双歧杆菌与乳酸菌筛选培养基
通用医学检验科模拟题2021年(101)_真题-无答案
通用医学检验科模拟题2021年(101)(总分98.XX02,考试时间120分钟)A1/A2题型1. 从混有杂菌的标本中分离葡萄球菌的首选培养基是A. 巧克力琼脂培养基B. EMB培养基C. 卵黄双抗培养基D. 高盐甘露醇培养基E. 卵黄甘露醇培养基2. 肺炎链球菌的主要致病因素是A. 鞭毛B. 菌毛C. 荚膜D. 外毒素E. 内毒素3. 与鉴别脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌有关的试验是A. 葡萄糖发酵B. 乳糖发酵C. 果糖发酵D. 麦芽糖发酵E. 蔗糖发酵4. 正常人体内及体表多处有葡萄球菌存在而不引起人的疾病，其中最主要的带菌部位是A. 咽喉B. 皮肤C. 鼻腔D. 肠道E. 泌尿道5. 乙型溶血性链球菌的致病物质不包括A. 溶血素OB. 肠毒素C. 致热外毒素D. 溶血素SE. M蛋白6. 大叶性肺炎时痰液的性状多为A. 铁锈色B. 红色C. 烂桃样D. 棕褐色E. 黄色7. 人体患伤寒后的血清抗体变化，叙述不正确的是A. O与H抗体在体内的消长情况不同B. IgM类O抗体出现较早，持续约半年C. IgM类O抗体消失后不易受伤寒等病原菌的非特异抗原刺激而重新出现D. IgG类H抗体出现较早，持续约半年E. IgG类H抗体消失后易受非特异抗原刺激而重新出现8. 肥达氏反应，有诊断价值的结果是A. O凝集价≥1：80，H凝集价≥1：80B. O凝集价≥1：80，H凝集价≥1：160C. O凝集价≥1：160，H凝集价≥1：80D. O凝集价≥1：160，H凝集价≥1：160E. O凝集价≥1：160，H凝集价≥1：3209. DNA酶阳性的细菌是A. 黏质沙雷菌B. 肺炎克雷伯菌C. 产气肠杆菌D. 阴沟肠杆菌E. 大肠埃希菌10. 迁徒扩散生长的细菌可能是A. 普通变形杆菌B. 肺炎克雷伯菌C. 黏质沙雷菌D. 大肠埃希菌E. 伤寒沙门菌11. 细菌菌体抗原的特异性在于A. 脂类AB. 外侧多糖链C. 核心多糖链D. 内毒素E. 外毒素12. 肺炎患者痰标本为砖红色胶胨样，可能感染的细菌是A. 肺炎链球菌B. 葡萄球菌C. 肺炎克雷伯菌D. 铜绿假单胞菌E. 链球菌13. 耐热肠毒素的检测方法是A. 兔肠段结扎法B. 皮肤毛细血管通透性试验C. Elek法D. 乳鼠灌胃法E. 豚鼠眼结膜法14. 双歧杆菌、乳酸菌需要哪种培养A. 一般培养法B. 二氧化碳培养法C. 厌氧培养法D. 微氧培养法E. 专性需氧培养15. 我国院内感染最常见的菌属是A. 克雷伯菌属B. 肠杆菌属C. 哈夫尼亚菌属D. 沙雷菌属E. 枸橼酸菌属16. 沙门菌的H抗原是指A. 鞭毛B. 脂多糖C. 外膜蛋白D. 菌毛主要亚单位E. 荚膜多糖17. 所致的疾病似痢疾，腹泻呈脓血便，里急后重，称为志贺样大肠埃希菌的是A. 肠产毒型大肠埃希菌B. 肠侵袭型大肠埃希菌C. 肠致病型大肠埃希菌D. 肠出血型大肠埃希菌E. 肠聚集型大肠埃希菌18. 葡萄球菌感染可引起烫伤样皮肤综合征的是A. 溶血素B. 杀白细胞素C. 肠毒素D. 表皮剥脱毒素E. 毒素休克综合征毒素19. 判定致病性葡萄球菌的主要试验是A. 甘露醇发酵B. 耐热DNA酶测定C. 明胶液化D. 触酶试验E. 蔗糖发酵试验20. 金黄色葡萄球菌与表皮葡萄球菌共有的特点是A. 产生金黄色色素B. 有核糖核酸酶C. 甘露醇发酵D. 血浆凝固酶E. SPA21. 分离脑膜炎奈瑟菌的最佳培养基是A. 血平板B. EMB培养基C. 巧克力培养基D. 卵黄平板E. 麦康凯平板22. 关于脑膜炎奈瑟菌，叙述不正确的是A. 镜下呈肾形或豆形成双排列、坦面相对的革兰阴性球菌，具有荚膜B. 本菌是流行性脑脊髓膜炎的病原菌C. 本菌经空气传播，定植于人的脑皮质部位D. 人类是脑膜炎奈瑟菌的惟一宿主E. 本菌对外界环境的抵抗力弱，易自溶23. 肺炎患者痰标本为黄色脓痰、黏厚，可能感染了A. 肺炎链球菌B. 葡萄球菌C. 肺炎克雷伯菌D. 铜绿假单胞菌E. 链球菌24. 某医院新生儿病房发生剥脱性皮炎流行，为追踪引起剥脱性皮炎的金黄色葡萄球菌带菌者，应对医务人员及患儿做A. 细菌学涂片染色镜检B. 细菌分离培养和鉴定C. 血清中葡萄球菌抗体效价滴定D. 金黄色葡萄球菌噬菌体分型E. 血浆凝固酶试验25. 下列可用作B群链球菌鉴定的试验是A. 杆菌肽敏感试验B. 肝汁七叶苷水解试验C. cAMP试验D. 山梨醇发酵试验E. 6．5％NaCl生长试验26. 埃希菌属是A. 革兰阴性短杆菌，散布排列，大多有周鞭毛B. 革兰阳性，菌体染色不均匀，菌体一端或两端膨大C. 革兰阴性较粗大的杆菌，有明显的荚膜，无鞭毛D. 革兰阴性，弧形或逗点状，细菌一端有单鞭毛E. 革兰阴性双球菌，无鞭毛27. 能在SS琼脂上生长的大肠埃希菌菌落的颜色是A. 浅红B. 深红C. 黄D. 无E. 深灰28. 关于志贺菌A群Ⅰ型产生的志贺毒素的特性，叙述不正确的是A. 具有神经毒性B. 具有细胞毒性C. 具有肠毒性D. 由A和B亚单位组成E. 亚单位是毒素的活性部位，能抑制蛋白合成29. 对鉴别痢疾志贺菌与其他志贺菌最有价值的试验是A. 甘露醇利用试验B. 乳糖发酵试验C. 蔗糖利用试验D. 木糖利用试验E. β－半乳糖苷酶试验30. 在肠杆菌科的细菌鉴定中，如何选用选择性培养基主要取决于A. 标本类型B. 取材的时间C. 标本量的多少D. 临床要求E. 细菌的种类31. 关于痢疾志贺菌，叙述错误的是A. 在中国蓝培养基上形成红色小菌落B. 无鞭毛C. 可产生对Vero细胞有毒性作用的Vero毒素D. 可引起败血症E. 其胞质中存在与其侵袭性和耐药性有关的质粒32. 下列哪一项不是肠产毒型大肠埃希菌的特性A. 常见于婴幼儿和旅游者腹泻B. 致病物质包括不耐热肠毒素C. 致病物质包括耐热肠毒素D. 可以是轻度腹泻，也可呈严重的霍乱样症状E. 血性结肠炎33. 大肠埃希菌H抗原是A. 耐热蛋白质B. 不耐热蛋白质C. 多糖磷脂D. B+CE. A+B34. DNA酶阳性的菌属是A. 克雷伯菌属B. 肠杆菌属C. 哈夫尼亚菌属D. 沙雷菌属E. 大肠埃希菌35. 大多数肠道杆菌是肠道的A. 强致病菌B. 正常菌群C. 弱致病菌D. A+BE. B+C36. 关于感染伤寒沙门菌后人体免疫情况的描述错误的是A. 病愈后，有牢固的免疫力B. 主要是细胞免疫C. 血液中特异性抗体对胞内菌作用很大D. 胃肠炎的恢复与局部生成的分泌型IgA有关E. 可形成健康携带者37. 葡萄球菌A蛋白是一种细菌表面蛋白，其英文简称是A. HRPB. SPAC. SAPD. SSPE. ASP38. 我国流行的脑膜炎奈瑟菌菌株主要是A. Y群B. W-135群C. C群D. B群E. A群39. 可用荚膜肿胀试验分型的细菌是A. 肺炎链球菌B. 金黄色葡萄球菌C. 甲型溶血性链球菌D. 乙型溶血性链球菌E. 丙型溶血性链球菌40. 关于耐甲氧西林葡萄球菌，叙述不正确的是A. 已成为目前葡萄球菌医院感染的主要问题B. 耐药菌携带的耐药基因是mecAC. 在琼脂筛选试验中只要有1个菌落生长，就判为耐药D. 体外药敏试验表现为敏感的药物，临床疗效也一定好E. 在药敏培养基中加入2％～4％氯化钠可提高耐药菌的检出率41. 链球菌分类的根据是A. 在血液琼脂培养基中溶血的情况B. 产生色素的颜色C. 细菌的致病作用D. 鞭毛抗原的特异性E. 对营养的要求42. 下列关于金黄色葡萄球菌的描述正确的是A. 革兰染色阴性B. 能产生凝固酶C. 不发酵甘露醇D. 培养需要特殊培养基E. 血液为主要带菌部位43. 一位中年男性自述排尿困难、尿急、尿痛、尿频，有婚外性行为。
