结.试验方法:挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于36±1℃培养1~2d,观察结果.产硫化氢者使培养基变为黑色.注:肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生,应采用三糖铁琼脂或本培养基.15尿素琼脂磷酸二氢钾2g0.4%酚红溶液3ml蒸馏水1000ml20%尿素溶液100mlph7.2±0.1制法:将除尿素和琼脂以外的成分配不好,并校正ph,重新加入琼脂,冷却熔化并灌装烧瓶.121℃高压杀菌15min.热至50~55℃,重新加入经除菌过滤器的尿素溶液.尿素的最终浓度为2%,最终ph应属7.2±0.1.灌装于杀菌试管内,放成斜面水泵.试验方法:挑取琼脂培养物接种,在36±1℃培养24h,观察结果.尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色.16氰化钾(kcn)培养基蛋白胨10g磷酸二氢钾0.225g磷酸氢二钠5.64g蒸馏水1000ml0.5%氰化钾溶液20ml制法:将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,121℃高压灭菌15min.放在冰箱内使其充分冷却.每100ml培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0ml(最后浓度为1:10000),分装于12mm×100mm灭菌试管,每管约4ml,立刻用灭菌橡皮塞塞紧,放在4℃冰箱内,至少可保存两个月.同时,将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用.17氧化酶试验1%盐酸二甲基对苯二胺溶液:少量新鲜配制,干冰箱内避光保存.1%α-萘酚-乙醇溶液.试验方法:取白色洁净滤纸沾取菌落.加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红色,并逐渐加深;再加α-萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色.阴性于两分钟内不变色.以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显色反应与以上相同.18硝酸盐培养基硝酸钾0.2g蒸馏水1000ml制法:溶解,校正ph,分装试管,每管约5ml,121℃高压灭菌15min.硝酸盐还原成试剂:甲液:将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/l乙酸溶液100ml中.乙液:将甲萘胺0.5g熔化于2.5mol/l乙酸溶液100ml中.试验方法:接种后在36±1℃培养1~4d,加入甲液和乙液各一滴,观察结果.硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色.备注:本试验阴性的原因存有三:细菌无法还原成硝酸盐;亚硝酸盐稳步水解,分解成氨和氮;培养基不适合细菌的生长.如欲检查培养基中硝酸盐与否未被水解,可以再重新加入锌粉少许,可以并使硝酸盐还原成为亚硝酸盐而呈现出红色.19细胞色素氧化酶试验1%盐酸二甲基对苯二胺溶液.1%α-萘酚-乙醇溶液.试验方法:挑37℃(或高于37℃)培育20h的斜面培育物一支,将两种试剂各2~3几滴,从斜面上端滴下,并将斜面略作弯曲,并使试剂混合液流经斜面上的培育物.例如系平板培育物,则需用试剂混合液滴在菌落上.结果:于2min内呈现蓝色者为阳性.阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应,2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果.20过氧化氢酶试验试剂:3%过氧化氢溶液:临用时配制.试验方法:挑取液态培养基上菌落一注射环路,放在洁净试管内,碱液3%过氧化氢溶液2ml,观测结果.结果:于半分钟内出现气泡者为阳性,不出现气泡者为阴性.21过氧化物酶试验试剂:2%儿茶酚溶液.3%过氧化氢溶液.试验方法:挑取液态培养基上菌落一注射环路,放在洁净试管内,碱液2%儿茶酚溶液1ml及3%过氧化氢溶液1ml.静放在室温(20℃)中30~60min,观测结果.结果:阳性反应,细菌变为黑褐色;阴性反应,细菌不变色.