实验六叶绿体色素的质及叶绿素ab含量的测定
叶绿素测定的实验报告
一、实验目的1. 了解叶绿素在植物光合作用中的作用。
2. 掌握叶绿素提取和测定的方法。
3. 通过实验，掌握分光光度法测定叶绿素含量的原理和操作步骤。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，其含量直接影响植物的光合作用效率。
本实验采用分光光度法测定叶绿素含量，通过测定叶绿素a和叶绿素b的吸光度，计算出叶绿素的总含量。
分光光度法测定叶绿素含量的原理：叶绿素a和叶绿素b对光的吸收具有选择性，在一定波长范围内，其吸光度与叶绿素含量成正比。
通过测定特定波长下的吸光度，可以计算出叶绿素含量。
三、实验材料1. 新鲜植物叶片（如菠菜、生菜等）。
2. 95%乙醇溶液。
3. 0.1mol/L硫酸铜溶液。
4. 0.1mol/L氢氧化钠溶液。
5. 分光光度计。
6. 移液器。
7. 烧杯。
8. 试管。
9. 移液管。
四、实验步骤1. 准备实验材料：取适量新鲜植物叶片，洗净、擦干，剪成小块备用。
2. 叶绿素提取：取10g植物叶片，加入50mL 95%乙醇溶液，用研钵研磨至匀浆。
将匀浆转移到50mL容量瓶中，用95%乙醇溶液定容至刻度。
3. 吸光度测定：取适量叶绿素提取液，分别加入0.1mol/L硫酸铜溶液和0.1mol/L氢氧化钠溶液，配制成叶绿素a和叶绿素b溶液。
4. 标准曲线绘制：取一系列已知浓度的叶绿素a和叶绿素b标准溶液，分别测定其在特定波长下的吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度对数值为横坐标，绘制标准曲线。
5. 样品测定：取适量叶绿素提取液，按照标准曲线绘制步骤，测定其吸光度。
6. 计算叶绿素含量：根据样品的吸光度，从标准曲线上查得对应的叶绿素a和叶绿素b浓度，计算叶绿素的总含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：绘制叶绿素a和叶绿素b的标准曲线，相关系数R²均大于0.99，表明标准曲线线性关系良好。
2. 样品测定：根据样品的吸光度，从标准曲线上查得叶绿素a和叶绿素b的浓度，计算叶绿素的总含量。
3. 结果分析：通过对不同植物叶片的叶绿素含量测定，可以发现不同植物叶片的叶绿素含量存在差异，这与植物的种类、生长环境等因素有关。
叶绿素a与叶绿素b含量的测定
CONSTRUCTION节能环保一、叶绿素的概念叶绿素是一类与光合作用有关的最重要的色素。
光合作用是通过合成一些有机化合物将光能转变为化学能的过程。
叶绿素实际上存在于所有能营造光合作用的生物体，包括绿色植物、原核的蓝绿藻（蓝菌）和真核的藻类。
叶绿素从光中吸收能量，然后能量被用来将二氧化碳转变为碳水化合物。
叶绿素是植物进行光合作用的主要色素，是一类含脂的色素家族，位于类囊体膜。
叶绿素吸收大部分的红光和紫光但反射绿光，所以叶绿素呈现绿色，它在光合作用的光吸收中起核心作用。
叶绿素为镁卟啉化合物，包括叶绿素a、b、c、d、f 以及原叶绿素和细菌叶绿素等。
去镁叶绿素。
叶绿素有造血、提供维生素、解毒、抗病等多种用途。
二、实验材料和方法1、实验材料使用韭菜叶片作为实验材料，测定其叶绿素含量，样品购自菜市场，仪器使用SPECORD ®50PLUS 型双光束分光光度计、高速电动匀浆机和电子天平。
药品：无水乙醇、石油醚、聚四氯乙烯、蒸馏水、丙酮（80%）、叶绿素a 和叶绿素b 标准品；用具：锥形瓶、超声波水浴锅。
2、实验方法（1）叶绿素提取提取前先进行提取试剂的优化选择，使用乙醇、丙酮和石油醚、异辛烷、正庚烷配制成2∶3的混合溶液。
从中选择出提取叶绿素含量最高的配比溶剂进行最终提取。
叶绿素含量根据朗伯.比尔定律进行计算，叶绿素含量测定结果用mg/kg 表示，使用如下公式：w=（kxA 校正xV）/mxl，其中A 校正=A665-（A705+A625）/2，w 为样品中叶绿素含量单位为mg/kg；A665为最大吸收665nm 的吸收值；A705为705nm 附近峰谷的吸收值；A625为625nm 附近峰谷的吸收值；k 为吸光常数取值13；l 为光程，指石英杯的厚度，单位为cm；m 为试样质量数值，单位为g；V 是提取试剂的体积，单位是ml。
称量定量切碎韭菜样品放入锥形瓶内，加入乙醇和石油醚混合浸提液（2：3，以上结果证明该配比提取含量最高），使用聚四氟乙烯密封带将瓶口密封，避免混合液挥发。
实验名称：叶绿素a、叶绿素b含量测定
实验名称：叶绿素a、叶绿素b含量测定一、实验目的：熟悉在未经分离的叶绿体色素中测定叶绿素a、叶绿素b的方法。
二、实验原理；根据叶绿体色素提取液对可见光的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测其吸光度，即可利用公式计算出提取液中各种色素的含量：Ca=13.95A665-6.88A649Cb=24.96A649-7.32 A665C T= Ca+ Cb=18.08 A649+6.63 A665三、仪器、试剂与材料：仪器：分光光度计、离心机、研钵；试剂：96%乙醇溶液、石英砂、CaCO3粉末；材料：菠菜叶片；四、实验步骤：1.取干净的菠菜叶片剪碎，分别混匀。
