日立l-8900氨基酸自动分析仪.ppt
日立氨基酸分析仪操作事项
日立氨基酸分析仪操作步骤 (1)日立氨基酸分析仪简介 (3)日立氨基酸分析仪操作注意事项 (4)日立氨基酸分析仪操作步骤1、开机：计算机开机及仪器开机。
2、创建新项目：打开软件→“项目”→“创建新项目”→填名称和路径，两个“□”打钩，点“启用程序”→“确定”→将D盘Method文件夹的6个方法复制到F盘Method文件夹。
3、泵的排气：“仪器”→“启动”和/或“离线启动”→关掉弹出窗口→点左下角“控制”→“仪器状态”→“Connet”→待左上角灰色框显示“Idle”，点“OPTION”→点Pump 1的“Purge”→ B1：B2：B3：B4 = 25：25：25：25 →“Start”→手动打开泵1开关（逆时针旋转90°）→“确定”→点Pump 2的“Purge”→R1：R2：R3 = 34：33：33 →“Start”→手动打开泵2开关→“确定”→待泵2的废液管液体无气泡，点Pump 2的“Purge”→拧紧泵2开关→点Pump 1的“Purge”→B5：B6 = 50：50 →“Start”→“确定”→待泵1的废液管液体无气泡，点Pump 1的“Purge”→拧紧泵1开关。
4、进样器的排气：“L 8900”→“Autosample”→“Sampler Wash”→“OK”→重复排气，直到进样器无气泡。
5、创建序列：“帮助”→“仪器向导”→“创建序列”→选方法“PH 4.6×60-2622”→“打开”→“下一步”→“样品”命名，加后缀→“数据文件”命名，选“样品ID”，加后缀“日期与时间”→填样品数（样品数= n+3，n为样品个数）→重复次数“1”→“下一步”→输入第一个样品瓶的编号→进样量“20”μL →“下一步”→“下一步”→“完成”→更改第一针方法为“PH 4.6×60-2622（Stand-by）”→更改第二针方法为“PH 4.6×60-2622（RG）”→更改样品瓶序号，与样品盘中一一对应→“文件”—“保存”—“序列”→命名文件夹→点“序列运行”。
L8900 AA analyzer 样品前处理简要步骤
日立L-8900全自动氨基酸分析仪样品前处理步骤（内部用）一、饲料样本中水解蛋白中氨基酸含量测定步骤（参考GB/T 18246-2000）1. 样品制备取具代表性的饲料样品，用四分法缩减分取25g 左右，粉碎并过。
.25m m孔径(60目)筛，充分混匀后装入磨口瓶中备用。
对于粗脂肪含量大于、等于5%的样品，需将脱脂后的样品风干、混匀，装入密闭容器中备用。
而对粗脂肪小于5%的样品，则可直接秤用未脱脂样品。
2. 氨基酸水解液制备（酸水解）称取含蛋白7.5 -25 mg的试样(约50~100 mg,准确至1 mg) 于20 mL水解管，加10.00 mL 酸解剂（6 mol/L HCl)，置液氮或干冰(丙酮)中冷冻。
然后，抽真空至7 Pa(-<5X1 0-'mm汞柱)后封口或充氮气封口。
将水解管放在110℃恒温干燥箱中，水解22~24 h。
冷却，混匀，开管，用水定容至50~100mL（保证上机液中总氨基酸浓度在50-250 nmol/mL），过滤，用移液管吸取1.0 mL 于真空干燥箱60℃蒸干，必要时，加少许水，重复蒸干1-2次（或50℃氮吹仪吹干，加少量水重复吹干2次）。
加入2 mL 0.02 mol/L HCl溶液，充分溶解，0.22 um滤膜过滤，上机。
二、血浆中游离氨基酸测定1. 样品制备采集约5 mL抗凝全血，4000 × rpm离心，获得血浆，检测前-20℃保存。
2. 分离游离氨基酸取血浆1.0 mL，加入1.0 mL 8%磺基水杨酸（8g磺基水杨酸溶于92mL的超纯水），4℃冰箱过夜，14000 × rpm 离心10 min，上清液过0.22 um滤膜，取约1 mL上机测定。
日立l-8900氨基酸自动分析仪.ppt
含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物
氨基连在α-碳上的为α-氨基酸
组成蛋白质的氨基酸均为α-氨基酸
组成蛋白质的 20 种氨基酸除甘氨酸外，都有一个不对称碳原子，即α-碳原子。
α-碳原子有四个不同取代基：羧基、氨基、氢原子和 R 基团，不同氨基酸的 R 基团不同。 每种氨基酸有 D -构型和 L -构型，天然蛋白质中的氨基酸都是 L- 构型。 广泛存在于食品、药品、水产品、饲料和体液（血液、尿样）
2.保留时间、峰面积、重现性好，检出限可达3pmol。
3.不存在液相方法生成二级衍生物的问题。 4.峰形显高斯分布，体系稳定快（半小时即可）
氨基酸分析仪按其分离和检测方法的不同可分为两大类型， 第一类是基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生光度法 测定的经典方法（IEC）。第二类是所有基于反向色谱分离、 柱前衍生、荧光或紫外检测的高效液相色谱法（HPLC）以
的缓冲液依次将氨基酸按吸附力的不同洗脱下来。
3.分离后的氨基酸与茚三酮试剂在高温反应器中进行衍生反应， 生成可以被分光光度计检测的有色物质，然后在检测器中被检
测出来。
日立L-8900氨基酸分析仪流程图
分析实例：啤酒酵母
实例分析：猪排
实例分析：正常血清
实例分析：苯丙酮尿症血清
实例分析：苹果汁
种氨基酸吸附能力的不同进行分离纯化。
二 氨基酸分析仪发展及生产厂家
氨基酸分析仪进入国内市场已有近三十年的历史，它是专用于 测定蛋白质水解液（水解氨基酸）及生理体液中（游离氨基酸） 混合氨基酸含量的一种专用仪器，现已广泛应用于各行各业。 它与其他分析仪器区别在于只能检测氨基酸，不能作为他用，
具有专一性。
蛋白质氨基酸分析测试
蛋白质氨基酸分析测试一、实验课程：组成蛋白质的氨基酸的定量分析二、实验项目：三、主要仪器设备日立L-8900高速氨基酸分析仪1 实验目的用于检测样品中蛋白水解氨基酸、游离氨基酸的种类及含量，广泛应用于食品、纺织等领域检测。
