最新1氨基酸的分离---纸层析法汇总

合集下载

(2023)纸层析法分离氨基酸实验报告(一)

(2023)纸层析法分离氨基酸实验报告(一)实验报告：纸层析法分离氨基酸实验目的通过纸层析法分离并鉴定氨基酸的类型及其浓度。

实验原理纸层析法是一种简单的分离技术，它的分离原理就是根据溶液成分在固定相上的不同运移速度而分离出各种化合物的方法。

氨基酸属于碱性氨基酸、酸性氨基酸和非极性氨基酸三类，它们在纸层析上的运移速度不同，可以通过将样品施加到起始线处，用溶剂上升将样品分离成单独的氨基酸，从而鉴定氨基酸的类型和浓度。

实验步骤1.准备好样品；2.准备纸层析板和移层溶剂；3.在纸层析板上留下起始线处，将样品点于起始线上；4.将纸层析板浸泡在移层溶剂中，注意不要使样品触及移层溶剂；5.待溶剂上升至足够高处后将纸层析板取出晾干；6.可选择用氨基酸定性试剂对氨基酸进行鉴定。

实验结果经过实验，分离出了6种氨基酸，它们是： 1. 苯丙氨酸 2. 丝氨酸3. 脯氨酸4. 缬氨酸5. 赖氨酸6. 天冬氨酸结论纸层析法是一种常用的分离技术，适用于分离和鉴定氨基酸等化合物。

通过本次实验，我们了解了氨基酸在纸层析上的运移规律，并成功地分离出了样品中的6种氨基酸。

实验分析在实验中，我们使用纸层析法分离鉴定了氨基酸。

纸层析法是一种简便易行的分离方法，常用于生物学和化学研究中。

它的原理是利用固定相吸附和液态相洗脱分离成分，从而实现混合物分离和提纯的过程。

氨基酸是构成蛋白质的基本单位，其种类丰富，具有重要的生物学和化学意义。

氨基酸的分离和鉴定对于深入研究生命科学和化学领域的相关问题具有十分重要的意义。

在实验中，我们采用纸层析法将溶液中的氨基酸分离开来。

由于氨基酸的不同极性和分子大小不同，它们在纸层析中的运移速度存在较大差异，可以通过纸层析进行分离。

在实验中，我们通过将氨基酸样品点于纸层析板上的起始线处，并将其浸泡于移层溶剂中，利用溶剂的上升，将氨基酸分离开来。

实验不足与改进在实验过程中，我们虽然成功地分离出了样品中的氨基酸，但存在一定的不足。

氨基酸的分离鉴定纸层析法

氨基酸的分离鉴定纸层析法引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于生物体的正常生理功能至关重要。

因此，准确地分离鉴定氨基酸成分对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。

纸层析法是一种简单而有效的分离和鉴定氨基酸的方法。

本文将介绍氨基酸的分离鉴定纸层析法并探讨其应用。

一、纸层析法的原理纸层析法是利用气相平衡原理进行物质分离的一种方法，其原理是根据物质在纸上各组分的相对亲疏性，通过运动距离的差异来分离物质。

在氨基酸的分离鉴定中，纸层析法通过将待测氨基酸溶液滴于纸上，然后将纸立起来，将纸的下端浸入相应的溶剂中，使得溶剂上升，通过毛细作用将氨基酸上提，最终实现氨基酸的分离和鉴定。

二、纸层析法的步骤1. 准备工作：制备纸层析板和显色剂。

2. 样品处理：将待测氨基酸溶解于适量的溶剂中，使其浓度适宜，然后滴于纸层析板上。

3. 运行纸层析：将纸层析板立起，纸的下端浸入相应的溶剂中，待溶剂上升到一定高度后，取出纸层析板。

4. 显色：将纸层析板放置于显色剂中，通过氨基酸与显色剂的反应，使得氨基酸在纸上显色。

5. 结果鉴定：根据显色的位置、颜色和强度等特征，对氨基酸进行鉴定和定量分析。

三、纸层析法的应用1. 氨基酸组成分析：纸层析法可用于分析蛋白质中氨基酸的组成，从而揭示蛋白质的结构和功能。

2. 质量控制：纸层析法可用于对食品、药品等中氨基酸含量的快速检测，保证产品质量和安全性。

3. 生物体内氨基酸代谢研究：纸层析法可用于研究生物体内氨基酸的代谢途径和代谢产物。

四、纸层析法的优缺点纸层析法作为一种常用的分离和鉴定氨基酸的方法，具有以下优点：1. 简单易行：操作简单，不需要复杂的仪器设备，成本低廉。

2. 分离效果好：对于氨基酸的分离效果较好，可以得到较为准确的结果。

3. 易于观察：通过显色剂的反应，可以直观地观察到氨基酸在纸上的分离和鉴定结果。

然而，纸层析法也存在一些缺点：1. 分离效果有限：对于某些结构相似的氨基酸，纸层析法的分离效果不佳，难以实现准确鉴定。

氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告(1)

氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告(1)氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告一、实验目的通过纸层析法将混合氨基酸分离并鉴定其种类及含量。

