MMFSCNJ出口食品沙门氏菌属包括亚利桑那菌检验方法
肠道沙门氏菌双相亚利桑那亚种检验特征分析及检验方法比较研究
肠道沙门氏菌双相亚利桑那亚种检验特征分析及检验方法比较研究1.生化特征：双相亚利桑那亚种对甘露糖进行酸性产气反应，而其他亚种则不具备这一特征。
此外，双相亚利桑那亚种在甲醇中的甲酸盐试验中显示出阳性反应。
2. 抗原特征：双相亚利桑那亚种表面存在一种特殊的抗原结构，称为Salmonella菌核抗原（Vi抗原），其他亚种则不具备此抗原。
因此，Vi抗原检测可以用于鉴定双相亚利桑那亚种。
3.分子特征：通过多样性分子检测方法，如PCR和序列分析，可以检测到双相亚利桑那亚种独特的基因组序列，并确定其与其他亚种的遗传差异。
对于肠道沙门氏菌双相亚利桑那亚种的检验，目前常用的方法主要包括传统培养方法、免疫学方法和分子生物学方法。
不同方法的优缺点如下：1.传统培养方法：传统的肠道沙门氏菌检验方法包括富尔敬氏培养基的纯培养、生化鉴定和血清凝集反应等。
这些方法简单、经济，但存在一定的时间延迟和操作难度较大的问题，且不能鉴定亚种。
2.免疫学方法：包括血清学试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）和荧光抗体方法等。
这些方法可以检测Vi抗原，从而鉴定双相亚利桑那亚种。
但是，部分亚种缺乏Vi抗原，因此对所有肠道沙门氏菌亚种的检测效果有限。
3.分子生物学方法：PCR和序列分析等分子生物学方法可以针对双相亚利桑那亚种的特异序列进行靶向放大和检测。
这些方法具有高灵敏度和特异性，能够快速鉴定亚种。
然而，设备要求高，操作复杂，且相对昂贵。
总的来说，在检验肠道沙门氏菌双相亚利桑那亚种时，综合使用多种方法可以提高检测的准确性与灵敏度。
首先，可以通过传统培养方法获得沙门氏菌的纯培养，并根据生化特征进行初步分类。
然后，通过免疫学方法检测Vi抗原，进一步确定是否为双相亚利桑那亚种。
最后，对于一些无Vi抗原的亚种，可以使用分子生物学方法进行检测和鉴定。
在未来的研究中，可以进一步探索肠道沙门氏菌双相亚利桑那亚种的检验特征和检验方法，提高检测的准确性和效率，为临床的诊断和防控提供更好的支持。
沙门氏菌的检验流程及每一步检验过程的作用
沙门氏菌的检验流程及每一步检验过程的作用下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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沙门氏菌基本知识及检测方法
沙门氏菌基本知识及检测方法沙门氏菌基本知识及检测方法沙门氏菌属(Salmonella)是肠杆菌科的一个大属，有2000多个血清型，我国发现的约有100个。
沙门氏菌广泛存在于猪、牛、羊、家禽、鸟类、鼠类等多种动物的肠道和内脏中。
1880年Eberth首先发现伤寒杆菌，1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌，由于Salmon发现本属细菌的时间较早，在研究中的贡献较大，遂定名为沙门氏菌属Salmonella 。
本属细菌绝大多数成员对人和动物有致病性，能引起人和动物的败血症与胃肠炎，甚至流产，并能引起人类食物中毒，是人类细菌性食物中毒的最主要病原菌之一。
根据沙门氏菌的致病范围，可将其分为三大类群。
第一类群：专门对人致病。
如伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌(甲型、乙型、丙型)。
第二类群：能引起人类食物中毒――食物中毒沙门氏菌群，如鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、纽波特沙门氏菌等。
第三类群：专门对动物致病，很少感染人，如马流产沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌。
致病性最强的是猪霍乱沙门氏菌(Salmonella cholerae)，其次是鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)和肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)。
一、沙门氏菌属的生物学特征：1.形态染色特性：G-无芽孢杆菌。
大小通常为0.7～1.5μm ×2.0～5.0μm，菌端钝圆，散在，偶有短丝状，无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛，能运动，绝大多数菌株有菌毛。
需氧或兼性厌氧菌，生长温度范围为10～42℃，最适生长温度为37℃，适宜pH为6.8～7.8，对营养要求不高，在普通培养基中生长旺盛，胆盐可促进其生长。
2.培养特性：需氧或兼性厌氧菌；生长温度范围为10～42℃，最适生长温度为37℃；适宜pH为6.8～7.8；对营养要求不高，在普通培养基中生长旺盛；胆盐可促进其生长。
§普通琼脂：圆形、光滑、无色半透明、边缘整齐或不太整齐的中等大小(2 ～4mm)菌落。
MMFSCNJ出口酱油检验规程
