[高等教育]动物细胞培养和核移植技术讲课
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动物细胞培养和核移植技术上课(共43张PPT)
问题探讨：
多细胞动物和人体的细胞都生活在 内环境中，根据你所学的知识，认 为体外培养动物细胞应该模拟内环 境的哪些条件呢？
一动物细胞培养
3、条件：
1、无菌、无毒的环境
（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）
2、营养
（葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。）
3、温度和PH
36.5 +0.5度 ；PH为7.2-7.4。
因为幼龄组织或器官上的细胞增殖能力强 1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？
（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）
，有丝分裂旺盛，容易培养。 扦插和嫁接实质上也是克隆
这样的过程叫做传代培养 激活受体细胞，完成分裂、发育 CO2作用：维持培养液的PH值
老龄动物的细胞则相反。 二、动物体细胞核移植技术
原代培养时细胞生长可能会出现了哪些现象？
生出与供体奶牛遗传基础相同的犊牛
通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？
O2作用：进行
呼吸，提供能量
学习活动二：寻根问底，加深巩固
4、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？用于植
皮的细胞培养应该不多于多少代？
？
保存10代以内的细胞；因为10－50部分细 胞的细胞核型可能发生变化，有少部分还 发生突变向癌细胞方向发展；10代
数目增多，不能发育成新的动物个 疗该病人？
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治 疗该病人？
体 那么动物细胞工程常用的技术手段 呢？
利用动物体细胞核移植技术 胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛
这样的过程叫做传代培养
一、动物细胞培养
[人教版]《动物细胞培养和核移植技术》公开课课件1
![[人教版]《动物细胞培养和核移植技术》公开课课件1](https://img.taocdn.com/s3/m/5f7715066f1aff00bfd51e47.png)
人 ［教 名版 师《课动堂物教细学胞］培［养人和教核版移］《植动技物术 细胞》培PPT养课和件核2 移植技 术》公 开课课 件1（完 整版PP T)
人 ［教 名版 师《课动堂物教细学胞］培［养人和教核版移］《植动技物术 细胞》培PPT养课和件核2 移植技 术》公 开课课 件1（完 整版PP T)
体细胞核移植技术的应用前景
C母绵羊子宫 妊娠 分娩 多莉羊
［名师课堂教学］［人教版］《动物 细胞培 养和核 移植技 术》公 开课课 件1（完 整版PP T)
克隆羊成功的分子 细胞生理学机理
重组移核细胞丢失了源于乳腺细胞的调 节蛋白，经过三次分裂后，原乳腺细胞的调 节蛋白便全部被卵细胞质中的蛋白因子替换 了，因此核DNA被重新编排，细胞开始表达
（二）动物细胞全能性的表现程度 1、高等动物细胞 受精卵 > 胚胎干细胞 > 多能干细胞 > 单能干细胞 > 体细胞
如多能造血干细胞：可分化为红细胞、白细胞、血小板等
2、低等动物细胞：全能性一般容易体现。如水螅的上 皮细胞，不经过分裂就可以转变为上皮、肌肉细胞。
（三）植物组织培养和动物细胞培养的比较
④原代培养：从机体取出后立即进行的细胞培养 ⑤传代培养：从1个培养瓶中转移或移植到另一 个培养瓶的培养
原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原 代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞 称为原代细胞培养。
传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制 成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶 中继续培养，称为传代培养。
［名师课堂教学］［人教版］《动物 细胞培 养和核 移植技 术》公 开课课 件1（完 整版PP T)
多
A母绵羊
莉 卵细胞
羊
的
培
人 ［教 名版 师《课动堂物教细学胞］培［养人和教核版移］《植动技物术 细胞》培PPT养课和件核2 移植技 术》公 开课课 件1（完 整版PP T)
体细胞核移植技术的应用前景
C母绵羊子宫 妊娠 分娩 多莉羊