二、实验原理纸层析法的原理是根据化合物的物理化学性质在纸质或硅胶薄层中移动的速度不同，从而实现对混合物中各种物质的准确分离。

对于氨基酸而言，其分子结构均包含有羧基和氨基，因此都是具有弱酸和弱碱性的。

通过没食子酸和氯化钠的混合缓冲液，可使氨基酸在纸层析板上逐渐向上移动，从而实现了混合氨基酸的分离。

三、实验步骤1. 准备滤纸、混合氨基酸标准溶液、混合缓冲液、酸性洗涤液、碱性洗涤液及定量分装棒。

2. 在滤纸的底端画一个以棕色标识的线，表示样品的注入位置。

3. 用定量分装棒把混合溶液从注入位置滴入滤纸中，约需滴入 5 μl。

4. 将悬浊液放在平台上，加入具有吸附性但不溶于缓冲液的薄层纸片，等待它变成透明状态。

5. 将滤纸放入盒中，使其完全覆盖盒底，并加入混合缓冲液。

6. 等待溶液上升至顶端时立即取出滤纸，并在溶液升至预定高度后标注液位高度。

7. 筛选并选择相应的染色剂将其喷在纸层析板上，以便于观察分离效果。

四、实验分析通过对实验纸层析图的分析，可以确定混合溶液中所含有的氨基酸种类及各种氨基酸的比例。

在该纸层析图上，靠近底部的区域标示着杂质的位置，应当忽略不计。

通过纸层析图，我们得到了以下氨基酸的分离和鉴定结果：1. Alanine（6μg）2. Leucine（4μg）3. Isoleucine（3μg）4. Phenylalanine（1μg）5. Tyrosine（1μg）六、实验结论通过实验结果表明，纸层析法能够成功地将混合溶液中的氨基酸分离，并且通过染色剂的辅助，可以更加清晰地看到氨基酸的分散情况。

此外，通过对实验结果的分析，我们可以得出混合溶液中所含有的各种氨基酸的种类及含量，为进一步的实验提供了帮助和指导。

氨基酸纸层析法

氨基酸纸层析法氨基酸纸层析法（paper chromatography of amino acids）是一种常用的分离和鉴定氨基酸的方法。

本文将详细介绍氨基酸纸层析法的原理、步骤、实验条件和数据处理方法等内容，以帮助读者更好地了解并应用这一实验技术。

一、氨基酸纸层析法的原理氨基酸纸层析法是利用氨基酸在纸上的分布系数和溶剂的渗透速度差异进行分离的方法。

其原理是在一根滤纸条上画上水平的线，将待测的氨基酸溶液直接点于纸条上，待溶液中的氨基酸离子在滤纸上沿渗透液前进，不同氨基酸在滤纸上的迁移速度不同，从而实现氨基酸的分离和测定。

二、氨基酸纸层析法的步骤1. 实验前准备（1）准备氨基酸样品，将其溶解在适当的溶剂中，并使用pH 计调节至适当的酸碱度。

（2）准备滤纸条，按照实验需要确定滤纸的宽度和长度。

（3）准备层析槽，将槽中的溶剂预先与上盖采光纸取代，避免有光照射到。

2. 进行层析实验（1）在滤纸条上绘制水平基线，并将标记的点分开，便于后续氨基酸的测定。

（2）将氨基酸溶液直接点于滤纸条上，点的位置要尽量靠近基线，以避免扩散的影响。

（3）将纸条的一端浸入含有适当溶剂的层析槽中，保持溶剂的面平稳。

（4）待溶液中的氨基酸在滤纸上渗透，不同氨基酸迁移的距离不同，最终在纸条上形成清晰的色斑。

（5）将纸条取出，用热风干燥，然后在紫外灯下进行观察和记录。

3. 数据处理将滤纸上的色斑分别用铅笔勾画出来，并测量它们与基线之间的距离。

然后，根据距离之间的比例关系来计算氨基酸在纸上的迁移速度，并与标准曲线进行比较，从而得出待测氨基酸的浓度。

三、氨基酸纸层析法的实验条件1. 溶剂体系常用的溶剂体系有正丙醇/ 乙酸/水 = 4:1:5、正丙醇/氨水/水 = 70:2:25等，需要根据实验需要确定溶剂的组成和比例。

2. 滤纸条的准备常用的滤纸有菱形滤纸和圆形滤纸，需要根据所需分离的氨基酸种类和数量决定滤纸的大小。

3. 实验条件实验应在干燥、通风的环境中进行，避免光照和温度过高。

氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告

氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告一、实验目的1、掌握纸层析法分离和鉴定氨基酸的基本原理和操作方法。

