破伤风类毒素单克隆抗体的制备及初步鉴定
破伤风毒素C片段单克隆抗体的研制
GST Te tC
—
作为检测原
Te tC
，
制备
Ab
)
。
方法
，
：
以 纯 化 蛋 白 H is T e t C 免 疫 6 周 龄 雌 性
—
Te tC
的
m
Ab
，
为研 究
的生 物学 功
B A L B ／c
一
小鼠
．
末 次 加 强 免 疫 后 取 其脾 细 胞 与骨 髓 瘤 细 胞
，
破伤风毒 素结 构与功 能 的关 系 以 及 建立 快 速 检
，
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1 2
．
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免疫原和检 测 原 的制备
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在 分 泌 过 程 中被 蛋 白酶 裂 解 成 两 条 由 单
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一
硫键 连
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诱导 重 组 大 肠 杆 菌
l ／L I P T G
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一
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破 伤风 毒 素 C 片段 ( T e t C ) 是 破 伤
，
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诱导重组 大肠杆菌
，
B 12 1
( p GE X
。
-
6 p 1 Te tC
部分
M
，
约为
，
50 000
。
经 研 究证 实
6 h后
，
离心 收集 菌体
抗破伤风类毒素单克隆抗体的制备与鉴定
抗破伤风类毒素单克隆抗体的制备与鉴定①董国霞张华捷晁哲田霖侯启明谭亚军②马霄②（中国食品药品检定研究院百白破疫苗和毒素室，卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室，北京102629）中图分类号R392.1文献标志码A文章编号1000-484X（2021）18-2252-05［摘要］目的：制备抗破伤风类毒素单克隆抗体，并对其进行鉴定。
方法：用破伤风类毒素免疫BALB/c小鼠，经细胞融合及筛选，将阳性杂交瘤细胞株扩大培养后免疫BALB/c小鼠，收获的腹水用Protein G柱纯化；对获得的单克隆抗体进行鉴定，对杂交瘤细胞株进行稳定性检测。
结果：筛选出5株稳定分泌抗破伤风类毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为T1、T2、T3、T4、T5，其分泌的单克隆抗体分别为IgG1、IgG2b、IgG1、IgG2b和IgG1亚类，轻链均为к型；均与百白破疫苗中的T抗原具有较好的反应，与D抗原、PT抗原、FHA抗原和PRN抗原无交叉反应；其中2株单克隆抗体为中和性抗体。
结论：获得5株抗破伤风类毒素单克隆抗体，其中2株为中和性抗体，为破伤风疫苗效价检测新方法的建立等奠定了基础。
［关键词］破伤风类毒素；单克隆抗体；制备；鉴定Preparation and identification of monoclonal antibodies against tetanus toxoid DONG Guo-Xia，ZHANG Hua-Jie，CHAO Zhe，TIAN Lin，HOU Qi-Ming，TAN Ya-Jun，MA Xiao.Division of DTP Vaccine and Toxins，Key Laboratory of the Ministry of Health for Research on Quality and Standardization of Biotech Products，National Institute for Food and Drug Control，Beijing102629，China［Abstract］Objective：To prepare and identify monoclonal antibodies against tetanus toxoid.Methods：BALB/c mice were immunized with tetanus toxoid，cells were