2.称取剪碎的样品0.2g，各2份，分别放入研钵中，加少量石英砂和CaCO3粉末、及2-3ml 96%乙醇溶液，研成匀浆，倒入离心管，再用96%乙醇溶液多次洗涤研钵，洗涤液也倒入离心管中。
3．将离心管放入离心机后取上述提取液放入比色皿中，以96%乙醇为对照，分别测定665nm、649nm处的吸光度值。
4.按公式计算提取液中叶绿素a、叶绿素b及叶绿素a+b的浓度。
五、实验结果及分析：1.研磨提取叶绿素是加入石英砂和CaCO3粉末各有什么作用？加入石英砂有助于研磨得更充分；加入CaCO3粉末可以保护叶绿素在研磨时不被破坏。
2.计算: A665(1)=0.399A A665(2)=1.237A 故A665=0.818AA649(1)=0.208A A649(2)=0.626A 故A649=0.417A 所以: Ca=13.95A665-6.88A649=8.542Cb=24.96A649-7.32 A665=4.421C T= Ca+ Cb=18.08 A649+6.63 A665=12.963。
实验5 叶绿素a与叶绿素b含量的测定
C—叶绿素的浓度（mg/L)；v—提取液体积(ml)； n—稀释倍数；m—样品鲜重（g)
作业：
比较阳生植物和阴生植物的叶绿素有何不 同？
下周实验：植株磷素的测定(钼蓝法)
三、实验器料
1、材料： 菠菜或其它绿色植物叶片
2、试剂： 80% 丙 酮 或 96% 乙 醇 ； 石 英 砂 ；
CaCO3； 3、仪器：分光光度计（分光光度计
的使用）、高速离心机
四的植物叶片，称取0.2g剪碎后置 于研钵中，加入5ml 80%丙酮，少许CaCO3和 石英 砂。充分研磨（组织变白），再加10ml80%丙 酮，静止3-5分钟，冲洗研钵后转至离心管，定 容至15ml,3000转、15分钟，取上清液用80% 丙酮 定容至25ml。
2. 测定OD值： 取上清液1ml，加80%丙酮4ml， 以80%丙 酮
作空白对照，用分光光度计分别测定叶绿 素提取液在645nm、663nm、470 nm下的吸
光度。 3.计算：
把测出的吸光值带入(1)(2)(3)(4)式计算叶 绿素a、b、a+b和类胡萝卜素的浓度。 根据下式求出植物组织中叶绿素的含量：
实验六 叶绿素含量的测定
一、实验目的
1、熟悉在未经分离的叶绿体色素溶 液中测定叶绿素a、b和类胡萝卜素 的方法及计算；
2、测定叶绿素含量a与叶绿素b含量 的意义。
二、实验原理
叶绿素提取液中同时含有叶绿素a、叶绿素b和 类胡萝卜素，三者的吸收光谱虽有不同，但又 存在着明显的重叠，在不分离他们的情况下同 时测定叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素的浓度， 可分别测定在663nm、645nm、470 nm （分别是叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素在红 光区的吸收峰）的光吸收，然后根据 Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素 a、叶绿素b、和类胡萝卜素的浓度。
叶绿体色素定量测定及性质实验报告-叶绿素的定量测定
.取两支试管，向一支试管中加入 5mL 叶绿体色素提取液，然后将其 存在的问题，改进栽培方式，提高产量，这对于农业生产有很大的现实意
一部分倒入另一支试管中，作为对比。向试管里加入 1~2 滴 0.5mol/L HCl 义；在水体治理中，通过测定叶绿素含量，了解水中植物的光合能力，借
后摇匀。
此查找治理方案。总之，测定植物叶片叶绿素含量对于我们生产实践具有
光物质〔稀溶液〕时，其吸光值与吸光物质的浓度 C 及汲取层厚度 d 成正
式中，C、Cb 和 Cx·c 分别为叶绿素、b 和类胡萝卜素的浓度。
比，及=KCd。
2、叶绿素理化性质鉴定
假如溶液中含有数种吸光物质，则混合液在某一波长下的总吸光值等
叶绿素是一种双羧酸，其中一个羧基被甲醇所酯化，另一个被叶醇所
于各组分在此波长下吸光值的总和。如欲测定叶绿素混合提取液中叶绿素、 酯化。故可与碱起皂化反应而生成醇〔甲醇和叶绿醇〕和叶绿素的盐。皂
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叶绿体色素定量测定及性质实验报告:叶绿素的定量 测定
应选择叶绿素在红光区的最大汲取峰。 已知叶绿素、b 分别 663nm 和 645nm〔80％丙酮提取〕有最大汲取值；
同时已知在波长 663nm 下，叶绿素、b 汲取系数分别为 82.04 和 9.27；在
4、在分管光度计上，分别测定 663nm，645nm 和 470nm 处的吸光值，
夹，酒精灯。
以 80％丙酮为空白对比。
2、试验试剂：80％丙酮，纯丙酮，碳酸钙，20％KOH 甲醇溶液，苯，
5、结果计算
0.5molmol/L?HCl，醋酸铜粉末。
按原理中的公式分别计算叶绿素、b 和类胡萝卜素的浓度〔mg/L〕，
叶绿素含量的测定实验报告
叶绿素含量的测定实验报告一、实验目的1、掌握叶绿素含量测定的原理和方法。
2、学会使用分光光度计测定叶绿素的含量。