2、学习如何根据氨基酸在层析纸上的迁移率（Rf 值）来鉴定氨基酸。

二、实验原理纸层析法是以滤纸作为惰性支持物的分配层析法。

滤纸纤维上的羟基具有亲水性，能吸附一层水作为固定相，而有机溶剂作为流动相。

当有机相沿滤纸经过样品点时，样品点中的溶质在水和有机相之间进行分配。

由于不同的氨基酸在两相中的分配系数不同，导致它们在滤纸上的迁移率不同，从而实现分离和鉴定。

Rf 值（比移值）是氨基酸在层析中的特征值，计算公式为：Rf ＝溶质移动的距离／溶剂移动的距离。

三、实验材料与仪器1、实验材料标准氨基酸溶液：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸。

混合氨基酸溶液。

展开剂：正丁醇：冰醋酸：水＝ 4:1:5（体积比）。

显色剂：025%茚三酮溶液。

2、实验仪器层析缸。

毛细管。

喷雾器。

烘箱。

直尺。

四、实验步骤1、准备滤纸选用一张大小合适的滤纸，在距底边 2cm 处用铅笔轻轻画一条横线，作为起始线。

2、点样用毛细管分别吸取标准氨基酸溶液和混合氨基酸溶液，在起始线上轻轻点样，每个点的直径不超过 2mm，点样后自然风干。

3、层析将滤纸垂直放入装有展开剂的层析缸中，滤纸下端浸入展开剂约1cm，注意滤纸不要与缸壁接触，盖上盖子，进行层析。

当展开剂前沿上升至距滤纸顶端约 1cm 时，取出滤纸，用铅笔标记展开剂前沿的位置，自然风干。

4、显色用喷雾器将显色剂均匀地喷在滤纸上，放入烘箱中，在 80℃左右烘 5 10 分钟，直至斑点显色清晰。

五、实验结果与分析1、测量并计算 Rf 值用直尺分别测量标准氨基酸和混合氨基酸斑点中心到起始线的距离（a）以及展开剂前沿到起始线的距离（b），计算 Rf 值。

2、结果分析根据计算得到的 Rf 值，对照标准氨基酸的 Rf 值，鉴定混合氨基酸溶液中的成分。

六、注意事项1、点样时要避免毛细管的尖端刺破滤纸，且点样量要适中，过多会导致斑点扩散，影响分离效果。

氨基酸的分离鉴定——纸层析

氨基酸的分离鉴定——纸层析氨基酸是构成蛋白质的基本单元，其在生物体内的作用极为重要。

因此对氨基酸的分离和鉴定具有重要的研究意义。

纸层析是一种常用于分离和鉴定氨基酸的方法。

其原理是利用氨基酸在纸层析板上的运动速度不同，根据氨基酸之间的相互作用，分离出各种氨基酸。

实验步骤：1. 纸层析板的制备将一张高分子量纸，如Whatman No.1滤纸，剪成所需要的大小，并用铅笔在纸上画出氨基酸移行的标线。

2. 氨基酸样品的制备将所需的氨基酸样品溶解在适量的水中，浓度应为0.2-2%。

3. 样品的上样将氨基酸溶液利用微量注射器沿着标线往上移行。

在上样后，将纸层析板放在带有盖子的玻璃罩中，罩中放置一些饱和度为70%的异丙醇-水溶液，保持相对湿度为70%，使其充分展开。

5. 鉴定氨基酸将经过分离的氨基酸溶液阴性反应的氨基酸用二乙酰胺-丙酮混合溶液鉴定。

将0.2ml 二乙酰胺-丙酮混合溶液加入几滴氨基酸样品中，加热60℃-80℃，5分钟。

加入0.1ml氯仿，振荡混合，分离出上清液，上清液加入干燥瓶中，用喷雾器喷洒Ninhydrin试剂，加热于热水中1分钟，在冷水中快速降温附着氨基酸的部位呈现紫色。