备注:过氧化物酶的促进作用可以受到氰化钾的遏制.22磷酸盐缓冲液磷酸二氢钾34g1mol/l氢氧化钠溶液175ml蒸馏水825ml制法:先将磷酸盐溶解于500ml蒸馏水中,用1mol/l氢氧化钠溶液校正ph后,再用蒸馏水稀释至1000ml.稀释液:取储存液1.25ml,用蒸馏水稀释至1000ml.分装每瓶100ml或每管10ml,121℃高压灭菌15min.23明胶磷酸盐缓冲液磷酸氢二钠4g蒸馏水1000ml制法:加热溶解,校正ph,121℃高压灭菌15min.24乳酸-苯酚溶液乳酸(比重1.21)10g蒸馏水10ml制法:将苯酚在水中加热溶解,然后加入乳酸及甘油.用途:检验真菌形态时用.25肉浸液肉汤切碎牛肉500g蛋白胨10g磷酸氢二钾2g蒸馏水1000ml制法:将切碎之回去筋膜并无油脂牛肉500g提蒸馏水1000ml,混合后摆冰箱过夜,除去液面之浮油,隔水煮熟半小时,并使肉渣全然凝固成块,用绒布过滤器,并侵蚀搜集全部滤液,搅拌补齐原量.重新加入蛋白胨,氯化钠和磷酸盐,熔化后校正ph7.4~7.6煮熟并过滤器,灌装烧瓶,121℃高压杀菌30min.26肉浸液琼脂肉浸液肉汤(ph7.4)1000ml琼脂17~20g制法:冷却熔化琼脂,灌装烧瓶或试管,121℃高压杀菌30min.根据须要,蕴含平板或放成斜面.27牛肉(或牛心)消化汤切碎牛肉(或牛心)1000g15%氢氧化钠溶液27ml胰蛋白酶40ml三氯甲烷1ml氯化钠10g蒸馏水2000ml1表示取碎牛肉,提蒸馏水,隔水冷却至80℃,保持15min.2加氢氧化钠溶液,对ph试纸呈弱碱性,冷至40℃.3提胰蛋白酶,乙醚,在36±1℃置放4~5h,每小时晃动一二次.44h后,吸取上层液5ml于试管中,加5%硫酸铜溶液0.1ml,4%氢氧化钠溶液5ml,混合之.若呈红色,则不须再消化,可由温箱取出.5重新加入15%乙酸溶液45ml,对ph试纸呈酸性.6煮沸15min,使胰蛋白酶破坏,冷后,放冰箱内一夜.7次日汲取上层清液,提氯化钠10g,并搅拌补齐原量,煮熟.8校正ph7.4~7.6(加15%氢氧化钠溶液约10ml),加热,用滤纸过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌20min.注:①此培养基可作为琼脂培养基的基础,不需加蛋白胨.②胰蛋白酶之酿制:称取回去脂切碎的猪胰500g,重新加入乙醇500ml,蒸馏水1500ml,混合之,装人玻塞瓶内.每日容器三次.3d后,用绒布过滤器抽走其汁,提盐酸至0.05%,摆冰箱内留存水泵.绞碎猪胃100g切碎猪血块100g蒸馏水1000ml淡盐酸10ml1洗涤猪胃,除去油脂,保留胃粘膜,用绞肉机绞碎.2用绞肉机将猪血块切碎.3将蒸馏水加热至55℃,加入猪胃,猪血块和盐酸,置55℃水浴中24h,时常加以摇动.4从水浴内抽出,重新加入1mol/l碳酸钠溶液5ml,煮熟10min,放在冰箱内一夜.5吸取上层清液,加磷酸氢二钾1g,加热至75℃,加入1mol/l碳酸钠溶液45ml,煮沸,校正ph7.2~7.4.6用滤纸过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌20min.牛心消化汤(ph7.4~7.6)1000ml黄豆粉浸液50ml制法:将琼脂提在牛心消化汤内,冷却熔化,过滤器.重新加入豌豆粉浸液,灌装每瓶100ml,121℃高压杀菌15min.豌豆粉浸液制法:挑豌豆粉5g,氯化钠10g,重新加入蒸馏水100ml.复置100℃水浴内冷却1h,摆于冰箱中过夜.汲取上清液即为为豌豆浸液.ph7.4~7.6豆粉琼脂100ml退纤维羊血(或兔血)5~10ml制法:加热溶化琼脂,冷至50℃,以灭菌手续加入脱纤维羊血,摇匀,倾注平板.亦可分装灭菌试管,置成斜面.亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂.蛋白胨10g琼脂15~20g蒸馏水1000ml制法:将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15%氢氧化钠溶液约2ml,校正ph 至7.2~7.4.加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化.分装烧瓶,121℃高压灭菌15min.备注:此培养基可以可供通常细菌培养之用,可以蕴含平板或做成斜面.如用作菌落计数,琼脂量为1.5%;例如做成平板或斜面,则应属2%.