沉降菌测试验证规程
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程沉降菌检测操作规程一、实验材料和仪器设备准备1. 培养基：选择适合于沉降菌生长的培养基，如营养琼脂、脑心提取物琼脂等。
2. 试管：清洁且干燥的试管，用于制备培养基和盖儿。
3. 平板培养皿：密封性好、无明显污损的平板培养皿。
4. 无菌纱布：用于对培养皿进行覆膜。
5. 显微镜：高倍显微镜，用于观察沉降菌。
6. 其他常规的无菌操作用具和试剂。
二、实验操作步骤1. 准备培养基：根据所选的培养基配方，按照要求将培养基配制成液体状态，并进行无菌过滤。
将液体培养基倒入试管中，每个试管约倒满的1/3，悬挂液体培养基放置在试管架上，待培养基凝固后，封闭试管盖儿。
2. 取样：将待检测的样品进行无菌采样，如空气、水、土壤、食品等，确保取样时避免污染和杂菌的进入。
3. 塑料膜覆盖：将待检测的培养基倒入平板培养皿中，约倒满1/2，然后用无菌纱布覆盖培养皿口，并用橡皮筋固定好。
确保培养基表面整齐平坦，无明显凸起或凹陷。
4. 样品接种：将取样时采集的样品（空气、水、土壤等）用滴管或铁丝等工具，均匀地接种到培养基的表面上，每个培养皿大约接种2～3滴，然后迅速盖上试管上的盖子。
5. 培养条件：将培养皿置于恒温箱中，一般温度设定为30-35°C，培养时间为24小时至72小时不等，具体视沉降菌生长速度而定。
三、结果判读1. 观察培养皿：取出培养皿，观察上面是否出现菌落。
正常情况下，如果检测的样品中存在沉降菌，培养皿上会出现可见的菌落。
2. 菌落形态观察：使用高倍显微镜观察菌落的形态特征，确定是否为沉降菌。
3. 菌种的鉴定：对形态特征与已知的沉降菌标准比对，进行菌种鉴定。
四、注意事项1. 所有操作必须在无菌条件下进行，避免外界杂菌的污染。
2. 严格控制培养基、试管和平板培养皿等材料的无菌。
3. 样品采集要避免手部接触，使用无菌工具进行采样。
4. 培养条件要保持稳定，避免温度、湿度等因素对实验结果的影响。
5. 观察菌落时要细心，准确判断是否为沉降菌。
沉降菌检测操作规程
●1、目的规范洁净区和洁净室沉降菌测试条件和测试方法。
●2、适用范围适用于公司洁净区、洁净室或局部空气净化区域（如：洁净工作台）的沉降菌的测试和环境验证。
●3、引用文件⏹化妆品卫生规范-2007⏹GB/T 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法●4、定义⏹ 4.1 沉降菌：用本测试规定的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖的可见菌落数。
⏹ 4.2 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以（个/皿）表示●5、仪器和设备⏹ 5.1 灭菌培养皿90mm *15mm⏹ 5.2 培养基。
⏹ 5.3 恒温培养箱。
⏹ 5.4 高压灭菌器。
⏹ 5.5 放大镜●6、培养基和试剂⏹ 6.1 生理盐水：成份﹕氯化钠 8.5g蒸馏水加至 1000ml制法﹕溶解后﹐分装到加玻璃珠的三角瓶内﹐每瓶90ml﹐121℃（15 1b）2 0 mi n，高压灭菌。
⏹ 6.2 卵磷脂、吐温80—营养琼脂培养基6.2.1 成分：蛋白胨20g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15g卵磷脂1g吐温80 7g蒸馏水1000mL6.2.2制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分（除琼脂外）加到其余的蒸馏水中，溶解。
加入已溶解的卵磷脂、• 吐温80，混匀，调pH 值为7.1～7.4，加入琼脂，103.43kPa（121℃15 lb）20min 高压灭菌，储存于冷暗处备用。
●7、操作步骤⏹7.1 取样：7.1.1 取样点的设置：A) 最少取样点数：灌装间、制造间3个，其他洁净区2 个；B) 取样点的位置：取样点应均匀分布在待测试区域内，一般离地高度为0.8m左右，关键设备处可增加取样点；C）每个取样点一般取样一次，每次一般为2个取样皿；D) 布置采样点时，应避免回风口；7.1.2 取样时间：可采用动态取样和静态取样：A) 动态取样：正常生产，且空气净化系统正常运转30分钟后开始取样；B）静态取样：员工己撤离生产区域，且空气净化系统正常运转至少20分钟后；静态取样时人员不得多于2人；7.1.3 取样A）将制备好的培养皿逐个放置到采样点，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养皿暴露在空气中；B）静态测试时，培养皿的暴露时间为30分钟以上；动态测试时，培养皿的暴露时间不得大于4个小时⏹7.2 置于37±1℃恒温培养箱内培养至少48小时，记录每个平皿的菌落数；●8、菌落计数方法：⏹8.1先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5 倍～10 倍的放大镜检查，以防遗漏；⏹每个测点的沉降菌总数为该测点所有培养皿菌落数的平均数；●9、结果评定：⏹9.1 每个测点的菌落数必需低于该洁净区的标准时判定符合要求；⏹9.2 静态测试时，如某测点的的菌落平均数超过标准，应再重新取样两次，两次都低于标准时才能判定符合；。