fused and the positive hybridoma cell strains secreting tetanus antibodies were screened out. After the positive hybridoma cell strains were cultured on expansion，BALB/c mice were immunized，ascites were harvested and puri‐fied by Protein G-column，and monoclonal antibodies were obtained.The monoclonal antibodies were identified and the hybridoma cell strains were tested for stability.Results：Five hybridoma cell strains secreting monoclonal antibodies against tetanus toxoid were screened out，named T1，T2，T3，T4and T5respectively.The monoclonal antibodies were IgG1，IgG2b，IgG1，IgG2b and IgG1sub‐classes respectively and all light chains wereкtype.All of them had good reaction with T antigen and had no cross reaction with D anti‐gen，PT antigen，FHA antigen and PRN antigen in DTP vaccine.Two of them were neutralizing antibodies.Conclusion：Five mono‐clonal antibodies against tetanus toxoid have been obtained and two of them are neutralizing antibodies，which provides the foundation for the new method establishment of the potency test of tetanus vaccine etc.［Key words］Tetanus toxoid；Monoclonal antibody；Preparation；Identification破伤风疫苗是预防破伤风的有效途径，破伤风类毒素是破伤风疫苗的主要有效组分，破伤风疫苗效价检测是疫苗有效的重要指标。
破伤风毒素C片段单克隆抗体的研制
・论著・文章编号:1007-8738(2009)02-0161-03破伤风毒素C 片段单克隆抗体的研制单艳菊,潘志明,程宁宁,张成全,孙 林,焦新安3(扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室,江苏扬州225009)收稿日期:2008-05-26; 接受日期:2008-06-30基金项目:国家自然科学基金资助项目(30425031);全国优秀博士学位论文作者专项资金资助项目(200358)作者间介:单艳菊(1982-),女,江苏大丰人,硕士生,现在江苏省家禽科学研究所工作3Corres ponding author,E 2mail:jiao@yzu .edu .cnTel:0514287971136[摘要] 目的:研制抗破伤风毒素C 片段(Tet C )的单克隆抗体(mAb )。
方法:以纯化蛋白H is 2Tet C 免疫6周龄雌性BALB /c 小鼠,末次加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/02Ag 214融合,应用间接E L I S A 筛选阳性克隆。
W estern bl ot 鉴定mAb 的特异性,并用mAb 亚类试剂盒鉴定mAb 亚类。
结果:共获得5株稳定分泌抗Tet C 的杂交瘤细胞株,分别命名为1E5、5G10、6B9、7D6、7F5,其腹水效价除1E5为3×210外,其余均为1×105,亚类鉴定结果均为I gG 1。
W est 2ern bl ot 分析结果显示,5株mAb 均与融合蛋白H is 2Tet C 发生特异性反应。
结论:成功制备了抗Tet C 的mAb,为进一步研究Tet C 的生物学功能、破伤风毒素结构与功能的关系以及建立快速检测破伤风抗毒素水平的方法奠定了基础。
