沉降菌测试验证规程
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江苏舜宇医疗器械有限公司文件号：SY/ZT7.1-08 页码：1/4
版本号：A.2 受控状态：受控
文件名称沉降菌测试验证规程制定部门质量管理部
1.0 目的
验证洁净区沉降菌测试效果。
2.0 范围
洁净区、菌检室、超净工作台。
3.0 职责
质量管理部检验人员负责相关操作。
4.0 工作程序
4.1要求：
4.1.1 我公司洁净区洁净度按10万级（洁净车间）、1万级（菌检室）、100级（超净工作台），故在测定沉降菌时按相应级别进行监测。
4.1.2 洁净区沉降菌测试标准按《洁净室（区）环境评定标准》执行。
4.2测试所用仪器设备
高压灭菌器、恒温培养箱、培养皿(采用直径90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿)、培养基（普通营养琼脂培养基或药典许可的其他培养基）
4.3测试方法
4.3.1 准备工作
4.3.1.1 将直径90mm的培养皿置于121℃湿热灭菌20min。
4.3.1.2 将灭菌好的培养基 ( 如已冷凝则加热熔化 ), 冷至45℃左右时, 在无菌操作条件下将培养基注入培养皿, 每皿约20 ml。
4.3.1.3 待琼脂凝固后, 将培养基平皿倒置于37℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长, 即可供采样用。
4.3.2 采样
将已制备好的培养皿按3.6.4.2的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露30min，再将培养皿盖盖上后倒置。
4.3.3 培养
4.3.3.1 采样结束后, 将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
4.3.3.2 在37℃培养箱中培养，时间不少于48小时。
4.3.3.3 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。每批选定3只培养皿作对照培养。
拟制：审核：批准：
制订记事：
2013 年5月制订
文件名称沉降菌测试验证规程制定部门质量管理部
4.3.4菌落计数
4.3.4.1 用肉眼直接计数，标记点数，然后用5～10倍放大镜检查, 有否遗漏。
4.3.4.2 若培养皿上有2个或以上的菌落重叠, 可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
4.3.4.3 平板上有片状菌落或花斑样菌落蔓延生长以及平板受到污染的情况, 该平板计数无效。
4.3.5注意事项
4.3.
5.1 测试中所用用具要作灭菌处理, 以确保测试的可靠性、正确性。
4.3.
5.2 采取一切措施防止人为对样品的污染。
4.3.
5.3 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落, 并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别, 必要时用显微镜鉴别。
4.3.
5.4 采样前应仔细检查培养皿的质量, 如发现变质、破损或污染的应剔除。
4.3.6测试规则
4.3.6.1 测试状态
a) 沉降菌测试前，被测试洁净区的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气
流速必须控制在规定值内。
b) 沉降菌测试前，被测试洁净室已经消过毒。
c) 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明
测试状态。
4.3.6.2 测试人员
a) 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
b) 静态测试时, 室内测试人员不得多于2人。
4.3.6.3 测试时间
a) 对单向流，100级层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。
b) 对非单向流， 100,000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于
30min后开始。
4.3.6.4 沉降菌计数
a) 沉降法的最少采样点数目可按表1确定
文件名称沉降菌测试验证规程制定部门质量管理部表1：最少采样点数目
面积 m2
洁净度级别
100级10,000级
＜10 2～3 2
≥10～＜20 4 2
≥20～＜40 8 2
≥40～＜100 16 4
≥100～＜200 40 10
≥200～＜400 80 20
≥400～＜1000 160 40
≥1000～＜2000 400 100
2000 800 200 注：表中的面积，对于单向流洁净区，是指送风面面积。对于非单向流洁净区是指房间的面积。
b) 在满足最少测点的同时，还宜满足最少培养皿数，见表2
表2：最少培养皿数
洁净度级别所需φ90mm培养皿数（以沉降0.5h计）100级14
100,000级 2
c) 采样点的布置
●工作区采样点位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。
●可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
采样点的布置见表3
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表3：采样点布置图
d) 测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差及测试状态。
4.3.7 结果计算
4.3.7.1 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。
4.3.7.2 平均菌落数计算
平均菌落数M=M
1
+M
2
+···M
n
n
式中： M——平均菌落数
M
1……M
n
——培养皿菌落数
n——培养皿总数
4.3.8 结果评定
用平均菌落数判断洁净室（区）空气中的微生物。
4.3.8.1 洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。
4.3.8.2 若其洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
5.0相关记录
《空气沉降菌测试记录》