版药典沉降菌检测操作规程
1.目的：阐述洁净室空气中沉降菌检测操作规程，保证药品质量，预防生产环境对产品的污染。
2.范围：适用于本公司洁净区(室)的沉降菌的监测。
3.责任：沉降菌检测员。
4.内容：4.1根本概念：菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。
4.1.2沉降菌：用GB/T16292-202X提及的方法搜集空气中的活性微生物粒子，通过特意的培养基在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
沉降菌菌落数:规定时间内每个平板培养皿搜集到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。
4.2测试原理:本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理搜集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经假设干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
4.3测试方法：使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。
恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。
培养皿:一般采纳φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。
使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。
培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72 小时假设培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。
4.3.2测试时间:对单向流，如A级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。
4.3.3采样点数目及其安排:最少采样点数目:沉降菌的最少采样点数可按表1确定。
在满足最少测点数的同时，不宜满足最少培养皿数，见表2表1 最少采样点数目表2 最少培养皿数采样点的安排:除受洁净区的设备限制外，取样点应在整个洁净区均匀安排。
沉降菌测试标准操作规程
1.1目的：建立沉降菌测试的标准操作规程。
1.2范围：本标准规定了医药工业洁净室和洁净区中沉降菌的测试条件，测试方法。
本标准适用于医药工业洁净室和洁净区，无菌室或无菌区域(包括洁净工作台)的沉降菌的测试和环境验证。
1.3责任人：检验员、化验室负责人。
2、引用标准：GB/T16294－2010 ，新版GMP3、定义：本标准采用下列定义：3.1沉降菌：用本标准提及的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数3.2沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。
4、测试方法：4.1 方法概述：本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室(区)的洁净度。
4.2 人员的职责及培训：洁净室(区)的测试人员应进行本专业的培训并获得相应资格后才能履行对洁净室（区）测试的职责，其中包含涉及的卫生知识和基本微生物知识。
洁净室(区)的测试人员应选择与生产操作的空气洁净度级别要求相适应的穿戴方式，外面的衣服不能带进100000级以上的区域。
4.3仪器：4.3.1培养皿：一般采用￠90mm×15mm 规格的培养皿。
4.3.2培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）或用户认可并经验证了的培养基。
其配制方法见附录B。
4.3.3恒温培养箱：必须定期对恒温培养箱进行校验。
4.3.4高压蒸汽灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。
4.4 测试步骤：4.4.1 测试前培养皿表面必须严格消毒。
4.4.2将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
4.43.3静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上，动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4h。
沉降菌检验标准操作规程
01.0目的01.1阐述洁净室（区）空气中沉降菌检测操作规程，保证药品的质量，防止生产环境对产品的污染，保证实验室的环境达到检测产品的要求。