注：二乙酰胺-丙酮混合溶液的组成为45%二乙酰胺，45％丙酮和10%水。

6. 结果的解释根据氨基酸在纸层析板上的运动速度和比色反应的颜色，确定样品中的氨基酸种类及含量。

优点：纸层析方法简便易行，无需昂贵的仪器设备，适用于小样品分析，能分离不同种类的氨基酸，并且结果清晰，操作简单。

限制：纸层析分离结果受到氢键作用和酸碱度等因素的影响，需要控制好上样的数量和浓度。

此外，纸层析无法分离胶原氨基酸和类似结构的氨基酸，且鉴定结果在颜色和色谱图谱方面有些模糊。

1 氨基酸的分离---纸层析法

【实验步骤】
1、配扩展剂：正丁醇：冰醋酸：水= 20ml ：5ml ：15ml 顺序：正丁醇→冰醋酸→水，放入分液漏斗中，充分混匀。静置约10min后分层，放出下层水层，其余的倒入培养皿中。
2. 准备滤纸
取一张层析滤纸，距纸底边2cm处用铅笔划一横线，沿线每隔2.5cm作一记号为点样处，点样处也不要太靠近两侧边（约距1.5cm），会产生边缘效应。
3.点样
用毛细管依次吸取标准品氨基酸和混合样，吸管与滤纸垂直，轻轻接触纸面，样品扩散直径小于3mm。一滴滴完后用冷风吹干，再点第二次，共点三次。
4.扩展
将点完样的滤纸两侧面对齐，用针线缝合，纸的两边不能接触。将点样后的滤纸直立于培养皿的
扩展剂中，（点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线1 cm ）当溶剂展层至滤纸上沿2-3cm处展层结束，取出滤纸。用铅笔画
【结果分析与讨论】【思考题】
通过本次实验，讨论下列问题：（1）简述纸层析的原理。（2）判断氨基酸极性大小顺序，讨论AA极性与Rf的关系？（3）什么是Rf值？影响的主要因素是什么？
下周实验：脂质的薄层层析（405实验室）每组清洗一块玻璃板，置于烘箱中备用。
6、缝合时，滤纸的两个纸边不能相互接触并且底边应对齐，点样线一面滤纸朝外。 7、点样时，样品扩散圈不能过大，直径小于 3mm。 8、使用移液管时应右手拿管，左手拿吸耳球并用食指堵管口。 9、使用移液管时，应先看清管的最大刻度，每一格代表多少后再量取。
10、 15ml水是用蒸馏水，在水槽边的大玻璃瓶中。 11、实验结束请清洗实验玻仪，但不要清洗展层缸及其中的培养皿。 12、有机废液倒入右侧实验台上的“废液收集有机溶剂”大试剂瓶中。 13、实验结束, 回收竹夹子、A4复印纸、电吹风。 14、实验报告要写同组同学号数、名字，层析滤纸贴在其中一位同学的实验报告上。 15、坐椅推入实验台下，空出过道。

氨基酸的分离纸层析法

增加实验次数
综合多种方法
通过增加实验次数，可以降低实验误差，提高分离效果的可靠性。
可以结合其他分离方法如电泳、高效液相色谱等，以提高氨基酸的分离效果。
05 结论
纸层析法在氨基酸分离中的应用价值
高效分离
纸层析法能够将氨基酸进行高效分离，具有操作简便、分离效果好的
优点。
成本低廉
纸层析法所需材料成本较低，适合大规模分离操作，降低了生产成本。
定型方法
选择适当的定型方法，如自然晾干、加热或使用定型剂等，以固定氨基酸的位置并保持其稳定性。
04 实验结果分析
分离效果的评价
分离度
通过比较不同氨基酸的迁移距离，可以评估分离效果。分离度越大，说明氨基酸之间的分离越完全。
分辨率
分辨率是评价纸层析分离效果的重要参数，它反映了氨基酸在层析图谱中的清晰程度。分辨率越高，层析图谱越清晰。
02 纸层析法的基本原理
纸层析法的分离原理
纸层析法是一种基于不同物质在固定相和流动相之间分配系数差异的分离技术。在纸层析法中，固定相是纸上的纤维素，流动相是展开剂。当流动相携带待分离物质通过固定相时，由于分配系数不同，不同物质在固定相和流动相之间发生分离。
氨基酸在纸层析法中的分离是基于它们的极性、相对分子质量和其它物理化学性质的差异。极性较弱的氨基酸在流动相中的溶解度较大，移动较快；极性较强的氨基酸在固定相中的溶解度较大，移动较慢。
疾病诊断和治疗
某些氨基酸的缺乏或过量与某些疾病有关，检测氨基酸水平有助于疾病的诊断和治疗。
纸层析法的简介
定义
应用
纸层析法是一种基于滤纸的层析技术，用于分离和鉴定混合物中的组分。
纸层析法广泛应用于生物、化学和医学领域，用于分离和鉴定各种化合物，如氨基酸、糖类、脂类等。

实验十二氨基酸的分离鉴定-纸层析法

原到析心距点层中的离 = 原到剂沿距点溶前的离
实验步骤: 三.实验步骤实验步骤
1. 扩展剂的制备
20ml正醇丁 15ml → →分液漏斗充分振→ 5ml冰酸醋
取上层（油层）扩展剂 5ml→层析缸→密闭，备用 → 静置分层→ 下层（水层）弃掉 →
2. 纸层析操作纸层析操作:
取层析滤纸,并画一条底线用铅笔取层析滤纸并画一条底线(用铅笔并画一条底线用铅笔) 直线每隔１作标用点样器点样直线每隔１cm作标记缝线成筒状扩展至上升 9~11cm 取出滤纸, 取出滤纸并用铅笔描前沿线吹干喷茚三酮吹干显色计算Rf值计算值
实验十三氨基酸的分离鉴定 --------纸层析法纸层析法
一.实验目的实验目的: 实验目的通过氨基酸的分离,学习纸层析法的基本原理及操作方法
二.实验原理实验原理: 实验原理
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法.不同的氨基酸在滤纸上的移动速度不同,最终层析的位置也不同,从而可根据这个位置来确定各类氨基酸的比移值Rf. Rf
四.数据记录及处理
1. 原点到溶剂前沿的距离a= 2.原点到层析点中心的距离b=
五. 分析讨论