2 仪器用具和材料L-8900高速氨基酸分析仪、氮吹仪、真空泵、水解瓶等。
3 基本知识用水解的方法将蛋白质的肽链打开，形成单一的氨基酸进行分析。
所有的氨基酸在低PH值的条件下都带有正电荷，在阳离子交换树脂上均被吸附，但吸附的程度不同，碱性氨基酸结合力最强、其次为芳香族氨基酸、中性氨基酸、酸性氨基酸结合力最弱。
按照氨基酸分析仪设定的洗脱程序，用不同离子强度、PH值的缓冲液依次将氨基酸按吸附力的不同洗脱下来，被洗脱下来的氨基酸与茚三酮反应液在加热的条件下反应（135度），生成可在分光光度计中检测到的蓝紫色物质外标法定量。
4 实验步骤：1水解样品（1）药液0.02 N HCI稀释3倍以上（根据氨基酸的浓度）作样品。
（2）蛋白质固体a 6N-HCI，110℃水解样品24小时。
b 减压干燥，除去HCI。
c 0.02NHCI容量, 0.22um的滤膜过滤（最终浓度以200ug/ml为宜）。
2打开工作站主画面，点击control——instrument status键进入3 单击connect联机，大约两分钟后初始化完成。
4点击File——Sequence，建立样品表。
5依次输入未知样品顺序、样品号、数据路径、文件名称、样品个数、重复次数。
6 点击下一步，输入样品瓶号、标准瓶号、进样体积、样品间隔数。
7点击下一步，标准品号、路径、文件名、标准品个数、重复次数。
8点击完成，生成的样品表。
9点击File-Method-Open，调用方的。
10点击单一运行(Single Run)，及序列运行(Sequence Run)。
11采样结束后进行数据处理。
全自动氨基酸分析如何推测样品浓度
5.6 如何推测样品浓度本设备使用的各氨基酸样品的最适宜浓度范围为0.4至10 nmol/20 μL。
因此，在添加样品之前，必须对样品的浓度加以推测。
(1) 当在水解之前已知样品容量时这时，需先确定蛋白质或缩氨酸的重量。
假定平均分子量为120，那么，每次样品中20种氨基酸的净含量大约为5μg/20 μL。
于是，需制备5份这样的样品。
(2) 当样品浓度未知时这时，按下文所述与标准样品进行对比非常方便。
(a) 取两个试管，一个加入0.1 mL认为浓度适宜的样品，另一个加入0.1 mL的标准样品。
(b) 向两试管内均加入1 mL茚三酮试剂和1 mL缓冲溶液（PH-1）。
(c) 在100 ︒C的相同温度下对两个试管加热3分钟。
(d) 将颜色变化同标准样品进行比较，即测定570 nm波长时的吸光率。
(e) 为了推测近似浓度，需对比标准样品与稀释溶液的总容量e并估测二者之间的倍数关系，从而判断未知样品的容量。
例如，如果未知样品稀释至1/4时的浓度与标准样品的浓度相同，则未知样品的浓度为标准样品浓度的4倍，那么，未知样品的添加容量为1/4即可。
如果未知样品的浓度较低，在按此方式处理时，增加相应容量的即可。
在采用这种对比方法对多种氨基酸进行具体推测时，需仔细计算浓度。
(3) 样品浓度过高时(包括杂物的浓度过高的情况)(a) 自动进样器的进样针上粘附着高浓度样品时，将会促进进样口的磨损，而可能引发漏液。
为了防止漏液，对高浓度样品进行分析时，请更改自动进样器的清洗条件。
(b) 请参照方法的创建（L-8900高速氨基酸分析仪（OpenLAB系统）2.7.1「仪器条件的设定」），将进样针的清洗时间设定为1 s～5 s。
5.75.7 样品的预处理在加载到分析仪之前，必须根据具体的检测目标处理样品。
处理方法大体有两种。
一种方法是测定游离氨基酸，包括氨基酸及其化合物（以下称生理性液体分析）；另一种方法是测定蛋白质水解获得的氨基酸本身（以下称蛋白质水解分析）。
L-8900氨基酸分析仪培训内容
❖ 四、氨基酸分析仪与HPLC法的比较 ❖ （一）OPA法（邻苯二甲醛） ❖ （二）PITC法 ❖ （三）D-CL法 ❖ （四）2-4—二硝基氟苯法
❖ 五、样品的制备（样品预处理）
❖ （一）蛋白质的水解方法
日立氨基酸分析仪
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培训课程安排
第一项内容
❖ 一、日立氨基酸分析仪简介
❖ （一）氨基酸分析仪
Байду номын сангаас
❖ （二）氨基酸分析仪构成、流程图
❖ （三）特点
❖
什么叫氨基酸分析仪？
❖ 二、氨基酸
❖ （一）氨基酸的定义
❖ （二）氨基酸的分类
❖ （三）氨基酸的化学性质
❖
什么叫氨基酸？
❖ 三、氨基酸分析仪基本分析原理（洗 脱过程）
❖
1、酸水解法
❖
2、碱水解法
❖
3、酶水解法
❖
4、样品的前处理（详细）
❖
5、盐酸水解注意事项
❖ （二）游离氨基酸样品的制备
❖ （三）生理体液样品的前处理
❖ 六、影响氨基酸分析的各种因素
❖ （一）样品中氨基酸浓度的影响
❖ （二）缓冲液PH值、钠离子浓度
❖
的影响
❖ （三）柱温的影响
❖ （四）氨的影响 ❖ （五）氧存在的影响 ❖ （六）光源的影响（钨灯） ❖ 七、应用 ❖ （一）医学上的应用 ❖ （二）饲料上的应用
❖ 1、质量控制 ❖ 2、真伪鉴别 ❖ （三）农用、食品、饮料及其它
第二项内容
❖ 一、试剂国产化交流 ❖ 二、试剂国产化注意事项 ❖ 三、仪器软件的操作讲解 ❖ 四、仪器的维护保养 ❖ 五、答疑（与用户现场交流）
日立-8900全自动氨基酸分析仪简单操作规程
日立L-8900全自动氨基酸分析仪简易操作规程一、联机1、打开电脑。
2、打开主机电源。
3、双击桌面的图标，进入1-1画面，双击图标，进入程序。
1-14、在菜单栏中依次点击和，出现1-2画面，单击联机。
大约两分钟，初始化完毕。
中Uninitialized变成Idle，图1-2变成了图1-3，各个组件可以进行控制了。
初始化完毕后，分离柱的温度逐渐上升。
分离柱的温度会升到50℃。
1-21-3二、手动各组件控制操作1、泵1和泵 2点击，出现2-1的画面。
设置泵1，流量0.ml/min，B1 100%。