［名师课堂教学］［人教版］《动物 细胞培 养和核 移植技 术》公 开课课 件1（完 整版PP T)
克隆羊成功的分子 细胞生理学机理
重组移核细胞丢失了源于乳腺细胞的调 节蛋白，经过三次分裂后，原乳腺细胞的调 节蛋白便全部被卵细胞质中的蛋白因子替换 了，因此核DNA被重新编排，细胞开始表达
（二）动物细胞全能性的表现程度 1、高等动物细胞 受精卵 > 胚胎干细胞 > 多能干细胞 > 单能干细胞 > 体细胞
如多能造血干细胞：可分化为红细胞、白细胞、血小板等
2、低等动物细胞：全能性一般容易体现。如水螅的上 皮细胞，不经过分裂就可以转变为上皮、肌肉细胞。
（三）植物组织培养和动物细胞培养的比较
④原代培养：从机体取出后立即进行的细胞培养 ⑤传代培养：从1个培养瓶中转移或移植到另一 个培养瓶的培养
原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原 代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞 称为原代细胞培养。
传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制 成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶 中继续培养，称为传代培养。
［名师课堂教学］［人教版］《动物 细胞培 养和核 移植技 术》公 开课课 件1（完 整版PP T)
多
A母绵羊
莉 卵细胞
羊
的
培
动物细胞培养和核移植技术-课件
■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就 贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。
■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易 于帖附。
强调三：接触抑制
■当贴壁细胞分裂生 长到表面相互接触时, 细胞就会停止分裂增 殖，这种现象称为细 胞的接触抑制。
P46讨 论
多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中， 根据你所学的内环境的知识，思考以下问题：
3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动 物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？ 为什么？
绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有 少量的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵 母细胞。
此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的 一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系， 核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境 不会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和 核供体动物完全相同，从这一角度看，克隆动物 不会是核供体动物100%的复制。
该克隆牛不能无限制地推广，其数量不宜过多， 尤其是在小范围内不能无限的繁殖，以避免奶牛 群出现近亲繁殖而引起种质衰退。
（2）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交 给你，你将如何对它进行克隆？ 从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵 在活体上容易取）上剪取一小块组织，在体外 培养获得该组织（如软骨组织）的细胞。从屠 宰场取废弃的牛卵巢，抽取卵母细胞体外培养 成熟。用显微针去除卵母细胞的核，再将耳细 胞注入卵母细胞，用电刺激方法使卵母细胞与 体细胞融合，这时供体核就进入了受体卵母细 胞，再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞 核的卵母细胞，使其完成细胞分裂和发育过程。 核移植胚胎在体外短时间培养后，挑选正常卵 裂的胚胎植入经同期发情处理的受体母牛体内。
2.2 动物细胞工程
动物细胞工程常用的技术
■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易 于帖附。
强调三：接触抑制
■当贴壁细胞分裂生 长到表面相互接触时, 细胞就会停止分裂增 殖，这种现象称为细 胞的接触抑制。
P46讨 论
多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中， 根据你所学的内环境的知识，思考以下问题：
