实验一大肠杆菌的分离和培养培训课件

实验材料：
(1)50mlLB液体培养基：蛋白胨0.5g、酵母提取物0.25g、 NaCl 0.5g、加水50ml。
(2)大肠杆菌菌种斜面 (3)空白斜面
实验一大肠杆菌的分离和培养
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实验步骤
• (1) 灭菌：将配制好的50mlLB液体培养基和50mlLB液体 培养基分别装入两个250ml
• 的三角瓶中，加上封口膜，用高压锅进行灭菌。
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(三)无菌技术
• 1、获得纯净培养物的关键: 防止外来杂菌的入侵 • 2、无菌技术 的四个方面(参看教材20页) • 3、消毒与灭菌 (1)消毒： ① 概念：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体
表面或内部一部分对人体有害的微生物。包括芽孢 和孢子吗？ (不包括芽孢和孢子) ② 方法: a. 煮沸消毒法 b. 巴氏消毒法:如牛奶的消毒 c. 化学药剂消毒:酒精、氯气、石碳酸、煤酚皂溶液等 d. 紫外线消毒
b. 干热灭菌 160－170℃ ；1－2h
能耐高温的需要保持干 燥的物品( 玻璃器皿)
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c.高压蒸汽灭菌 100kPa 121℃ 15-30min
通常用于培养基的灭菌
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二、实验操作 • （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
• 计算－称量－溶化－灭菌－倒平板
• （二）分离纯化大肠杆菌
• (5)单菌落接种培养：在无菌操作下将单菌落用接种环取 出，再用划线法接种在空白斜面上，在37℃下培养24h, 4℃冰箱保存。
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单菌落
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实验讨论 实验完成后，接触过细菌的器皿应如何处理？
• 实验完成后，所有接触过细菌的器皿都必须 先高压灭菌后再洗涤，特别是培养基，有可 能被有害菌体污染，在培养繁殖后，大量有 害菌体影响人畜健康，也污染环境，因此必 须高压灭菌。使用后的废弃物也要高压灭菌 后再抛弃。对于取样器的取样头，通常是灭 菌后在超声波清洗器中加洗衣粉洗涤纶30 min ,再用清水洗净，仍可再用。封口膜也可 再用。
病毒
细菌
2.微生物包括五类 放线菌
真菌
原生动物
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(二)培养基
• 1.分类(按物理形态分)
• (1)液体培养基
• (2)固体培养基
①常用的固体培养基: 琼脂固体培养基.
②微生物在固体培养基 表面生长,可以形成 肉眼可见的菌落.
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2.培养基内所含的基本物质
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• 接种方法有：
• 划线分离法和涂布分离法
• （三）将接种后的培养基和一个未接 种的培养基放入37℃恒温箱中培养12h 和24h后，观察并记录
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实验1：大肠杆菌的培养和分离
设备及用品：
灭菌锅或高压锅、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈、 直径90mm的培养皿、接种环和玻璃三角刮刀、恒温培 养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性塑料手套、装有 酒精棉球的广口瓶、镊子、有棉塞的试管 （15mm×120mm）5支
实验一大肠杆菌的分 离和培养
实验目的：
• 1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基 进行细菌培养的操作。
• 2.进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养 基本进行细菌的划线培养。
• 3.说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。
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一、基础知识 • (一)微生物:
1.特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要 用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没 有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光 合作用.
• (1)水 • (2)碳源 • (3)氮源 • (4)无机盐
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3.培养基内所需的其他条件 • (1)pH值 • 如:培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或微碱
性
• (2)特殊营养物质---- ? 生长因子
• 如：培养乳酸杆菌需要在培养基中添加维生 素
• (3)氧气的含量 • 如:培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件
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（2）灭菌
① 概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的 微生物，包括芽孢和孢子。
② 方法：a 灼烧灭菌 b 干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌
a.灼烧灭菌
注意适用范围
微生物的接种工具 (接 种环、接种针)或其 他金属用具直接在火 焰的充分燃烧层灼烧
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• (2) 制平板：在酒精灯火焰旁将固体培养基分别倒在4个 培养皿中，使培养基铺平皿底部，待凝，使之形成平面。
• (3)接种扩大培养：靠近酒精灯火焰将大肠杆菌接种到三 角烧瓶的液体培养基中，三角烧瓶在37℃摇床振荡培养 12h。
• (4) 划线分离：将摇床上培养12h的菌液在固体培养基的 平板上连续划线，然后将盖好的培养皿倒置，放在37℃ 恒温培养箱中进行培养。