氨基酸的分离鉴定—纸层析法

（3）规划：带上手套，取宽约10cm、高约15cm的层析滤纸一张。在纸的下端距边缘2～3 cm处轻轻用铅笔划一条平行于底边的直线A，在直线上做4个记号，记号之间间隔2cm，这就是原点的位置。另在距左边缘1cm处画一条平行于左边缘的直线B，在B线上以A、B两线的交点为原点标明刻度（以厘米为单位），参见下图。
2)、氨基酸溶液0．5％的赖氨酸、脯氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液(各组份浓度均为0．5％)各配置5mL。
3)、显色剂50～100mL 0．1％水合茚三酮正丁醇溶液。
【实验步骤】
（1）检查培养皿是否干燥、洁净；若否，将其洗净并置于干燥箱内120℃烘干。
（2）平衡：剪一大块塑料薄膜铺在桌面上，将层析缸或大烧杯到置于塑料薄膜上，再把盛有约5mL展层溶液的小烧杯置于倒置的层析缸或大烧杯中，用塑料薄膜密封起来，平衡20min。
【注意事项】
⑴.点样时要避免手指或唾液等污染滤纸有效面(即展层时样品可能达到的部分)。
⑵.点样斑点不能太大，防止层析后氨基酸斑点过度扩散和重叠，且点样后吹风温度不宜过高，以免样品变性(斑点发黄)。
⑶.展层开始时切勿使样品点浸入溶剂中。
⑷.展层剂要临用前配制，以免发生酯化，影响层析结果。
⑸.如果样品中溶质种类较多，且某些溶质在某一溶剂系统中的Rf值十分接近时，单向层析分离效果不佳，则可采用双向层析，即将样品点在一方形滤纸的角上，先用一种溶剂系统展层。滤纸取出干燥后，再将滤纸转90度角，用另一溶剂系统展层。所得图谱分别与这两种溶剂系统中作的标准物质层析图谱对比，即可对混合物样品中各成分进行鉴定。
在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与被测物的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用单向纸层析法分离氨基酸。

实验一氨基酸的分离鉴定纸层析法

5
实验报告
实验报告是学生实验研究结果的记录和总结，同时也是评价学生实验课成绩的重要依据。
实验报告的格式：一、实验目的二、实验原理三、仪器和试剂四、实验方法与步骤五、实验结果与分析六、讨论、心得
注意讨论部分不是对结果的重述，而是实验结果、实验方
法和实验异常结果的分析和讨论，以及对实验设计的认识、体会及建议。
7
基础生物化学实验课评分标准
实验课中迟到或早退者其实验过程成绩须扣分。无故不做实验的学生其实验项目成绩评为零分。实验课缺勤超过1/3的学生其实验总成绩评为不及格。在规定的时间内不能按时交实验报告的学生其实验报告成绩须扣分。实验成绩占基础生物化学考试成绩的20℅。
8
实验一氨基酸的分离鉴定（纸层析法）
【实验目的】
通过实验，掌握纸层析法的一般原理和操作技术。掌握纸层析法分离鉴定氨基酸的一般过程。
9
【实验原理】
层析技术是一种物理的分离方法，利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两相中，其中一相为固定相，另一相流过此相称作流动相，并使各组分以不同速度移动，从而达到分离的目的。可分离物质糖类、有机酸、氨基酸、核苷
12名称操作方式固定相流动相分离依据分配层析纸层析薄层层析液体液体溶解度离子交换层析离子交换柱层析固体液体带电性静电引力吸附层析吸附薄层层析气体吸附层析固体液体气体吸附力亲合层析酶与底物抗原与抗体固体液体配体专一性凝胶层析凝胶过滤固体液体分子大小实验原理实验原理层析的分类层析的分类13分配层析分配层析是利用不同物质在两种不相溶的溶剂中的分配系数不同而达到分离的一种技术
15
【仪器和试剂】
实验仪器
1.电热鼓风干燥箱 2.培养皿、青霉素小瓶、毛细管、小型喷雾器 3.层析滤纸、滤纸芯

1、氨基酸的分离鉴定--纸层析法

实验一：氨基酸的分离鉴定--纸层析法一、目的：通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。

二、原理：层析法也叫色谱法，是一种物理分离方法，它是利用混合物中各组分的物理、化学性质的差异，使各组分以不同的程度分布在两个相中，其中一个相为固定相，另一个相则流过此固定相（称流动相）并使各组分以不同的速度移动从而达到分离。

层析法是近代生物化学最常用的分析方法之一，运用这种方法可以分离性质极为相似而用一般化学方法难以分离的各种化合物。

如各种氨基酸、核苷酸、糖、蛋白质等。

层析法有许多种类，根据分离所依据的理化性质不同，可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。

纸层析是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗生素等物质的一中分离分析工具。

纸层析属于分配层析法。

分配层析法是一种连续抽提法，利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数的不同而得到分离。

纸层析以滤纸作为惰性支持物，滤纸纤维素上的羟基具有亲水性，能吸附一层水，把吸附在滤纸上的水作为固定相，展层用的有机溶剂为流动相。

水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相：由于纤维素上的羟基具有亲水性，和水以氢键相连，使这部分水不易扩散，所以能与跟水混合的溶剂仍然形成类似不相混合的两相。

当有机相沿纸流动经过层析点时，层析点上的溶质就在水相和有机相之间进行分配，有一部分溶质离开原点随有机相而进入无溶质的区域，这时，又重新分配，一部分溶质从有机相进入水相。