蛋白陈10g蒸馏水1000ml制法:按上述成分混合,溶解后校正ph,分装烧瓶,每瓶225ml,121℃高压灭菌15min.33乳糖胆盐蒸煮管蛋白胨20g猪胆盐(或牛,羊胆盐)5g0.04%滇甲酚紫水溶液25ml蒸馏水1000ml制法:将蛋白胨,胆盐及乳糖溶于水中,校正ph,加入指示剂,分装每管10ml,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min.备注:双料乳糖胆盐蒸煮管除蒸馏水外,其他成分加倍.34乳糖发酵管蛋白胨20g0.04%溴甲酚紫水溶液25ml蒸馏水1000ml制法:将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正ph,加入指示剂,按检验要求分装30ml,10ml或3ml,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min.备注:①双料乳糖蒸煮管除蒸馏水外,其他成分加倍.②30ml和10ml乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用,3ml乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用.35ec肉汤胰蛋白胨20g3号胆盐(或混合胆盐)1.5g磷酸氢二钾4g蒸馏水1000ml制法:将上述成分混合,熔化后,分后装有蒸煮倒管的试管中,121℃高压杀菌15min,最终ph为6.9±0.2.36缓冲蛋白胨水(bp)蛋白胨10g磷酸氢二钠(na2hpo4·12h2o)9g磷酸二氢钾1.5g蒸馏水1000ml制法:按上述成分配不好后以大烧瓶上装,121℃高压杀菌15min.临用时无菌灌装每瓶225ml.注:本培养基供沙门氏菌前增菌用.37氯化镁孔雀绿减菌液(mm)胰蛋白胨5g磷酸二氢钾1.6g蒸馏水1000ml氯化镁(化学纯)40g蒸馏水100ml4.13.3丙液0.4%孔雀绿水溶液.制法:分别按上述成分配不好后,121℃高压杀菌15min水泵.临用时挑甲液90ml,乙液9ml,丙液0.9ml,以无菌操作混合即可.注:本培养基亦称rappaport10(r10)增菌液.38四硫磺酸钠煌蓝减菌液(ttb)多胨或眎胨5g碳酸钙10g蒸馏水1000ml蒸馏水20ml制法:将基础培养基的各成分重新加入蒸馏水中,冷却熔化,灌装每瓶100ml.灌装时应随时振摇,并使其中的碳酸钙搅匀.121℃高压杀菌15min水泵.临用时每100ml基础培养基中重新加入碘溶液2ml,0.1%煌蓝溶液1ml.39四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法)蛋白胨10g碳酸钙45g蒸馏水1000ml将各成分加入于蒸馏水中,加热至约70℃溶解,校正ph至7.0±0.1,121℃高压灭菌20min.硫代硫酸钠溶液硫代硫酸钠(na2s2o3·5h2o)50g蒸馏水减至100ml碘化钾25g蒸馏水减至100ml将碘化钾充分溶解于是少量的蒸馏水中,加入碘片,振摇玻瓶至碘片全部溶解,再加入蒸馏水至规定量.贮于棕色玻瓶内,紧塞瓶盖备用.煌蓝0.5g蒸馏水100ml放置暗处,不少于1d,并使其自然杀菌.干燥的牛胆盐10g蒸馏水100ml煮沸溶解,121℃高压灭菌20min.基础液900ml硫代硫酸钠溶液100ml碘液20ml煌绿溶液2ml牛胆盐溶液50ml临用前,按上列顺序,以无菌操作依次加入于基础液中,每加入一种成分,均应摇匀后再加入另一种成分.分装于灭菌瓶中,每瓶100ml.40亚硒酸盐胱氨酸减菌液(sc)亚硒酸氢钠4g磷酸氢二钠5.5g磷酸二氢钾4.58l-胱氨酸0.01g蒸馏水1000ml1%l-胱氨酸-氢氧化钠溶液的配法:称取l-胱氨酸0.1g(或dl-胱氨酸0.2g),提1mol/l 氢氧化钠1.5ml,并使熔化,再重新加入蒸馏水8.5ml可自.制法:将除亚硒酸氢钠和l-胱氨酸以外的各成分溶解于900ml蒸馏水中,加热煮沸,俟冷备用.另将亚硒酸氢钠溶解于100ml蒸馏水中,加热煮沸,候冷,以无菌操作与上液混合.再加入1%l-胱氨酸-氢氧化钠溶液1ml.分装于灭菌瓶中,每瓶100ml,ph应为7.0±0.1.41gn减菌液胰蛋白胨20g柠檬酸钠5g去氧胆酸钠0.5g磷酸氢二钾4g磷酸二氢钾1.5g蒸馏水1000ml制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正ph.