02.0适用范围02.1适用于本公司的洁净室（区）的沉降菌监测和洁净度等级的验证。
03.0人员职责测试人员对洁净室（区）沉降菌的测试。
04.0内容04.1术语和定义下列术语和定义适用于本规程。
04.1.1菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的细菌集落，简称CFU，通常用个数来表示。
04.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010 提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基在适宜的生长条件下系繁殖到可见到的菌落数。
04.1.3沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以cfu/皿表示。
04.2测试原理：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
04.3监测周期：A级洁每次室验做监控，B级每周一次，C级每季度一次，D级每半年一次监控。
04.4测试方法：04.4.1使用设备与材料高压灭菌锅：使用时应严格按照操作规程进行。
恒温恒湿培养箱：必须定期对培养箱进行校验。
培养皿：一般采用φ90mm×15mm培养皿。
培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）；已灭菌配制好的培养基平皿放入30-35℃恒温培养箱中培养72小时，若培养基平皿上确无菌落生生即可供采样用，制备好的培养基平皿应放在2-8℃的环境中存放。
清洁剂：75%酒精04.4.2测试时间：（1）对单向流，如A级净化房间内及超净工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
（2）对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。
（3）培养皿的采样时间：静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4小时。
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程1. 引言沉降菌是指在液体中沉淀并附着在容器底部的微生物。
在许多行业中，沉降菌的检测是非常重要的，例如制药、食品加工、饮水安全等领域。
本文档旨在介绍沉降菌检测的操作规程，以确保检测结果准确可靠。
2. 检测设备和试剂准备在进行沉降菌检测之前，需要准备以下设备和试剂：•沉降菌检测容器：一般选择具有透明底部和标有刻度的容器，容量不小于100 mL。
•色谱纸：用于制作沉降菌检测培养基。
•高温灭菌器：用于灭菌沉降菌检测容器和试剂。
•干燥烘箱：用于干燥沉降菌检测容器和试剂。
•取样器：用于抽取待检测样品。
•生物安全柜：用于操作中的生物安全。
试剂准备：•培养基：可根据需要选择适当的培养基，例如Luria-Bertani（LB）培养基。
•蒸馏水：用于制备培养基和洗涤操作。
•山梨醇盐溶液：用于沉降菌悬浮液的稀释。
3. 检测操作步骤步骤1：沉降菌检测容器准备1.将需要检测的沉降菌检测容器放入高温灭菌器中，设定适当的温度和时间进行灭菌。
2.灭菌后，将沉降菌检测容器取出，放入干燥烘箱中进行干燥，确保容器完全干燥。
步骤2：制备培养基1.准备适量的色谱纸，切成小块。
2.在高温灭菌器中加热蒸馏水至沸腾，将色谱纸块放入烧杯中，倒入足够的蒸馏水。
3.候色谱纸块充分吸水后，取出备用。
步骤3：取样1.在生物安全柜内，使用取样器抽取待检测样品，确保样品干净无杂质。
2.将样品转移到沉降菌检测容器中，注意不要沾到容器外表面。
步骤4：制备沉降菌悬浮液1.取一定量的山梨醇盐溶液，进行稀释，制备合适的浓度。
2.将制备好的山梨醇盐溶液加入沉降菌检测容器中，使样品充分悬浮。
步骤5：培养和观察1.将沉降菌检测容器放入培养箱中，设定适当的温度和时间进行培养。
2.观察培养后的沉降菌情况，记录菌落数量和特征。
4. 结果记录和分析根据观察到的沉降菌情况，记录菌落数量和特征。
根据结果进行分析和判断，判断样品是否符合标准要求。
5. 安全注意事项•操作过程中要戴好实验手套和口罩，避免直接接触待检测样品。
洁净区沉降菌培养检验操作规程
管理文件一、目的：规范洁净区沉降菌培养检验操作标准二、适用范围：洁净区沉降菌培养检验操作操作三、责任者：质量管理部四、内容：1.沉降菌培养1.1由QC人员将复核的培养皿转移至恒温培养箱；1.2培养前，培养箱温度应设为32℃或者22℃，1小时后检测培养箱温度是否恢复正常；1.3采用大豆酪蛋白琼脂培养基配制的培养皿时，在32℃的培养箱中培养，培养时间为2天；采用沙氏培养基配制的培养皿时，在22℃培养箱中培养，时间为5天；1.4培养时每天检测培养箱温度一次，以培养箱中温度计温度为准。
2.检测（菌落计数）2.1用肉眼对培养皿上所有菌落直接计数，专人复核是否计数有遗漏；2.2若平板上有2个或者2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数；2.3计数时一般用透射光对培养皿背面或正面仔细观察，不要漏记培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。