当有机相不断流动时，溶质就沿着有机相流动的方向移动，不断分配。

溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。

纸上层析法的一般操作是将混合物点到纸上，干后让溶剂从有样品的一端经毛细作用流到纸的另一端。

在密闭的容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向反复抽提，由于混合氨基酸在两相中的分配系数（当把一种物质在两种不相溶的溶剂中振荡时，它将在这两相中不均匀分配。

氨基酸的分离鉴定——纸层析法

三、操作 1、将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。 2、取层析滤纸（长18—20厘米，宽14厘米）一张。在垂直于纸的纹路一端距边缘2—3厘米处用铅笔划一条直线，在此直线上每间隔2厘米作一记号，作为点样位置，并用铅笔在点样点下端写出所点氨基酸的名称。 3、点样用毛细管将各氨基酸样品分别点在这5个位置上，干后再点一次，共点三次。每点在纸上扩散的直径，最大不超过3mm。 4、扩展用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。将盛有约20 mL扩展剂的培养皿迅速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中(点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线1 cm)。待溶剂上升15―20 cm时即取出滤纸，铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机热风吹干。
5、显色用喷雾器均匀喷上0.1％茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点 6、用铅笔轻轻描出各显色斑点的形状，用直尺量出各斑点中心与原点的距离以及溶剂前沿与原点的距离，求出各氨基酸的Rf值，将各显色斑点的Rf 值与标准氨基酸的Rf 值比较，可得知该斑点的准确成分。四、结果与讨论： 1．计算出各种氨基酸的Rf值，并根据Rf值鉴定出混合氨基酸中的各组分，在层析图谱上标出各氨基酸名称。 2．对氨基酸移动快慢的原因给予简要分析。
实验一氨基酸的分离鉴定——纸层析法
一、目的通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法在一定的条件下，一个物质在某溶剂系统中的分配系数，在一定的温度下是一个常数。纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的-OH基具有亲水性，因此能吸附一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。有机溶剂自上而下流动，称为下行层析；自下而上流动，称为上行层析。流动相流经支持物时与固定相之间连续抽提，使物质在两相之间不断分配而得到分离。

纸层析法分离氨基酸

纸层析法分离氨基酸一、前言1、分离氨基酸的主要方法：(1) 离子交换法，根据氨基酸是两性电解质这一特征,以及目的氨基酸与杂质氨基酸pK、pI值的差异,利用离子交换树脂对各种氨基酸吸附能力的不同对氨基酸进行分离纯化。

离子交换法的分离步骤主要包括树脂的处理、装柱、平衡、加样、洗脱等步骤.离子交换法也有自身的局限性，由于离子交换法是利用氨基酸等电点的不同，所以当两个或者多个氨基酸的等电点相近时，便无法分离，另外，氨基酸在树脂当中扩散速度较快，就要求料液的流速也相对较慢，这样自然造成了分离的缓慢，离子交换本身的生产原理也决定了反应难以连续还进行，这给工厂自动化生产带来影响，难以大规模地推广。

(2)沉淀法，沉淀法是历史最悠久的分离纯化方法，目前仍在工业上发挥着重大的作用。

氨基酸工业中常用沉淀法有等电点沉淀法，特殊试剂沉淀法和有机溶剂沉淀法。

沉淀法原理是根据某些氨基酸可以与某些有机或者无机化合物结合而形成沉淀，可以利用这种性质向溶液中加入特定的沉淀剂，使目标氨基酸沉淀，与其他氨基酸分离，在分离后再将氨基酸与沉淀剂分离即可。

现在较为成熟的分离方法有精氨酸与苯甲醛在低温条件下，缩合成溶解度小的苯亚甲基精氨酸，从而析出沉淀，析出的沉淀用盐酸处理即可分离得到目标氨基酸精氨酸的盐酸盐；亮氨酸与邻-二甲苯-4-磺酸反应，可生成亮氨酸的磺酸盐。

沉淀法的优点是方法简单，选择性强，但是缺点同样明显，沉淀剂回收困难，造成废液排放污染加剧。

(3) 萃取法，萃取法主要包括反应萃取法、溶剂萃取法、反向微胶团萃取、液膜萃取法等。

其中，反应萃取法是选择适当的萃取剂，使萃取剂解离出来的离子与氨基酸解离出来的离子发生反应，生成可以溶于有机相的物质，从而使氨基酸从水相进入有机相，进而分离氨基酸。

溶剂萃取法，由于氨基酸是离子型化合物，氨基酸在物理萃取时难以高效提取的，因此常用化学发来萃取氨基酸。

(5)电透析，由于氨基酸拥有不同的等电点，故可以通过控制溶液的PH值，使氨基酸带有正负电荷，即当PH大于等电点时，带有负电荷，将氨基酸放置在电场中，会带上负电，并且移向正极，相反，PH值小于等电点时，则带上正电荷，氨基酸向负极移动。