M M F S C N J出口酱油检验规程The pony was revised in January 2021MM_FS_CNJ_0381出口酱油检验规程MM_FS_CNJ_0381出口酱油检验规程1.适用范围本方法适用于出口酱油的检验。
对外贸易合同、信用证及法律、法规有规定要求的，按规定检验，无上述规定的按本标准检验。
2.定义检验批：在同一时间，按同一工艺生产，规格相同、品质均匀、标志一致并具有同样质量证明书的产品构成的批。
原始样品：从一个检验批中单个容器内所取的产品。
试验样品：根据检验工作的需要将原始样品混匀后制得的供检测用样品。
恶性杂质：蚊、蝇、虫、玻璃碎屑、橡胶、塑料、漆片、头发、指甲、金属物及其他污秽物。
安全卫生项目：微生物、重金属、恶性杂质等。
3.试样的抽取.抽样原则按检验批在不同部位抽取代表性样品。
.抽样方法100件以下抽取6件，100件以上按全批总数量平方根二分之一计算抽样数量。
n ＝√—N ／2 (1)式中：n ——抽样数量（取整数，小数部分向上修约）；N ——全批总数量。
瓶装酱油每箱抽样1～2瓶，每批抽样不得少于6瓶（每瓶以500mL 计，下同），其中4瓶用于检验，留样2瓶备用。
散装酱油每批采集混合样不少于3000mL （或3kg ），分装于三个磨口瓶中（微生物抽样容器及用具均需灭菌）。
.标注抽样后必须立即在样品上标注品名、批号、生产日期、生产单位、抽样人员及抽样日期。
4.过程简述.感官检验检验场所条件应有符合卫生要求的感官检验室，室内应光线充足，通风良好，清洁、卫生、无异味；检验台应光滑平整，易于清洗、消毒、耐腐蚀，保持清洁卫生；比色管：50mL；白色瓷皿；玻璃棒。
色泽体态检验分别吸取10～15mL样液置于50mL比色管中，摇匀后在白色背景上观察，液体应透明、澄清、无沉淀、无霉花浮膜。
另取定量样品15～20mL置于预先洗净烘干的白色瓷皿中，对光观察其色泽应鲜艳，并看其起泡、消泡、挂壁等情况，检查应无杂质。
沙门氏菌的检验方法
沙门氏菌的检验方法沙门氏菌是一种主要引起食物中毒的致病菌，其检验方法主要包括培养分离、生化检测和分子生物学方法等。
下面是关于沙门氏菌检验方法的相关参考内容。
1. 培养分离沙门氏菌可以通过在选择性培养基上进行培养分离来检测。
常用的选择性培养基包括XLD培养基、SS培养基和BS培养基等。
将待检样品接种于选择性培养基上，并采用适当的温度和培养时间进行培养。
沙门氏菌在培养基上形成红色或无色的菌落，可以通过形态特征进行初步判断。
2. 生化检测生化检测是通过检测沙门氏菌代谢产物或酶活性来进行的。
常用的生化检测方法包括气体产生试验、亚甲蓝试验和尿嘧啶酸试验等。
气体产生试验通过观察沙门氏菌在培养基中是否产生氢气或硫化氢气体来判断其存在。
亚甲蓝试验则是通过观察沙门氏菌对亚甲蓝的还原作用来进行检测。
尿嘧啶酸试验则是通过检测沙门氏菌产生的尿嘧啶酸来进行。
3. 血清学检测血清学检测是通过检测人体血清中对沙门氏菌特异性抗体的存在来进行的。
常用的血清学检测方法包括凝集试验、间接荧光抗体试验和酶联免疫吸附试验等。
在这些方法中，沙门氏菌抗原与患者血清中的抗体结合，形成可见的凝集物或荧光产物，从而判断是否感染沙门氏菌。
4. 分子生物学方法分子生物学方法是通过检测沙门氏菌特异性基因序列来进行的。
常用的分子生物学方法包括聚合酶链式反应（PCR）、核酸杂交和基因测序等。
PCR方法可以通过特异性引物扩增沙门氏菌基因的特定片段，从而进行检测。
核酸杂交可以通过与沙门氏菌特异性探针结合，形成杂交信号来进行检测。
基因测序则可以直接检测沙门氏菌菌株中的特定基因序列，确定其身份。
总结：沙门氏菌的检验方法主要包括培养分离、生化检测、血清学检测和分子生物学方法等。
这些方法通过不同的途径检测沙门氏菌的存在，可以提供准确鉴定和检测结果。
在实际应用中，结合多种方法的综合应用可以提高检测结果的准确性和可靠性。
MMFSCNJ出口食品沙门氏菌属包括亚利桑那菌检验方法
MM_FS_CNJ_03出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验MM_FS_CNJ_0335出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法1. 适用范围本方法适用于冻猪肉、冻鸡肉、鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验。
其他食品可参照使用。
2.样品制备及增菌培养2.1. 肉类2.1.1.如为冷冻产品，应在45C以下不超过15min,或在2〜5C不超过18h解冻。
若不能及时检验，应置于-15C左右保存。
非冷冻而易腐的食品，置于4C 冰箱保存。
2.1.2.以无菌操作，称取剪碎后的瘦肉样品25g，置于灭菌均质杯内，加入25mL 缓冲胨水增菌液，以8000〜10000r/min均质1min,移入盛有200mL缓冲胨水增菌液的500mL广口瓶内，混合均匀，女口pH低于6.6，用灭菌1 mol/L氢氧化钠溶液，调pH至6.8 ± 0.2，于37 C水浴培养4h （以增菌液达到37 C时算起），进行前增菌；其后，移取10mL转种于盛有100mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的250mL 玻璃瓶内，摇匀，于42土1C培养20± 2h，进行选择性增菌。