【课件】乳酸菌的筛选及应用PPT
2、筛选过程
样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适 的稀释度涂布→37℃培养48h→挑选产生溶钙 圈的菌落反复在MRS培养基上划线→挑起单 菌落染色，经镜检确认为纯种→挑选革兰氏 阳性单菌落→试管穿刺4℃冰箱保存。
（二）溴甲酚绿指示剂法
1、培养基：MRS培养基（含溴甲酚绿酒精溶液） 2、筛选过程：同上，不同之处是稀释涂布后长
3、 双歧杆菌
样品来源：婴儿新鲜粪便 培养基：MRS培养基、NPNL培养基 、TYP培养基、
PTYG培养基
培养温度：37℃ 需氧情况：严格厌氧 筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离法
第三部分、乳酸菌的应用
一、乳酸菌的生理功能
①维持肠道菌群的微生态平衡； ②增强机体免疫功能； ③预防和抑制肿瘤发生； ④提高营养利用率、促进营养吸收； ⑤控制内毒素、降低胆固醇； ⑥ 延缓机体衰老。
聚乳酸是以微生物发酵产物乳酸为单体用化学 合成方法聚合而成的一种高分子材料，它无毒、无 刺激性。
聚乳酸制品废弃后在土壤或水中，30天内会在 微生物、水、酸和碱的作用下彻底分解成CO2和H2O， 不会对环境产生污染，因而是一种完全可生物降解 的材料。
（2）聚乳酸的生产过程
目前聚乳酸的生产和制备主要有：
（4）前景
PLA作为一个新型的医用、生物可降解塑料在 我国有广阔的市场发展前景。生物降解塑料大多数 是天然高分子与常用塑料复合体系，或基于天然高 分子(主要是淀粉、纤维素)的改性。
PLA合成直链脂肪族聚酯，在医用领域是最重 要的可降解高分子材料，已越来越受到重视。PLA 树脂替代现有降解材料已成为市场发展的必然趋势， 并具有与烯烃类聚合物竞争的能力，“绿色生态塑 料”的市场前景将十分看好!
3、明串珠菌属（Leuconostoc）
产细菌素双歧杆菌的筛选及其分泌条件研究_尚楠
产细菌素双歧杆菌的筛选及其分泌条件研究尚 楠，王 洋，任发政，李平兰*(中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京100083)摘 要：以32株我国广西巴马长寿老人源双歧杆菌为材料，以植物乳杆菌PL-2为指示菌，经筛选获得1株具有明显抗菌效果的双歧杆菌L-SN 。
排除有机酸、H 2O 2等干扰因素，经硫酸铵沉淀粗提，蛋白酶敏感性实验后确定其产生的抗菌物质为细菌素。
通过形态学、生理生化以及16S rRNA 序列分析鉴定菌株L-SN 为动物双歧杆菌乳亚种(Bi fi dobacterium animalis subsp . lactis L-SN)。
进一步研究菌株L-SN 产细菌素的生物学特性，确定其最佳分泌细菌素条件为起始pH6.5、培养温度30℃、培养时间28h 。
在此基础上，考察菌株L-SN 所产细菌素的抗菌谱，发现其具有广谱的抗菌效果，尤其对金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌等致病菌有显著的作用，显示出该双歧杆菌的潜在开发应用前景。
关键词：双歧杆菌；筛选；细菌素；分泌特性Screening of Bacteriocin-producing Bi fidobacterium Strain and Culture Coditions for Bacteriocin Secretion SHANG Nan，WANG Yang，REN Fa-zheng，LI Ping-lan *(College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing100083, China)Abstract ：Bi fi dobacterium L-SN capable of producing an antimicrobial substance that was effective against Lactobacillus plantarum PL-2 was screened from 32 strains of Bi fi dobacterium isolated from the feces of centenarians in Bama county of Guangxi region. By eliminating the effects of organic acid and H 2O 2, we con fi rmed the antimicrobial role because of bacteriocin. Based on morphological, physiological and biochemical characteristics and 16S rRNA sequence analysis, the strain L-SN was identi fi ed as Bi fi dobacterium animalis subsp. lactis . We investigated the secretion characteristics of Bi fi dobacterium animalis L-SN and established the optimum incubation conditions for producing bacteriocin: 28 h of culture at 30 ℃ and initial medium pH 6.5. The bacteriocin had a wide spectrum of antibacterial activities against Gram-positive and Gram-negative bacteria, especially against Staphylococcus aureus , Escherichia coli and Listeria monocytogenes showing a potential application prospect.Key words ：Bi fi dobacterium ；screening ；bacteriocin ；secretion characteristics 中图分类号：Q 936 文献标志码：A 文章编号：1002-6630(2013)23-0170-06doi:10.7506/spkx1002-6630-201323036收稿日期：2013-09-21基金项目：国家自然科学基金项目(31071591)作者简介：尚楠(1990—)，女，硕士研究生，主要从事益生菌的研究。