点击打开泵1。
泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。
2-1点击，出现2-2的画面，设置泵2，流量0.1ml/分钟，R3 100%。
点击打开泵2。
泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。
2-22、自动进样器点击，出现2-3的画面，设置Sampler Wash不少于3次。
2-32-43、反应柱柱温箱点击，出现2-5画面，设置柱温135℃，设置ON，打开柱温箱。
柱温箱打开后，背景颜色由灰色变为黄色。
2-52-6三、编辑方法1、依次点击、、出现3-1-1的画面。
3-1-12、选中，点击。
再依次点击、，出现3-1-2的画面。
3-1-23、在设置中选中各个柱，其余参数默认。
4、将方法另存为L8900分析方法，文件名及路径均可自选。
注意一定不要覆盖原来的方法，一定得另存。
注意将梯度设为3-3-1所示，其余参数默认。
3-3-12、保存方法。
四、编辑Sequence1、依次点击、、，出现4-1画面。
选中，其余参数默认。
4-12、点击，出现4-2画面，根据需要填写各个参数。
4-23、点击，出现4-3画面，根据需要填写各个参数。
4-34、点击，出现4-4画面，根据需要填写各个参数。
4-45、点击，出现4-5画面。
4-56、通过复制、编辑，最终将Sequence编辑如图4-6所示。
注意此时第一行是再生程序（RG），进样体积为0，Run Type是Unknown，第二行是标准样品，三行起是未知样。
氨基酸分析仪
氨基酸分析仪洗脱过程
1.氨基酸在PH2.2的条件下都带正电荷，在阳离子交换树脂上均 被吸附,但结合强度各不相同。
2.随着缓冲液在离子交换柱上流动，氨基酸不断地吸附、解吸附。 由于氨基酸性质的差异（酸碱性、极性、分子大小）,吸附强度 有差异。 3.不同氨基酸与离子交换树脂的亲和力不同：碱性氨基酸> 芳香 族氨基酸>中性氨基酸>酸性氨基酸及羟基氨基酸。 4.提高流动相PH值，氨基酸正电荷减少，吸附力减弱，最后从离 子交换柱上洗脱下来。洗脱顺序是酸性和带羟基氨基酸、中性氨 基酸、碱性氨基酸。 5.氨基酸标准液中各种氨基酸在氨基酸自动分析仪上被洗脱的顺 序一定;标准液各种氨基酸的浓度一定，洗脱峰的面积一定;由此 可计算出样品中各种氨基酸的含量。
L-8900 AAA的流程图
L-8900 AAA的性能指标
以蛋白水解液标准分析方法为例： 净分析时间：30分钟 检出限：3 pmol(信噪比=2，天门冬氨酸） 保留时间重现性：CV 0.3% （精氨酸） 峰面积重现性：CV 1.0% (甘氨酸、组氨酸）
氨基酸分析仪最大的特点：
1 灵敏、快速、提供数据准确可靠：分辨 率高、操作简单，分析周期短（水解30分 钟、体液110分钟）。 2 保留时间、峰面积、重现性好，检出限 可达3pmol。 3 不存在液相方法生成二级衍生物的问题。 4 峰形显高斯分布，体系稳定快（半小时 即可）。
日立L-8900全自动氨基酸分析仪
日立氨基酸分析仪的历史
KLA-5
四十多年的历史，拥有2000多用户
835 L-8800 L-8900
Sold KLA in 1962 L-8500
L-8900 AAA的内部结构
L-8900 AAA的组成
组件名称 缓冲液 色谱柱 泵 自动进样器 柱温箱 反应单元 检测单元 控制系统 参数 6种（试剂与清洗液） 4.6mm id x 60mm， 阳离子树脂填充（标配) 0.001-0.999ml/min, 0-20MPa, 2 1500µl; 200vial (200 cooler) ; 0.1-100µl 20-85℃（1℃）, 电子加热/制冷的温控装置。 50℃ --140℃,电子加热的温控系统 可见分光光度计（570，440nm） EZChrom Elite 分析软件 CPU: 32bits OS, Windows xp
L-8900氨基酸分析仪分析柱重新填充方法
L-8900氨基酸分析仪分析柱重新填充方法陈蕊君;满目【摘要】2008年引进的L-8900高速全自动氨基酸分析仪由于使用过久、维护不当,导致泵1压强过高不能正常运行.通过更换线性过滤器,逆洗分析柱,仍没有解决问题,最后重填分析柱使仪器恢复正常.重填分析柱操作较复杂、容易出错,会造成树脂损失,因此,在重填过程中详细记录拆卸、清洗树脂、安装分析柱的完整过程,为今后工作和同行积累经验.【期刊名称】《分析测试技术与仪器》【年(卷),期】2019(025)003【总页数】3页(P204-206)【关键词】L-8900高速全自动氨基酸分析仪;压强过高;重新填充【作者】陈蕊君;满目【作者单位】中国人民解放军食品检测试验中心,北京 101301;中国人民解放军食品检测试验中心,北京 101301【正文语种】中文【中图分类】O657L-8900高速全自动氨基酸分析仪由日立(HITACHI)公司生产，是目前国内使用最多的氨基酸自动分析仪之一[1]. 当分析仪使用过久、维护不当时，其分析柱会发生堵塞或污染，从而导致系统压力升高，直接影响系统稳定性，同时引起保留时间的偏差. 当分析柱树脂老化，就会导致离子交换能力下降，柱效降低，相邻峰的分离度会变差，峰形也会改变，从而严重影响测试结果.1 故障表现分析仪开机后电脑进入设置界面，主机与软件连接正常. 初始化完毕，手动排出泵1和泵2流路中的气泡后，设置泵1流速(PH-1缓冲液B1为0.3 mL/min)和泵2流速(5%乙醇R3为0.2 mL/min)，执行后待流速逐渐升高，此时出现提示“PERSSURE MAX LIMIT ERROR” occurred on Pump 1(泵1压强过高)，主机停止运行.2 故障排除首先，根据使用说明书(主机)中故障诊断，首先检查线性过滤器是否被样品中的杂质堵塞. 卸下各部位的前推螺丝，卸下过滤器压板，取出过滤器，发现不仅被杂质污垢覆盖，并且已被腐蚀断裂. 