3、了解叶绿素在植物光合作用中的重要作用。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，包括叶绿素 a 和叶绿素 b 两种类型。
叶绿素在特定波长的光下有吸收峰，利用分光光度计分别测定叶绿素提取液在 665nm 和 649nm 波长下的吸光度，根据朗伯比尔定律，可以计算出叶绿素 a 和叶绿素 b 的含量，进而得出叶绿素的总含量。
叶绿素 a 和叶绿素 b 在 665nm 和 649nm 波长下的吸光系数分别为8331 和 1675，在 649nm 波长下的吸光系数分别为 2454 和 4466。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜的菠菜叶片。
2、实验仪器分光光度计、电子天平、研钵、漏斗、容量瓶、移液管、剪刀等。
3、实验试剂95%乙醇、石英砂、碳酸钙。
四、实验步骤1、材料准备选取新鲜的菠菜叶片，用剪刀剪碎，称取 05g 左右，放入研钵中。
2、研磨提取在研钵中加入少量石英砂和碳酸钙，以及 10ml 95%乙醇，充分研磨成匀浆。
3、过滤将研磨好的匀浆用漏斗过滤到 25ml 容量瓶中，用少量 95%乙醇冲洗研钵和漏斗，将滤液收集到容量瓶中，直至刻度线，摇匀。
4、吸光度测定以 95%乙醇作为空白对照，用分光光度计分别测定提取液在 665nm 和 649nm 波长下的吸光度，每个波长重复测定 3 次，取平均值。
五、实验结果与计算1、记录吸光度值665nm 波长下的吸光度平均值记为 A665，649nm 波长下的吸光度平均值记为 A649。
2、计算叶绿素含量叶绿素 a 的浓度（Ca，mg/L）＝ 1395×A665 688×A649叶绿素 b 的浓度（Cb，mg/L）＝ 2496×A649 732×A665叶绿素的总浓度（C，mg/L）＝ Ca ＋ Cb叶绿素含量（mg/g）＝（C×V）／（W×1000）其中，V 为提取液总体积（ml），W 为叶片鲜重（g）。
实验六叶绿素A、B 含量的测定
精品实验《水生植物抗逆生理的研究》——1
一，实验目的与要求
• 掌握叶绿素a、b含量测定的方法； • 了解逆境条件（重金属Cd污染）下植物体叶绿素含
量的变化。
二、实验材料与试剂
• 材料 不同浓度Cd2+处理7d的菹草。
• 试剂 1/10Hogland营养液； CdCl2溶液：0、5、10、20mg/L（以Cd的浓度计）； 80%丙酮。
叶绿素b（mg/gFW)=?
叶绿素a/叶绿素b=?
四、统计并分析
• 统计CdCl2处理浓度与叶绿素含量之间的关系； • 结合其他生理指标分析Cd2+对植物体生长的影响。
许石英砂和碳酸钙，研磨匀浆后过滤，再用5mL80%丙酮冲洗滤 渣，定容到10mL，混匀； • 测定：充分过滤后，以80%丙酮调零，测定叶绿素提取液在645 nm和663nm处的光吸收值。 • 计算： 叶绿素a：C=12.21A663-2.81A645
叶绿素a（mg/gFW)=? 叶绿素b：C=20.13A645-5.03A663
三、实验原理
• 叶绿素a、b的吸收光谱
• 叶绿素a、b的光吸收总和在645nm和663nm处各有一 峰值。
• A=nCL n=摩尔消光系数； C=溶液浓度； L=比色杯内径。
三、实Байду номын сангаас步骤
• 取培材养7：d适后量，菹从草顶，端在起含取有倒不数同第浓三度对C叶d片Cl2；的1/10Hogland营养液中 • 提取：叶片洗净、吸干、称重后于研钵中加入5mL80%丙酮、少
叶绿素a与叶绿素b含量的测定
实验仪器及材料
• 实验材料：
– 菠菜或其它绿色植物
• 实验仪器及试剂：
– UV-1700分光光度计；天平；剪刀；打孔器； 研钵；移液管；漏斗；量筒；培养皿；滤纸； 丙酮；石英砂；CaCO3；
实验步骤
1. 提取叶绿素
选取有代表性的菠菜叶片数张，于天平上称取0.5g， （也可用打孔器打取一定数量的叶圆片，计算总 的叶面积），剪碎后置于研体中，加入5ml 80%丙 酮，少许CaCO3和石英砂。仔细研磨成匀浆，用 滤斗过滤到10ml量筒中，注意在研钵中加入少量 80%丙酮将研钵洗净，一并转入研钵中过滤到量 筒内，并定容至10ml。将量筒内的提取液混匀， 用移液管小心抽取5ml转入25ml量筒中，再加入 80%丙酮定容至25ml（最终植物材料与提取液的 比例为W：V＝0.5：50＝1：100，叶色深的植物 材料比例要稀释到1：200）。
讨论：
1． 叶绿素在兰光区的吸收峰高于红光区 的吸收峰，为何不用兰光区的光吸收来 测定叶绿素的含量。 2． 计算叶绿素a与叶绿素b含量的比值， 可以得到什么结论？ 3． 比较阳生植物和阴生植物的叶绿素a和 叶绿素b的含量以及比例，可以得到什么 结论？
实验原理
• 叶绿素提取液中同时含有叶绿素a和叶绿素b， 二者的吸收光谱虽有不同，但又存在着明显的 重叠，在不分离叶绿素a和叶绿素b的情况下同 时测定叶绿素a和叶绿素b的浓度，可分别测定 在 663nm 和 645nm（分别是叶绿素 a 和叶绿素 b 在红光区的吸收峰）的光吸收，然后根据 Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素a和 叶绿素b的浓度。 • A663=82.04Ca+9.27Cb （1 ） • A645=16.75Ca+45.60Cb （2）
