实验1特殊显微镜的使用
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4. 每幅图的大小、位置在纸面上须安排得当并注意纸面 的整洁。
细胞生物学实验
实验一 特殊显微镜的使用
生命科学学院
普通光学显微镜
右手握住镜臂，左手托住底座
正确取镜姿势
家蚕中肠细胞（40×）
解剖镜
倒置显微镜
荧光显微镜
微常 镜见
特 殊 显
扫描电镜
透射电镜
蓝 曼 龙 的 胚 胎 发 育 过 程
倒 置 相 差 显 微 镜
细胞生物学实验绘图方法与要求
1. 在仔细观察的基础上，选择典型结构进行描绘，要求 真实、准确，注意各部结构的比例关系。
2. 用铅笔绘图，线条要明确清晰，图的深浅明暗一律以 点的疏密来表示，不得涂阴影或进行其它美术加工。
3. 各部分结构名称要在一侧引直线注明，各引线要平行 不得交叉，在图的下方要注明图名，放大倍数。
发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本受紫外线照射3～ 5min后，荧光也明显减弱。 ⑤ 启动高压汞灯后，不得在1 5min内将其关闭，一经关 闭，必须待汞灯冷却后方可再开启。严禁频繁开闭，
荧光显微镜照片（微管呈绿色、微丝红色、核蓝色）
目前，荧光显微镜更广泛用于免疫细胞化学研究，即 用异硫氰酸（FITC,绿色）或罗丹明（TRITC，红色）等 荧光素标记抗体（一抗或二抗）直接或间接地与细胞内 的相应抗原结合，以检测该抗原的存在与分布。
相差显微镜光路图
荧光显微镜：利用一个高发 光效率的点光源，经过滤色 系统发出一定波长的光(如紫 外光365nm或紫蓝光420nm) 作为激发光，激发标本内的 荧光物质发射出各种不同颜 色的荧光后，再通过物镜和 目镜的放大进行观察。这样 在强烈的对衬背景下，即使 荧光很微弱也易辨认，敏感 性高。 用途：主要用于细胞结构和 功能以及化学成分等的研究。
荧光光源 一般采用超高 压汞灯(50一200W)，它 可发出各种波长的光， 但每种荧光物质都有一 个产生最强荧光的激发 光波长，所以需加用激 发滤片（一般有紫外、 紫色、蓝色和绿色激发 滤片），仅使一定波长 的激发光透过照射到标 本上，而将其他光都吸 收掉。
每种物质被激发光照射后，在极短时间内发射出较照射
实验内容：
一、暗视野显微镜的使用 二、荧光相差显微镜的使用
实验目的： 了解暗视野显微镜、相差显微镜和荧光显
微镜的工作原理和使用方法。
+ 根据丁达尔效应原理设计的一种在黑色背 景条件下观察被检物体的显微镜
+ 观察到明场看不到的极其微小的物体 + 最高分辨率可达0.004微米
人血细胞（40 × ）
人血细胞（40 × ）
作业：
1.根据观察到的现象填写下面表格
材料 维生素B6
青霉素 水绵
自然色
荧光色
材料 棉花纤维
花粉 羊毛
自然色
荧光色
2.用暗视野显微镜观察标本为什么要用强照明光源？ 3.荧光显微镜的使用注意事项有哪些？
家蚕中肠细胞系的建立
家蚕细胞系的传代培养
细胞生物学实验
史晋绒 2016-03
生命科学学院
实验室规则
1. 遵守实验纪律，按时到达实验室，避免迟到或早退。实验中途因故 需外出时，向老师请假。
2. 保持实验室安静，禁止大声喧哗、打闹。 3. 严肃认真地进行实验，如实做好各项观察与记录。 4. 实验过程中要爱护仪器设备，如遇仪器损坏等现象，及时上报。 5. 实验材料、药品及水、电等要节约，取用时不可过量。取用试剂后