分装每瓶225ml,115℃高压灭菌15min.42肠道菌增菌肉汤蛋白胨110g牛胆盐20g磷酸氢二钠8g磷酸二氢钾2g煌绿0.015g蒸馏水1000ml制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正ph.分装每瓶30ml,115℃高压灭菌15min.43亚硫酸铋琼脂(bs)蛋白胨10g硫酸亚铁0.3g磷酸氢二钠4g煌蓝0.025g柠檬酸铋铵2g亚硫酸钠6g琼脂18~20g蒸馏水1000ml1将前面5种成分溶解于300ml蒸馏水中.2将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50ml蒸馏水熔化.3将琼脂于600ml蒸馏水中煮沸溶解,冷至80℃4将以上三液分拆,补足蒸馏水至1000ml,校正ph,提0.5%煌蓝水溶液5ml,容器.热至50~55℃,蕴含平皿.备注:此培养基不须要高压杀菌.制取过程不必过分冷却.以免减少其选择性.应当在临用前一天制取,储藏于室温暗处.少于48h不必采用.44dhl琼脂蛋白胨20g去氧胆酸钠1g硫代硫酸钠2.3g柠檬酸铁铵1g中性红0.03g琼脂18~20g蒸馏水1000ml制法:将除中性红和琼脂以外的成分溶解于400ml蒸馏水中,校正ph.再将琼脂于600ml蒸馏水中煮沸溶解,两液合并,并加入0.5%中性红水溶液6ml,待冷至50~55℃,倾注平板.45he琼脂琼脂18~20g蒸馏水1000ml0.4%溴麝香草酚蓝溶液16mlandrade指示剂20ml甲液20ml乙液20ml制法:将前面七种成分溶解于400ml蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入于600ml蒸馏水内,加热溶解.加入甲液和乙液于基础液内,校正ph.再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷至50~55℃,倾注平板.备注:①此培养基不容高压杀菌.硫代硫酸钠34g柠檬酸铁铵4g蒸馏水100ml回去氧胆酸钠10g蒸馏水100ml②andrade指示剂酸性复红0.5g1mol/l氢氧化钠溶液16ml蒸馏水100ml将复红熔化于蒸馏水中,重新加入氢氧化钠溶液.数小时后如复红退色不全系列,再提氢氧化钠溶液1~2ml.46ss琼脂蒸馏水1000ml再将两液混合,121℃高压杀菌15min,留存水泵.基础培养基100ml柠檬酸钠8.5g硫代硫酸钠8.5g10%柠檬酸铁溶液10ml1%中性红溶液2.5ml0.1%煌蓝溶液0.33ml加热溶化基础培养基,按比例加入上述染料以外之各成分,充分混合均匀,校正至ph7.0,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板.备注:①合叶的培养基宜当日采用,或留存于冰箱内于48h内采用.②煌绿溶液配好后应在10d以内使用.③可以购用ss琼脂的潮湿培养基.47ws琼脂十二烷基硫酸钠2gandrade指示剂20ml0.4%溴麝香草酚蓝溶液16ml甲液20ml蒸馏水1000ml制法:除指示剂和甲液外,将其他成分加热溶解,不需消毒,校正ph后加入指示剂和甲液,倾注平板应呈草绿色.备注:①可供沙门氏菌拆分用.②andrade指示剂和甲液的配制均见he琼脂.48麦康凯琼脂蛋白胨17g猪胆盐(或牛,羊胆盐)5g蒸馏水1000ml0.01%结晶紫水溶液10ml0.5%中性红水溶液5ml1将蛋白胨,眎,胆盐和氯化钠熔化于400ml蒸馏水中,校正ph7.2.将琼脂重新加入600ml加热溶解.将两液合并,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用.2临用时冷却熔化琼脂,趁热重新加入乳糖,热至50~55℃时,重新加入结晶青色和中性白水溶液,容器后蕴含平板.备注:结晶紫及中性白水溶液包好后须经高压杀菌.49伊红美蓝琼脂(emb)蛋白胨10g磷酸氢二钾2g2%伊红y溶液20ml0.65%美蓝溶液10ml蒸馏水1000ml制法:将蛋白胨,磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正ph,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用.