[关键词]破伤风毒素C 片段;单克隆抗体;研制[中图分类号]R392.11 [文献标识码]B 破伤风毒素(tetanus t oxin,TT )是破伤风梭菌感染伤口后,在缺氧的条件下产生的神经毒素,是已知最毒的毒素之一。
2021年高二下学期第二次阶段测试生物试题含答案
2021年高二下学期第二次阶段测试生物试题含答案一、单项选择题：（本题包括20小题，每小题2分，共40分。
）1.下列有关基因工程的叙述，正确的是A．基因工程的核心是获取目的基因B．可将番茄细胞置于低温下检验转基因抗冻番茄是否成功C．人的生长激素基因可在细菌体内表达，说明遗传密码具有通用性D．农杆菌的Ti质粒都可以整合到双子叶植物的染色体DNA上2．精原细胞增殖的方式是A.无丝分裂B.有丝分裂C.减数分裂D.有丝分裂和减数分裂3．在显微镜下观察动物组织切片，发现细胞内的染色体数目有的是体细胞的一半，有的是体细胞的1倍，该切片取自A．人的原肠胚 B．牛的卵巢 C．绵羊的肝脏 D．家兔的胚胎4．下列有关基因工程和蛋白质工程的叙述，正确的是A.PCR扩增目的基因时，不必知道目的基因的全部序列B.采用DNA分子杂交技术可以检测外源基因是否成功表达C.以蛋白质的氨基酸序列为依据合成的目的基因与原基因相同D.蛋白质工程就是用蛋白酶对蛋白质进行改造5．下列有关植物细胞工程的叙述，错误的是A．理论上只要是活的植物细胞都可以培养成新个体B．植物组织培养过程中需要进行严格的无菌操作C．脱分化过程需要一定比例的生长素和细胞分裂素诱导D．单倍体培育过程使用了组织培养技术，但属于有性生殖过程6．下列不是精子、卵子发生过程的区别的是A．初级精母细胞和初级卵母细胞的形成时间 B．MI和MII的时间连续性C．成熟生殖细胞是否经过变形 D．成熟生殖细胞中染色体的数量7．精子的变形过程中演变成精子尾的是A. 中心体B.细胞核C.线粒体D. 高尔基体8．“冲卵”是指A. 把受精卵从子宫冲洗出来B. 把卵细胞从卵巢冲洗出来C. 把卵细胞冲散，便于收集D. 把胚胎从子宫冲洗出来9．次级卵母细胞的第二次成熟分裂完成于A．排卵前，在卵巢内 B. 受精前，在输卵管内C. 受精时，在输卵管内D. 排卵后，在腹腔内10．下列有关动物细胞工程的叙述错误的是A．正常动物细胞培养时，具有接触抑制的特性，癌细胞没有B．动物细胞培养技术和植物组织培养技术都可用于转基因生物的培育C．单克隆抗体的制备依据的原理是膜的流动性和细胞的全能性D．胚胎干细胞比正常体细胞在体外培养时分裂的代数多11．下列能正确表示高等动物胚胎发育顺序的是A．受精卵→囊胚→桑椹胚→原肠胚→组织器官的分化B．卵→卵裂→原肠胚→组织器官分化C．受精卵→囊胚→原肠胚→幼体D．受精卵→桑椹胚→囊胚→原肠胚→组织器官的分化12．有关卵巢的叙述正确的是A．所有细胞都进行减数分裂 B．所有细胞都可以见到染色体C．有的细胞进行有丝分裂 D．所有细胞的遗传物质都相同13．xx年，我国农业部颁布了《农业转基因生物标识管理办法》，要求对转基因生物产品及其加工品加贴标注。
【预防医学】吸附精制破伤风类毒素制造及检定规程(WORD档)word资料7页
吸附精制破伤风类毒素制造及检定规程本品系精制破伤风类毒素经氢氧化铝吸附制成。
用于预防破伤风。
1 毒素制造制造破伤风毒素应在隔离的具有专用消毒设备的实验室内进行。
实验室的墙面、地面及实验台应使用便于消毒的材料。
工作人员应经过培训并接受破伤风类毒素全程免疫，以后每10年进行一次加强免疫，凡发生外伤未完全治愈前不能参加工作。
1.1 菌种1.1.1 应选用中国药品生物制品检定所分发或同意的产毒效价高、免疫力强的破伤风菌株，必要时可对菌种进行筛选。
1.1.2菌种应定期作全面性状检查（如细菌形态、纯菌试验、糖发酵反应、产毒试验及特异性中和试验等），并有完整的传代、检定记录。
1.1.3菌种应用冻干或其他适宜方法保存在2～8℃。
1.2 培养基制造种子管及毒素培养基所用的酪蛋白、黄豆蛋白、牛肉等蛋白质应适当加深水解。
其他原材料应尽量减少对人体产生过敏反应的物质，不得含有可引起人体毒性反应的物质。
培养基原材料应保证质量，所用化学原料应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》。
1.3 毒素1.3.1 毒素制造过程应严格控制杂菌污染，经显微镜检查或纯菌试验发现污染者应废弃。
1.3.2 毒素须经除菌过滤后方可进行下步制造程序，亦可杀菌后进行精制。
1.3.3 毒素Lf测定用生理盐水将Lf 检定用标准破伤风抗毒素稀释至100Lf/ml，按一定间隔递增量加于一列絮状检定用试管中，每管加待检毒素1ml，摇匀后立即放入50℃水浴中，以首先出现絮状者判定毒素的Lf值，并记录絮状反应时间。