必要时，用显微镜鉴别；2.4将所计数菌落进行记录，然后进行结果计算。
3.结果计算：3.1用计数方法得出各个培养皿的菌落数，按下式计算：式中：M——平均菌落数M 1——1号培养皿菌落数M——2号培养皿菌落数2Mn——n号培养皿菌落数N——培养皿总数3.2结果评定：3.2.1用平均菌落数判断洁净室（区）空气中微生物；3.2.2洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准；3.2.3若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
4.洁净区沉降菌检测标准：4.1洁净区沉降菌检测静态标准：4.2洁净区沉降菌检测动态标准：5.非主要工作区的其他洁净区域，静态测试频次为每半年测试一次，动态测试频次为每一年测试一次。
沉降菌检测操作规程
1.目的：建立沉降菌监测标准操作程序，以确保洁净室（区）洁净度满足生产/检验需要。
2.范围:适用于洁净区沉降菌指标监测。
3. 职责:洁净区沉降菌监测人员对本规程实施负责，质量部负责人对本规程的有效执行承担监督检查责任。
4. 内容4.1 检测依据:4.1.1 GB/T 16294-2010《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》4.1.2 YY0033-2000《无菌医疗器具生产管理规范》4.2 仪器设备：培养皿、培养基、恒温恒湿培养箱、高压蒸汽灭菌器4.2.1 培养皿：一般采用Ф90mm×15mm规格的培养皿；121℃高压蒸汽灭菌30min 后使用。
4.2.2 培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）或用户认可并经验证了的培养基，其配置方法见《培养基配制操作规程》。
4.2.3 恒温恒湿培养箱：按《恒温恒湿培养箱操作及维护保养操作规程》进行操作。
4.2.4 高压蒸汽灭菌器：按《高压灭菌器操作及维护保养操作规程》进行操作。
4.3 检测周期：日常环境监测应每周一次，如长时间未生产，恢复生产前需检测沉降菌。
4.4采样点：采样点的布置力求均应，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最小采样点数目，在满足最少测定数的同时，还宜满足最少培养皿数。
4.4.2 最少培养皿数：在满足最少采样点数目的同时，还宜满足最少培养皿数，见下表。
4.4.3采样点的位置4.4.3.1 洁净室（区）采样点的布置力求均应，避免采样点在某局部区域过于稀疏。
可参考下图。
平面采样点布置图4.4.3.2 100级单向流区域，洁净工作台或局部空气净化设施的采样点宜布置在正对气流方向的工作面上，气流形式参考下图。
水平单向流气流形式垂直单向流气流形式4.4.3.3 工作区采样点的位置离地0.8米～1.5米左右（略高于工作面）。
并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
4.4.4 采样次数：每个采样点一般采样一次。
洁净室（区）沉降菌检测标准操作规程
洁净室（区）沉降菌检测标准操作规程⽬的制定标准的洁净室（区）沉降菌的测试⽅法，指导沉降菌的测试⼯作。
范围适⽤于洁净室（区）沉降菌的测定和验证。
责任QC微⽣物室检验员负责洁净室（区）沉降菌的测试，QC主管和QA部门负责对测试的数据进⾏统计分析。
程序1.定义1.1.菌落：微⽣物培养后，由⼀个或⼏个微⽣物繁殖⽽形成的微⽣物集落，简称CFU。
1.2.沉降菌：通过⾃然沉降原理收集在空⽓中的活微⽣物粒⼦，通过专⽤的培养基，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数。
1.3.动态测试：洁净室（区）已处于正常⽣产状态设备在指定的⽅式下进⾏，并且有指定的⼈员按照规范操作的状态。
2.测试⽅法2.1.测试过程2.1.1.设备和培养基：恒温培养箱、购买预灌装TSA平⽫或者⾃制TSA平⽫。
2.2.测试条件2.2.1.洁净室（区）的温度和相对湿度应与其⽣产及⼯艺要求相适应（⽆特殊要求时，温度在18~26℃，相对湿度在45%~65%为宜）。
2.2.2.风速、压差应在合格范围内。
2.2.3.动态测试。
2.3.测试⽅法2.3.1.将准备好的培养⽫按采样点要求放置或放在沉降架上（约1.0m）。
将采样台⾯取样位置或采样辅助设施表⾯消毒，打开培养⽫，将培养⽫盖置于已消毒位置，将培养⽫置于培养⽫盖上，使培养基表⾯充分暴露后，将培养⽫盖盖上后倒置。
2.3.2.在每⼀只培养⽫上标记好具体的取样位置及取样⽇期，将所有培养⽫在QC微⽣物室进⾏培养观察。
2.4.培养观察计数2.4.1.全部采样结束后，将培养⽫倒置于恒温培养箱中培养，在20~25℃培养箱中培养3天，30~35℃培养箱中培养2天后观察计数。
2.4.2.每批培养基应有阴性对照试验，检验培养基本⾝是否污染。
可每次选定2只培养⽫作对照培养。