临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷至50~55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板.50三糖铁琼脂(tsi)蛋白胨20g硫酸亚铁铵〔fe(nh4)2(so4)2·6h2o〕0.2g硫代硫酸钠0.2g酚红0.025g蒸馏水1000ml制法:将除琼脂和酚红以外的各成分熔化于蒸馏水中,校正ph.重新加入琼脂,冷却煮熟,以熔化琼脂.重新加入0.2%酚红水溶液12.5ml,容器.灌装试管,装量宜多些,以便获得较低的底层.121℃高压杀菌15min.置放高层斜面水泵.51三糖铁琼脂(换用方法)蛋白胨15g硫酸亚铁0.2g硫代硫酸钠0.3g酚红0.025g蒸馏水1000ml制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正ph.加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂.加入0.2%酚红水溶液12.5ml,摇匀.分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层.121℃高压灭菌15min,放置高层斜面备用.52克氏双糖铁琼脂(ki)上层培养基成分血消化汤(ph7.6)500ml琼脂6.5g硫代硫酸钠0.1g硫酸亚铁铵0.1g0.2%酚红溶液5ml下层培养基成分血消化汤(ph7.6)500ml0.2%酚红溶液5ml1剥皮消化汤按上层和下层的琼脂用量,分别重新加入琼脂,冷却熔化.2分别加入其他各种成分.将上层培养基分装于烧瓶内;将下层培养基分装于灭菌12mm×100mm试管内,每管约2ml.115℃高压灭菌10min.3将上层培养基放到56℃水浴箱内保温;将下层培养基四肢放到室温内,并使其凝结.4当下层培养基凝固后,以无菌手续将上层培养基分装于下层培养基的上面,每管约1.5ml,放成斜面.53克氏双糖铁琼脂(换用方法)蛋白胨20g柠檬酸铁铵0.5g硫代硫酸钠0.5g酚红0.025g蒸馏水1000ml制法:将除琼脂和酚红以外的各成分熔化于蒸馏水中,校正ph.重新加入琼脂,冷却煮熟,以熔化琼脂.重新加入0.2%酚红水溶液12.5ml,容器.灌装试管,装量宜多些,以便获得比较低的底层.121℃高压杀菌15min.置放高层斜面水泵.54葡萄糖半固体发酵管牛肉膏0.3g氯化钠0.5g1.6%溴甲酚紫酒精溶液0.1ml琼脂0.3g蒸馏水100ml制法:将蛋白胨,牛肉膏和氯化钠加入于水中,校正ph后加入琼脂加热溶解,再加入指示剂和葡萄糖,分装小试管,灭菌121℃15min.555%乳糖蒸煮管蛋白胨0.2g氯化钠0.5g2%溴麝香草酚蓝水溶液1.2ml蒸馏水100ml。
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终1 X浓度
Na2HPO4x7H2O
64 g
47.8 mM
KH2PO4
15 g
22 mM
NaCl
2.5 g
8.6 mM
NH4
5 g
18.7 mM
添加剂
/升
终1 X浓度
抗生素(如果需要)
氨苄青霉素
50 µg/ml
氯霉素
20 µg/ml
卡那霉素
30 µg/ml
四环素
12 µg/ml
半乳糖苷(如果需要)
充分混匀后4°C黑暗保存
警告:溴化乙锭是一种突变剂。使用溴化乙锭溶液时需带手套;称量其粉末时需带面具。
1 M KCl
KCl
74.6 g
H2O
至1升
1 M MgCl2
MgCl2x6H2O
20.3 g
H2O
至100 ml
1 M MgSO4
MgSO4x7H2O
24.6 g
H2O
至100 ml
5 M NaCl
H2O
至1升
5X Tris-甘氨酸, Native电泳缓冲液
/升
终1 X浓度
Tri 碱
15.1 g
25 mM
甘氨酸
72.0 g
192 mM
H2O
至1升
稀释溶液的pH至8.3
5X Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液
H2O
至500 ml
过滤灭菌后分装(25 ml),-20°C 保存
0.5 M EDTA (乙二胺四乙酸)(pH 8.0)
Na2EDTAx2H2O
186.1 g
H2O
至700 ml
10 M NaOH (~50 ml)调节pH值至8.0
H2O
至1升
10 mg/ml 溴化乙锭
溴化乙锭
0.2 g
H2O
至 20 ml
常用培养基
LB培养基
/升
终1 X浓度
胰蛋白胨
10 g
1.0% (w/v)
酵母抽提物