1.3.4用于生产的毒素不得低于40Lf/ml。
2 类毒素制造2.1 毒素或精制毒素的脱毒毒素或精制毒素中加入适量甲醛溶液，置适宜温度进行脱毒。
所用甲醛溶液等级应不低于化学纯。
2.2 脱毒试验每瓶取样，用体重300～400g豚鼠1只，皮下注射10ml。
精制毒素脱毒者可事先用生理盐水稀释成100Lf/ml，皮下注射5ml，于注射后第7、14、21天进行观察，动物不应有破伤风症状，到期每只动物体重不得较注射前减轻且健存者为合格，发生破伤风症状者应继续脱毒，体重减轻者应予重试。
人源抗破伤风毒素单链抗体_ScFv_的原核表达_纯化及功能鉴定
Key words: Single chain Fv ( ScFv) ; Prokaryotic exp ression; Neutralizing activity
破 伤风 ( Tetanus) 是 由 破 伤 风 梭 状 芽 胞 杆 菌 (C lostrid ium tetan i) 感染所引起的常见性疾病且病 死率很高 ,破伤风杆菌在自然界广泛存在 ,很容易随 创伤 ,如一般性外伤 ,妇女生产婴儿时的创伤等感染 人体 ,其病死率高达 90%以上 。一但感染破伤风杆 菌 ,唯一有效的治疗方法是使用破伤风抗毒素 。中 国用于临床的破伤风抗毒素为马抗血清和人破伤风 免疫球蛋白 ,前者为异源蛋白 ,易引起人体过敏反 应 ,后者由于是人血生产存在血源不足或可能存在 潜在病毒污染的问题 。杂交瘤技术制备抗体的技术 目前还不理想 。鼠源单克隆抗体由于是异源蛋白 , 易引起过敏 ,应用受到局限 ,人源杂交瘤细胞由于细
that the penetrating power is strong, is not easy to induce the allergic reaction and can be directly targeted to toxin. It is
suitable for the p revention and treatment of tetanus.
微生物学免疫学进展 2009年第 37卷第 4期 Prog in M icrobiol Immunol Nov. 2009, Vol. 37 No. 4
5
兰州生物制品研究所第五研究室保存 。 1. 2 工具酶与化学试剂
Taq酶 、核 酸 内 切 酶 、T4 DNA 连 接 酶 、DNA M arker 、IPTG、卡那霉素 、购自大连宝生物公司 ; 胶 回收试剂盒购自 Roche 公司 ; 蛋白质 M arker及 N i 亲和层析柱 ,购自 GE公司 ; TR Izol试剂购自 Invitro2 gen公司 。 1. 3 PCR引物
单克隆抗体法生产破伤风杆菌抗体
单克隆抗体法生产破伤风杆菌抗体
• • • • 破伤风杆菌 单克隆抗体 生产工艺 市场前景
破伤风杆菌生物学性状
形态与染色 为革兰阳性细长杆菌 培养24~72h形成芽 胞——芽胞呈球形， 大于菌体宽度，位于 菌体顶端，形似鼓槌 状
病因 破伤风杆菌的具有抵抗力的芽孢存在 于环境中，特别是富饶的土壤。芽孢通过污 染的伤口进入体内。 病理 破伤风杆菌芽孢产生的神经毒素，不可 逆转性地结合抑制脑和脊椎的中间神经元， 阻滞甘氨酸及a-氨基酸的释放。破伤风的恢 复依赖于新的轴突末端的发育情况。
单克隆抗体
由单个浆细胞进行无性繁殖， 形成细胞群（称为克隆）， 由这样的细胞群产生的化学 性质单一、特异性强的抗体 称为单克隆抗体。
单克隆抗体的制备
1）抗原制备；2）免疫动物； 3）免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的 制备；4）细胞融合；5）杂交瘤细胞的选择培养；6）杂交瘤 细胞的筛选；7）杂交瘤细胞的克隆化；8）单克隆抗体的检定； 9）分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立；10）单克隆抗体的 大量制备。
破伤风抗体制备的工艺流程
破伤风特有症状
苦笑面容risus 苦笑面容 sardonicus 牙关紧闭lockjaw 牙关紧闭 角弓反张 opisthotonos,can lead to fractured spine 呼吸肌痉挛、窒息、 呼吸肌痉挛、窒息、死 亡
思考题
破伤风属于 A、呼吸道感染 B、消化道感染 C、创伤感染 D、接触感染 E、动物及节肢动物感染
破伤风类毒素单克隆抗体的制备及初步鉴定
破伤风类毒素单克隆抗体的制备及初步鉴定作者：张秀昌刘芳崔萍孙黎罗强贾天军【摘要】目的：制备并鉴定破伤风类毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株，为破伤风的快速检测及致病机制的研究提供实验材料。