婴儿双歧杆菌BI-G201的分离与鉴定
婴儿双歧杆菌BI-G201的分离与鉴定冯仕云;龚萍;蒋德意;韩迪【摘要】从由健康母乳喂养的婴儿肠道内容物中取得的5份样品中,利用选择性培养基和需氧条件分离筛选得到6株双歧杆菌。
经菌落形态特征、生理生化特性及糖发酵试验,6株乳酸菌的鉴定结果为:2株长双歧杆菌(Bifidobacterium longum),2株乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis),2株婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)。
再经过16S r RNA基因序列测序分析对比,确认分别为长双歧杆菌、乳双歧杆菌和婴儿双歧杆菌BI-G201。
【期刊名称】《生物化工》【年(卷),期】2016(000)006【总页数】4页(P41-43,46)【关键词】婴儿肠道;双歧杆菌;分离;鉴定;16S rRNA基因序列测序【作者】冯仕云;龚萍;蒋德意;韩迪【作者单位】润盈生物工程(上海)有限公司【正文语种】中文【中图分类】R371899年，法国巴黎儿童医院的蒂赛（Henry Tissier），从婴儿粪便中分离了第1株双歧杆菌（当时称为分叉杆菌）[1]，并且他发现双岐杆菌与婴儿患腹泻的频率及营养都有关系。
双歧杆菌是人体肠道菌群中的重要成员，有着至关重要的作用，维持着肠道菌群的微生态平衡，有调节肠胃、增强免疫力、抗菌、防肿瘤甚至影响人体认知等多种重要的生理功能[2-6]。
在人体肠道中，随着年龄的增长，有益菌的种类与数量明显有所下降。
所以，在母乳喂养的婴儿体内是最多的，尤其双歧杆菌在母乳喂养儿肠道内大量存在，对婴幼儿有许多生理功能方面的好处，其中婴儿双歧杆菌就是其中一种菌种。
近年来，随着人们对健康意识的逐渐提升，双歧杆菌也被广泛地应用于医药、保健品或食品中[7]。
该文从婴儿肠道内容物中分离出婴儿双歧杆菌，对其进行生化研究及鉴定，从而为以后长期的研究和应用打下良好的种质资源基础。
1.1 样品来源采集由健康母乳喂养的婴儿的肠道内容物样品5份。
婴儿粪便中益生菌的分离筛选及培养
婴儿粪便中益生菌的分离筛选及培养作者：郑丽君吴秀英李洪亮来源：《农产品加工·上》2019年第04期摘要：采用从婴儿粪便中提取具有益生作用的菌种，为下一步的研究开发做乳酸菌种库做积累。
选取河南省洛阳市 5位志愿者进行样品采集，得到5份完全由母乳喂养的婴儿（2月龄）自然排出的粪便样，并分离纯化出5株乳酸菌（RS1， RS2，RS3，RS4，RS5）和5株双歧杆菌（SQ1，SQ2，SQ3，SQ4，SQ5），经鉴定，确定RS3和SQ1具有益生作用的。
结果表明，此2株菌具有较好的耐酸性、胆盐耐受力，对温度敏感，对模拟胃液和肠液具有较强的耐受力，且对大肠杆菌、沙门氏菌具有95%以上的抑菌率，可作为优良的益生菌候选菌种。
关键词：婴儿粪便；乳酸菌；双歧杆菌；分离鉴定中图分类号：S852.6 文献标志码：A doi：10.16693/ki.1671-9646（X）.2019.04.003Isolation and Cultivation of Probiotics from Infant FaecesZHENG Lijun，WU Xiuying，LI Hongliang，SUN Tao（Inner Mongolia Mengniu Dairy Industay（Group）Co.，Ltd，Huhot，Inner Mongolia 011517，China）Abstract：Along with increased recognition of the probiotics， however， the basic mechanism of probiotics hasn't been completely unified up to now，which needs further research and analysis. The purpose of this study was to isolate probiotic strains from the feces of infants，and to lay the foundation for constructing the library of probiotics next step. Five natural excrement samples were collected from full breastfeeding babies（2 months）of Luoyang He'nan，five Lactic acid bacteria （RS1，RS2，RS3，RS4，RS5）and five Bifidobacterium（SQ1，SQ2，SQ3，SQ4，SQ5）were isolated after purification. Furthermore，two strains（RS3，SQ1）were characterized to have probiotic function. The results showed that these two strains were well resistant to acid and bile condition，sensitive to temperature，and highly tolerant to simulated gastric and intestinal fluid. In addition，up to 95% E. Coli and Salmonella were inhibited by these two strains. Based on their phenotypic characteristics，（RS3）and（SQ1）can be excellent candidates of probiotics library.Key words：baby faeces；Lactobacillus；Bifidobacterium，；isolation and identification0 引言益生菌是一類可以对宿主细胞起到有益作用的活性微生物，定植在人体肠道和生殖系统中[1]，分为乳酸菌类、双歧杆菌类、革兰氏阳性双歧杆菌。
双歧杆菌微胶囊化及其应用研究
双歧杆菌微胶囊化及其应用研究双歧杆菌微胶囊化及其应用研究引言双歧杆菌是一种益生菌，常被用于维护肠道健康。