2.5.计算2.5.1.平均菌落数M= M1＋M2＋…MNNM1＝1号培养⽫菌落数M2＝2号培养⽫菌落数Mn＝n号培养⽫菌落数n＝培养⽫总数2.5.2.结果判定2.5.2.1.最终结果采⽤平均值。
沉降菌监测规程
1.范围适用于本公司生产洁净区的沉降菌的测定和环境的验证2. 质量指标：根据《GBT16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》进行；洁净度级别技术要求（沉降菌个数）100，000级≤10个/皿10000级≤3个/皿3. 测试方法3.1 本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净区的洁净度。
3.2 培养皿一般采用90c m×15mm规格的培养皿。
3.3 恒温培养箱必须对培养箱的温度计进行鉴定4. 测试步骤4.1将已制备好的培养皿按采样点放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
4.2静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4h.4.3全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
4.4采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配置的培养皿经采样后。
在30℃～35℃培养箱中培养，时间不少于2d；采用沙氏培养基（SAD）配置的培养皿采样后，在20℃～25℃培养箱中培养，时间不少于5d.4.5每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。
可每批选定3只培养皿作对照培养。
4.6菌落计数4.6.1若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可以辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
4.7注意事项4.7.1测试用具要作灭菌处理。
以确保测试的可靠性、正确性。
4.7.2采取一切措施防止人为对样本的污染。
5. 测试规则5.1 沉降菌测试前，被测试的洁净区的温度、静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内；温度和相对湿度的测试，温度在18℃～26℃，相对湿度在45﹪～65﹪为宜。
5.2 测试状态静态和动态两种状态均可进行测试。
静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
沉降菌测试前，被测试的洁净区已经过消毒5.3沉降菌菌落数计算5.4采样点数量及其布置5.4.1.1采样点的位置5.4.1.2采样点布置及放置平皿数应按5.4.1采样点：100000级≤20m2洁净区应布置2个采样点；10000级≤20m2洁净区应布置2个采样点；带：·的为布点位置5.4.2 平皿数：100000级≤20m2洁净区每个采样点应放置2个平皿；10000级≤20m2洁净区每个采样点应放置2个平皿；5.4.3平均菌落数的计算：5.4.4记录监测结果。
车间洁净区沉降菌检测操作规程
文件制修订记录1.1质量检验人员按规定对车间洁净区沉降菌定期进行检验，按下表1确定好采样点数，每个采样点需做2个培养皿。
表1 采样点数洁净室是指房间面积。
1.2每点培养皿数见下表(2)1.4沉降菌测试规程1.4.1测试人员:测试人员必须穿戴符含该环境级别的工作服，静态测试时，室内人员不得多于3人。
1.4.2测试方法1.4.2.1所用的主要仪器和设备高压消毒锅、恒温培养箱、培养皿1.4.2.2培养基普通肉汤琼脂培养基。
1.4.3采样方法-将己制备好的培养皿按规定的采样点的要求放置，打开培养皿，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上后倒置。
1.4.4培养1.4.4.1全部采样结束后，将培养皿倒置与恒温培养箱中培养。
1.4.4.2在37℃培养箱中培养，时间不少于48h。
1.4.4.3每批培养基应有对照试验，检验培养基基本身量分否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养。
1.4.5菌落计数1.4.5.1用肉眼直接计数，标一记或在菌落器上点计，然后用5}-10倍放大镜检查，是否遗漏。
1.4.5.2若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
1.4.6结果计算1.4.6.1用计数方法得出各个培养皿的菌落数。
1.4.6.2平均菌落数的计算平均菌落数M= (M1+M2十M3+Mn) /nM:平均菌落数M1: 1号培养皿菌落数M2: 2号培养皿菌落数Mn: n号培养皿菌落数n:培养皿总数1.4.7结果评定:用平菌落数判定。
1.4.7.1洁净室(区)内的平菌落数必须低于所选定的评定标准。
1.4.7.2若某洁净室(区)内的平菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