必要时，同时另称取25g剪碎的瘦肉样品，加入25mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液，同样进行均质。
其后，移入盛有200ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液的500mL广口瓶内，混合均匀，如pH低于6.6，用灭菌1 mol/L氢氧化钠溶液调pH至6.8 ± 0.2，于37C培养24 ± 2h，进行直接选择性增菌。
2.2.蛋品2.2.1.冰蛋品（冰鸡全蛋、冰鸡蛋白、冰鸡蛋黄）2.2.1.1.按2.1.1 解冻和保存样品。
2.2.1.2.以无菌操作称取样品25g，置于盛有225mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的500mL广口瓶内混合均匀，女口pH低于6.6，用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液调pH 至6.8 ±0.2，于37C培养24±2h,进行直接选择性增菌。
食品中沙门氏菌的快速检验方法
86·FOOD INDUSTRY分析 检测 陈文财 惠州市食品药品检验所食品中沙门氏菌的快速检验方法泛用于遗传病诊断和微生物检验中。
（我个人认为沙门不会用）荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ检验法基于沙门氏菌ｆｉｍＹ基因序列，进行引物和探针的设计，利用基因重组技术对检测的定量标准品进行构建，可借助荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ法对沙门氏菌进行检测。
该方法操作简单、检验快速、适用范围广，在临床诊断、商品检验、食品卫生监管等领域均有运用。
多重ＰＣＲ快速检验法多重ＰＣＲ快速检验法基于质粒毒力基因ｓｐｖＣ、１６Ｓ ｒＲＮＡ、ｆｉｍＡ、致病基因ｉｎｖＢ序列设计引物，多重ＰＣＲ检测沙门氏菌株基因组ＤＮＡ，以此实现对沙门氏菌的快速检验。
多重ＰＣＲ快速检验法可对沙门氏菌的多种毒力因子进行鉴定，是沙门氏菌株检验和鉴定的新方法。
变性高效液相色谱检测法 变性高效液相色谱结合多重ＰＣＲ反应技术可对食品中的沙门氏菌进行快速检测。
该方法以ｆｉｍＹ基因为靶基因，选择引物可实现对多重ＰＣＲ体系的优化，由此可对沙门氏菌进行快速鉴别。
该方法的特异性、灵敏性较高，其扩增产物为２８４ｂｐ，可对沙门氏菌进行快速检验，并能进一步验证多重ＰＣＲ的特异性。
沙门氏菌是食物常见的病原菌，具有传播媒介多、途径繁复等特点，容易污染食品而危害人体健康。
另外，沙门氏菌是多种有紧密联系细菌的泛指，包括导致伤寒、胃肠及引起食物中毒的众多细菌。
文中提到的几种快速检验法与传统检验法相比，具有操作简单、特异性强、灵敏度高等特点。
但这些方法也存在各自缺陷，试纸快速检验法检验纯菌时，若目菌＞１０３ｃｆｕ／ｍｌ时，纸片菌斑密集，可导致假阴性反应的发生。
ＰＣＲ检验的特异型取决于所选扩增的靶序列，若为保守的特异片段，所选引物就会显示出特异型。
ＬＡＭＰ技术的产物复杂多样，引物设计要求较高，目标单链ＤＮＡ的分离困难，无法对扩增产物的序列进行分析；其在同一温度条件下采用多条引物扩增非特异性条带，可能会出现假阳性结果。
沙门氏菌检验方法(pdf 52页)
沙门氏 菌属
氏菌属
大肠菌群Coliform
变形杆
克雷伯
菌属
柠檬酸杆菌属
氏菌属
摩根菌 属
粪大肠菌群 Fecal Coliform
志贺氏 菌属
沙雷氏 菌属
克罗诺
肠杆菌属
……
大肠埃希氏菌属(大肠杆菌)E.Coli
出血性
侵袭性
致病性 非致泻
O157:H7
（非典
集聚性 产毒性
型）
目录
v 概述 v 致病性 v 细菌学特性 v 生化特性 v 血清学特性 v GB 4789.4-2010检验方法
产生乙酰甲基甲醇（V-P），对苯丙氨酸不脱氨 § 在氰化钾培养基上不生长
目录
v 概述 v 致病性 v 细菌学特性 v 生化特性 v 血清学特性 v GB 4789.4-2010检验方法
沙门氏菌血清学特性
v 抗原成份极为复杂，且有变种，因此这给血清分型带来很多困难，分 为菌体（O）、鞭毛（H）、荚膜（K、Vi）、纤毛抗原。其中菌体和鞭 毛抗原在沙门氏菌血清型的鉴别上很重要。 § O抗原：存在于细胞壁中，每一种沙门氏菌的光滑型菌株至少有一 种特异的菌体抗原，由于菌体抗原耐热性相对稳定，抗原不易丧失 或变异，因此菌体抗原已公认为沙门氏菌血清学分型的基础。O抗 原耐热，100℃~121℃加热2.5h，而不失去抗原性；用乙醇和1N盐 酸处理细菌，其抗原性不受影响。O凝集反应呈颗粒状。 § H抗原：系由不耐热的蛋白质组成，经加热和用乙醇及碱处理易变 性，失去凝集性，但不改变抗原性。加热100℃以上，H抗原会失去 活性。H凝集反应出现迅速，2h内即达最终效价。H凝集为絮状，松 散，轻摇易散开。 § K抗原：为Vi抗原和M抗原。Vi和M抗原，均为O抗原表面的荚膜抗 原，具有这种抗原的细菌，不被相应的O血清凝集。但100℃加热处 理后，虽然抗原不被灭活，而已从菌体表面脱落，游离于液体中， 从而暴露出O抗原，可以与0血清凝集。个别种有Vi抗原，如伤寒沙 门氏菌等 § 纤毛抗原：纤毛是一种比鞭毛更细小的纤维样结构物，含有蛋白性 的抗原物质。其纤毛能凝集豚鼠的红血球，该特性因加甘露糖而消 失，即谓1型纤毛。所有沙门氏菌的纤毛抗原性一样。