更换新的过滤器并运行泵1，仍然弹出“泵1压强过高”的提示.第二步，确认分析柱是否发生堵塞. 采用逆洗方法，拆下分析柱并反向安装，不连接柱出口特氟隆管. 用RH-RG缓冲液B6冲洗10 min进行再生，再用缓冲液B1冲洗30 min，完成后将分析柱恢复正常流向，然后运行泵1，仍然弹出“泵1压强过高”的提示.最后，通过重新填充分析柱解决了问题. 因树脂价格昂贵，为避免造成损失，此操作需要小心谨慎，详见以下步骤.2.1 装柱工具玻璃棒、离心管、离心机等. 装柱工具一定要提前使用超纯水超声清洗，并用注射器清洗.2.2 试剂2 mol/L的HCl：将市售浓盐酸用蒸馏水稀释6倍. 2 mol/L 的NaOH：用烧杯称取氢氧化钠8 g，加水稀释，等溶液凉至室温后，转移定容至100 mL，存于聚乙烯试剂瓶中备用.丙酮和乙醇级别越高越好，如无色谱纯试剂，也可用国药的分析纯替代.2.3 树脂收集及清洗在柱温低于50 ℃时拆卸分离柱，拆下一端端帽后发现树脂明显变脏，用裁纸刀轻轻的去掉一层，重新连接分离柱，通过泵压把树脂冲洗出来(泵1流速设置为B1 0.999 mL/min)，收集至一空离心管中(如图1所示)，将分离柱金属外壳及两端端帽超声清洗.图1 树脂收集Fig. 1 Collection of resin把冲洗到离心管中的树脂进行离心，转速 5 000 r/min，离心5 min，弃去上清液(和树脂一同冲洗出的B1缓冲液). 向离心管中添加4～5倍量的丙酮(约10 mL)，用玻璃棒搅拌后离心(同时用丙酮冲洗玻璃棒)，转速5 000 r/min，离心5 min，弃去上清液，加入约10 mL超纯水搅拌，离心弃上清液，并重复2～3次. 向离心管中添加4～5倍量2 mol/L 的HCl，用玻璃棒搅拌后离心，转速5 000 r/min，离心5 min，弃去上清液，加入约10 mL超纯水搅拌，离心弃上清液，直到用普通pH试纸测试其pH值接近中性为止(或在5～6附近)，一般2-3次即可达到. 向离心管中添加4～5倍量2 mol/L 的NaOH，用玻璃棒搅拌后离心，转速5 000 r/min，离心5 min，弃去上清液，加入约10 mL超纯水搅拌，离心弃上清液，直到用普通pH试纸测试pH值接近8～9左右即可，一般洗2～3次即可达到.如清洗完成后无法立即重填柱子，可将清洗过的树脂加入少量B1缓冲液保存于冰箱中.2.4 填充分析柱拆开泵1 的出口，连接装柱工具. 因清洗过程中树脂会有损失，所以需要向清洗好的树脂中再添加少许新树脂. 将清洗好的旧树脂转移到装柱工具中(装柱工具总容量12.5 mL，树脂填充液添加至白色密封圈前约5 mm的位置)，转移完毕后重新连接装柱工具到泵1. 点击EZChrom 控制软件中的全自动装柱程序，设置压力为13 MPa. 把装柱工具和分离柱(如图2所示)斜向上，以排除柱中可能存在的气泡. 当没有气泡冒出后(约20 min)，放置如图3所示，开始填充分析柱. 当泵压上升至12.8 MPa时，等待60 min，即可拆开装柱工具及分离柱.图2 排除装柱工具中气泡Fig. 2 Remove air bubbles in packing tool图3 填充分析柱Fig. 3 Filling of analytical column拆下装柱工具后，用滤纸吸取分析柱另一端多余的水分，拧上端帽，安装至主机，泵1不再提示压强过高，实测氨基酸标准溶液，结果如图4所示. 由图4可见，设备运行正常.3 分析柱维护仪器一周以上不使用时，需要将分析柱的树脂用泵排出，并使用缓冲液B1浸泡，在4 ℃冰箱中保存，同时用蒸馏水清洗各个管路. 或每周使用手动清洗的方法：B6和R3缓冲液冲洗30 min，B1和R3缓冲液冲洗30 min. 需注意，冲洗后应将管路中的气泡排出干净，再将缓冲液泵接入分析柱. 由于样品中固形物、脂肪和蛋白质等污染物质的含量不同，分析柱使用寿命标准也不相同，当出现泵1压强过高、柱效降低等现象时，可考虑是否需要重填分析柱.图4 分析柱充填后标准溶液图谱Fig. 4 Standard solution map after refilling analytical column4 结语分析柱充填后，不仅解决了设备故障问题，分离度和重复性也有很大提高. 虽然重填分析柱可以恢复柱效，但是仪器的定期维护可降低重填的频率，维持较为稳定的仪器状态. 由于树脂价格昂贵，在充填树脂的过程中尤其要注意回收，避免浪费.仪器维修虽然可以利用说明书逐步推断故障原因，但在设备检查维修过程中，因元件较小，线路复杂，安装和拆卸错误会引起极大损失，因此操作时需格外小心谨慎. 在没有经验和技术支持的情况下，重填分离柱会有一定困难，为此将操作步骤进行记录与总结，以期为将来的工作和同行提供借鉴.参考文献:【相关文献】[1] 姜涛，冯永建，何学超，等. 氨基酸自动分析仪快速分析方法的研究[J].化学研究与应用, 2012,24(7):1159-1163.[JIANG Tao, FENG Yong-jian, HE Xue-chao, et al. Research on localized reagent and rapid analysis method of amino acid analyzer[J].Chemical Research and Application, 2012, 24(7):1159-1163.]。
L－8900氨基酸分析仪分析柱重新填充方法
大型仪器维护与维修(２０４ ~ ２０６)
Ｌ － ８９００ 氨基酸分析仪分析柱重新填充方法
陈蕊君ꎬ满 目
( 中国人民解放军食品检测试验中心ꎬ北京 １０１３０１)
摘要: ２００８ 年引进的 Ｌ－８９００ 高速全自动氨基酸分析仪由于使用过久、维护不当ꎬ导致泵 １ 压强过高不能正常运行.
通过更换线性过滤器ꎬ逆洗分析柱ꎬ仍没有解决问题ꎬ最后重填分析柱使仪器恢复正常. 重填分析柱操作较复杂、容
易出错ꎬ会造成树脂损失ꎬ因此ꎬ在重填过程中详细记录拆卸、清洗树脂、安装分析柱的完整过程ꎬ为今后工作和同
行积累经验.