然而，双歧杆菌的存活率受限于酸性环境和胃液对其的破坏。
为了提高双歧杆菌的生存率并扩大其应用范围，学者们开始研究将双歧杆菌微胶囊化的方法。
本文将系统地探讨双歧杆菌微胶囊化及其应用的研究进展。
双歧杆菌微胶囊化的方法1. 壳聚糖微胶囊化壳聚糖作为一种生物可降解材料，被广泛应用于微胶囊化工艺中。
研究者通过静电喷雾、包埋法等方法将双歧杆菌包裹在壳聚糖微胶囊中，形成一层保护层，保护菌株不受外界环境的侵害。
2. 乳酸菌培养基微胶囊化将双歧杆菌培养在含有乳酸菌培养基的纳米胶囊中，通过微生物发酵作用，让双歧杆菌自行形成微胶囊。
这种方法能够提高双歧杆菌的存活率，并保证微胶囊内营养物质的供应。
3. 多糖复合微胶囊研究人员还尝试使用多糖材料制备微胶囊，以提高双歧杆菌的存活率和释放效果。
多糖材料能够提供良好的保护层，保持微胶囊的结构稳定性，并在合适的条件下释放双歧杆菌。
双歧杆菌微胶囊化的应用1. 食品工业双歧杆菌微胶囊可以应用于酸性食品中，如酸奶、发酵饮料等，提供更好的益生菌供给。
微胶囊化处理可以保护双歧杆菌不受环境的影响，并延长其在食品中的存活时间。
2. 药品开发双歧杆菌微胶囊化可以改善其在药物中的应用效果。
通过微胶囊化，双歧杆菌可以更好地存活于酸性胃液中，提高生物利用度。
另外，微胶囊化还可以降低药物剂量，减少副作用。
3. 动物饲料添加剂双歧杆菌微胶囊添加到动物饲料中，可以提高动物的消化吸收效果，增强免疫力。
同时，微胶囊化也可以减少营养物质的流失，提供更加可靠的营养支持。
结论双歧杆菌微胶囊化是一种提高双歧杆菌存活率和应用效果的有效手段。
壳聚糖微胶囊化、乳酸菌培养基微胶囊化、多糖复合微胶囊是常见的微胶囊化方法。
双歧杆菌微胶囊化的应用领域涉及食品工业、药品开发以及动物饲料添加剂等多个领域。
未来的研究应重点关注微胶囊化技术的改进及其在更多领域中的应用综上所述，多糖材料制备的微胶囊可以有效提高双歧杆菌的存活率和释放效果。
母乳婴儿源益生菌筛选鉴定及其潜在益生特性研究
母乳婴儿源益生菌筛选鉴定及其潜在益生特性研究母乳婴儿源益生菌筛选鉴定及其潜在益生特性研究引言母乳是新生儿最理想的营养来源，不仅含有丰富的营养物质，而且富含益生菌，对婴儿的免疫系统和肠道健康具有重要作用。
近年来，关于母乳中益生菌的研究逐渐得到关注，本文将对母乳中的益生菌进行筛选鉴定并探讨其潜在的益生特性。
一、母乳中益生菌的筛选鉴定方法1. 分离和培养：从新鲜的母乳样品中分离出益生菌，并在适宜的培养基上进行培养。
常用的培养基有MRS培养基、LBS培养基等。
2. 形态学鉴定：通过观察益生菌形态特征，如菌落形态、菌体形态等，进行初步鉴定。
3. 生理学鉴定：通过对益生菌生理特性的研究，如产酸、产气、耐酸碱等，进一步鉴定益生菌的种属。
4. 分子生物学鉴定：利用PCR技术对益生菌的16S rDNA进行扩增和测序，通过比对NCBI数据库中的序列，鉴定母乳中益生菌的亲缘关系。
二、母乳中益生菌的分类和特征1. 乳酸菌：包括双歧杆菌、乳酸杆菌、轮状乳杆菌等。
乳酸菌具有产酸、抗菌、调节肠道菌群等功能。
2. 双歧杆菌：是最常见的母乳中益生菌之一，具有调节免疫功能、促进钙吸收等作用。
3. 双叉杆菌：主要存在于母乳中，能够抑制致病菌的生长，增强免疫系统的功能。
4. 嗜酸乳杆菌：具有抑制肠道致病菌生长的作用，有助于维持肠道菌群的平衡。
三、母乳中益生菌的潜在益生特性1. 免疫调节：母乳中的益生菌能够通过调节免疫细胞的功能，增强婴儿的免疫系统。
研究发现，摄入乳酸菌可以增加婴儿体内免疫球蛋白的水平，提高抗体的产生能力。
2. 肠道健康：益生菌可以调节肠道的菌群结构，增加有益菌的数量，抑制有害菌的繁殖。
同时，益生菌产生的乳酸和短链脂肪酸有助于维持肠道的酸碱平衡，促进肠道的健康。
3. 营养吸收：益生菌可以分解食物中难以消化的纤维素，产生有益的代谢产物，提高营养物质的吸收率。
研究表明，双歧杆菌能够促进钙、铁等矿物质的吸收。
4. 抗菌作用：益生菌能够产生抑菌物质，抑制病原菌的繁殖。
乳酸菌和双歧杆菌制剂对小鼠肠道菌群失调模型的调节作用
第 １ ６期
２ ０ １ ３年 ６月
科
学
技
术
与
工
程
Ｖｏ １ ． １ ３ Ｎ ｏ ． １ ６ Ｊ ｕ ｎ ．２ ０ １ ３
１ ６ ７ １ —１ ８ １ ５ （ ２ ０ １ ３ ） １ ６ － ４ ４ ９ ７ — ０ ４
Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ａ ｎ ｄ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ
于选择肠球菌 ； 乳酸杆 菌选择 培养基 （ ＭＲ Ｓ ） 用 于
菌、 乳酸菌、 双 歧杆 菌 的菌 落数 ， 并 以每 克 盲 肠 内容 物 中菌落 数 的常用 对数 表示 。
１ ． ３ ． ４ 双歧杆 菌和 乳酸 杆 菌的调 节治 疗
选择乳酸杆 菌 ； 双歧杆 菌选择 培养 基 （ Ｂ Ｂ Ｌ） 选 择
后， 检测被检菌群 的数量 。结果 不同剂量头孢 曲松钠灌 胃的小 鼠盲肠体 积均有所增 大 ， 模 型组的优势 菌的数量 显著 减少。通
过 口服 乳酸菌和双歧杆菌制剂 ， 可 以适 当的恢复乳酸 菌和双 歧杆 菌的数量 。与对 照组 比较 差异 显著 。说 明实 验成功地 制备 了小 鼠的肠道 菌群 失衡模 型 ， 模 拟长 期应用抗 生素的机 能环境 ， 通过 外源性 的补充 乳酸菌和双 歧杆 菌 ， 对 保持肠道 菌群 的平 衡具有调 节和修 复作用。
关键词
乳酸菌
双歧杆菌
抗 生素 文献标 志码
菌群 失调 Ｂ
中图法分类号
１ １ ３ ７ ８ ． ９ １ ；
哺乳 动 物肠 道 内存 在 数 量 庞 大 、 结 构 复 杂 的 正 常菌 群 ， 对 宿 主 具有 营养 、 免 疫 和 生 物 拮 抗 等 作
双歧杆菌和乳酸菌的一种简便快速计数法
双歧杆菌和乳酸菌的一种简便快速计数法/Lf/微生7l,)双歧杆菌和乳酸菌的一种简便快速计数法(复美军互磊,和微生物:j=海南433)|一3当前,含双歧杆菌和乳酸菌的各种微生态调节剂正在国内外迅速发展''为确保这类制剂的质量,活菌计数极其重要可是,由于这两类细菌都是厌氧菌,在计数方法上需要特殊的设备和较复杂的操作技术,因此现有方法还很不理想.我们根据高层半固体琼脂培养基具有良好厌氧性能的原理在必要的条件试验基础上,提出了一种适用于双歧扦菌和乳酸菌等不产气厌氧菌的简便快速活菌计数法(下称本法),现简报如下.l材料和方法.1l菌种两歧双歧杆菌(Bifidobacteriumb~dum)A TCC29521菌株(由美国UMDNJ的J.Fu教授喜赠):青春双歧杆菌(B.adolescentis)FTB[菌株r由本实验室自国内纯菌产品中分得):嗜酸乳扦菌(Lactobacillusacidophilus)FALA菌株(由本实验室自国外纯菌胶囊中分离).1.2培养基VL琼脂培养基:按文献【3]方法配制:MRS培养基和LAB培养基:按文献[4】方法配制.2结果2I本法的操作步骤和实验条件操作步骤如图IIImIImIImlhnlImli图I用高层半固体琼脂试曾进行系列稀释l试样:2装有玻璃珠和99mi生理盐水的250ml血浆瓶(预先煮沸除氧):3.9ml高层半固体培养基(未凝前)经试验,本法的最适琼脂谁度为O.3%～O4%:稀释时,用吸管上下轻搅3～5敬{不能产生气泡)培养温度为37℃;培养时间一般为16～24h(不超过36h),稀释度以每管菌落数在30～300为宜/一,I∑】xl0/9计算公式为:活菌数(个/m1)='-一×稀释倍数:用来计数的试管数:N:不同试管中所长的菌落数.