1.1 原理 丁达尔现象 微粒发光原理
1.2 结构特点 使用中央遮光板或
暗视野聚光器光源的中央 光束被阻挡光线倾斜照射 在观察的标本上，标本遇 光发生反射或散射，散射 的光线投入物镜内整个视 野是黑暗的。
1.3 优缺点 可分辨0.004um以上的微粒的存在和运动 可用以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动 只能看到物体的存在和运动，不能辨清物百度文库的细
1m=103mm=106μm=109nm
0.1nm
OM
1nm 10nm 100nm 1μm 10μm 100μm
光学显微镜
电子显微镜
扫描隧道显微镜
SEM
1mm
1cm
肉眼分辨0.2mm
分辨极限0.2 μm 放大倍数10×40倍 分辨极限0.2 nm 放大倍数 数万倍
TEM
扫描隧道显微镜
用STM拍下的DNA 用STM拍下的血细胞
，要及时盖上瓶盖，取出的药品或溶液不得倒回瓶内。滴管等不可 混用。 6. 实验中注意安全。使用有毒试剂要严格按照操作规程。易燃物品远 离火源。严禁湿手接触电源。 7. 保持实验室内清洁整齐。实验结束后，各组清理自己的实验台，将 器材清洗后清点数目，摆放整齐。实验室卫生由课代表安排各组轮 流，经老师检查允许后方可离开。
实验材料及步骤：
① 取洋葱内表皮细胞制作临时装片，在普通显微镜、暗视场 显微镜分别比较观察。
② 取牙垢涂在滴有生理盐水的洁净载玻片上，盖上盖玻片， 用滤纸条吸去多余水分，制成临时装片，用暗视野显微镜 观察。
③ 取洋葱内表皮细胞制作临时装片，在普通显微镜、相差显 微镜分别比较观察。
④ 制作水绵、羊毛、维生素B6、棉花、青霉素以及花粉粒临 时装片，先用普通光学显微镜观察，再用荧光相差显微镜 观察不同波长短光照射后的标本图像。
荧光显微镜光路原理
什么是荧光？
物质中的电子吸收光的能量 由低能状态转变为高能状态，再 回到低能状态时释放出的光，是 非温度辐射光——冷光。即：物 质吸收短波光，发射出长波光。
荧光的种类：
自发荧光（固有荧光）：生物体中有些化学成分在短波谱线照 射下可自发地发出荧光。例如某些种类的维生素(VB6)、生物色 素（叶绿素）、弹力纤维等，但显色效应和显像效应很微弱。 二次荧光（次生荧光）：生物标本用荧光色素处理之后，在短 波谱线照射下可以激发出荧光，显色效应和显像效应极为强烈。
微结构
1.4 应用 微小粒子、细菌形态、细菌记数，透明标本观察等。
1.5 暗场显微镜的要求 要求载玻片和盖玻片必须无疵痕和灰尘 物镜前透镜必须清洁无尘 载玻片和盖玻片厚度必须绝对符合要求
2.1 原理及用途
人的眼睛只能感觉光波的波 长（颜色）和振幅（亮度）的变 化。因此难以看到无色透明的活 细胞。
相差显微镜：把透过标本不同部 分的可见光（通过环形光阑形成 的环状入射光）的光程差转变成 振幅差（光强度），从而提高各 种结构间的对比度，使各种结构 变得清晰可见。 用途：主要用于观察活细胞或不 染色的组织切片，有时也可用于 观察缺少反差的染色样品。
波长更长的可见荧光。荧光具有专一性，一般都比激发光弱。
2.2 使用方法及注意事项
① 荧光几乎都较弱，应在较暗的室内进行。 ② 打开灯源，超高压汞灯要预热5～15min，待光源稳定，
眼睛适应暗室环境后再开始观察标本。 ③ 观察过程中为防止紫外线对眼睛造成损害，应避免直