方法：用破伤风类毒素做抗原免疫BALB/C小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，获得分泌高滴度针对破伤风类毒素的杂交瘤细胞株，测定单抗免疫球蛋白亚类及单抗效价，用间接ELISA 和Western blot检测单克隆细胞株的特异性。
结果：通过细胞融合和克隆化，筛选出3株持续分泌抗破伤风类毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株1E12、1E11、1G10。
间接ELISA和Western blot检测结果表明1E12、1E11、1G10可以和破伤风类毒素发生特异性反应。
结论：成功制备了抗破伤风类毒素单克隆抗体，为制备免疫诊断试剂盒和抗体药物的开发奠定了基础。
【关键词】破伤风类毒素；杂交瘤；单克隆抗体【ABSTRACT】 Objective: To establish and prepare hybridoma cell line secreting monoclonal antibody (McAb) against tetanic toxoid, to develop a rapid assay for Tetanus and investigate the pathogenesis of the virus. Methods: BALB/c mouse was immunized by purified tetanic toxoid. Hybridoma cell lines secreting monoclonal antibodies (McAbs) against tetanic toxoid were screened after the fusion of mouse splenic cells with SP2/0 cells. The Ig subtypes and titer of the McAbs were assayed with EL ISA and Western blot assay. Results: After cell fusion andsubcloning, three hybridoma cell lines secreting monoclonal antibodies specifically against tetanic toxoid were obtained, and respectively named as 1E12, 1E11 and 1G10. Indirect EL ISA and Western blot assay showed that the McAbs 1E12, 1E11 and 1G10 could specifically recognize tetanic toxoid. Conclusion: The specific anti tetanic toxoid McAbs are developed and these McAbs may be useful in the development of detection assay and basic research of the pathogenesis of Tetanus.【KEY WORDS】 Tetanic toxoid; Hybridoma cell line; Monoclonal natibodies破伤风梭状杆菌是引起破伤风的病原菌，当机体受到外伤，创口被污染，或分娩时使用不洁器械剪断脐带等，本菌可侵入局部创面而引起外源性感染，发芽繁殖，释放毒素,在发展中国家，新生儿破伤风死亡率可高达90%。
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破伤风类毒素单克隆抗体的制备及初步鉴定作者：张秀昌刘芳崔萍孙黎罗强贾天军【摘要】目的：制备并鉴定破伤风类毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株，为破伤风的快速检测及致病机制的研究提供实验材料。
方法：用破伤风类毒素做抗原免疫BALB/C小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，获得分泌高滴度针对破伤风类毒素的杂交瘤细胞株，测定单抗免疫球蛋白亚类及单抗效价，用间接ELISA 和Western blot检测单克隆细胞株的特异性。