上悔市高拉科技发展基垒项目.微生物学专业1995届本科生严二平和孙刚曾参加部分实验1996届硕士研究生.本文于1995年7月26H收到.1期马向前等:双歧杆菌和乳酸苗的一种简便快速计数法63由于在此法中,稀释管和计数管是同一试管,所以计数时应注意两点,一是因每支试管在混匀后都要吸出Ina].最后均为9ml,所以应乘以10/9才能表示每毫升菌液实际含苗落数;二是后稀释度的试管中长出的菌落数实为前一稀释度每毫升的活菌数,所以在乘稀释倍数时切忌出错22本法与其他方法的比较本法与平板厌氧罐培养法通用乳酸菌计数法比较的结果见表1表l本法与其f酉涪的比较注:双歧杆菌用VL琼脂培养基培养.乳酸菌和酸奶样品用MRS培养基培养.从表I可以看出,本法与常规的两种计数方法相比,既简便又快速,而且活菌检出率也高,所以在以下实验中,均采用本法2.3最适培养基的选择对用于双歧杆菌或乳酸菌计数的三种培养基进行比较,结果见表2.表2不同培养基对计数结果的影响表3若干含双歧扦茁和乳酸茁商品中的活菌数微生物37卷从表2可看出,无论对双歧杆菌(ATCC2952I,FTBI),还是对乳酸菌(FALA,酸奶中的乳酸菌),都以LAB的检出率为高,故在以下试验中均采用LAB.2,4各商品中所台双歧杆菌和乳酸菌数的捡测为检验本法的实际效果,我们对市售商品(包括国外产品)进行了活菌检测,结果见表3.3讨论双歧杆菌和乳酸菌的传统计数法主要包括试样分散一系列稀释一滁布或倾注平板一厌氧培养菌落计数五步操作,由此必然带来设备特殊,操作繁琐和耗时费力等缺点本文作者在验证了高层半固体琼脂培养基具有良好厌氧性能的基础上,提出了集稀释(凝固前)和计数(凝固后)于周一试管的设想,使禚菌计数只需试样分散一系列稀释+常规培养一菌菇计数三步经试验,证明它但可省略厌氧培养装置和简化许多操作,而且还有明显缩短培养时间等优点,因此,这是一种有较高应用价值的计虬参考文献…1康自微生态学原理大连:大连出版社,1996131～144【2】周德庆微生物学教程.北京:高等教育出版社,1993200.f]】RasicJLKurmannJABilidobacrmandTheirRole.BirkhauserV eflag,BaselBostonStuttgart ,I983144～158.1O～17Il许率发.李宏建,柴金贞酸奶和乳酸菌饮料加工.北京:中国轻工业出版社,19941～169[5】赵国屏,周德庆微生物学通报.1984,II(I):26--29 ASIMPLERANDFASTERMETH0DFORENUMERA TING BIFIDoBACTERIAANDLA(1lCACIDBACTERIA MaXiangqianZhouDeqing(Depc~tmeniM/cro6/dogvandM砌B/oted'~/ogv.FudanUmters/r),,s蜘21)0433) AbstractAnewmethodiSreportedfortheenumerationofbindobacteriaandlactJcacid bacteriawhichdon'tproducegas.Theadvantagesofthismethodare:(1)simcity——the tIlbewhichcontainshighlayer$emi-solidhastwofunctions:dilutionandenumeration.so theoverelaborateenumerationprocedurebyusingplatecanbeabolished;theins~umentfor anaerobiccultivationandrelatedoperationcanbeomittedbecauseofthegoodanaerobic propertyofhighlayersemi-solidagartube.(2)rapidity-—一山ecountingofbifidobacteria andIactieacidbacteriacanbedoneafterincubationabout16～24hifweu9ethismethod, WhileinthetraditionaIplatemethod,48～72haleneeded.(3)preciseness--countsof bifidobacteriaorlacticacidbacteriaaresimiLartoorhigherthanthatofthetraditionalD1ate method.WehadmeasuredtheviablecountofbifidobacteriaandIactieacidbacteriain commercialprobioticsandyogurtsbyusingthismethod.KeywordsSemi-solidagarmedium,Enumeration,Bifidobacterh~cticacidbacteria。
乳酸菌、双歧杆菌检验培养基
改良番茄汁培养基Tomato Juice Agar,Modified 用途：用于食品中乳酸菌总数测定改良MC培养基Chalmers Agar ,Modified 用途：用于食品中乳酸菌总数测定MRS琼脂MRS Agar Base 用途：用于食品中乳酸菌总数测定LBS琼脂LBS agar 用途：用于乳酸菌检测和分离培养BLB培养基BLB Modified 用途：用于双歧杆菌的分离培养改良的M17培养基M17培养基是酸奶中嗜热链球菌计数的重要培养基,它也是从酸奶或牛奶中分离嗜热链球菌的常用培养基。
配方：胰蛋白胨5.0g、鱼蛋白胨5.0 g、牛肉膏5.0 g、酵母浸膏2.5 g、抗坏血酸0.5g、硫酸镁0.25g、甘油10.0g、乳糖3.0g、磷酸二氢钾5.0g、琼脂11.0 g、蒸溜水lL，用NaOH调节pH至6.9，121℃蒸汽灭菌15min。
乳酸杆菌选择性琼脂Lactobacillus Selective Agar用途：用于乳酸杆菌检测和分离培养APT琼脂APT Agar用途：用于乳酸菌分离培养BL琼脂培养基BL Agar Medium 用途：用于双岐杆菌分离培养（GB标准）BBL琼脂培养基BBL Agar Medium 用途：用于双岐杆菌分离培养（GB标准）TPY琼脂培养基TPY Agar Medium 用途：用于双岐杆菌分离培养（GB标准）PYG液体培养基基础PYG Broth Medium Base用途：用于双岐杆菌增菌培养，使用时需加入氯化血红素和维生素K1（GB标准）MC培养基MC Medium 用途：用于食品中乳酸菌检测的肉汤APT Broth用途：用于异质发酵乳酸杆菌和其它需高含量盐酸硫酸胺素菌的培养。