关键词:Ｌ－８９００ 高速全自动氨基酸分析仪ꎻ压强过高ꎻ重新填充
中图分类号: Ｏ６５７
管. 用 ＲＨ －ＲＧ 缓冲液 Ｂ６ 冲洗 １０ ｍｉｎ 进行再生ꎬ再
用缓冲液 Ｂ１ 冲洗 ３０ ｍｉｎꎬ完成后将分析柱恢复正
常流向ꎬ然后运行泵 １ꎬ仍然弹出“ 泵 １ 压强过高” 的
提示.
最后ꎬ通过重新填充分析柱解决了问题. 因树
脂价格昂贵ꎬ为避免造成损失ꎬ此操作需要小心谨
冲洗出的 Ｂ１ 缓冲液) . 向离心管中添加 ４ ~ ５ 倍量
(ＨＩＴＡＣＨＩ) 公司生产ꎬ是目前国内使用最多的氨基
酸自动分析仪之一 [１] . 当分析仪使用过久、维护不
当时ꎬ其分析柱会发生堵塞或污染ꎬ从而导致系统压
力升高ꎬ直接影响系统稳定性ꎬ同时引起保留时间的
偏差. 当分析柱树脂老化ꎬ就会导致离子交换能力
下降ꎬ柱效降低ꎬ相邻峰的分离度会变差ꎬ峰形也会
改变ꎬ从而严重影响测试结果.
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第 ２５ 卷第 ３ 期
２０１９年９月
氨基酸分析仪培训讲义
下面将日立氨基酸分析仪的构成、流程图 及特点给大家介绍如下： （一）氨基酸分析仪的构成
1、输液单元（泵与管路） 作用：输送缓冲液、反应液在流路系统 中流动。
2、进样单元（自动进样器） 作用：将样品在流动相的带动下送入仪 器体系中。
3、分离单元（离子交换柱、柱温箱）
作用：主要是样品的分离、将混合的样 品分离成单一组分。
从目前的情况来看，别的仪器产品厂家有的已 退出中国市场、且仪器的使用年限已有20几年， 具我们了解的情况来看，基本大多数都已报废 停用（如贝克曼121M、6300型）。近期进入国 内市场的一两家仪器生产商，在国内的占有率 也非常小、而且售后服务也不到位。日本日立 公司的一切从最早的分析时间12小时、4小时、 70分钟、直至降到现在的30分钟一个分析程序 （快速20分钟），而且操作软件非常得心应手 简便快捷，最小检测限为3pmol。无论从市场 占有率上、还是售后服务上都是最好的。
（4）泵（高速反馈、实时控制技术）：
日立氨基酸分析仪 采用双柱塞串联往 复泵，此种泵采用了高速反馈实时控制 技术，最大的优点是脉动小、流速稳定、 噪音低，所采用的这种泵它可保证所供 液体流量恒定、流速稳定。流量是否恒 定关系到峰的重复性、分辨率和定量的 准确。流速如果不稳定会产生脉动，它 可导致检测器噪音增大、最小检测量增 加灵敏度下降。实时控制技术系统采用 了一个高速传感器，对内部压力进行实 时监控，在柱塞换向的时间区段内、系 统压力有所下降趋势时
精氨酸 甘氨酸 胱氨酸 酪氨酸
非必需氨基酸 谷氨酸
天门冬氨酸 丙氨酸 丝氨酸 脯氨酸
羟脯氨酸
动物的必需氨基酸除上述8种外，还有精氨 酸、组氨酸共10种。 中性氨基酸：在分子式中具有一个氨基和 一个羧基，这样的氨基酸叫中性氨基酸。 酸性氨基酸：在分子式中羧基多于氨基具 有酸性，这样的氨基酸叫酸性氨基酸。 碱性氨基酸：在分子式中氨基多于羧基具 有碱性，这样的氨基酸叫碱性氨基酸。 什么叫必需氨基酸：人体每日总有一定量 的组织蛋白分解成氨基酸，然后再进一步 分解成水
水产品一般成分的检测—氨基酸的测定
水产品氨基酸态氮的测定 ——酸度计法
目录页
概述 原理 试剂与仪器 分析步骤 注意事项
一、概述
水产品中含有丰富的蛋白质，在食品加工 的过程中蛋白质会分解成多种氨基酸，这些氨 基酸可让食品呈现出独有的“鲜味”。
氨基酸态氮是指以氨基酸形式存在的氮元 素的含量，可以间接反映产品中氨基酸的多少， 是衡量产品鲜味和品质的特征性指标。
3. 混合氨基酸标准工作液和样品测定液分别以相同体积注入氨基酸 分析仪，以外标法通过峰面积计算样品测定液中氨基酸的浓度。
结果的计算 样品测定液氨基酸的含量按下式计算：
式中：
Ci——样品测定液氨基酸i的含量，单位为nmol/ml ； Ai——样测定液氨基酸i的峰面积； As —— 氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积； Cs —— 氨基酸标准工作液氨基酸s的含量，单位为nmol/ml ；
含水量较低或固态样品
样品搅拌均匀后，放入研钵中，在10min内迅速研磨至无肉眼可见颗粒, 装入磨口瓶中备用。用已知重量的称量瓶称取搅拌均匀的样品5.0g，用 50mL80℃左右的蒸馏水分数次洗入100mL烧杯中，冷却后，转入100mL容量 瓶中，用少量水分次洗涤烧杯,洗液并入容量瓶中,并加水至刻度,混匀后过滤。
混合氨基酸工作液色谱图
vis1 检测波长570nm时
vis1 检测波长440nm时
五、注意事项
本方法适用于食品中酸水解氨基酸的测定，包括天冬氨酸、 苏氨酸、丝氨酸等共16种氨基酸。也就是说20种氨基酸中不能测 谷氨酰胺、天冬酰胺、色氨酸和半胱氨酸。
脯氨酸在波长440 nm测定，其余氨基酸在570 nm波长下测定。 实验中注意控制氮气压力：仪器需要的压力一般为0.05-
氨基酸分析仪操作规程