洁净室(区)空气洁净度级别表。
沉降菌测试标准操作规程
目的：建立洁净室（区）中沉降菌的测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别的区域内进行生产。
范围：适用于洁净室（区）的沉降菌的测试。
职责：质量管理部、QA检测员内容：1、测试方法本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室(区)的洁净度。
2、仪器、设备、培养基2.1培养皿：Φ90mm×15mm 培养皿2.2培养基：营养琼脂培养基2.3生化培养箱：必须定期对生化培养箱进行校验。
2.4自动台式灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。
3、测试条件3.1温度和相对湿度：洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应，温度控制在18℃～26℃，相对湿度控制在45%～65%为宜。
3.2压差：空气洁净度不同的洁净室（区）之间压差应≥10Pa。
4、测试状态：动态测试和静态测试。
静态测试时，室内测试人员不得多于2人；动态测试时，现场人员数按《洁净区人员控制管理制度》中规定执行，记录中注明现场人员数量及测试点位置。
5、测试时间：对单向流，测试应在净化空气调节系统运行不少于10分钟后开始；对非单向流，测试应在净化空气调节系统运行不少于30分钟后开始。
6、采样点数量及布置 6.1最少采样点数目6.2最少培养皿数在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见下表6.3采样点布置类型abcdef6.4采样点的位置6.4.1一般布置在离地面0.8-1.5m之间或操作平台的高度，除受洁净室（区）的设备限制外，应在整个洁净室（区）均匀布置。
6.4.2每个采样点一般采样一次，也可以多于1次。
6.4.3布置采样点时，应避开回风口，测试人员应在采样口的下风侧。
7、培养基制备7.1依据检测区域的取样点数，按照《培养基配制标准操作规程》制备适量的营养琼脂培养基。
7.2在超净工作台内，以无菌操作法将配制好的营养琼脂培养基以每皿约15ml的装量分装，待培养基凝固后移出洁净区。
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程
《沉降菌检测操作规程》
一、目的
为了保障食品安全，防止沉降菌污染食品，特制定本操作规程。
二、适用范围
本规程适用于对食品中沉降菌的检测工作。
三、检测仪器和试剂
1. 采用适用于沉降菌检测的培养基和培养皿。
2. 采用适用于沉降菌检测的显微镜和显微镜镜片。
四、检测操作步骤
1. 取一定量的食品样品，按照相应比例加入适量的生理盐水中，并进行均匀搅拌。
2. 取适量预处理后的样品液，分别加入培养基中的培养皿，并进行培养。
3. 观察培养皿，记录沉降菌的形态特征和数量。
4. 如果需要进一步分析，使用显微镜观察沉降菌的细胞形态和结构。
五、结果判定
根据检测结果，判断食品样品是否含有沉降菌，并确定其数量和种类。
六、记录和报告
1. 对检测操作进行详细记录，包括样品处理、培养条件、观察结果等。
2. 根据检测结果，制作检测报告，并按照规定提交相关部门。
七、注意事项
1. 操作人员应按照操作规程进行操作，严格遵守操作规范和安全操作规定。
2. 显微镜等实验仪器要定期检查和维护，以确保检测的准确性和可靠性。
3. 培养基的制备和保存要符合相关要求，避免影响检测结果。
通过严格按照《沉降菌检测操作规程》进行操作，可以保障沉降菌检测的准确性和可靠性，为保障食品安全提供了重要的技术支持。
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江苏舜宇医疗器械有限公司文件号：SY/ZT7.1-08 页码：1/4
版本号：A.2 受控状态：受控
文件名称沉降菌测试验证规程制定部门质量管理部
1.0 目的
验证洁净区沉降菌测试效果。
2.0 范围
洁净区、菌检室、超净工作台。
3.0 职责
质量管理部检验人员负责相关操作。
4.0 工作程序
4.1要求：
4.1.1 我公司洁净区洁净度按10万级（洁净车间）、1万级（菌检室）、100级（超净工作台），故在测定沉降菌时按相应级别进行监测。
4.1.2 洁净区沉降菌测试标准按《洁净室（区）环境评定标准》执行。
4.2测试所用仪器设备
高压灭菌器、恒温培养箱、培养皿(采用直径90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿)、培养基（普通营养琼脂培养基或药典许可的其他培养基）
4.3测试方法
4.3.1 准备工作
4.3.1.1 将直径90mm的培养皿置于121℃湿热灭菌20min。
4.3.1.2 将灭菌好的培养基 ( 如已冷凝则加热熔化 ), 冷至45℃左右时, 在无菌操作条件下将培养基注入培养皿, 每皿约20 ml。
4.3.1.3 待琼脂凝固后, 将培养基平皿倒置于37℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长, 即可供采样用。