(2021年整理)叶绿体色素含量的测定
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叶绿体色素含量的测定---—分光光度法中文摘要：本实验利用菠菜叶作为原料用80%的丙酮提取叶绿体色素，应用分光光度计在某一特定波长下所测定的吸光度,带入公式计算出色素溶液中各色素浓度。
英文摘要：In this experiment ， we used spinach leaves as raw material and used 80％ of acetone to extract pigments from them ,and apply spectrophotometer at a particular wavelength to determine absorbance, then take the absorbance into the formula to calculate concentration of each pigment。
叶绿素a和b含量的测定(分光光度法)
实验14 叶绿素a 和b 含量的测定（分光光度法）一、目的学会Chla 、b 含量的测定方法，了解叶片中Chla 、b 的含量。
二、材料用具及仪器药品菠菜叶片、721分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶（25ml ）、漏斗、滤纸、乙醇（95%）三、原理叶绿素a 、b 在波长方面的最大吸收峰位于665nm 和649nm ，同时在该波长时叶绿素a 、b 的比吸收系数K 为已知，我们即可以根据Lambert Beer 定律，列出浓度C 与光密度D 之间的关系式：D 665=83.31Ca+18.60C b (1)D 649=24.54Ca+44.24 C b (2)(1)(2)式中的D 665、D 649为叶绿素溶液在波长665nm 和649nm 时的光密度。
为叶绿素a 、b 的浓度、单位为每升克数。
82.04、9.27为叶绿素a 、b 在、在波长665nm 时的比吸收系数。
16.75、45.6为叶绿素a 、b 在、在波长649nm 时的比吸收系数。
解方程式(1)(2)，则得 ：C A =13.7 D 665—5.76 D 649 (3)C B =25.8 D 649—7.6 D 665 (4)G=C A +C B =6.10 D 665+20.04 D 649 (5)此时，G 为总叶绿素浓度，C A 、C B 为叶绿素a 、b 浓度，单位为每升毫克，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算叶绿素a 、b 及总叶绿素的总含量。
四、方法步骤1．称取0.1克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加入乙醇10ml 共研磨成匀浆，再加5ml 乙醇，过滤，最后将滤液用乙醇定容到25ml 。
2．取一光径为1cm 的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规格的比色杯中，作为对照，在721分光光度计下分别以665nm 和649nm 波长测出该色素液的光密度。
计算结果：叶绿素a 含量（mg/g. FW ）=2.01100025⨯⨯A C 叶绿素b 含量（mg/g.FW ）=2.01100025⨯⨯B C 叶绿素总量（mg/g.FW ）=2.01100025⨯⨯G五、实验报告计算所测植物材料的叶绿素含量。
叶绿素的提取及含量测定实验报告
叶绿素的提取及含量测定实验报告一、实验目的1、掌握叶绿素提取的原理和方法。
2、学会使用分光光度计测定叶绿素的含量。
3、了解叶绿素的性质和在植物光合作用中的重要作用。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，包括叶绿素 a 和叶绿素 b两种类型。
叶绿素不溶于水，易溶于有机溶剂，如丙酮、乙醇等。
在提取过程中，利用有机溶剂将叶绿素从植物叶片中溶解出来。
叶绿素溶液在特定波长下有吸收峰，叶绿素 a 在 663nm 波长处，叶绿素 b 在 645nm 波长处。
根据朗伯比尔定律，吸光度与溶液中物质的浓度成正比。
通过测定提取液在这两个波长下的吸光度，并利用公式计算，可以得出叶绿素a 和叶绿素b 的含量，进而计算总叶绿素含量。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜菠菜叶2、实验仪器电子天平、研钵、漏斗、玻璃棒、容量瓶（25ml、50ml）、分光光度计、移液管（1ml、2ml、5ml）、剪刀3、实验试剂丙酮、无水乙醇、石英砂、碳酸钙四、实验步骤1、材料准备选取新鲜的菠菜叶，洗净擦干，去除叶柄和中脉，剪碎备用。
2、叶绿素提取称取 2g 剪碎的菠菜叶放入研钵中，加入少量石英砂和碳酸钙，再加入 5ml 丙酮和 5ml 无水乙醇，充分研磨成匀浆。