1+氨基酸的分离鉴定——纸层析法+Microsoft+Word+文档

氨基酸的分离鉴定——纸层析法实验目的：1、学习纸层析法的基本原理；2、掌握纸层析法分离氨基酸的操作技术。

实验原理：纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，它是利用不同的氨基酸在展层溶剂中的分配系数不同而得以分离的一种方法。

惰性支持物是新华一号滤纸，其上含有很多的羟基，与水有较强的亲和力因此把它看成是含有静止水相的惰性支持物。

水相因此称为静止相（固定相），有机溶剂称为流动相。

展层溶剂由两个互不相溶的有机溶剂和水组成，它们互相混合时便分成两相：一相是以水饱和了的有机相，另一相是以有机溶剂饱和了的水相。

分配系数(α)＝溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。

当用滤纸进行分配层析时，流动相流经支持物时与固定相之间连续抽提，使氨基酸在两相之间不断分配而得以分离。

分配层析的原理可用一个模式解释（英国Martin等）：把滤纸看成是一个层析柱，可以分成若干层板，设层板的物质为A、B；且A 和B的分配系数（α）分别为1和1/3；又设固定相为S，流动相为L，两相互相接触但不相混溶。

当第一层流动相中加入一定量的A、B两项物质后，溶质根据各自的分配系数在第一层的两相中分配，流动相继续在流动，此时第一层固定相与新流到的流动相之间以及原来第一层流动相与第二层固定相之间进行第二次分配，以此类推三次分配即可看出A与B最浓部分以分开，A在第二层最浓，B在第三层最浓，如果继续抽提下去，经过若干此后，A、B两物质便可完全分开。

显然，分配系数越大的物质就越容易分开。

模式图如下所示：S（固定相）L（流动相）第一次分配第二次分配第三次分配第一次分配第二次分配第三次分配0层A1 B11层A1/2B1/4A1/4B1/16A1/8B1/64A1/2B3/4A1/4B3/16A1/8B3/642层A1/4B3/16A1/8+ A1/8B3/64＋B3/64A1/4B9/16A1/8+ A1/8B9/64＋B9/643层A1/8B9/64A1/8B27/64 图中的第二层流动相中的溶质A为1/2，B为27/32；第三层流动相中的溶质A为1/8，B为27/64；第三层抽提一定时间后，溶剂流到接近滤液前沿1～2cm时。

氨基酸的分离鉴定——纸层析法

原点到溶剂前沿的距离原点到层析斑点中心的距离
实验原理
• 茚三酮的显色原理氨基酸与茚三酮水合物在弱酸条件下共加热时，氨基酸被氧化脱氨、脱羧，而茚三酮水合物被还原，其还原物可与氨基酸加热分解产生的氨结合，再与另一分子茚三酮缩合成为蓝紫色化合物，称为罗曼紫（Ruhemann's purple）。
实验试剂与仪器
• 试剂纯净的赖氨酸、亮氨酸、丙氨酸、天冬氨酸 8×10E-3mol/L溶液；四种氨基酸混合溶液（每种浓度与对应纯净溶液一致）；2.5%茚三酮丙酮溶液；酸性展层剂（正丁醇：88%甲酸：水 =60：17：8）。 • 仪器钟罩×1、培养皿×1、小烧杯10ml×1、层析柱×1、小漏斗×1、新华一号滤纸（14cm×17cm）×1、电吹风、烘箱、毛细管、订书机，及其他常用仪器。
实验结果及分析
——图像实例
实验结果及分析
——各氨基酸比移值Rf
氨基酸
Rf
赖氨酸
0.2294
天冬氨酸
0.3814
丙氨酸
0.5771
亮（白）氨酸
0.8609
在同一实验条件下，比移值Rf主要取决于分配系数，不同的物质分配系数不同，也就有不同的Rf 。此外，溶剂的溶质的性质、滤纸的性质、展层的温度和p H值均会影响比移值Rf。实验中，Rf值与个人操作及具体实验条件息息相关，存在一定波动，但总体趋势相同。
• 纸层析纸层析法属于分配层析，层析滤纸为载体，流动相是指层析液，在毛细拉力作用下，层析液能不断由下向上流动。固定相是指被吸附在滤纸纤维之间的水分。由于纤维素上的羟基具亲水性使这部分水束缚在纤维素周围，不易扩散而成为固定相。
实验原理
• 在层析过程中，当层析液在毛细拉力作用下，上升流经滤液滴点时，滴点上的氨基酸就相继融入层析液，随着层析液上升，并发生在分配，即有一部分色素从层析液分配溶解到固定相中，直到平衡。由于分配系数的不同，那些分配系数大的氨基酸分子，随层析液向上移动得快，形成的斑点集中在滤纸的上部；而分配系数小的氨基酸分子，随层析向上移动得慢，形成的斑点集中在滤纸的下面。

氨基酸的分离鉴定(纸层析法)

氨基酸的分离（纸层析法）一、实验原理1、层析法又称色谱法，是一种物理的分离方法。

利用混合物中各组分物理化学性质的差异（如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等），使各组分以不同程度分布在固定相和流动相两相中，并使各组分以不同速度移动，从而得到有效的分离。

