实验六叶绿体色素的质及叶绿素ab含量的测定

取分液漏斗
加20ml乙醚 加提取液10ml
？ 摇动
沿漏斗边缘加30ml蒸馏水
？ 轻摇，静置
·· 蒸馏水冲洗1～2次
分层，弃去下层 加5ml 30％KOH甲醇溶液，
用力摇动 ·· 振动，静置
？ ？ 静置10min
ຫໍສະໝຸດ Baidu
加水10ml
分层
作业
描述各实验结果并作出解释
二、叶绿素a、b含量测定
实验原理
叶绿体色素
Lambert- Beer定律 A ＝ K LC
A――吸光度 K――吸收系数 C――浓度
Ka663：82.04 Kb663：9.27 Ka645：16.75 Kb645：45.60
A663=82.04Ca+9.27Cb A645=16.75Ca+45.60Cb
Ca=12.7A663-2.69A645 Cb=22.9A645-4.68A663
CT=Ca+Cb=20.2A645+8.02A663 (mg / L)
？
实验步骤
以丙酮为对照，
1. 提取液1ml，用丙酮稀释至10ml 分光光度计下分别读取A663、A645
2. 计算
Ca=12.7A663-2.69A645
Cb=22.9A645-4.68A663
CT=Ca+Cb=20.2A645+8.02A663 (mg/L
Ⅰ
Ⅱ
Mg
Ⅳ
Ⅲ
Ⅴ
头部：4个吡咯环+4个甲烯基 连接，形成卟啉环，卟 啉环+Mg，与四个吡咯 环上的N相连，再与一 个副环相连
尾部：C20H39(叶醇)
叶绿素的降解与色变
-COOCH3
-COOCH3
5. 叶绿素的荧光现象：
取提取液少许于试管中，分别观察在反射光和透射光
？ 一侧提取液的颜色
6. 黄色素与绿色素的分离
类胡萝卜素 （含量占1/4）
叶绿素 （含量占3/4）
胡萝卜素 叶黄素 叶绿素a 叶绿素b
分光光度法
根据叶绿素对某一特定波长的可见光具有吸收能力， 用Lambert- Beer定律计算出叶绿素的含量。
吸光度
Lambert- Beer定律
A ＝ KLC
浓度
吸收系数
叶绿素b的最大吸收峰：645nm 叶绿素a的最大吸收峰：663nm
叶绿素a、b含量：
C×提取液体积（20ml）×稀释倍数（10） (mg / g)
样品的重量（1g）
取两只试管，分别加入提取液少许：
一支放入黑暗处 一支放在直射光中
？ 2小时后观察颜色变化
3. 酸对叶绿素的影响
取少许提取液于试管中，逐滴加入浓HCl
？ 摇匀，观察颜色变化
4. 金属离子对叶绿素的影响
加醋酸铜粉末少许
？ 观察颜色变化
水浴，微微加热
对酸、碱、光、热不稳定
光照：引起叶绿素光敏氧化 金属离子：镁离子可被铜、锌、铁等取代 热处理：叶绿素转化为脱镁叶绿素 酸性条件下：叶绿素的镁离子被H取代 碱性条件下：叶绿素水解，脱植基叶绿素 叶绿素酶：叶绿素脱植醇
实验六叶绿体色素的质及叶绿 素ab含量的测定
实验原理
叶绿体色素
类胡萝卜素 （含量占1/4）
叶绿素 （含量占3/4）
胡萝卜素 叶黄素 叶绿素a 叶绿素b
实验步骤
1. 叶绿体色素的提取： 称取新鲜叶片4g，剪碎。放入研钵中加丙酮10ml，
少许碳酸钙（保护叶绿素）和石英砂（增大摩擦，使叶片 研磨得更充分），研磨成匀浆，再加丙酮50ml，避光保存 至残渣发白，以漏斗过滤之（三角烧瓶），即为色素提取 液，放于暗处备用。
Chla: C32H30ON4Mg
COOCH3 COOC20H39
+
H2O
Chlb:C32H28O2N4Mg CCOOOOCC2H0H3 39
Ⅰ
Ⅱ
Mg
Ⅳ
Ⅲ
Ⅴ
头部：4个吡咯环+4个甲烯基 连接，形成卟啉环，卟 啉环+Mg，与四个吡咯 环上的N相连，再与一 个副环相连
尾部：C20H39(叶醇)
2. 光照对叶绿素的影响