视紫外光源。 ④ 检查时间每次以1～2h为宜，超过90min，超高压汞灯
细胞生物学实验
实验一 特殊显微镜的使用
生命科学学院
普通光学显微镜
右手握住镜臂，左手托住底座
正确取镜姿势
家蚕中肠细胞（40×）
解剖镜
倒置显微镜
荧光显微镜
微常 镜见
特 殊 显
扫描电镜
透射电镜
蓝 曼 龙 的 胚 胎 发 育 过 程
倒 置 相 差 显 微 镜
细胞生物学实验绘图方法与要求
1. 在仔细观察的基础上，选择典型结构进行描绘，要求 真实、准确，注意各部结构的比例关系。
2. 用铅笔绘图，线条要明确清晰，图的深浅明暗一律以 点的疏密来表示，不得涂阴影或进行其它美术加工。
3. 各部分结构名称要在一侧引直线注明，各引线要平行 不得交叉，在图的下方要注明图名，放大倍数。
发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本受紫外线照射3～ 5min后，荧光也明显减弱。 ⑤ 启动高压汞灯后，不得在1 5min内将其关闭，一经关 闭，必须待汞灯冷却后方可再开启。严禁频繁开闭，
荧光显微镜照片（微管呈绿色、微丝红色、核蓝色）
目前，荧光显微镜更广泛用于免疫细胞化学研究，即 用异硫氰酸（FITC,绿色）或罗丹明（TRITC，红色）等 荧光素标记抗体（一抗或二抗）直接或间接地与细胞内 的相应抗原结合，以检测该抗原的存在与分布。
相差显微镜光路图
荧光显微镜：利用一个高发 光效率的点光源，经过滤色 系统发出一定波长的光(如紫 外光365nm或紫蓝光420nm) 作为激发光，激发标本内的 荧光物质发射出各种不同颜 色的荧光后，再通过物镜和 目镜的放大进行观察。这样 在强烈的对衬背景下，即使 荧光很微弱也易辨认，敏感 性高。 用途：主要用于细胞结构和 功能以及化学成分等的研究。
荧光光源 一般采用超高 压汞灯(50一200W)，它 可发出各种波长的光， 但每种荧光物质都有一 个产生最强荧光的激发 光波长，所以需加用激 发滤片（一般有紫外、 紫色、蓝色和绿色激发 滤片），仅使一定波长 的激发光透过照射到标 本上，而将其他光都吸 收掉。
每种物质被激发光照射后，在极短时间内发射出较照射
实验内容：
一、暗视野显微镜的使用 二、荧光相差显微镜的使用
实验目的： 了解暗视野显微镜、相差显微镜和荧光显
微镜的工作原理和使用方法。
+ 根据丁达尔效应原理设计的一种在黑色背 景条件下观察被检物体的显微镜
+ 观察到明场看不到的极其微小的物体 + 最高分辨率可达0.004微米
人血细胞（40 × ）
人血细胞（40 × ）
作业：
1.根据观察到的现象填写下面表格
材料 维生素B6
青霉素 水绵
自然色
荧光色
材料 棉花纤维
花粉 羊毛
自然色
荧光色
2.用暗视野显微镜观察标本为什么要用强照明光源？ 3.荧光显微镜的使用注意事项有哪些？
家蚕中肠细胞系的建立
家蚕细胞系的传代培养
细胞生物学实验
史晋绒 2016-03
生命科学学院
实验室规则
1. 遵守实验纪律，按时到达实验室，避免迟到或早退。实验中途因故 需外出时，向老师请假。
2. 保持实验室安静，禁止大声喧哗、打闹。 3. 严肃认真地进行实验，如实做好各项观察与记录。 4. 实验过程中要爱护仪器设备，如遇仪器损坏等现象，及时上报。 5. 实验材料、药品及水、电等要节约，取用时不可过量。取用试剂后
1.1 原理 丁达尔现象 微粒发光原理