3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动 物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？ 为什么？
绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有 少量的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵 母细胞。
此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的 一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系， 核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境 不会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和 核供体动物完全相同，从这一角度看，克隆动物 不会是核供体动物100%的复制。
该克隆牛不能无限制地推广，其数量不宜过多， 尤其是在小范围内不能无限的繁殖，以避免奶牛 群出现近亲繁殖而引起种质衰退。
（2）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交 给你，你将如何对它进行克隆？ 从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵 在活体上容易取）上剪取一小块组织，在体外 培养获得该组织（如软骨组织）的细胞。从屠 宰场取废弃的牛卵巢，抽取卵母细胞体外培养 成熟。用显微针去除卵母细胞的核，再将耳细 胞注入卵母细胞，用电刺激方法使卵母细胞与 体细胞融合，这时供体核就进入了受体卵母细 胞，再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞 核的卵母细胞，使其完成细胞分裂和发育过程。 核移植胚胎在体外短时间培养后，挑选正常卵 裂的胚胎植入经同期发情处理的受体母牛体内。
2.2 动物细胞工程
动物细胞工程常用的技术
动物细胞培养和核移植技术课件
遗传物质 已改变
■选动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做 动物细胞培养材料的原因：
因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强， 分化程度低。
■用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理的原因：
解除由于接触抑制对细胞生长和繁殖的抑制。
■目前使用的或冷冻保存的正常细胞 通常在10代以内的原因：
以保持正常二倍体核型 （或10代以内的细胞遗传物质不改变）。
（5）若把体细胞的细胞核注入到无核卵 母细胞，则称之为 核移植 。
（6）用卵母细胞做受体细胞原因： a．卵母细胞体积 大 ，便于 操作 ； b．卵黄 多 ， 营养物质 丰富； c．易激发 细胞核 全能性的表达。
（7）克隆属于 无性 繁殖，产生新个体的 性别、绝大多数性状与供核亲本 一致 。
（8）诱导融合方法：
妊娠、出生
4、若黑面绵羊的基因型为AA，白面绵羊 克隆羊多利
的基因型为aa，则克隆羊的基因型为：
aa
3.体细胞核移植技术的应用前景
（1）加速家畜遗传改良的进程 （2）保护濒危物种
（3）生产医用蛋白质
（4）转基因克隆动物作为 异种移植的供体
（5）人核移植胚胎干细胞诱导分 化后提供组织、器官用于移植。 （6）研究克隆动物和克隆细胞，可使人 类更深入了解胚胎发育及衰老过程。 （7）用克隆动物做疾病模型。
强调一：细胞贴壁过程
■细胞贴壁：
■培养瓶或培养皿壁要求：
■ 强调二：接触抑制
瓶壁上的细 胞层数是：
一层 （或单层）！
■原代培养：
■传代培养：
■细胞株：原代细胞一般传至10代左 右细胞生长停 滞，大部分细胞衰 老死亡，少数细胞存活到50代这种 传代细胞为细胞株。 ■细胞系：50代以后大部分死亡， 部分细胞细胞核型（遗传物质）发 生变化，获得不死性，朝着等同于 癌细胞的方向发展，无限繁殖。
■选动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做 动物细胞培养材料的原因：
因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强， 分化程度低。
■用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理的原因：
解除由于接触抑制对细胞生长和繁殖的抑制。
■目前使用的或冷冻保存的正常细胞 通常在10代以内的原因：