乳酸杆菌肉汤培养基Lactobacillus broth Medium用途：用于乳酸杆菌增菌培养MRS肉汤MRS Broth 用途：用于乳酸菌增菌培养双歧杆菌BS培养基Bifidobacterium BS Medium 用途：用于双歧杆菌分离培养。
用于肠道中的乳酸菌和双歧杆菌研究的分子生物学技术
Ａｃｄ Ｂａ ｔ ｒ ａ ｎｄ Ｂｉ ｄｏ ａ ｔ ｒａ ｉ ｃ ｅ ｉ ａ ｆ ｂ ｃ ｅ ｉ ｉ
Ｓ ｎ Ｆｕ ｈ ｎ ， Ｚｈ ｎ Ｌ ｎ ｉ ｕ ｃｕ ａ ｇ ａ ｗｅ
（ ｏ ｄ Ｃ ｌ ｇ，Ｎ ｒ ｅ ｓ Ａ ｒ ｕｔｒｌＵ ｉ ｒ ｔ，Ｈ ｒｉ ｏ ｅｌｎｊ ｎ ５ ０ ０ ． Ｃ ｉａ １ Ｆ ｏ ｏ ｅｅ ｏｔ ａｔ ｇｉ ｌ ａ ｎｖ ｓ ｙ ａｂｎ ｆＨ ｉ ｇ ａ ｇ １０ ３ ，Ｐ Ｒ． ｈｎ ； ｌ ｈ ｃ ｕ ｅｉ ｏ ｉ
维普资讯
《 乳业 科 学与技 术》
２０ ０ ７年 第 ４期
（ 总第 １ ５期 ） ２
１１ ９
综述与专题评论
、 ｓ
用 于肠 道 中的 乳酸 茵 和双 歧 杆 菌研 究 的分 子 生物 学 技术
孙福春 ，张 兰威
（ 东北 农业 大 学食 品 学 院 ， １ 黑龙 江哈 尔滨 １ ０ ３ ；２ 哈 尔滨 工业 大 学食 品 科 学与 工程 学院 ） ５ ００
Ｋｅ ｒ ｓ ａ ｔ ｃ ｄ ｂ ｃ ｅ ｉ ；ｂ ｆ ｏ ａ ｔｒａ １ Ｓ ｒ ｙ ｗｏ ｄ ：ｌｃ ｉ ａ ｉ ａ ｔｒａ ｉ ｄ ｂ ｃ ｅ ｉ ； ＲＮＡ ｅ ｅ ｃ ｉ ６ ｇｎ
乳 酸菌 包 括乳 杆 菌 属 、 球 菌属 、 球 菌属 、 链 乳 肠球 菌属 、 串珠菌 属 、 明 片球 菌属 、 魏斯 氏菌 属 等 ，
用于乳酸菌分离鉴定的几种培养基的筛选及应用资料
用于乳酸菌分离鉴定的几种培养基的筛选及应用资料
一、乳酸菌介绍：
乳酸菌是一类可发酵糖类产生大量乳酸的、无芽孢、革兰氏阳性细菌的通称。
主要有乳杆菌属（Lactobacillus）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）和嗜热链球菌属（Streptococcus）、明串珠菌属（Leuconostoc）和片球菌属（Pediococcus）。
双歧杆菌呈短杆状、纤细杆状或球形,可形成各种分支或分叉等多形态，如Y字形、v字形、弯曲状、勺形（图2），典形形态为分叉杆菌，因而取名bifidus，不抗酸，无动力。
培养基成分（g/L）如下：
原理：
蛋白胨、牛肉膏粉、酵母膏粉提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂；柠檬酸三铵、硫酸镁、硫酸锰、吐温-80和醋酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌并中和细胞毒性物质，为乳酸菌提供一个良好的生长环境；琼脂是培养基的凝固剂。
用法：
称取本品66.2g，加热溶解于1000mL蒸馏水中，分装，121℃高压灭菌15-20分钟，备用。
实验方案(双歧杆菌的分离)
1 双歧杆菌的分离1.1 样品取出生后20天母乳喂养健康婴儿粪便。
1.2 培养基根据目前的双歧杆菌选择性培养基，以及X-Gal在这方面的应用。
选择使用NPNL培养基，在其基础上添加X-Gal。
1.2.1 缓冲蛋白胨水溶液（BP）成份：蛋白胨10g 磷酸氢二钠2g葡萄糖5g 磷酸二氢钾2g氯化钠5g 蒸馏水1000ml制法：精确称取各种试剂，加人到1000ml的蒸馏水中，加热溶化后分装于250ml的三角瓶中，每瓶90ml，121℃，杀菌15min后置4℃的冰箱中备用。
1.2.2 选择性改良NPNL培养基（苏世彦）成份：酵母膏5g 淀粉0.5g蛋白胨10g L-半胱氨酸0.5g胰蛋白胨5g 溶液A 10ml大豆蛋白胨5g 溶液B 5ml葡萄糖10g 溶液C 50ml乳糖3g 琼脂 15g吐温80 1g pH 7.2牛肝提取液150ml制法：将各成分准确量取后，分别加热溶化，混合摇匀后分装，121℃杀菌10min，备用。
溶液A：K2HPO4 10g、KH2PO4 10g溶于蒸馏水100ml。
溶液B：FeSO4·7H2O 0.2g、MgSO4·7H2O 4g、MnSO4·4H2O 0.135g、NaCl 0.2g溶于蒸馏水100ml。
溶液C：丙酸钠30g、硫酸巴龙霉素400mg、硫酸新霉素200mg、NaCl 6g溶于蒸馏水1000ml。
1.2.3 NPNL培养基(孙雪)培养基成分及用量：牛肉浸汁粉(oxoid)3g，蛋白胨10g，胰蛋白酶5g，植胨3g，酵母浸出汁5g，肝浸出汁150ml，葡萄糖10g，可溶性淀粉0.5g，溶液A 10ml，溶液B 5ml，吐温80 1g，盐酸半胱氨酸0.5g，琼脂15g，蒸馏水815ml，X-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D- 半乳糖苷)60mg。
pH 7.2，121℃，15min 高压灭菌。
溶液A：K2HPO425g，KH2PO425g，蒸馏水250ml。
乳酸菌菌悬液的制备
乳酸菌菌悬液的制备乳酸菌菌悬液是一种含有益生菌的悬浮液，可以增加乳酸菌的存活率并使其更容易被吸收。
制备乳酸菌菌悬液需要进行以下步骤：1.选择乳酸菌菌株：乳酸菌是一类革兰氏阳性菌，常见的有嗜酸乳杆菌、双歧杆菌等。
在制备乳酸菌菌悬液时，需要选择耐受胃酸和胆盐的菌株，以提高存活率。
2.菌种的培养：将选好的乳酸菌菌株接种到适宜的培养基中，利用培养基中的营养物质为菌株提供营养。
同时，为了增加菌落数量，可以利用振荡培养或搅拌培养的方式进行培养。
3.菌液的收集：通过培养一段时间后，菌液中的菌株数量会增加。
此时，可以使用离心机将培养物与菌体分离，收集到菌液中。
4.菌液的悬浮：将收集到的菌液通过离心或过滤的方式除去大部分的培养基残留物，得到较为纯净的乳酸菌菌体。
然后，将乳酸菌菌体悬浮于适宜的溶液中，例如生理盐水、蔗糖溶液或甘油溶液中。
5.菌液的保存：乳酸菌菌悬液由于含有活菌，所以需要采取适当的保存方式，以保证其活性。
常用的保存方法有冷藏和冷冻。
冷藏保存在4摄氏度下，能够保持较长时间的活性；冷冻保存则需要将菌液转移到-20摄氏度或更低的温度。
6.产品的包装：最后一步是将乳酸菌菌悬液进行产品化。
可以将菌悬液灌装到药用注射器中，以便于用户使用。
同时，要在包装上注明保存和使用的方法，以保证用户正确使用。
在以上步骤中，关键的一点是保证乳酸菌菌株的活性。
为此，可以在培养过程中加入适量的保护剂，例如果糖、蔗糖等，以提高菌株对胃酸和胆盐的抵抗能力。