用漏斗过滤，将滤液收集到 25ml 容量瓶中，并用少量丙酮和无水乙醇冲洗研钵和漏斗，将冲洗液也倒入容量瓶中，最后用丙酮和无水乙醇定容至刻度，摇匀。
3、吸光度测定以丙酮和无水乙醇的混合液为空白对照，用分光光度计分别测定叶绿素提取液在 663nm 和 645nm 波长下的吸光度。
每个波长重复测定 3 次，取平均值。
4、计算叶绿素含量根据以下公式计算叶绿素 a、叶绿素 b 和总叶绿素的含量（单位：mg/g）：叶绿素 a 含量＝ 127×A663 269×A645叶绿素 b 含量＝ 229×A645 468×A663总叶绿素含量＝叶绿素 a 含量＋叶绿素 b 含量式中，A663 和 A645 分别为在 663nm 和 645nm 波长下的吸光度。
叶绿体色素的提取、分离,测定叶绿素a、b含量
实验四、叶绿体色素的提取、分离及叶绿素a、b含量的测定刘家富（40508014）05生科（一）一、实验原理1.脂溶性叶绿体色素提取：可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。
2.分离：（1）叶绿体色素的分离＜纸层析法＞因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各种成分在两相（固定相和流动相）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后，可将各种色素分开。
纸层析是以滤纸纤维为固定相，而以有机溶剂作为流动相。
由于样品中各物质有不同的分配系数，移动速度因此而不同，从而达到分离的目的。
（2）叶绿素与类胡萝卜素的分离<皂化反应>叶绿素是一种二羧酸——叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇与叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开。
3.叶绿素a、b含量的测定：根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其溶液浓度c和液层厚度L成正比，即：A=φCL(φ为吸光系数)因此，根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度，用公式即可计算出提取液中各色素含量。
测定663nm和645nm两个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b在对应波长下的吸光系数即可求出叶绿素a、b含量。
其校正过的公式为：C a＝12.7A663－2.69A645 Ca:叶绿素a浓度,mg/LC b＝22.9A645－4.68A663 Cb:叶绿素b浓度,mg/LCT＝Ca + Cb CT:叶绿素总浓度,mg/L二、仪器药品剪刀、漏斗、烧杯、分光光度计、分液漏斗、铁架台、移液管、吸耳球、试管、毛细管、平底大试管、石英砂、碳酸钙、丙酮、乙醚、四氯化碳、无水硫酸钠、30%KOH-甲醇溶液、天平、研钵、滤纸三、操作步骤1. 叶绿体色素的提取取去中脉叶片（2g左右），剪碎后加入少量石英砂、碳酸钙、纯丙酮5ml后放入研钵研磨成匀浆成深绿色提取液，之后用漏斗过滤。
上课用--叶绿素测定
思考题
TTC法和红墨水测定种子生活力有 何不同？实验结果与实际情况是否相 符 ? 为什么 ?
实验八 生长素类物质对小麦根、 芽生长的不同影响
红墨水染色法
【实验原理】 有生活力的种子其胚细胞的原生质膜具 有半透性，具有选择吸收外界物质的能力， 某些染料如红墨水中的酸性大红G不能进 入细胞内，胚部不染色。而丧失活力的种 子其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收的 能力，染料进入细胞内使胚部染色，所以 可根据种子胚部是否染色来判断种子的生 活力。
3、测定数据记录 光合速率、呼吸速率测定数据记录
植物 名称 V：气体流速 (L/min) 叶面积 (cm2) Ci ：CO2参/初值 (μL/L) C0：CO2测/终值 (μL/L) 叶室温度 （t℃） 备注（是 否遮光）
6.5
平均值
五、结果计算
光合速率、呼吸速率计算（当光照为0时，R=-Pn ）
注：Ta = 273.15 +t℃ 60是将气流量V的L/min化分为秒 P：大气压力（bax），一般认为1标压 22.41L/mol，是将温度Ta，压强P下的气体体积划为mol 10000是将叶面积A的cm2划为m2
注意事项： 1、仪器使用前，对CO2分析器的调零和调满已校正好， 测定时，无需再校准。 2、仪器使用时，对调零、调满旋钮不要乱旋动，以免影 响测定的准确性。 3、叶室与叶室的手柄连接杆比较细小，使用时要轻拿轻 放，小心使用。
实验五
不同生长环境下植物 叶绿素a、b含量的测定
一、实验目的、原理
[实验目的] 在未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶 绿素a和b的方法及其计算。 [实验原理] 如果混合液中的两个组分，它们的光谱吸收峰虽然 有明显的差异，但吸收曲线彼此有重叠，在这种情 况下要分别测定两个组分，可根据朗伯-比尔 （Lambert-Beer）定律，通过代数方法，计算一种 组分由于另一种组分存在时对光密度的影响，最后 分别得到两种组分的含量。 根据叶绿素a和b的吸收光谱曲线，叶绿素a的最大吸 收峰在663nm，叶绿素b的最大吸收峰在645nm, 吸收 曲线彼此又有重叠。