菏泽市食品药品检验检测中心仪器设备相关记录作业指导书氨基酸分析仪操作规程文件编号：ZY(GC)-1012版次：A/O分发号：编制：日期：审核：日期：批准；日期：生效日期：年月日1、技术参数1.1 性能（以蛋白质水解液标准分析为例，共进样5次）（1）净分析时间约30分钟（2）保留时间重现性CV0.3%（精氨酸）（3）峰面积重现性CV11.0%（甘氨酸，组氨酸）（4）检出限3Pmol（信噪比=2，天冬氨酸）1.2 氨基酸分析仪主机（1）色谱柱尺寸：4.69mmID×60mm粒度：3μm树脂：日立专用离子交换树脂（2）输液泵方式：微量型串联式双柱塞往复泵压力：0-20Mpa流量：0.000-0.999ml/min(增量：0.001ml/min) (3)自动进样器进样方式：直接进样样品瓶容积：1500μl样品瓶数量：200（选配：带制冷装置，200）进样量：0.1-100μl（4）柱温箱方式：半导体制冷加热温度设定：20-85℃（增量：1℃）有断电和散热器过热保护装置（5）反应单元方式：反应柱尺寸：4.6mmID×40mm填充材料：金刚砂惰性材料温度范围：50-140℃（增量：1℃）有过热断电保护装置（6）可见光度计：单色器：消象差凹面衍射光栅波长：570nm 440nm(700nm参比)1.3 自动支持功能：（1）N2自动鼓入（2）N2压力控制（3）茚三酮回流保护装置1.4 系统管理（1）环境温度：15-35℃（2）电源 100-115V AC/220-240V,≥800VA，W/in 50/60Hz±0.5Hz2、操作步骤1．联机（1）打开电脑。
（2）打开L-8900主机电源。
（3）双击桌面的图标，进入1-1画面，双击图标，进入程序。
1-1（4）在菜单栏中依次点击和，出现1-2画面，单击联机。
大约两分钟，初始化完毕。
中Uninitialized变成Idle，图1-2变成了图1-3，各个组件可以进行控制了。
日立氨基酸分析仪安全操作及保养规程
日立氨基酸分析仪安全操作及保养规程前言日立氨基酸分析仪是一种专门测量蛋白质、氨基酸等物质成分的重要仪器。
在正常使用和维护保养中，必须注意安全操作以及细致的保养工作，以确保仪器的精准性和长久使用。
本文档通过总结和归纳，介绍了氨基酸分析仪的安全操作与保养规程，旨在帮助新用户更好的管理仪器，延长仪器的使用寿命。
安全操作规程1、正确选取试剂和标样在使用氨基酸分析仪时，试剂和标样必须与仪器相匹配，切勿随意更换试剂和标样。
使用过期或不合格的试剂和标样会影响测试结果，甚至损坏仪器。
2、正确操作仪器氨基酸分析仪使用前请仔细阅读仪器说明书，正确接通电源、试管夹或者针头，确认仪器状态正常后再进行操作。
在仪器运作过程中不要做过于激烈的动作，以免试管脱落或者不完全插入。
3、操作过程中必须戴手套和口罩在使用氨基酸分析仪时，必须戴耐酸碱的手套和口罩，确保工作安全。
4、防止样品污染样品应经过彻底洗涤，以防止其污染仪器或其他样品。
在操作过程中，应该使用干净的滴定管和针头，避免污染和交叉感染。
5、使用后彻底清洗氨基酸分析仪使用完毕后，应该对试剂、试管、针头和其他部分进行清洗，清除残留物并确保不会堵塞仪器通路。
保养规程1、定期清洗氨基酸分析仪部分组件及其通道是易受附着和腐蚀的，在每次使用后，需要对部件进行彻底清洗。
定期清洗有助于延长仪器使用寿命和确保测试结果的准确性。
2、定期更换维护部件氨基酸分析仪的一些部件，如色谱柱、针头和过滤器等，会因为使用而磨损和老化。
定期更换这些维护部件，可以确保仪器的正常运转。
3、保持通风良好在使用氨基酸分析仪的过程中，应当放置于通风良好的房间内，以保证仪器周围的空气质量，防止仪器被腐蚀。
4、定期检测和校准定期对氨基酸分析仪进行检测和校准可以确保仪器可以正常运转，且保持准确度。
仪器需要根据检测和校准结果分析和处理错误，并调整测量参数，以确保测试结果的准确性。
结语本文档介绍了使用日立氨基酸分析仪的安全操作和保养规程。
日立L-8900高速全自动氨基酸分析仪测定食品中牛磺酸
1.1 仪器与试剂 氨基酸自动分析仪：日立835-50型高效氨基酸自
动分析仪，连有自动数据处理机和记录仪、自动进样 装置、梯度洗脱系统等；电热恒温干燥箱；牛磺酸标 准溶液，500 mg/mL；盐酸，6 mol/L；茚三酮显色剂： 将26.67 g茚三酮溶于1000 mL乙二醇甲醚中，加入 333.33 mL醋酸缓冲液，再加入2.3 mL三氯化钛，低温 保存。 1.2 色谱条件
表5 样品测试分析结果
2.2 仪器精密度 配制牛磺酸标准溶液10 mg/L，连续进样6次，由
表2可知，峰面积相对标准偏差为0.27%。
Table 5 Results of analysis of sample
样品名称
牛磺酸含量/(10-2 g/g)
牡蛎 1
5.42
表2 精密度实验
牡蛎 2
5.37
Table 2 The results of the precision test
分离柱：26 mm i.d.×150 mm不锈钢柱；交换树脂 型号：No.2619，日本公司生产的氨基酸分析专用树脂；
现代食品科技
Modern Food Science and Technology
2012, Vol.28, No.3
柱温：53 ℃；泵流速：0.225 mL/min；泵压力：8.8 MPa； 次独立测定结果的相对标准偏差为/g)
5.42
2
5.38
3
5.38
4
5.41
5
5.40
6
5.43
2.4 加标回收率
平均值 /(10-2 g/g)
标准偏差
RSD/%
5.40 0.0191 0.35
2 结果与讨论
8900L说明书
目录LX-8900L〈一〉简介 (2)〈二〉相关位置机件说明 (3)〈三〉规格及功能 (4)〈四〉开机及测试 (5)〈五〉按键说明 (6)〈六〉操作说明 (7)〈七〉简易操作程序 (10)〈八〉测试资料的显示与列印说明 (11)〈九〉传输线接线组态 (14)〈十〉外接治具及转接线使用注意事项 (15)<一>简介我公司LX-8900精密线材测试仪系采用微电脑控制，配合精密的测试电路及软体应用程式设计而成，机体本身具有自我诊断测试、校正、自动测试等多项功能,对于一般及精密的线材皆能提供有效及准确的测试以确保品质。
LX-8900精密线材测试器除了一般短路、断路、误配等测试外，并提供连接线本身及连接线与接头的导电阻抗值的测试、连接线与连接线本身的绝缘阻抗测试之间的绝缘阻抗测试及瞬间短/断路测试，能严格的检查出不良的线材。