4.3.2 采样
将已制备好的培养皿按3.6.4.2的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露30min，再将培养皿盖盖上后倒置。
4.3.3 培养
4.3.3.1 采样结束后, 将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
4.3.3.2 在37℃培养箱中培养，时间不少于48小时。
4.3.3.3 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。
每批选定3只培养皿作对照培养。
拟制：审核：批准：
制订记事：
2013 年5月制订
文件名称沉降菌测试验证规程制定部门质量管理部
4.3.4菌落计数
4.3.4.1 用肉眼直接计数，标记点数，然后用5～10倍放大镜检查, 有否遗漏。
4.3.4.2 若培养皿上有2个或以上的菌落重叠, 可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
4.3.4.3 平板上有片状菌落或花斑样菌落蔓延生长以及平板受到污染的情况, 该平板计数无效。
4.3.5注意事项
4.3.
5.1 测试中所用用具要作灭菌处理, 以确保测试的可靠性、正确性。
4.3.
5.2 采取一切措施防止人为对样品的污染。
4.3.
5.3 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落, 并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别, 必要时用显微镜鉴别。
4.3.
5.4 采样前应仔细检查培养皿的质量, 如发现变质、破损或污染的应剔除。
4.3.6测试规则
4.3.6.1 测试状态
a) 沉降菌测试前，被测试洁净区的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气
流速必须控制在规定值内。
b) 沉降菌测试前，被测试洁净室已经消过毒。
c) 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明
测试状态。
4.3.6.2 测试人员
a) 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
b) 静态测试时, 室内测试人员不得多于2人。
4.3.6.3 测试时间
a) 对单向流，100级层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。
b) 对非单向流， 100,000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于
30min后开始。
4.3.6.4 沉降菌计数
a) 沉降法的最少采样点数目可按表1确定
文件名称沉降菌测试验证规程制定部门质量管理部表1：最少采样点数目
面积 m2
洁净度级别
100级10,000级
＜10 2～3 2
≥10～＜20 4 2
≥20～＜40 8 2
≥40～＜100 16 4
≥100～＜200 40 10
≥200～＜400 80 20
≥400～＜1000 160 40
≥1000～＜2000 400 100
2000 800 200 注：表中的面积，对于单向流洁净区，是指送风面面积。
对于非单向流洁净区是指房间的面积。
b) 在满足最少测点的同时，还宜满足最少培养皿数，见表2
表2：最少培养皿数
洁净度级别所需φ90mm培养皿数（以沉降0.5h计）100级14
100,000级 2
c) 采样点的布置
●工作区采样点位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。
●可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
采样点的布置见表3
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表3：采样点布置图
d) 测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差及测试状态。
4.3.7 结果计算
4.3.7.1 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。
4.3.7.2 平均菌落数计算
平均菌落数M=M
1
+M
2
+···M
n
n
式中： M——平均菌落数
M
1……M
n
——培养皿菌落数
n——培养皿总数
4.3.8 结果评定
用平均菌落数判断洁净室（区）空气中的微生物。
4.3.8.1 洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。
4.3.8.2 若其洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
5.0相关记录
《空气沉降菌测试记录》。