实验六 重金属污染对植物叶绿素含量的
作用。
叶 绿 素 的 卟 啉 环 结 构
叶绿素的作用
叶绿素不参与氢的传递或氢的氧化还原，
而仅以电子传递（即电子得失引起的氧化还
原）及共轭传递（直接能量传递）的方式参
与能量的传递。
三、仪器、材料及试剂
1．仪器
研钵（配石英砂）、容量瓶、微量移液器、分光光度 计（可见光）等。 2．材料
处理好的水稻幼苗。 3．试剂 （1）重金属溶液处理：用水配制成分别含Cu2+为0mM 和2.0mM的溶液。
卟啉环中的镁原子可被H＋、Cu2＋、Zn2＋
所置换。用酸处理叶片，H＋易进入叶绿体，
置换镁原子形成去镁叶绿素，使叶片呈褐色。
3. 使用的分光光度计一定要用分辨率高的
型号如751型。分辨率低的分光光度计测定 波长的半波宽值大，不足以区分叶绿素a、b 的吸收峰，易造成读数偏低，叶绿素a、b比 偏小的现象。分光光度计使用前应作波长 校正，稍有偏差也可造成相当大的误差。
四、注意事项
1. 提取叶绿素过程中尽量避免光照，以免叶 绿素受光分解。提取过程中可适当加温， 以加快提取速度，但要补足丙酮因挥发而 减少的量。
2. 有些植物材料细胞间质的酸度很高，在
磨碎过程中会使叶绿素脱镁成去镁叶绿素，
从而降低了测定值。因此，在磨碎这些材 料时要加入pH为8.0的缓冲液一起研磨，并 适当提高丙酮浓度，使混合后的丙酮浓度 达到80％。
CT=8.02A663+20.21A645 式中：A663、A645—分别为提取液在波长663nm、645nm 下的吸光度。
叶绿含量
Ca(含量)＝Ca×V/1000W;
Cb(含量)＝Cb×V/1000W;
CT(含量)＝CT×V/1000W
叶绿素a和b含量的测定(分光光度法)
实验14 叶绿素a 和b 含量的测定（分光光度法）一、目的学会Chla 、b 含量的测定方法，了解叶片中Chla 、b 的含量。
二、材料用具及仪器药品菠菜叶片、721分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶（25ml ）、漏斗、滤纸、乙醇（95%）三、原理叶绿素a 、b 在波长方面的最大吸收峰位于665nm 和649nm ，同时在该波长时叶绿素a 、b 的比吸收系数K 为已知，我们即可以根据Lambert Beer 定律，列出浓度C 与光密度D 之间的关系式：D 665=83.31Ca+18.60C b (1)D 649=24.54Ca+44.24 C b (2)(1)(2)式中的D 665、D 649为叶绿素溶液在波长665nm 和649nm 时的光密度。
为叶绿素a 、b 的浓度、单位为每升克数。
82.04、9.27为叶绿素a 、b 在、在波长665nm 时的比吸收系数。
16.75、45.6为叶绿素a 、b 在、在波长649nm 时的比吸收系数。
解方程式(1)(2)，则得 ：C A =13.7 D 665—5.76 D 649 (3)C B =25.8 D 649—7.6 D 665 (4)G=C A +C B =6.10 D 665+20.04 D 649 (5)此时，G 为总叶绿素浓度，C A 、C B 为叶绿素a 、b 浓度，单位为每升毫克，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算叶绿素a 、b 及总叶绿素的总含量。
四、方法步骤1．称取0.1克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加入乙醇10ml 共研磨成匀浆，再加5ml 乙醇，过滤，最后将滤液用乙醇定容到25ml 。
2．取一光径为1cm 的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规格的比色杯中，作为对照，在721分光光度计下分别以665nm 和649nm 波长测出该色素液的光密度。
计算结果：叶绿素a 含量（mg/g. FW ）=2.01100025⨯⨯A C 叶绿素b 含量（mg/g.FW ）=2.01100025⨯⨯B C 叶绿素总量（mg/g.FW ）=2.01100025⨯⨯G五、实验报告计算所测植物材料的叶绿素含量。
叶绿素a、b含量测定
叶绿素a、b含量测定【实验原理】如果混合液中的两个组分，它们的光谱吸收峰虽然有明显的差异，但吸收曲线彼此有些重叠，在这种情况下要分别测定两个组分，可根据Lambert-Beer定律，通过代数方法，计算一种组分由于另一种组分存在时对光密度的影响，最后分别得到两种组分的含量。
叶绿素a和b的吸收光谱曲线，叶绿素a的最大吸收峰在663nm，叶绿素b在645nm，吸收曲线彼此又有重叠。