此外，在制备乳酸菌菌悬液时，应注意无菌操作，以避免菌液被其他微生物污染。
乳酸菌菌悬液的制备过程相对简单，但是需要仔细操作以保证菌株的活性。
通过制备乳酸菌菌悬液，可以方便地获得乳酸菌的益生菌，从而促进肠道健康，增强免疫力。
乳酸菌检测国标方法
乳酸菌检测国标方法乳酸菌检测方法1 适用范围本方法适用于清谷田园食品有限公司系列产品及原料中的乳酸菌的检测。
2 设备和仪器2.1 恒温培养箱：36±1℃2.2 天平：感量为0.01g2.3 无菌吸管：1 ml、2ml、10ml2.4 无菌锥形瓶：500ml2.5 无菌培养皿：直径为90mm2.6 无菌试管：18×180mm2.9 酒精灯2.10 立式蒸汽压力灭菌器2.11 超净工作台2.12 厌氧缸3试剂3.1 无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。
3.2 MRS（Man Rogosa Sharpe）培养基3.2.1 成分蛋白胨 10.0g牛肉粉 5.0g酵母粉 4.0g葡萄糖 20.0g吐温80 1.0mLK2HPO4.7H2O 2.0g醋酸钠.3H2O 5.0g柠檬酸三铵 2.0gMnSO4.7H2O 0.2gMnSO4.4H2O 0.05g琼脂粉 15g3.2.2制法：将上述成分加于1000mL蒸馏水中，调节PH至6.2±0.2，加热煮沸溶解，分装于锥形瓶中，在121℃高压灭菌15-20min。
3.3莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）和半胱氨酸盐酸盐改良 MRS 培养基：3.3.1 莫匹罗星锂盐储备液制备：称取50mg莫匹罗星锂盐加入到50 mL蒸馏水中，用0.22 mm微孔滤膜过滤除菌。
3.3.2 半胱氨酸盐酸盐储备液制备：称取250mg莫匹罗星锂盐加入到50 mL 蒸馏水中，用0.22 mm微孔滤膜过滤除菌。
3.3.3 制法将A.1.1 成分加入到950 mL蒸馏水中，加热溶解，调节pH，分装后121 ℃高压灭菌15 min～20 min。
临用时加热熔化琼脂，在水浴中冷至48 ℃，用带有0.22 mm微孔滤膜的注射器将莫匹罗星锂盐储备液及半胱氨酸盐酸盐储备液制备加入到熔化琼脂中，使培养基中莫匹罗星锂盐的浓度为50 mg/mL，半胱氨酸盐酸盐的浓度为500 mg/mL。
微生物学实验报告——双歧杆菌分离
微生物学实验报告乳酸菌分离纯化——双歧杆菌的分离纯化2012/6/5实验目的：从酸奶等富含乳酸菌的物质中分离到具有活性的双歧杆菌并进行初步鉴定。
实验原理：双歧杆菌是动物体肠道内的正常优势生理细菌，革兰氏阳性，无芽孢，没有运动能力，最适生长温度37℃~41℃，专性厌氧。
双歧杆菌的细胞呈现多样形态，有短杆较规则形、纤细杆状具有尖细末端形、球形、长杆弯曲形、分枝或分叉形、棍棒状或匙形。
单个或链状、V形、栅栏状排列，或聚集成星状。
双歧杆菌的菌落光滑、凸圆、边缘完整、乳脂至白色、闪光并具有柔软的质地(7)。
因为双歧杆菌是严格厌氧细菌，所以双歧杆菌的培养条件必须无氧，且培养基要具有低氧化还原电势。
培养双歧杆菌最常用的方法是亨盖特厌氧滚管法(1, 5, 7)，此外还有厌氧箱法，厌氧袋法和厌氧罐法等。
亨盖特厌氧滚管法是亨盖特（Hungate）于1950年发展起来的一套严格厌氧微生物的培养技术，主要原理是利用铜柱氧化除氧的滚管分离纯化法。
亨盖特厌氧滚管法的优点是可以实时检查培养物，无氧效果好且花费不高，但需要专门的仪器和技术性很强的操作。
本实验采用的简易厌氧罐法是一种操作简单且成本很低的方法，主要原理是利用焦性没食子酸除去厌氧罐内的氧气。
该方法的缺点是焦性没食子酸与NaOH反应过程中会产生一定量的NO，可能不利于细菌的生长；此外，过量的NaOH 会将厌氧罐中的CO2一起除掉，而CO2对多数厌氧菌的生长有促进作用。
另外，在同一个培养皿上接种好氧细菌（如大肠杆菌和枯草杆菌）能加强除氧的效果。
本实验所用的培养基参考了NPNL培养基(6)和BS培养基的配方，其中鱼粉、牛肉膏、酵母浸粉、胰蛋白胨的作用是提供氮源、维生素和生长因子，葡萄糖和乳糖为乳酸菌发酵提供糖类底物，磷酸氢二钾和磷酸二氢钾为酸碱缓冲剂，硫酸亚铁、硫酸锰为乳酸菌提供生长因子，氯化钠维持均衡的渗透压。
如果在培养基中加入一定浓度的抗生素，比如硫酸卡那霉素（75μg/ml）、硫酸新霉素（30-200μg/ml）、硫酸巴龙霉素（20-200μg/ml）、萘啶酮酸（15或80μg/ml）、氧化锂（3mg/ml）、丙酸钠（10或15g/L）、山梨酸（0.4g/L）等，培养基就成为双歧杆菌的选择性培养基(7)。
乳酸菌菌种的分离筛选方法
乳酸菌菌种的分离筛选方法Hessen was revised in January 2021乳酸菌菌种的分离筛选方法乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。
为兼性厌氧菌，杆状或球状，革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。
营养要求高，需要提供丰富的肽类氨基酸维生素。
在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。
通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。
乳杆菌常用MRS琼脂作半选择培养基。
当乳杆菌仅是复杂区系中的部分菌类时，SL培养基常用作为选择性培养基。
对于芽孢乳杆菌常用GYP培养基，链球菌有TYC培养基、MS培养基。
M17培养基被用作乳球菌的分离培养基。
嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个种。
其特性为：杆菌，两端圆，不运动，无鞭毛。
粪肠球菌为革兰氏阳性，圆形或椭圆形。
乳酸片球菌细胞呈球状，直径~μm，在直角两个平面交替形成四联状，一般细胞成对生，单生者罕见，不成链状排列。
革兰氏阳性，不运动，兼性厌氧。
在MRS培养基上菌落小，呈白色。
沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。
乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落，不易观察，所以分离时先富集培养并选择合适的培养基。
分离培养基一般添加西红柿、酵母膏、吐温-80等物质，也常常加入醋酸盐，因醋酸盐能抑制部分细菌生长，对乳酸菌无害。
培养基中添加碳酸钙，乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈，作为分离鉴别的依据，通过对生成的乳酸量进行性能鉴定。
乳酸菌生长繁殖时需要多种氨基酸，维生素及微氧，一般菌落比较小。
分离培养基一般可添加西红柿酵母膏油酸吐温等物质，均具有促进生长作用。
也常常添加醋酸盐抑制有些细菌的生长，对乳酸菌无害。