沙门氏菌几种检测方法简介与比较
每个平板选5个菌落
营养琼脂纯化可疑菌落
35℃ or 37℃ 18~24h
TSI，尿素酶，赖氨酸脱羧酶，ONPG，VP，吲哚
血清学试验 （O抗原，Vi抗原，H抗原）
报告结果 送参考实验室分型
加拿大HPB方法
食品中沙门菌的分离和鉴定
25g样品
MFHPB-20
营养肉汤or缓冲胨水or煌绿 水溶液 or胰蛋白酶大豆肉汤
沙
门
应得 0 2 4 1 2 4 0 0 0 0 0 4 1 2 4 1 0 4 0 2 0 菌
树枝
组合
6
7
0
编码
4
7
5
2
API 20E
沙门菌检测显色培养基
沙门氏菌在海博公司显色培 养基上的菌落特征（红）
沙门氏菌在CHROMagar 显色培养基上的菌落特（紫）
DT 2R D
C
SE A
IN V G G M I S
D P E L A NO L U N OR
1 24 1 2 4 1 2 4 1 2 4
第6位数 第7位数 结
果 R S MA A O判 GA E MR X 定
ACL YA
1 24 1 24
反应 - + +
结果
+ ++
---
- - + + ++
+- + - +-
沙门菌仪器检测法
VIDAS 应用酶联免疫技术制造的全自动免疫分析仪 ，
用荧光分析技术通过固相吸附器，用已知抗体来捕 捉目标生物体，然后以带荧光的酶联抗体再次结合， 经充分冲洗，通过激发光源检测，即能自动读出发 光的阳性标本，其优点是检测灵敏度高，速度快， 可以在48小时的时间内快速鉴定沙门氏菌、大肠杆 菌O157：H7、单核李斯特菌，空肠弯曲杆菌和葡 萄球菌肠毒素等。
肠道沙门氏菌双相亚利桑那亚种检验特征分析及检验方法比较研究
肠道沙门氏菌双相亚利桑那亚种检验特征分析及检验方法比较研究作者：来源：《食品安全导刊》2022年第01期摘要：目的：通過参加中国食品药品检定研究院组织的能力验证，比对不同检验方法对巧克力样品中沙门氏菌的检出及鉴定效果，找出不同检验方法对样品中不典型沙门氏菌分离及鉴定的特性，有效提升实验室对不典型沙门氏菌检验能力及质量控制水平。
方法：实验中样品前处理按照考核方案作业指导书进行，沙门氏菌的分离按照《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》（GB 4789.4—2016）要求进行操作，通过BAX® system Q7快速筛查可疑样品，MALDI-TOF-MS定位可疑菌株，VITEK 2 COMPACT全自动微生物分析系统确认阳性菌株，MLST技术对沙门氏菌阳性菌株进行分子生物学分型。
结果：3个样品中两个样品检出沙门氏菌，样品CODE-0695检出鼠伤寒沙门氏菌，样品CODE-0050未检出沙门氏菌，样品CODE-0542检出肠道沙门菌双相亚利桑那亚种。
结论：实验发现肠道沙门菌双相亚利桑那亚种在显色培养基上菌落形态及生化表征与常见沙门氏菌不一致，易漏检，实际工作中应加强对不典型沙门氏菌检验能力的建设。
关键词：肠道沙门菌双相亚利桑那亚种;菌株鉴定;血清分型;多位点序列分型;基质辅助激光解析电离飞行时间质谱Comparative Study on Test Characteristics Analysis and Test Methods of Salmonella Enterica Subspecies DiarizonaeLIU Yang1， MA Bingcun2， LIU Zheng1， WANG Can1， QIN Yuan1， HE Qiaoling3*（1.Sichuan Center for Medical Product Technical Inspection， Chengdu 610000， China;2.Sichuan Institute for Drug Control， Chengdu 610000， China;3.Sichuan Institute of Food Inspection， Chengdu 610000， China）Abstract： Objective： By participating in the capability test organized by China food and drug testing and Research Institute， comparison of the detection and identification effects with different testing methods on Salmonella in chocolate samples， find out the characteristics of different testing