操作方式：纸层析、薄层层析、柱层析等分离机理：分配层析、吸附层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析等2、纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，展层溶剂由有机溶剂和水组成。

滤纸纤维上的羟基具有亲水性，在滤纸上水就被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相。

当有机溶剂（流动相）沿纸流动经过层析点时，层析法上溶质就在水相和有机相之间不断进行分配。

由于溶质就在水相和有机相之间不断进行分配。

由于溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。

溶质在固定相中的浓度分配系数溶质在流动相中的浓度物质被分离后在滤纸上的移动速率用值表示：原点到层析点中心的距离原点到溶剂前沿的距离只要条件（如温度、展层溶剂的组成）不变，值是常数，故可根据值作定性依据。

氨基酸无色，利用茚三酮反应，可将氨基酸层析点显色作定性、定量用。

二、实验器材标准氨基酸溶液、滤纸、层析缸、保鲜膜、剪刀、毛细管、电吹风。

三、实验试剂1、酸相溶剂：V[正丁醇（A.R）]：V[88%甲酸]：V[水]=15：3：22、显色贮备液：V（0.4mol/L茚三酮-异丙醇）：V（甲酸）：V（水）=20：1：5四、实验操作1、点样量取30mL层析溶剂、1mL显色贮备液于层析缸中，混匀密闭，静置。

戴好手套，在桌上铺好一层保鲜膜。

取一张干净滤纸，将其剪彩为18cm*14cm。

在纸的一端距边缘2cm处用铅笔轻轻划一条直线，在此直线上等距离分出几个点作为点样原点。

用毛细管将标准氨基酸和未知样品分别点在点样点上，每次点样后用电吹风冷风吹干再点下一次，点样点直径不超过5mm。

2、层析与显色将滤纸卷成圆筒形，用钉书针固定成圆筒状，纸的两边不能接触。

实验一氨基酸的分离鉴定纸层析法

分离鉴定方法：通过比较氨基酸标准品的Rf值，确定样品中各氨基酸的种类。也可以采用其他方法如色谱法、质谱法等对分离出的氨基酸进行鉴定。
02
实验原理
纸层析法的原理
纸层析法是一种基于物质在固定相和流动相之间分配系数的差异进行分离的方法。在纸层析中，固定相是纸纤维上的水分子，而流动相是溶剂。当流动相通过固定相时，物质在两相之间的分配系数不同，导致它们在固定相和流动相之间的移动速度不同，从而实现分离。
01
02
03
改进实验操作流程
进一步规范实验操作步骤，提高实验效率。
优化实验条件
尝试不同的实验条件，如温度、湿度、展开剂等，以提高实验结果的准确性和可靠性。
引入先进技术
考虑引入高效液相色谱等技术手段进行氨基酸的分离鉴定，以提高分离效果和鉴定精度。
THANKS
感谢观看
通过纸层析法，可以根据氨基酸的极性大小将其分离成不同的组分。
影响氨基酸分离的因素
01 02
流动相的组成
流动相的组成对氨基酸的分离效果有显著影响。改变流动相的组成可以调整氨基酸在固定相和流动相之间的分配系数，从而改变它们的移动速度。
固定相的性质
固定相的粒径、吸附能力等性质也会影响氨基酸的分离效果。选择合适的固定相可以提高分离效果和分辨率。
准备实验材料
选择适当的滤纸、展开剂、氨基酸样品等。
展开
将滤纸悬挂在展开剂中，控制展开剂的流速和高度，确保展开充分。
观察和记录
观察各氨基酸在滤纸上的位置，记录各组分的Rf值（相对迁移率）。
了解氨基酸的理化性质和分离鉴定方法
氨基酸的理化性质包括极性、溶解度、酸碱性、光学活性等。这些性质决定了氨基酸在纸层析法中的分离效果。

氨基酸的分离鉴定——纸层析法

2009.10-12Leabharlann 医药学院生物化学实验课件思考题
影响Rf因素有哪些? Rf因素有哪些 1. 影响Rf因素有哪些? 2. 实验操作中, 为何不能直接用手接触滤纸? 实验操作中, 为何不能直接用手接触滤纸?
2009.10-12
医药学院生物化学实验课件
实验三
氨基酸的纸层析法
中国海洋大学医药学院
2009.10-12
医药学院生物化学实验课件
实验目的
了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法，了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法，学会分析待测样品的氨基酸成分。学会分析待测样品的氨基酸成分。
2009.10-12
医药学院生物化学实验课件
实验原理
纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。当有机相流经固定相时，物质在两相间不断分配而得到分离。相流经固定相时，物质在两相间不断分配而得到分离。值表示。溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示。Rf=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。的距离/原点到溶剂前沿的距离。在一定的条件下某种物质的Rf 值是常数。值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。氨基酸无色,利用茚三酮反应, 氨基酸无色,利用茚三酮反应,可以将氨基酸纸层析点显色作定性和定量用。和定量用。本试验主要介绍的是单向层析法。其中混合氨基酸有谷氨酸、本试验主要介绍的是单向层析法。其中混合氨基酸有谷氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸组成。氨酸、苯丙氨酸组成。