以保持正常二倍体核型 （或10代以内的细胞遗传物质不改变）。
（5）若把体细胞的细胞核注入到无核卵 母细胞，则称之为 核移植 。
（6）用卵母细胞做受体细胞原因： a．卵母细胞体积 大 ，便于 操作 ； b．卵黄 多 ， 营养物质 丰富； c．易激发 细胞核 全能性的表达。
（7）克隆属于 无性 繁殖，产生新个体的 性别、绝大多数性状与供核亲本 一致 。
（8）诱导融合方法：
妊娠、出生
4、若黑面绵羊的基因型为AA，白面绵羊 克隆羊多利
的基因型为aa，则克隆羊的基因型为：
aa
3.体细胞核移植技术的应用前景
（1）加速家畜遗传改良的进程 （2）保护濒危物种
（3）生产医用蛋白质
（4）转基因克隆动物作为 异种移植的供体
（5）人核移植胚胎干细胞诱导分 化后提供组织、器官用于移植。 （6）研究克隆动物和克隆细胞，可使人 类更深入了解胚胎发育及衰老过程。 （7）用克隆动物做疾病模型。
强调一：细胞贴壁过程
■细胞贴壁：
■培养瓶或培养皿壁要求：
■ 强调二：接触抑制
瓶壁上的细 胞层数是：
一层 （或单层）！
■原代培养：
■传代培养：
■细胞株：原代细胞一般传至10代左 右细胞生长停 滞，大部分细胞衰 老死亡，少数细胞存活到50代这种 传代细胞为细胞株。 ■细胞系：50代以后大部分死亡， 部分细胞细胞核型（遗传物质）发 生变化，获得不死性，朝着等同于 癌细胞的方向发展，无限繁殖。
动物细胞培养和核移植技术 课件
养的细胞，能传到40-50代，其遗传物质没有 发生变化。
细胞系： 传到40-50代后有部分细胞遗传物质发生了
变化，带有癌变的特点，可能在培养条件下无限 制的传代下去，这种传代细胞称为细胞系。
二、动物细胞培养条件
1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液）
2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。） 3、温度和PH
原代培养： 取材（动物组织） →细胞分散→初次培养
传代培养： 培养的细胞→细胞分散→继续培养
进行传代培养的原因： 接触抑制
一、动物细胞培养过程
8、传代培养中， 第10代细胞与第50 代以后细胞的主要 区别是什么？
细胞癌变,失去接触 抑制特性。
一、动物细胞培养过程
9、动物细胞培养能否象植物组织培养那样获 得克隆个体？需要诱导其脱分化的过程吗？
植物组织培养呢？ 动物体细胞大都生活 在液体的环境
（1）液体培养基 与植物培养基相比其特点是：
（2）含有动物血清
无机盐、蔗糖 、维生素、生长 调节物质、植物激素
三、动物细胞培养的应用
1、获得细胞产物，如蛋白质生物制品－ 病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等
2、获得烧伤病人植皮所需的细胞 3、获得细胞用于检测有毒物质 4、为治疗及预防疾病提供理论依据。
形成的细胞群
单个细胞
传代培养过程中有个别细胞 传至50代以后，由于遗传物 质改变，失去控制，成为无
加培养液
细胞悬浮液
限增殖的不死的癌症细胞，
原代培养
形成的细胞群
10代细胞
遗传物质 细胞株
未改变
50代细胞 传代培养
动物细遗已胞传改培物变养质不细能胞系
最终培养成生物体
细胞系： 传到40-50代后有部分细胞遗传物质发生了
变化，带有癌变的特点，可能在培养条件下无限 制的传代下去，这种传代细胞称为细胞系。
二、动物细胞培养条件
1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液）
2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。） 3、温度和PH
原代培养： 取材（动物组织） →细胞分散→初次培养
传代培养： 培养的细胞→细胞分散→继续培养
进行传代培养的原因： 接触抑制
一、动物细胞培养过程
8、传代培养中， 第10代细胞与第50 代以后细胞的主要 区别是什么？
细胞癌变,失去接触 抑制特性。
一、动物细胞培养过程
9、动物细胞培养能否象植物组织培养那样获 得克隆个体？需要诱导其脱分化的过程吗？
植物组织培养呢？ 动物体细胞大都生活 在液体的环境
（1）液体培养基 与植物培养基相比其特点是：
（2）含有动物血清
无机盐、蔗糖 、维生素、生长 调节物质、植物激素
三、动物细胞培养的应用
1、获得细胞产物，如蛋白质生物制品－ 病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等
2、获得烧伤病人植皮所需的细胞 3、获得细胞用于检测有毒物质 4、为治疗及预防疾病提供理论依据。
形成的细胞群
单个细胞
传代培养过程中有个别细胞 传至50代以后，由于遗传物 质改变，失去控制，成为无
加培养液
细胞悬浮液
限增殖的不死的癌症细胞，
原代培养
形成的细胞群
10代细胞
遗传物质 细胞株
未改变
