植物体叶绿素含量的测定实验报告

实验报告

植物体叶绿素含量的测定

摘要：本实验采用分光光度法，利用95%乙醇提取菠菜叶片中和番茄叶片中叶绿

体色素，叶绿素a ，叶绿素b 和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是665nm 、649nm 和470nm 。根据分光光度计测定的吸光度值，从而计算出乙醇提取液中叶绿体色素含量。

实验原理：利用95%乙醇提取叶绿体色素，叶绿素a ，叶绿素b 和类胡萝卜素最

大吸收峰的波长分别是665nm 、649nm 和470nm 。

根据分光光度计测定的吸光度值，可以计算出乙醇提取液中叶绿体色

素含量。

实验目的：掌握分光光度计法对叶绿素a 、叶绿素b 、叶绿素总浓度和类胡萝卜

素总浓度测定和计算的方法。

实验材料：

生物材料：菠菜叶片0.25g ，自己培养的全素番茄苗叶片0.2g ，缺磷

番茄苗叶片0.2g ；

试剂：95%乙醇、石英砂、碳酸钙；

仪器：分光光度计、电子天平、研钵、漏斗、玻璃棒、小烧杯、10ml

量筒、50ml 容量瓶、剪刀、滤纸、滴管。

实验步骤：

1.叶绿体色素的提取

取新鲜菠菜叶片0.25g ，擦干，去中脉，剪碎放入研钵，加入少许

石英砂和CaCO 3，再加入95%乙醇3ml,研磨成匀浆，再加95%乙醇

10ml ，静置10min ，用漏斗滤去残渣，用乙醇反复冲洗研钵、残渣

至无色；用容量瓶定容至50ml 。

2.吸光度的测定

取光径1cm 比色杯，注入上述叶绿素提取液，以95%乙醇注入另

一同样的比色杯内作为空白对照，在波长665、649、和470nm 下

测定吸光度。

3.结果计算

依据下列计算公式，分别计算出叶绿素a 、B 的浓度及其叶绿素总

浓度和类胡萝卜素的浓度。

C a （叶绿素a ）=13.95A 665 – 6.8A 649

C b （叶绿素b ）=24.96A 649 – 7.32A 665

C T （叶绿素）=C a +C b =18.16A 649 + 6.63A 665

C x.c （类胡萝卜素）=(1000A 470 – 2.05C a -114.8C b )/248

叶绿体色素含量 = ）

样品鲜重（稀释倍数）提取液体积（）色素浓度（g /mg ⨯⨯L L

实验结果：

菠菜叶片提取液吸光值：

1、测定叶绿素ab为什么选用红光波长？

叶绿素吸收红光和蓝紫光，故有两个吸收峰，光合色素还有类胡萝卜素，只吸收蓝紫光，所以不能选蓝紫光区测定，否则被类胡萝卜素干扰，只能用红光。