高效液相色谱分析方法开发PPT幻灯片课件

流动相的调整“秘诀”
秘诀2 三倍规则
每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量， 保留因子约增加3倍，此为三倍规则。这是 一个聪明而又省力的办法。调整的过程中， 注意观察各个峰的分离情况。
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流动相的调整“秘诀”
秘诀3 粗调转微调
当分离达到一定程度，应将有机溶剂 10%的改变量调整为5%，并据此规则 逐渐降低调整率，直至各组分的分离 情况不再改变。
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流动相的Βιβλιοθήκη Baidu整“秘诀”
秘诀4 更换流动相的组成
在第三步，我们已经基本上得到了一个合适的 保留因子，如果还有一些组分的分离情况不好， 则应考虑更换流动相的组成(如有机溶剂类型的 改变、pH值的改变或是加入离子对试剂，等等)， 或者，索性改变固定相的类型。
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HPLC 分析方法开发
分析方法开发三步骤
选择合适的色谱柱(固定相)和流动 相，得到合理的保留时间
调整选择性以及各个色谱峰的分离度
调整流速、填料粒径、色谱柱规格(长度及内径) 以获得最佳的分离
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开发分析方法的规则
•合适的保留因子k (k值1-20)是获得满意分离的基础
保留因子 k=(tR-tM)/tM
•用以下“秘诀”可以使您的开发过程更加简便、快 速
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揭秘--------选择合适的起始条件
选用通用的色谱柱
一般直接选用C18(或C8) 5um 12.5, 15, 25cm 长的色谱柱
不同的样品不同的思路
选择流动相
中性化合物无需调整流动相的pH值；而对于含有带电基团的 化合物，则需要用缓冲溶液调整流动相的pH值；有时需要 采用离子对反相色谱
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色谱柱的调整
最后
根据操作压力、出峰时间、分离度 来调节色谱柱的长度、粒径以及 流动相流速，
从而
获得最佳的分离
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甲醇/水或乙腈/水(依据个人习惯而定)
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流动相的调整“秘诀”
秘诀1
试验， 调
由强到弱
一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行 这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况 整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
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