methods on the isolation and identification of atypical Salmonella in samples， and effectively improve laboratory atypical Salmonella inspection capability and quality control level. Methods：The samples pre-treatment in this experiment were carried out in accordance with the assessment plan instructions. The isolation of Salmonella was carried out according to the requirements of GB 4789.4—2016 National food safety standard-Food microbiological testing-Salmonella testing. And the suspicious samples could be screened quickly through the BAX® system Q7. Suspicious strains were located by MALDI-TOF-MS. Using VITEK 2 COMPACT automatic microbial analysis system to confirm positive strains. Then performed the molecular biology typing for positive Salmonella by MLST. Results： Salmonella was detected in two of the three samples. Salmonella typhimurium was detected in sample CODE-0695， no Salmonella was detected in sample CODE-0050. Salmonella enterica subspecies diarizonae was detected in sample CODE-0542. Conclusions： The experiment found that the colony morphology and biochemical characteristics of Salmonella enterica subspecies diarizonae in the chromogenic medium were inconsistent with common Salmonella， which could be missed detection easily. The ability to test atypical Salmonella should be strengthened in practical work .Keywords： salmonella enterica subspecies diarizonae; identification of strains; serotyping; multilocus sequence typing; MALDI-TOF-MS肠道沙门氏菌（Salmonella enterica）是一种常见的人畜共患病病原菌，主要传播方式是食用被污染的食物、水及接触带菌者，该菌造成的食物中毒事件多发于夏季。
MM FS CNJ 出口食品沙门氏菌属 包括亚利桑那菌 的荧光抗体筛选检验方法
MM_FS_CNJ_0150出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌) 荧光抗体筛选检验法MM_FS_CNJ_0150出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)的荧光抗体筛选检验方法1.适用范围本标准适用于冻猪肉、冻鸡肉鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验。
其他类食品可参照使用。
2..主要试剂和仪器2.1主要试剂0.01mol/L pH9.0磷酸盐-生理盐水缓冲溶液(PBS)：溶解无水磷酸氢二钠1.42g，氯化钠8.5g于1 000mL蒸馏水中，使完全溶解，用酸度计测定其pH值至9.0以上即可，必要时可用1mol/L氢氧化钠调整至pH9.1左右。
固定液：)30mL混匀，再加入36%～38%甲醛按顺序将无水乙醇60mL、三氯甲烷(CHCl310mL，混匀即成；注：此项固定液配制后可置4 ℃贮存，但重复使用次数以不超过3次为宜。
pH9.0碳酸盐-甘油缓冲溶液：溶解无水碳酸钠6g，无水碳酸氢钠37g于蒸馏水中，加至1000mL，使完全溶解，混匀，即成pH9.2碳酸盐缓冲液。
以上项缓冲液1份加甘油9份混匀即成。
注：①所用甘油应选用优级纯品或分析纯品。
②配成后置4 ℃贮存，在贮存期间其pH值逐渐下降，应以每2周左右重新配制一次为宜。