5 g
0.5% (w/v)
NaCl
10 g
1.0% (w/v)
H2O
至1升
调节pH值至7.0
低盐LB培养基
/升
终1 X浓度
胰蛋白胨
10 g
1.0% (w/v)
酵母抽提物
5 g
0.5% (w/v)
NaCl
10 g
0.5% (w/v)
150 mM
Na3citrate x H2O
88.2 g
15 mM
H2O
至800 ml
1M HCl调节pH值至7.0
H2O
至1升
20X SSPE
/升
终1 X浓度
NaCl
175.3 g
150 mM
NaH2PO4xH2O
27.6 g
10 mM
Na2EDTA
7.4 g
10 mM
H2O
至800 ml
10 M NaOH调节pH值至7.4
NaCl
292.2 g
H2O
至1升
10 M NaOH
NaOH
400.0 g
H2O
至1升
1 M Tris-HCl[三羟甲基氨基甲烷盐酸盐]
Tri base
121.1 g
H2O
至800 ml
用于浓缩的HCl调节至所需的pH值
混合后加H2O至1升
3 M 醋酸钠(pH 5.2 或 7.0) (2)
醋酸钠 x 3H2O
401.1 g
H2O
至800 ml
用醋酸调节pH值至7.0或用冰醋酸调节pH值5.2
H2O
至1升
参考文献
1.Atlas, R.M., Handbook of Microbiological Media, second edition, Ed. Parks, L.C., CRC Press, N.Y., 1997.
H2O
至1升
调节pH值至7.0
Terrific Broth 培养基
/升
终1 X浓度
胰蛋白胨
12 g
1.2% (w/v)
酵母抽提物
24 g
2.4% (w/v)
甘油
4 g
0.4% (w/v)
加H2O
至900 ml
灭菌,冷却至60°C后加入100 ml过滤灭菌的10X TB磷酸盐 (0.17 M KH2PO4, 0.72 M K2HPO4)
常用缓冲液
10X 磷酸盐缓冲液(储存液) (PBS)
/升
终1 X浓度
NaCl
80.0 g
137 mM
KCl
2.0 g
2.7 mM
Na2HPO4
14.4 g
100 mM
KH2PO4
2.7 g
2 mM
H2O
至800 ml
HCl
至pH 7.4
H2O
至1升
20X SSC
/升
终1 X浓度
NaCl
175.3 g
SOB 培养基
/升
终1 X浓度
胰蛋白胨
20 g
2.0% (w/v)
酵母抽提物
5 g
0.5% (w/v)
NaCl
0.5 g
0.05% (w/v)
250 mM KCl
10 ml
2.5 mM
H2O
至900 ml
调节pH值至7.0,加H2O至990 ml
灭菌、冷却至室温。使用前加入10 ml灭菌的1 M MgCl2溶液
2.Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001.
常用储存液
10 M 醋酸铵
醋酸铵
385.4 g
H2O
至500 ml
1 M CaCl2
CaCl2x6H2O
219.1 g
H2O
至1升
100X Denhardt 溶液
终浓度
Ficoll 400
10 g
0.02% (w/v)
聚乙烯吡咯烷酮
10 g
0.02% (w/v)
牛血清白蛋白
10 g
0.02% (w/v)
X-Gal
20 µg/ml
IPTG
0.1 M
培养基含有琼脂或琼脂糖
琼脂(平板)
15 g
1.5% (w/v)
琼脂(软性琼脂)
7 g
0.7% (w/v)
琼脂糖(平板)
15 g
1.5% (w/v)
琼脂糖(软性琼脂糖)
7 g
0.7% (w/v)
参考文献
1.Atlas, R.M., Handbook of Microbiological Media, second edition, Ed. Parks, L.C., CRC Press, N.Y., 1997.
2.Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001.
10 mM
SOC 培养基
SOB 培养基(1升)加入20 ml 过滤灭菌的1 M葡萄糖
M9 基本培养基
/升
终1 X浓度
5X M9 salts
200 ml
灭菌H2O
至1升
1 M MgSO4
1 ml
1 mM
20% 葡萄糖
10 ml
0.2 (w/v)
1 M CaCl2
0.1 ml
0.1 mM
5X M9 Salts