根据Lambert-Beer定律，最大吸收光谱峰不同的两个组分的混合液，它们的浓度C与光密度OD之间有如下的关系：OD1=C a·k a1+C b·k b1（1）OD2=C a·k a2+C b·k b2（2）式中：C a为组分a的浓度，g/L；C b 为组分b的浓度，g/L；OD1为在波长λ1（即组分a的最大吸收峰波长）时，混合液的光密度OD值；OD2为在波长λ2（即组分b的最大吸收峰波长）时，混合液的光密度OD值；k a1为组分a的比吸收系数，即组分a当浓度为1g/L时，于波长λ1时的光密度OD值；k a2为组分a（浓度为1g/L），于波长λ2时的光密度OD值；k b1为组分b（浓度为1g/L），于波长λ1时的光密度OD值；k b2为组分b的比吸收系数，即组分b当浓度为1g/L时，于波长λ2时的光密度OD值；从文献中可以查到叶绿素a和b的80%丙酮溶液，当浓度为1g/L时，比吸收系数k值如下：波长（nm）叶绿素a叶绿素b66382.049.2764516.7545.60将表中数值代入上式（1）、（2），则得：OD663=82.04×C a+9.27×C bOD645=16.75×C a+45.60×C b经过整理之后，即得到下式：C a=0.0127 OD663-0.00269 OD645C b=0.0229 OD645-0.00468 OD663如果把C a，C b的浓度单位从原来的g/L改为mg/L，则上式可改写为下列形式：C a=12.7 OD663-2.69 OD645（3）C b=22.9 OD645-4.68 OD663（4）C T= C a+ C b=8.02 OD663+20.21 OD645（5）（5）式中C T为总叶绿素浓度，单位为mg/L。
2021年叶绿体色素的提取分离理化性质和叶绿素含量的测定实验报告
试验汇报课程名称: 植物生理学试验（乙） 指导老师: 成绩: __________________试验名称: 叶绿体色素提取、 分离、 理化性质和叶绿素含量测定 试验类型:一、试验目和要求了解改良半叶法、 氧电极法测定光合作用和呼吸作用基础原理, 掌握红外线CO2分析仪法测定光合作用和呼吸作用, 蒸腾速率和气孔导度测定基础原理;掌握用LI-6400测定光合作用、 呼吸作用、 蒸腾速率和气孔导度方法, 测定光-光合响应曲线方法.二、 试验基础原理（一）改良半叶法测定光合作用（二）熟悉仪器基础结构, 及按装调试。
以榕树和蚕豆等植物为材料, 用LI-6400portable photosynthesis system 测定它们光合作用、 呼吸作用、 蒸腾速率和气孔导度及光-光合响应曲线, 经过比较分析其属于什么光合类型植物。
Principles for measuring photosynthesis and respiration 6CO 2+6H 2O 6(CH 2O)+6O 2一）测干重——改良半叶法: 同面积光暗叶片重量差。
使用三氯乙酸（TCA ）涂抹在叶片叶柄处, 阻断叶片在进行光合作用时候向外输出营养物质。
测定为总光合作用量。
二）测放O2 ——氧电极法。
气相和液相。
氧电极原理: 氧电极是由嵌在有机玻璃上铂和银所组成, 以0.5mol/L KCl 为电解质, 电极头外覆盖一层聚乙烯或聚四氟乙烯薄膜, 其厚度在15～25μm 之间, 用“〇”形套膜环固定, 使电极与被测溶液隔离, 而溶解在溶液中氧仍能透过薄膜, 进入电极内。
较薄膜易透过氧, 所以对氧浓度改变响应时间短.三）红外线CO2分析仪法: CO2吸收4260nm 红外线,有封闭式: 单位时间内CO2下降量和开放式: 参比室和叶室CO2差值 本试验将采取开放式测得。
三、 试验材料与试剂1. 试验试剂: 三氯乙酸（TCA ）2. 试验材料: 树叶、 菜豆四、试验器材与仪器天平、湿毛巾、烘箱、打孔器、游标卡尺、剪刀、 LI-6400 portable photosynthesis system五、试验操作方法和步骤（一）改良半叶法: 光照不少于1.5h, 注意测定打孔器内径（计算面积）。
叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定
实验报告Array课程名称：植物生理学及实验（甲）实验类型：实验名称：叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定姓名：专业：学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：一、实验目的和要求二、实验内容和原理三、主要仪器设备四、操作方法与实验步骤五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析七、讨论、心得一、实验目的和要求1、掌握植物中叶绿体色素的分离和性质鉴定、定量分析的原理和方法。
2、熟悉在未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素a和b的方法及其计算。
二、实验内容和原理以青菜为材料，提取和分离叶绿体色素并进行理化性质测定和叶绿素含量分析。
原理如下：1、叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取。
2、皂化反应。
叶绿素是二羧酸酯，与强碱反应，形成绿色的可溶性叶绿素盐，就可与有机溶剂中的类胡萝卜素分开。