沙门氏菌多价荧光抗体试剂：选用经国家进出口商品检验局指定的以FITC标记的沙门氏菌A-67全价“OH”免疫球蛋白(或沙门氏菌A-60多价“OH”免疫球蛋白)，染色时应按试剂所标明的常规染色工作浓度和稀释方法进行稀释后使用。
注：①所用荧光抗体试剂应在有效期限以内。
②已稀释的荧光抗体试剂置4 ℃贮存可使用1个月左右，保持其固有的染色亮度不变，如发现其染色亮度下降，则不能继续使用。
2.2.仪器载玻片：76mm×26mm，厚度0.8～1.0mm，事先刻好编号及8个小方格，自左至右每行4格，上下共2行(或采用供免疫荧光技术专用的多凹涂膜载玻片)，用洗涤剂彻底洗净油污，擦洗干净，并经滴水检查证实无油污后，再浸于95%乙醇中保存备用。
水产食品公司实验室出口食品沙门氏菌属的检验方法
水产食品公司实验室出口食品沙门氏菌属的检验方法1．仪器和设备1．1恒温培养箱：36±1℃1．2恒温水浴箱：45±1℃1．3高压灭菌锅1．4均质器1. 5冰箱：0-4℃和-15～-20℃1．6试管:18×150mm 12 mm×100 mm1．7锥形瓶:500ml 250ml1．8平皿：直径为90mm1．9灭菌吸管1．10灭菌均质杯1．11酒精棉1．12天平:感量0.1g2．培养基的制备2．1亚硒酸胱氨酸增菌液（SC）称取23g于1升蒸馏水中在无菌容器中溶解，定量分装备用。
2．2亚硫酸铋琼脂（BS）称取49.6g于1升蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，冷却至55℃，摇匀，倾注灭菌平板备用。
培养基不需要高压灭菌，平板为橙黄色。
2．3胆硫乳琼脂称取64.3g于1升蒸馏水中，浸泡15分钟，煮沸至完全溶解，冷却至55℃，倾注灭菌平板备用。
培养基不需要高压灭菌，新制备的培养基为玉白色不透明，2．4三糖铁（TSI）称取65g于1升蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装试管12 mm×100 mm，每管约2～4ml，115℃15分钟高压灭菌，制成高层斜面备用，桔红色。
2．5尿素酶琼脂基础（U）称取2.21g于95ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121℃15分钟高压灭菌，冷却至55℃灭菌加入40％尿素溶液5ml，混匀，分装灭菌试管12 mm×100 mm，每管2～3ml，制成斜面备用。
实验与判断：大量接种于37℃培养24±2h，强阳性反应为深红色，弱阳性为粉红色，阴性为黄色或不变色。
2．6赖氨酸脱羧酶培养基（LD）称取1.9g于100ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装试管12mm×100 mm，每管1～1.5ml，，121℃15分钟高压灭菌备用。
试验与判断：大量接种于37℃培养24±2h，阳性反应为紫色，阴性反应为黄色。
2．7吲哚培养基（I）称取1.6g于100ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装试管12 mm×100 mm，每管1～1.5ml，121℃15分钟高压灭菌。
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MM_FS_CNJ_0335出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验MM_FS_CNJ_0335出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法1.适用范围本方法适用于冻猪肉、冻鸡肉、鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验。
其他食品可参照使用。
2.样品制备及增菌培养.肉类如为冷冻产品，应在45℃以下不超过15min，或在2～5℃不超过18h解冻。
若不能及时检验，应置于－15℃左右保存。
非冷冻而易腐的食品，置于4℃冰箱保存。
以无菌操作，称取剪碎后的瘦肉样品25g，置于灭菌均质杯内，加入25mL缓冲胨水增菌液，以8000～10000r／min均质1min，移入盛有200mL缓冲胨水增菌液的500mL广口瓶内，混合均匀，如pH低于，用灭菌1 mol／L氢氧化钠溶液，调pH至±，于37℃水浴培养4h（以增菌液达到37℃时算起），进行前增菌；其后，移取10mL转种于盛有100mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的250mL玻璃瓶内，摇匀，于42±1℃培养20±2h，进行选择性增菌。
必要时，同时另称取25g剪碎的瘦肉样品，加入25mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液，同样进行均质。
其后，移入盛有200ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液的500mL广口瓶内，混合均匀，如pH低于，用灭菌1 mol／L氢氧化钠溶液调pH至±，于37℃培养24±2h，进行直接选择性增菌。