50代细胞 传代培养
动物细遗已胞传改培物变养质不细能胞系
最终培养成生物体
《动物细胞培养和核移植技术》课件PPT课件
当前应用
动物细胞培养技术已成为 生物医学、药物研发、基 因治疗等领域的重要手段 。
动物细胞培养的应用领域
生物医学研究
用于研究细胞生长、发育、分化、凋 亡等生物学过程，以及疾病发病机制 和药物筛选等。
药物研发
用于筛选和鉴定药物作用靶点，以及 新药的研发和安全性评价。
基因治疗
用于制备基因治疗载体和基因修饰细 胞，治疗遗传性疾病和恶性肿瘤等疾 病。
06
CATALOGUE
动物细胞培养和核移植技术的挑战与展望
技术瓶颈和伦理问题
技术瓶颈
动物细胞培养和核移植技术在实践中面临许多技术瓶颈，如细胞核重编程、细 胞生长和分化控制等。
伦理问题
该技术涉及到生命起源和尊严等伦理问题，引发了广泛的社会争议和伦理审查 。
技术改进和未来发展方向
技术改进
科研人员正在努力改进动物细胞培养和核移植技术，以提高技术的稳定性和成功率。
人类疾病模型的建立过程包括疾病病理生理机制研究、基因敲除或转基 因技术应用和表型分析等步骤。其中，疾病病理生理机制研究是整个过
程的基础，需要掌握病理学、生理学和分子生物学等知识。
人类疾病模型的成功建立为研究各种人类疾病的发病机制和治疗方法提 供了重要的实验材料和手段，有助于推动医学科学的发展和人类健康水 平的提高。
机械法
通过反复吹打或组织块切 碎来分离细胞。
传代
将培养的细胞按一定比例 稀释并重新接种在新的培 养器皿中，以维持细胞的 生长。
细胞鉴定和细胞系建立
形态学鉴定
01
通过观察细胞的形态、染色和排列等特征来鉴定细胞的类型。
免疫学鉴定
02
利用特异性抗体对细胞表面抗原进行检测，以确定细胞的来源
动物细胞培养和核移植技术 课件
(3)细胞株和细胞系 ①细胞株：传代培养的细胞能达到 10～50 代，这样的传代细 胞称为细胞株。 ②细胞系：传代培养的细胞在传到 50 代后，有部分细胞的遗 传物质发生了改变，获得不死性，这种具有癌变特点的细胞称 为细胞系。
2．植物组织培养与动物细胞培养的比较
项目
植物组织培养
动物细胞培养
原理 植物细胞的全能性
A．B 点之前的培养称为原代培养，之后的培养称为传代培养 B．接触抑制现象主要发生在 AB 段和 DE 段 C．分瓶后的每个培养瓶中的细胞群称为一个克隆 D．E 点后的少数细胞获得不死性，向等同于癌细胞的方向发 展
解析：选 C。人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代 培养，分瓶后的培养称为传代培养，B 点之后细胞继续生长， 可见 B 点之后进行了传代培养，A 正确；当贴壁细胞分裂生长 到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，即会发生接触抑 制现象，在 AB 段和 DE 段细胞几乎生长停滞，可能发生了接 触抑制，B 正确；细胞克隆的最基本要求是必须保证分离出来 的是一个细胞而不是多个细胞，C 错误；E 点后细胞已获无限 繁殖能力且持续生存，具有了癌细胞的性质，D 正确。
5.应用 (1)生产生物制品：如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。 (2) 应 用 于 基 因 工 程 ： 动 物 细 胞 是 基 因 工 程 技 术 中 常 用 的 __受__体__细__胞______，离不开动物细胞培养。 (3)检测___有__毒__物__质_____，判断某种物质的毒性。 (4)用于生理、病理、药理等方面的研究，如筛选抗癌药物等。
结果品Biblioteka 胞产物项目植物组织培养
动物细胞培养
①快速繁殖名贵花卉和果 ①生产蛋白质制品，如
树；②培养无病毒植株、转 病毒疫苗、干扰素、单
动物细胞培养和核移植技术 (标准版)ppt资料
贴满瓶壁的细胞需 4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？
健康细胞培养：如获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。
要重新用胰蛋白酶 烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。
CO2有调节PH的作用。
等处理，然后分瓶 （使用合成培养基时，需加入血清、血浆等）
超净工作台
继续培养，让细胞 少部分DNA来自于受体卵母细胞的线粒体。 继续增殖。这样的 培养过程通常被称 为传代培养。
植物体
细胞数目增多
培养目的
快速繁殖、培育 获得细胞或细胞
无病毒植株
分泌蛋白
动物细胞培养技术的应用
生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单 克隆抗体等 健康细胞培养：如获得大量自身的皮肤细胞 ，用于植皮。 用于检测有毒物质 用于生理、病理、药理等方面的研究，为治 疗和预防疾病提供理论依据