COOCH3COO-C32H30ON4Mg + 2KOH C32H30ON4Mg + 2KOH +CH3OH+C20H39OHCOOC20H39COO-3、取代反应。
在酸性或加温条件下，叶绿素卟啉环中的Mg++可依次被H+和Cu++取代形成褐色的去镁叶绿素和绿色的铜代叶绿素。
(H+取代Mg2+, Cu2+ (Zn2+)取代H+ )褐色绿色4、叶绿素受光激发，可发出红色荧光，反射光下可见红色荧光。
5、定量分析。
叶绿素吸收红光和兰紫光，红光区可用于定量分析，其中645和663用于定量叶绿素a,b及总量，而652可直接用于总量分析。
根据朗伯-比尔定律，最大吸收光谱不同的两个组分的混合液，它们的浓度C与吸光值之间有如下的关系： OD1=Ca*ka1+Cb*kb1OD2=Ca*ka2+Cb*kb2查阅文献得，叶绿素a和b的80％丙酮溶液，当浓度为1g/L时，比吸收系数k值如下。
波长/nm 比吸收系数k叶绿素a 叶绿素b 663 82.04 9.27645 16.75 45.60 将数值代入式子得：OD663=82.04*Ca+9.27*Cb OD645=16.75*Ca+45.60*Cb 经整理后，得到式子：Ca=0.0127 OD663 - 0.00269 OD645 Cb=0.0229 OD645- 0.00468 OD663三、主要仪器设备天平（万分之一）、可扫描分光光度计、离心机、研具、各种容（量）器、洒精灯等四、操作方法与实验步骤1、定性分析：鲜叶5g+95%30ml（逐步加入），磨成匀浆，过滤入三角瓶中，观察荧光现象。
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类胡萝卜素 （含量占1/4）
叶绿素 （含量占3/4）
胡萝卜素 叶黄素 叶绿素a 叶绿素b
分光光度法
根据叶绿素对某一特定波长的可见光具有吸收能力， 用Lambert- Beer定律计算出叶绿素的含量。
吸光度
Lambert- Beer定律
A ＝ KLC
浓度
吸收系数
叶绿素b的最大吸收峰：645nm 叶绿素a的最大吸收峰：663nm
Chla: C32H30ON4Mg
COOCH3 COOC20H39
+
H2O
Chlb:C32H28O2N4Mg CCOOOOCC2H0H3 39
Ⅰ
Ⅱ
Mg
Ⅳ
Ⅲ
Ⅴ
头部：4个吡咯环+4个甲烯基 连接，形成卟啉环，卟 啉环+Mg，与四个吡咯 环上的N相连，再与一 个副环相连
尾部：C20H39(叶醇)
2. 光照对叶绿素的影响
取两只试管，分别加入提取液少许：
一支放入黑暗处 一支放在直射光中
？ 2小时后观察颜色变化
3. 酸对叶绿素的影响
取少许提取液于试管中，逐滴加入属离子对叶绿素的影响
加醋酸铜粉末少许
？ 观察颜色变化
水浴，微微加热
对酸、碱、光、热不稳定
光照：引起叶绿素光敏氧化 金属离子：镁离子可被铜、锌、铁等取代 热处理：叶绿素转化为脱镁叶绿素 酸性条件下：叶绿素的镁离子被H取代 碱性条件下：叶绿素水解，脱植基叶绿素 叶绿素酶：叶绿素脱植醇
CT=Ca+Cb=20.2A645+8.02A663 (mg / L)
？
实验步骤
以丙酮为对照，
1. 提取液1ml，用丙酮稀释至10ml 分光光度计下分别读取A663、A645
2. 计算
Ca=12.7A663-2.69A645
Cb=22.9A645-4.68A663
CT=Ca+Cb=20.2A645+8.02A663 (mg/L
取分液漏斗
加20ml乙醚 加提取液10ml
？ 摇动
沿漏斗边缘加30ml蒸馏水
？ 轻摇，静置
·· 蒸馏水冲洗1～2次
分层，弃去下层 加5ml 30％KOH甲醇溶液，
用力摇动 ·· 振动，静置
？ ？ 静置10min
加水10ml
分层
作业
描述各实验结果并作出解释
二、叶绿素a、b含量测定
实验原理
叶绿体色素
实验六叶绿体色素的质及叶绿 素ab含量的测定
实验原理
叶绿体色素
类胡萝卜素 （含量占1/4）
叶绿素 （含量占3/4）
胡萝卜素 叶黄素 叶绿素a 叶绿素b
实验步骤
1. 叶绿体色素的提取： 称取新鲜叶片4g，剪碎。放入研钵中加丙酮10ml，
少许碳酸钙（保护叶绿素）和石英砂（增大摩擦，使叶片 研磨得更充分），研磨成匀浆，再加丙酮50ml，避光保存 至残渣发白，以漏斗过滤之（三角烧瓶），即为色素提取 液，放于暗处备用。
叶绿素a、b含量：
C×提取液体积（20ml）×稀释倍数（10） (mg / g)
样品的重量（1g）
Lambert- Beer定律 A ＝ K LC
A――吸光度 K――吸收系数 C――浓度
Ka663：82.04 Kb663：9.27 Ka645：16.75 Kb645：45.60
A663=82.04Ca+9.27Cb A645=16.75Ca+45.60Cb
Ca=12.7A663-2.69A645 Cb=22.9A645-4.68A663
Ⅰ
Ⅱ
Mg
Ⅳ
Ⅲ
Ⅴ
头部：4个吡咯环+4个甲烯基 连接，形成卟啉环，卟 啉环+Mg，与四个吡咯 环上的N相连，再与一 个副环相连
尾部：C20H39(叶醇)
叶绿素的降解与色变
-COOCH3
-COOCH3
5. 叶绿素的荧光现象：
取提取液少许于试管中，分别观察在反射光和透射光
？ 一侧提取液的颜色
6. 黄色素与绿色素的分离