.蛋品冰蛋品（冰鸡全蛋、冰鸡蛋白、冰鸡蛋黄）.按解冻和保存样品。
.以无菌操作称取样品25g，置于盛有225mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的500mL广口瓶内混合均匀，如pH低于，用灭菌1mol／L氢氧化钠溶液调pH至±，于37℃培养24±2h，进行直接选择性增菌。
干蛋品（鸡全蛋粉、鸡蛋白片、鸡蛋白粉、鸡蛋黄粉）以无菌操作将样品碾碎后，称取25g加入盛有225mL缓冲胨水增菌液的500mL广口瓶内（瓶内事先盛有直径3～4mm的玻璃珠约50粒），振荡10min，如pH低于，用灭菌1 mol／L氢氧化钠溶液调pH至±，于37℃培养20～24h，进行前增菌；其后，移取10mL转种于盛有100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液的250mL 玻璃瓶内，混匀，于42±1℃培养20±2h，进行选择性增菌。
3.分离培养.将增菌培养液摇匀，以无菌操作，用直径3mm的接种环分别挑取1环，分别划线于表面无凝结水的亚硫酸铋和胆硫乳琼脂平板各一个（必要时亚利桑那菌琼脂平板可参照使用），于37℃培养24±2h。
.观察各琼脂平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落，如无典型或可疑菌落，应再继续培养24±2h。
沙门氏菌属的菌落特征见表1。
表1.沙门氏菌属菌落特征.筛选试验每个琼脂平板至少应挑选2个典型或可疑菌落，分别用接种针接种赖氨酸脱羧酶培养基或尿素酶琼脂一管，接种后无须灭菌接种针，直接再接种三糖铁琼脂一管于37℃培养24±2h。
挑取菌落后的琼脂平板，应置于4～8℃至少保留24h，以备必要时复查。
按表2或表3结果进行判断。
注：K－产碱；＋－阳性反应；（－）－少见反应；A－产酸，——阴性反应；＋／——阳性或阴性反应。
注：K－产碱；＋－阳性反应；（－）－少见反应；A－产酸；－阴性反应；＋／－－阳性或阴性反应。
.生化试验将符合表2或表3可疑沙门氏菌属特性的三糖铁琼脂培养物，按表4进行生化试验（表中赖氨酸脱羧酶试验或尿素酶试验的结果见结果，不再另做）。
注：＋－阳性反应；－－阴性反应；d－反应不定。
所有生化试验管均于37℃培养24±2h。
生化试验结果符合表4沙门氏菌属特性的按进行。
.血清学试验检查培养物有无自凝性在洁净的玻片上加一滴生理盐水，将待试培养物混合于生理盐水滴内，使成为均一性的混蚀悬液，将玻片轻轻摇动30～60s，在黑色背景下观察反应（最好用放大镜观察）。
如菌体彼此相凝集成明显或比较明显小颗粒状物，即认为有自凝性。
反之无自凝性。
检查“O”抗原对无自凝性的培养物，按照的程度进行试验，但以多价“O”血清代替生理盐水，在2min内判断结果。
如为阳性结果以单价“O”血清进行分群试验。
如为阴性结果，必要时，可结合结果按进行试验，再以多价和单价“O”血清进行试验。
检查“Vi”抗原按照的程序进行，但以“Vi”血清代替生理盐水。
.根据和试验结果，按照表5进行判定。
表5.沙门氏菌属生化试验与血清学试验注：1 丙二酸钠试验阴性，卫矛醇试验反应不定的菌株，按上述1～6类别结果进行判断。
2 丙二酸钠试验阳性，卫矛醇试验阴性的菌株，按上述7～12类别结果进行判断。
3 如以上生化项目仍不能判定时，可按P·R·爱德华，W·H·爱文：《肠杆菌科的鉴定》（1978中译本），扩大必要的生化试验。
结合血清学作综合判定。
5.报告结果.报告阳性结果：“发现沙门氏菌”或“发现亚利桑那菌”或“发现沙门氏菌和亚利桑那菌”。
.报告阴性结果：“未发现沙门氏菌”或“未发现亚利桑那菌”或“未发现沙门氏菌和亚利桑那菌”。
6.培养基.营养肉汤（NB）蛋白胨酵母膏氯化钠葡萄糖蒸馏水将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至±，分装试管（12mm×100mm），每管约3mL高压灭菌121℃，15min。
.营养琼脂（NA）蛋白胨酵母膏氯化钠葡萄糖琼.脂蒸馏水将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至±，分装试管（12mm×100mm），每管约3mL，高压灭菌121℃，15min。
.缓冲胨水增菌液（BP）蛋白胨氯化钠磷酸氢二钠（含12个结晶水）磷酸二氢钾蒸馏水将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至±高压灭菌121℃，15min，临用时，以无菌操作分装灭菌玻璃瓶，每瓶200mL 或225mL。
.亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）蛋白胨乳糖磷酸氢二钠（含12个结晶水）亚硒酸氢钠L-胱氨酸蒸馏水除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸外，将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约10min，加热煮沸5min至完全溶解，冷至55℃以下，以无菌操作加入亚硒酸氢钠和1g／1 L-胱氨酸溶液……胱氨酸溶液10mL（称取胱氨酸，加1 mol／L氢氧化钠溶液15mL，使溶解，再加灭菌蒸馏水至100mL即成，如为DL-胱氨酸，用量应加倍）。