结果：通过细胞融合和克隆化，筛选出3株持续分泌抗破伤风类毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株1E12、1E11、1G10。
间接ELISA和Western blot检测结果表明1E12、1E11、1G10可以和破伤风类毒素发生特异性反应。
结论：成功制备了抗破伤风类毒素单克隆抗体，为制备免疫诊断试剂盒和抗体药物的开发奠定了基础。
【关键词】破伤风类毒素；杂交瘤；单克隆抗体【ABSTRACT】 Objective: To establish and prepare hybridoma cell line secreting monoclonal antibody (McAb) against tetanic toxoid, to develop a rapid assay for Tetanus and investigate the pathogenesis of the virus. Methods: BALB/c mouse was immunized by purified tetanic toxoid. Hybridoma cell lines secreting monoclonal antibodies (McAbs) against tetanic toxoid were screened after the fusion of mouse splenic cells with SP2/0 cells. The Ig subtypes and titer of the McAbs were assayed with EL ISA and Western blot assay. Results: After cell fusion andsubcloning, three hybridoma cell lines secreting monoclonal antibodies specifically against tetanic toxoid were obtained, and respectively named as 1E12, 1E11 and 1G10. Indirect EL ISA and Western blot assay showed that the McAbs 1E12, 1E11 and 1G10 could specifically recognize tetanic toxoid. Conclusion: The specific anti tetanic toxoid McAbs are developed and these McAbs may be useful in the development of detection assay and basic research of the pathogenesis of Tetanus.【KEY WORDS】 Tetanic toxoid; Hybridoma cell line; Monoclonal natibodies破伤风梭状杆菌是引起破伤风的病原菌，当机体受到外伤，创口被污染，或分娩时使用不洁器械剪断脐带等，本菌可侵入局部创面而引起外源性感染，发芽繁殖，释放毒素,在发展中国家，新生儿破伤风死亡率可高达90%。
目前对破伤风的诊断主要根据典型的症状和病史。
单克隆抗体用于诊断感染性疾病具有灵敏度高、特异性强的特点，在许多疾病的诊断中已得到广泛应用。
本实验首次成功制备破伤风类毒素单克隆抗体，为单抗应用于破伤风的临床诊断奠定了基础。
1 资料与方法1．1 试剂、毒素、细胞与实验动物破伤风类毒素由北京生物制品监定所提供。
福氏完全佐剂及福氏不完全佐剂购自北京市普京康生物工程技术有限公司。
BALB/C小鼠购自首都医科大学动物室。
SP2/0细胞由北京肿瘤研究所惠赠。
聚乙二醇（PEG，MW1000，）为天津天泰精细化学品有限公司产品。
HAT为美国GIBCOBRL公司产品。
羊抗鼠IgG酶标抗体为北京天象鑫龙生物医学科技有限公司进口分装产品。
1.2 小鼠免疫雌性、6周龄、17ｇ左右BALB/C小鼠，后腿肌肉及背部皮内注射破伤风类毒素免疫，第一次100μg加等量福氏完全佐剂，3周后用100μg加等量福氏不完全佐剂，7周后500μg不加佐剂腹腔注射，腹腔注射后第4天进行细胞融合。
1．3 细胞融合腹腔注射后第4天取BALB/C小鼠脾细胞与SP2/0细胞在50%聚乙二醇作用下融合。
融合后的杂交瘤细胞用含20%进口胎牛血清的HAT选择性培养基混均加入种有饲养细胞的96孔板中培养，2周后在倒置显微镜下挑选克隆孔。