P50
动物细胞培养要经过脱分化过程吗？ 为什么？
2.接触抑制
接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时， 细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触 抑制。（细胞为单层）
50代以后细胞失去接触抑制
失去接触抑制
50代以后
接触抑制
原代培养：
人们通常将动物组 ②还受动物生活环境的影响。 织消化后的初次培 但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？
(三)、动物细胞培养过程 烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。 动物细胞培养最终不能培养成动物体
植540物代、组 以织后动培细养胞物和失动去细物接细触胞胞抑培制培养的养比较能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？
剪碎组织及胰蛋白酶处理的目的：将组织分散成单个细胞，有利于细胞与培养液充分接触，便于培养。 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。
健康细胞培养：如获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。
要重新用胰蛋白酶 烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。
CO2有调节PH的作用。
等处理，然后分瓶 （使用合成培养基时，需加入血清、血浆等）
超净工作台
继续培养，让细胞 少部分DNA来自于受体卵母细胞的线粒体。 继续增殖。这样的 培养过程通常被称 为传代培养。
植物体
细胞数目增多
培养目的
快速繁殖、培育 获得细胞或细胞
无病毒植株
分泌蛋白
动物细胞培养技术的应用
生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单 克隆抗体等 健康细胞培养：如获得大量自身的皮肤细胞 ，用于植皮。 用于检测有毒物质 用于生理、病理、药理等方面的研究，为治 疗和预防疾病提供理论依据
P50
动物细胞培养要经过脱分化过程吗？ 为什么？
2.接触抑制
接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时， 细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触 抑制。（细胞为单层）
50代以后细胞失去接触抑制
失去接触抑制
50代以后
接触抑制
原代培养：
人们通常将动物组 ②还受动物生活环境的影响。 织消化后的初次培 但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？
(三)、动物细胞培养过程 烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。 动物细胞培养最终不能培养成动物体
植540物代、组 以织后动培细养胞物和失动去细物接细触胞胞抑培制培养的养比较能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？
剪碎组织及胰蛋白酶处理的目的：将组织分散成单个细胞，有利于细胞与培养液充分接触，便于培养。 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。
动物细胞培养和核移植技术(讲课)页PPT文档
胰蛋白酶或胶原蛋白酶
有一定量蛋白质
单个细胞
动物细胞培养适 宜的PH为7.2— 7.4，此环境下 胃蛋白酶（2.0） 没有活性，而胰 蛋白酶(7.2-8.4) 的活性较高。
加培养液
细胞悬液
原代培养
10代细胞
50代细胞 传代培养
无限传代
探究
1、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动 物的组织或器官，请解释原因？
1.动物细胞核移植的概念、种类：
概念：
将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核 的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎， 这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）
分 胚胎细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易 类 体细胞核移植： 细胞分化程度高，恢复全能性不容易
2.体细胞核移植的过程：
剪碎 胰蛋白酶处理
细胞悬液