一.筛选方法：1.溶钙圈法：利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。
其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH。
乳酸菌 标准
乳酸菌标准一、菌种分类乳酸菌是一类对人体有益的微生物，它们通常存在于人体肠道、乳制品、蔬菜等场所。
根据乳酸菌的形态、代谢和遗传特性等不同方面，乳酸菌可分为多个种类，如乳酸杆菌、双歧杆菌、链球菌等。
其中，乳酸杆菌和双歧杆菌是常见的益生菌种类。
二、菌种筛选乳酸菌的筛选是利用其特定的生长特性和生理特征，从自然界或发酵产品中分离出具有优良性能的菌株。
筛选出的乳酸菌应具有以下特点：1. 耐酸、耐胆盐能力强；2. 黏附肠道黏膜能力强；3. 在肠道定植能力强；4. 具有良好的益生作用；5. 无毒、无致病性。
三、发酵工艺乳酸菌的发酵工艺主要包括以下步骤：1. 菌种活化：将筛选出的乳酸菌菌株进行活化，使其恢复活性。
2. 培养基制备：选用适宜的培养基成分，如牛奶、豆奶、葡萄糖等，以支持乳酸菌的生长。
3. 接种与发酵：将活化的菌株接种到培养基中，在适宜的温度和时间内进行发酵。
4. 后处理：发酵结束后，对发酵液进行过滤、浓缩、干燥等后处理，得到乳酸菌制剂。
四、菌种保藏乳酸菌菌种需要保存在低温、干燥、缺氧的环境中，以保持其活性。
常用的保藏方法有：低温冰箱保藏、液氮保藏、真空干燥保藏等。
在保藏过程中，应定期检查菌种的活性和纯度。
五、安全性评估乳酸菌制剂的安全性评估应包括以下方面：1. 无毒害性：通过动物试验等方法检测乳酸菌制剂是否含有有毒物质。
2. 基因稳定性：对乳酸菌制剂的遗传稳定性进行评估，以确保其在生产和保藏过程中不会发生基因突变或产生有害代谢产物。
3. 免疫原性：评估乳酸菌制剂的免疫原性，以确定其是否会对人体免疫系统产生刺激或不良反应。
4. 抗生素抗性：对乳酸菌制剂进行抗生素抗性检测，以确保其不会对抗生素的治疗效果产生负面影响。
5. 临床试验：对乳酸菌制剂进行临床试验，以评估其疗效和安全性。
六、质量控制乳酸菌制剂的质量控制应包括以下方面：1. 产品质量标准制定：制定乳酸菌制剂的产品质量标准，以确保产品质量符合要求。
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BBL培养基
双歧杆菌选择性培养基成份
蛋白胨
酵母粉
葡萄糖
可溶性淀粉
氯化钠
5%半胱氨酸
西红柿浸出液
吐温80
肝提取液
琼脂
蒸馏水
MRS培养基
乳酸细菌培养基（MRS）
蛋白胨 g
牛肉膏 g
酵母膏 g
柠檬酸氢二铵[（NH4）2HC6H5O7] g
葡萄糖(C6H12O6·H2O) g
吐温80 mL
乙酸钠（CH3COONa·3H2O） g
磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O） g
硫酸镁（MgSO4·7H2O） g
硫酸锰（MnSO4·H2O） g
琼脂 g
蒸馏水 1 000 mL
pH ~
当乳酸菌生长代谢出乳酸后，会使pH下降而使颜色由绿变为黄绿，也由于pH
值降低再加上抗生素及厌氧培养的作用，所以一般的微生物不容易在此培养基上生长，因此十分容易鉴别乳酸菌。
2005-03-10 08:08 消息引用收藏分享
奉上一篇实验，以供参考！厌氧菌的分离和培养目前培养厌氧微生物的简便而又有效的技术包括有：厌氧箱培养技术；厌氧罐培养技术；厌氧袋培养技术；亨盖特厌氧滚管技术。
这里介绍的是亨盖特厌氧滚管技术。
亨盖特厌氧滚管技术是美国微生物学家亨盖特（Hungate）于1950年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术。
以后这项技术又经历了几十年的不断改进，从而使亨盖特厌氧技术日趣完善，并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一整套完整技术。
而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。
亨盖特厌样滚管培养技术不仅可用于有益厌氧菌如双歧杆菌等的分离、与活菌培养计数，还可以用于有害***菌（如酪酸菌）或病原菌（如肉毒梭状芽孢杆菌）的分离与鉴定。
1材料样品双歧酸奶（液体）、双歧杆菌制剂（固体）。
培养基改良MRS培养基，PTYG 培养基。
仪器和器具亨盖特厌氧滚管装置一套，厌氧管，厌氧瓶，滚管机，定量加样器。
2 流程铜柱除氧→预还原培养基→稀释用液制备→稀释样品→滚管→培养→计数3方法铜柱系统除氧铜柱是一个内部装有铜丝或铜屑的硬质玻璃管。
此管的大小为40—400mm，两段被加工成漏斗装，外壁绕有加热带，并与变压器相连来控制电压和稳定铜柱的温度。
铜柱两端连接胶管，一端连接气钢瓶，一端连接出气管口。
由于从气钢瓶出来的气体如N2、CO2和H2等通常都含有O2，故当这些气体通过温度约360℃的铜柱时，铜和气体中的微量O2化合生成CuO，铜柱则由明亮的黄色变为黑色。
当向氧化状的铜柱通入H2时，H2与CuO中的氧就结合形成H2O，而CuO又被还原成了铜，铜柱则又呈现明亮的黄色。
此铜柱可以反复使用，并不断起到除氧的目的。
当然H2源也可以由氢气发生器产生。
预还原培养基及稀释液的制备制作预还原培养基及稀释液时，先将配制好的培养基和稀释液煮沸驱氧，而后用半定量加样器趁热分装到螺口厌氧试管中，一般琼脂培养基装，稀释液装9ml，并插入通N2气的长针头以排除O2。
此时可以清楚地看到培养基内加入的氧化还原指示剂—刃天青由蓝到红最后变成无色，说明试管内已成为无氧状态，然后盖上螺口的丁烯胶塞及螺盖，灭菌备用。
双歧杆菌样品不同稀释度的制备在无菌条件下准确称取1g固体或用无菌注射器吸取1ml混合均匀的液体样品，而后加入装有预还原生理盐水的厌氧试管中，用震荡器将其震荡均匀，制成10-1稀释液。
用无菌注射器吸取1ml 10-1稀释液至另一支装有9ml生理盐水的试管中，制成10-2稀释液。
按此操作方法依次进行10倍系列稀释至10-7，制成不同浓度的样品稀释液。
通常选10-5、10-6、10-7三个稀释度进行滚管培养计数。
厌氧滚管培养法将盛有融化的无菌无氧琼脂培养基试管放置于50℃左右的恒温水浴中，用1ml无菌注射器分别吸取10-5、10-6、10-7三个稀释度的稀释液各于融化了的琼脂培养基试管中，而后将其平放于盛有冰块的盘中或特制的滚管机上迅速滚动，这样带菌的融化培养基在试管内壁立即凝固成一薄层。
每个稀释度重复3次，而后置于37℃（酸奶样品42℃）恒温培养箱中培养。
一般培养24—48小时后，即可在厌氧管的琼脂层内或表面长出肉眼可见的菌落。
双歧杆菌活菌（分离）计数选择分散均匀，数量在几十~几百个菌落的厌氧试管进行活菌计数，即可得出每克或每毫升样品中含有的双歧杆菌数量。
计算双歧杆菌的活菌数量cfu/g(ml)样品=滚管计数的实际平均值×10×稀释倍数。