此外亦能准确测试标准、多接头的线材和单边型线材等各种产品。
LX-8900的测试方式是采用将标准线材学习并与之比对的测试方式，将标准线材的连接组态予以记忆，接着与待测线材进行测试比较，测试的良品与不良之结果以及状态统计数据可显示在液晶显示窗上（LCD），以解决您的不良率的统计之忧。
LX-8900的操作十分容易，资料的显示简单明了；因采用自动扫描方式，所以不需要重复按键。
另外本机器有记忆保留装置，不必重新学习即能进行测试。
〈二〉相关机件位置说明（1）、LCD显示器（20 x 2字）（2）、PASS/ERROR指示灯（3）、操作按键（4）、测试探针插座（测试点搜寻）（5）、测试输出端口（1）、REMOTE远程控制及按键输入端口（2）、高压输出端口（3）、电源开关（4）、散热风扇（5）、外接电源插座（6）、AC电源输入（7）、110v/220v切换开关<三>规格及功能硬体规格测试规格测试方式: 自动扫描检测,自动不良点判断。
测试辅助: 自我诊断测试功能、校正功能、循序测试功能端点搜寻、单端点测、多段线材测试功能,瞬断测试功能。
全自动氨基酸分析仪
全自动氨基酸分析仪A200-IC（A200-IC Chromatography System）全自动氨基酸分析仪全自动氨基酸分析仪技术参数一.全自动氨基酸分析仪: 具双用的锂盐体系和经济的钠盐体系独特锂盐体系兼作21种水解氨基酸和43种游离氨基酸，不更换柱子。
钠盐体系高效完成21种水解氨基酸分析，测定一次样品试剂成本约1元人民币。
水解氨基酸检测限全部≤1pmol，平均0.5pmol；平均分离度≥98%；保留时间重现性CV≤0.3%，峰面积重现性CV≤1%；试剂和能源消耗及排污量为同类仪器1/3 - 1/4二.全自动氨基酸分析仪、离子色谱分析浓度范围：ppb–ppm离子色谱检测限(质量数)：抑制电导法：阴离子Cl:0.02ng非抑制电导法：阳离子Li:0.05ng柱后衍生法：重金属离子0.1ng仪器线性：0.9990保留时间重现性：CV≤0.5%峰面积或峰高重现性：CV≤1%分离度：≥1.36分钟分析7种常规阴离子，10分钟分析EPA10种阴离子2分钟分析Ca-Mg；一次测定甜菜碱氯化胆碱和一价阳离子Cr(III)-Cr(VI) 连测；13种高价金属离子连测80余种离子色谱分析。
全自动氨基酸分析仪主要特点A200-IC Chromatography System 是一代新型氨基酸分析仪。
主要特点: 高灵敏度,高稳定性,高性价比,双梯度（浓度＋温度梯度〕分离，黑匣子自动记录技术，低耗，环保。
具迄今最好的氨基酸检测限:水解氨基酸检测限平均0.5pmol，游离氨基酸检测限平均2 pmol。
连续分析水解和游离氨基酸而无须更换体系。
在线化学除氨除氧过滤和脱气。
A200-IC 同时又是一代新型离子色谱仪。
借助氨基酸分析仪高度自动化的主机、高灵敏度紫外可见检测器和电导检测器，适合80余种离子自动分析。
仪器介绍一.A200-IC主机全自动氨基酸分析仪组成：含8流路电子监控高位试剂架；在线化学脱氨脱氧脱气和过滤四项保护装置；带制冷室的120位三维自动进样器；高精度钛合金微型高压输液泵；流路电磁阀；温度梯度用高级柱温炉；柱后高温反应器；二.A200-IC检测器全自动氨基酸分析仪：UV.Vis 紫外可见光度检测器：波长190-900nm，恒温检测池；具汞灯和钨灯双光源，极高的信/噪比和极低的检测限；双光路同时检测，可扫描光谱。
氨基酸分析基本原理和应用PPT讲稿
日立L-8900氨基酸分析仪
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（一）氨基酸分析仪的构成
• 1、输液单元（泵与管路）
• 2、进样单元（自动进样器）
• 3、分离单元（离子交换柱、柱温箱）
• 4、反应单元（反应柱、反应温度加热设备） • 5、检测单元（分光光度计）
• 缓冲液、样品、流路系统混入氨进可使
基线在碱性氨基酸出峰处将基线抬高， 影响碱性氨基酸分离效果和准确定量。
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（五）氧的影响
• 反应液中的茚三酮最忌氧，茚三酮氧化后
即变质失效，所以茚三酮购入后一定要妥 善保管，特别是不能在空气中长时间暴露。 缓冲液中的溶解氧也会对茚三酮显色效果 造成影响。
定量精确度 操作
氨基酸分析仪 30min 110min 95-98% 3pmol
CV≤1.0% 简单
HPLC 50min 135min
85% 100pmol
CV≤3% 复杂
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三、样品的制备
• （一）蛋白质的水解
• （二）游离氨基酸样品的制备
• （三）生理体液样品的前处理
现在您浏览的位置是第二十六页，共二十九页。
（六）光源的影响
• 光源不佳时，灵敏度会降低，到达规定
时间后该换就得换灯（使用期限以灯能 量为准）
现在您浏览的位置是第二十七页，共二十九页。
五、应用
• 氨基酸是组成蛋白质的基本单元，具有极
其重要的生理功能。氨基酸的检测分析广 泛应用于医学、农业、食品、医药、饲料、 化妆品等与人类生活和健康密切相关的几 大行业。
• 2、离子交换树脂
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精氨酸 Arg （R）10.76 天冬氨酸 Asp（D） 2.98 谷氨酸 Glu （E） 3.22 甘氨酸 Gly （G） 5.97 亮氨酸 Leu （L） 5.98 蛋氨酸 Met （M）5.75 脯氨酸 Pro （P）6.30 苏氨酸 Thr （T）6.53 酪氨酸 Tyr （Y）5.65 异亮氨酸 Ile （I）6.02