1.2 结构特点 使用中央遮光板或
暗视野聚光器光源的中央 光束被阻挡光线倾斜照射 在观察的标本上，标本遇 光发生反射或散射，散射 的光线投入物镜内整个视 野是黑暗的。
1.3 优缺点 可分辨0.004um以上的微粒的存在和运动 可用以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动 只能看到物体的存在和运动，不能辨清物百度文库的细
1m=103mm=106μm=109nm
0.1nm
OM
1nm 10nm 100nm 1μm 10μm 100μm
光学显微镜
电子显微镜
扫描隧道显微镜
SEM
1mm
1cm
肉眼分辨0.2mm
分辨极限0.2 μm 放大倍数10×40倍 分辨极限0.2 nm 放大倍数 数万倍
TEM
扫描隧道显微镜
用STM拍下的DNA 用STM拍下的血细胞
，要及时盖上瓶盖，取出的药品或溶液不得倒回瓶内。滴管等不可 混用。 6. 实验中注意安全。使用有毒试剂要严格按照操作规程。易燃物品远 离火源。严禁湿手接触电源。 7. 保持实验室内清洁整齐。实验结束后，各组清理自己的实验台，将 器材清洗后清点数目，摆放整齐。实验室卫生由课代表安排各组轮 流，经老师检查允许后方可离开。
实验材料及步骤：
① 取洋葱内表皮细胞制作临时装片，在普通显微镜、暗视场 显微镜分别比较观察。
② 取牙垢涂在滴有生理盐水的洁净载玻片上，盖上盖玻片， 用滤纸条吸去多余水分，制成临时装片，用暗视野显微镜 观察。
③ 取洋葱内表皮细胞制作临时装片，在普通显微镜、相差显 微镜分别比较观察。
④ 制作水绵、羊毛、维生素B6、棉花、青霉素以及花粉粒临 时装片，先用普通光学显微镜观察，再用荧光相差显微镜 观察不同波长短光照射后的标本图像。
荧光显微镜光路原理
什么是荧光？
物质中的电子吸收光的能量 由低能状态转变为高能状态，再 回到低能状态时释放出的光，是 非温度辐射光——冷光。即：物 质吸收短波光，发射出长波光。
荧光的种类：
自发荧光（固有荧光）：生物体中有些化学成分在短波谱线照 射下可自发地发出荧光。例如某些种类的维生素(VB6)、生物色 素（叶绿素）、弹力纤维等，但显色效应和显像效应很微弱。 二次荧光（次生荧光）：生物标本用荧光色素处理之后，在短 波谱线照射下可以激发出荧光，显色效应和显像效应极为强烈。
微结构
1.4 应用 微小粒子、细菌形态、细菌记数，透明标本观察等。
1.5 暗场显微镜的要求 要求载玻片和盖玻片必须无疵痕和灰尘 物镜前透镜必须清洁无尘 载玻片和盖玻片厚度必须绝对符合要求
2.1 原理及用途
人的眼睛只能感觉光波的波 长（颜色）和振幅（亮度）的变 化。因此难以看到无色透明的活 细胞。
相差显微镜：把透过标本不同部 分的可见光（通过环形光阑形成 的环状入射光）的光程差转变成 振幅差（光强度），从而提高各 种结构间的对比度，使各种结构 变得清晰可见。 用途：主要用于观察活细胞或不 染色的组织切片，有时也可用于 观察缺少反差的染色样品。
波长更长的可见荧光。荧光具有专一性，一般都比激发光弱。
2.2 使用方法及注意事项
① 荧光几乎都较弱，应在较暗的室内进行。 ② 打开灯源，超高压汞灯要预热5～15min，待光源稳定，
眼睛适应暗室环境后再开始观察标本。 ③ 观察过程中为防止紫外线对眼睛造成损害，应避免直
视紫外光源。 ④ 检查时间每次以1～2h为宜，超过90min，超高压汞灯