摇匀，调至±，以无菌操作分装灭菌玻璃瓶内，每瓶100mL或200mL。
.四硫磺酸盐煌绿增菌液（TTB）基础液蛋白胨牛肉膏氯化钠碳酸钙蒸馏水除碳酸钙外，将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，再加入碳酸钙，调至±高压灭菌121℃，20min。
硫代硫酸钠溶液硫代硫酸钠（含5个结晶水）蒸馏水加至高压灭菌121℃，20min。
碘溶液碘片碘化钾蒸馏水加至将碘化钾充分溶解于少量的蒸馏水中，再投入碘片，振摇玻瓶至碘片全部溶解为止，然后加蒸馏水至规定的总量，贮存于褐色瓶内，塞紧瓶盖备用。
煌绿水溶液煌.绿蒸馏水溶解后，存放暗处，不少于1d，使其自然灭菌。
牛胆盐溶液牛胆盐蒸馏水加热煮沸至完全溶解，高压灭菌121℃，20min。
制备基础液硫代硫酸钠溶液碘溶液煌绿水溶液牛胆盐溶液临用前，按上列顺序，以无菌操作依次加入基础液中，每加入一种成分，均应摇匀后再加入另一种成分。
最后分装于灭菌玻璃瓶内，每瓶100mL或225mL。
.亚硫酸铋琼脂（BS）蛋白胨牛肉膏葡萄糖硫酸亚铁磷酸氢二钠煌绿或5g／L水溶液5mL柠檬酸铋铵亚硫酸钠琼脂蒸馏水将前三种成分加入300mL蒸馏水（制作基础液），硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20mL和30mL蒸馏水中，柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一20mL和30mL 蒸馏水中，琼脂加入600mL蒸馏水中。
然后分别搅拌均匀，静置约30min，加热煮沸至完全溶解。
冷至80℃左右时，先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀，倒入基础液中，混匀。
将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀，倒入基础液中，再混匀。
调至±，随即倾入琼脂液中，混合均匀，冷至50～55℃。
加入煌绿溶液，充分混匀后立即倾注平皿，每皿约20mL。
本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性，新配制的培养基呈玉白色不透明，贮于室温暗处，超过48h会降低其选择性，本培养基宜于当天制备，第二天使用。
.胆硫乳琼脂（胆盐.硫化氢.乳糖琼脂.DHL）蛋白胨牛肉膏乳糖蔗糖牛胆盐硫代硫酸钠柠檬酸钠柠檬酸铁铵中性红或5g／L水溶液6mL琼.脂蒸馏水除中性红和琼脂外，将其他成分加入400mL蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至±。
另将琼脂加入600mL蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解。
将两种溶液混合后，再加入5g／L中性红水溶液6mL，搅拌均匀，冷至50～55℃，倾注平皿，每皿约20mL。
本培养基不需高压灭菌，也不再进行任何加热。
制成的平板为橙黄色。
.亚利桑那菌琼脂（SA）蛋白胨酵母膏牛胆盐蔗糖丙二酸钠卫矛醇葡萄糖氯化钠硫代硫酸钠柠檬酸铁铵酚红或5g／L溶液8mL琼脂蒸馏水除酚红和琼脂外，将其他成分加入400mL蒸馏水中，搅拌均匀，加热煮沸至完全溶解，调至±。
将琼脂加入600mL蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，冷至约90℃，将上述溶液加入琼脂中，摇匀，再加入酚红指示剂，混匀，冷至50～55℃，倾注平皿，每皿约20mL。
本培养基不需高压灭菌，制成的平板为透明桔红色。
.三糖铁琼脂（TSI）蛋白胨牛肉膏乳糖蔗糖葡萄糖硫酸亚铁铵（含6个结晶水）酚红或5g／L溶液5mL氯化钠硫代硫酸钠琼脂蒸馏水除酚红和琼脂外，将其他成分加入400mL蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至±。
另将琼脂加入600mL蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解。
将上述两溶液混合均匀后，再加入酚红指示剂，混匀，分装试管（12mm×100mm），每管约2～4mL，高压灭菌121℃10min或115℃ 15min，灭菌后置成高层斜面，呈桔红色。
.赖氨酸脱羧酶培养基（LD）酵母膏葡萄糖L-赖氨酸溴甲酚紫或8g／L溶液2mL蒸馏水除溴甲酚紫外，将其他成分加入蒸馏水中，搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解，调至±，加入溴甲酚紫，混匀，分装试管（12mm×100mm），每管1～，高压灭菌121℃，15min。
试验与判断：接种待试菌，于37℃培养24±2h。
阳性反应为紫色，阴性为黄色。