日立 L-8900 氨基酸自动分析仪
内容
氨基酸相关内容介绍 氨基酸分析仪发展及生产厂家 氨基酸分析仪原理及相应部件 样品的制备 应用 常见故障的分析与处理 保养
一 氨基酸相关内容介绍
氨基酸（amino acid）：含有氨基和羧基的一类有机化合物的通 称。是生物功能大分子蛋白质的基本组成单位，是构成动物营养 所需蛋白质的基本物质。
离子交换树脂
专用氨基酸分析仪的色谱柱主要是以磺酸型强酸性阳离子交换 树脂为柱填料。强酸型阳离子交换树脂，它是由苯乙烯和二乙 烯苯聚合而成的。该树脂是由苯乙烯和二乙烯基本聚合后磺化 而成，球状树脂的粒度一般在5-10μm之间，交联度多为8%12%。
交联度大，树脂的网状结构紧密，孔隙度小，对外界离子进入 树脂有阻碍作用，较大的离子根本不能进入树脂内部，这样就 可以提高树脂对离子的选择性。交联度大的适合用于分子量较 小的氨基酸分离；交联度小，树脂结构疏松，孔隙度大，适合 用于蛋白质、肽类的分离。
氨基酸的化学性质
氨基酸分子中都具有氨基和羧基，因此它们都能产生氨基与 羧基的一般反应，如脂化、甲基化、乙酰化以及酸碱的中和 作用等。有些氨基酸由于存在其它基团而产生特殊反应，如 半胱氨酸的巯基（-SH）
茚三酮反应
茚三酮溶液与氨基酸共热，生成氨。氨与茚三酮和还原性茚三酮 反应，生成紫色化合物。该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成 正比，可通过测定570nm处的光密度，测定氨基酸的含量。
4.提高流动相pH值，氨基酸正电荷减少，吸附力减弱，最后从离子交换柱 上洗脱下来，洗脱顺序是酸性和带羟基氨基酸、中性氨基酸、碱性氨基酸。
5.氨基酸标准溶液中各种氨基酸在氨基酸自动分析仪上被洗脱的顺序一定， 标准液各种氨基酸的浓度一定，洗脱峰的面积一定，由此可计算出样品中 各种氨基酸的含量。
通常细分为两种系统：蛋白水解分析系统（钠盐系统）和游离氨基酸 分析系统（锂盐系统），利用不同浓度和pH值的柠檬酸钠或柠檬酸 锂进行梯度洗脱。其中钠盐系统一次最多分析约25种氨基酸，速度较 快，基线平直度好；锂盐系统一次最多分析约50种氨基酸，速度较慢， 基线一般不如钠盐系统好。
含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物 氨基连在α-碳上的为α-氨基酸 组成蛋白质的氨基酸均为α-氨基酸
组成蛋白质的 20 种氨基酸除甘氨酸外，都有一个不对称碳原子，即α-碳原子。 α-碳原子有四个不同取代基：羧基、氨基、氢原子和 R 基团，不同氨基酸的 R 基团不同。 每种氨基酸有 D -构型和 L -构型，天然蛋白质中的氨基酸都是 L- 构型。 广泛存在于食品、药品、水产品、饲料和体液（血液、尿样）
氨基酸在溶液中受溶液 pH 的影响存在着下列平衡
等电点（pI）：在某一 pH 的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴 离子的趋势或程度相等，成为兼性离子，呈电中性，此时溶液 的pH成为该氨基酸的等电点。
不同氨基酸等电点
丙氨酸 Ala （A）6.02 天冬酰胺 Asn （N）5.41 半胱酰酸 Cys （C）5.02 谷氨酰胺 Gln （O）5.65 组氨酸 His （H）7.58 赖氨酸 Lys （K）9.74 苯丙氨酸 Phe （F）5.48 丝氨酸 Ser（S）5.68 958年 stein 与moore 两人先后独立发明离子交换分离、茚三 酮柱后衍生氨基酸自动分析仪。基于阳离子交换柱分离、柱后 茚三酮衍生、光度法测定的离子交换色谱法（IEC）， 1972年 stein 与moore 两人同获诺贝尔奖。 IEC是当今国际标准和国 家标准以及仲裁和涉外的方法 。
氨基酸的分离分析
特殊沉淀法 离子交换法 萃取法 毛细电渗析
离子交换法分离分析氨基酸的原理
根据氨基酸是两性电解质这一特性，以及目的氨基酸与 杂质氨基酸 pK、pI 值的差异，利用离子交换树脂对各 种氨基酸吸附能力的不同进行分离纯化。
二 氨基酸分析仪发展及生产厂家
氨基酸分析仪进入国内市场已有近三十年的历史，它是专用于 测定蛋白质水解液（水解氨基酸）及生理体液中（游离氨基酸） 混合氨基酸含量的一种专用仪器，现已广泛应用于各行各业。 它与其他分析仪器区别在于只能检测氨基酸，不能作为他用， 具有专一性。
氨基酸分析仪洗脱过程
1. 氨基酸在pH 2.2的条件下都带正电荷，在阳离子交换树脂上均被吸附， 但结合强度各不相同。
2. 随着缓冲液在离子交换柱上流动，氨基酸不断的被吸附、解吸附。由于 氨基酸性质的差异（酸碱性、极性、分子大小），吸附强度有差异。
3. 不同氨基酸与离子交换树脂的亲和力不同：碱性氨基酸＞芳香族氨基酸 ＞中性氨基酸＞酸性氨基酸及羟基氨基酸。
氨基酸分析仪生产厂家及常见型号
日立氨基酸分析仪发展历史
三 氨基酸分析仪原理及相应部件
氨基酸分析仪基本分析原理：
各种蛋白质是由20种氨基酸首尾相连，并以一定的顺序组成肽链。用 水解的方法将肽链打开，形成单一的氨基酸进行分析。所有的氨基酸 在低pH值的条件下都带有正电荷，在阳离子交换树脂上均被吸附，但 吸附的程度不同，碱性氨基酸结合力最强、其次为芳香族氨基酸、中 性氨基酸、酸性氨基酸结合力最弱。按照氨基酸分析仪设定的洗脱程 序，用不同离子强度、pH值的缓冲液依次将氨基酸按吸附力的不同洗 脱下来（先酸性氨基酸再中性氨基酸最后碱性氨基酸），被洗脱下来 的氨基酸与茚三酮反应液在加热的条件下反应（135度），生成可在分 光光度计中570nm和440nm检测到的蓝紫色物质（仲氨生成浅黄色物 质440nm检测），外标法定量。