1．4 ELISA筛选以破伤风类毒素（1.5/mL）为抗原包被酶标板，封闭后加碱和杂交瘤细胞培养上清液37℃ 20min，洗涤后加HRP标记的羊抗鼠IgG（工作浓度1∶2000），37℃孵育20min后洗涤，加邻苯二胺（OPD）底物显色15min后终止反应。
以上各步均以PBST洗涤3次，3min/次。
同时设阴性、阳性和空白对照，筛选出能分泌抗体的杂交瘤细胞。
1．5 亚克隆化培养及腹水诱生筛选出阳性单抗后进行常规的有限稀释直至克隆细胞抗体阳性率为100%。
对最后筛选出的三株阳性单克隆细胞进行扩大培养，同时对三株杂交瘤细胞进行反复冻存和复苏，每次复苏后其培养上清液均做ELISA。
复苏已建株的三株杂交瘤细胞经传代取对数生长期的细胞计数，小鼠腹腔接种5×105/只。
一周后诱生采集并离心腹水得上清，用ELISA测抗体效价，置-20℃保存。
1.6 染色体鉴定秋水仙素处理传代培养单抗杂交瘤细胞，0.075mol/L KCL溶液低渗处定、铺片，10%Giemsa染色，镜检。
1.7 单克隆抗体亚类鉴定用鼠源性单克隆抗体亚型检测试剂盒（Sigma）鉴定。
1.8 免疫印迹（Western blot）分析破伤风类毒素经SDS PAGE，转膜后分别与3株单抗的腹水进行Western blot检测。
2 结果2.1 杂交瘤细胞株的建立将免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，HAT培养基选择性培养，融合率为8%（32/396），抗体阳性率为9%（3/32）,经3次亚克隆，ELISA筛选，三株杂交瘤细胞获得稳定分泌抗破伤风类毒素单克隆抗体的性能。
经免疫球蛋白亚类鉴定为IgG1 亚类。
培养上清效价为1∶6400，腹水效价为1∶12800。
2.2 杂交瘤细胞的克隆培养及腹水抗体诱生杂交瘤细胞在克隆化及扩大培养过程中经过3次克隆化、亚克隆后阳性克隆率为100%。
3株杂交瘤细胞株分别定名为1G10、1E11、1E12,3株细胞在扩大培养及反复冻存复苏后，其分泌特异性抗体的能力能够持续保持。
取杂交瘤细胞5×105细胞悬液，对经不完全福氏佐剂预处理过的BALB/C小鼠作腹腔注射以诱生腹水。
用ELISA检测到腹水抗体的最高稀释度为1∶12800。
杂交瘤细胞增殖旺盛，经过反复复苏后细胞生长良好，分泌抗体性能稳定。
2.3 染色体鉴定正常 BALB/C小鼠脾细胞染色体的数目恒定为40对；同品系的SP2/0细胞的染色体众数目为68对。
杂交瘤细胞的染色体数目约为两种亲本染色体数目的总合，染色后计数为102对。
2.4 抗破伤风类毒素单抗亚类的鉴定纯化后的抗体用鼠源性单克隆抗体亚型检测试剂盒检测后显示，制备的抗破伤风类毒素单克隆抗体均为IgG1型。
2.5 Western blot检测破伤风类毒素经SDS PAGE，转膜后分别与3株单抗的腹水进行Western blot检测。
重复3次实验，结果均显示，1G10、1E11、1E12细胞株分泌的单克隆抗体与破伤风类毒素在约120KD 处有浓迹的特异性条带出现。
3 讨论破伤风是人畜共患的一种创伤性、中毒性传染病。
其特征是患病机体全身肌肉发生强直性痉挛，对外界刺激的反射兴奋性增强。
该病的病原破伤风梭状杆菌在自然界中广泛存在，经创伤感染破伤风梭状杆菌后，如果创口具备缺氧条件，病原体在创口生长繁殖产生毒素，刺激中枢神经系统而发病。
常见于外伤、阉割和脐部感染。
在临诊上有不少病例往往找不出创伤，这种情况可能是因为在破伤风潜伏期中创伤已经愈合，也可能是经胃肠粘膜的损伤而感染。
该病以散发形式出现。
破伤风类毒素单克隆抗体技术的出现，将大大推动了对破伤风梭状杆菌活性物质在分子水平上的研究，如对破伤风的分子流行病学调查、快速诊断、抗原物质和致病因子的分析、以及对该病的预防和治疗等方面，都提供了强有力的手段。
【参考文献】1 周正任. 医学微生物学\[M\]. 北京：人民卫生出版社，2003.1831852 曾德秀，杨芳，向鑫. 新生儿破伤风流行病学调查\[J\]. 中国医药导报,2006，3（30）：1431443 覃雄林,李健龙,覃春伟,等. 1999～2005年贵港市新生儿破伤风流行病学分析\[J\]. 2002，12（5）：3013024 罗央努, 叶建杰, 胡超云, 等. 2004～2005 年慈溪市新生儿破伤风病例的流行病学分析\[J\]. 疾病监测, 2006，21（7）：3875 徐志凯.实用单克隆抗体技术\[M\].西安：陕西科学技术出版社，1992.7906 朱立平，陈学清.免疫学实验方法\[M\].北京：人民军医出版社，2000.3683697 萨姆布鲁克，EF·佛里奇，T·曼尼阿蒂斯.分子克隆实验指南\[M\].北京：科学出版社，1992.880898。