细胞贴壁、接触抑制
10代细胞
50代细胞
细胞株
培养液培养
细胞系
无限传代
3、条件：
1、无菌、无毒
2、添营加养一（定培量养的基抗生成素分） （ 血糖清定培、、期养氨血更 液基 浆换 和酸等培 培、。养 养促）液器生具长无因菌子处培、理无养机基盐的、不微同量是元素、 3、适宜的温度和PH值 动物细胞培养和
① 加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 ② 保护濒危物种，增加存活数量 ③ 克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 ④ 可以作为异种移植的供体 ⑤ 可以用于组织器官的移植
4.体细胞核移植技术存在的问题：
• ① 成功率低 • ② 克隆动物存在健康问题 • ③ 克隆动物食品的安全性问题存有争议
思考题
细胞贴壁。 5.什么叫接触抑制？
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就 会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 6、如何理解原代培养和传代培养？
动物细胞培养和核移植技术 课件
(1)细胞贴壁：将细胞悬液放入培养瓶内，置于适宜环境中 培养，悬液中分散的细胞很快就 7 _贴__附__在__瓶__壁______上，称为细 胞贴壁。
(2)接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面 8 _相__互__接__触____ 时，细胞 9 ___停__止__分__裂__增__殖______的现象称为细胞的接触抑制。
19
_血__清__、__血__浆__：补充培养液中没有搞清楚的成分
温度：哺乳动物多以 20 3_6_._5_±__0_._5_℃__为宜 (3)温度和 pHpH： 21 __7_.2_～__7_._4___
22 __O__2 _______：细胞代谢所必需的 (4)气体环境CO2：维持培养液的 23 ___p_H_______
解 析 ： (1) 哺乳动物 的正常细 胞核中性 染色体的 组成为 XX(雌性)或 XY(雄性)。卵母细胞在培养至减数第二次分裂的中 期时，常采用显微操作法去除细胞核。②过程是将早期胚胎移 植到代孕个体的子宫中，即代表的是胚胎移植。(2)一般来说， 动物细胞在传代培养到 10～50 代时，部分细胞的细胞核型可能 会发生变化，即遗传物质的稳定性会降低。因此，选材时一般 选 10 代以内的细胞，以保证细胞正常的二倍体核型。(3)获得的 克隆动物性状与供体动物基本相同，但不完全相同，从遗传物
解析：选 D 为保证动物细胞培养过程中细胞的增殖，应 先用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理使细胞分散开，解除细胞的接 触抑制，并分瓶培养；细胞一般能传至 10～50 代，有的甚至能 继续分裂增殖。
2．如图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：
(1) 容 器 A 中 放 置 的 是 动 物 器 官 或 组 织 ， 它 一 般 取 自 ________________。
动物细胞培养和核移植技术PPT
2．2 动物细胞工程
2．2.1 动物细胞培养和核移植技术
课标领航
1．简述动物的细胞培养及条件。
2．举例论证动物细胞培养技术的应用及意义。
3．简述动物核移植的过程及意义。 【重点】 程。 【难点】 原代培养和传代培养的概念。 动物细胞培养的过程；动物核移植的过
情景导航 克隆羊多利的诞生，为动物细胞工程的发
基础自主梳理
核心要点突破
知能过关演练
基础自主梳理
一、动物细胞培养的概念 动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织， 单个 细胞，然后，放在适宜的培养基 将它分散成______ 中，让这些细胞生长和增殖。
二、动物细胞培养的过程
1．流程图：
原代 培 动物组织― ― →单个细胞―→细胞悬液―→_____
1．过程
2．用于核移植的供体细胞一般都选用10代以内 的细胞，目的是为了保证细胞正常的遗传基础。
减数第 3．接受细胞核的卵母细胞必须体外培养到_______ 二次分裂中 期，原因是此期细胞核的位置靠近第 ____________
一极体，用微型吸管可将二者一并吸出，并且此时
使细胞核的全能性表现出来的物质已近成熟。 七、体细胞核移植技术的应用前景 遗传改良 进程，促 1．在畜牧生产中，可加速家畜_________ 进优良畜群繁育。
制，细胞在培养瓶壁上只能形成单层细胞，A错；
克隆培养法中细胞都是由一个细胞经过有丝分裂而
2．培养过程
动物细胞培养的过程如下所示：
特别提醒 用胰蛋白酶处理组织块，可使细胞分散开，这样做 的目的是使细胞与组织液充分接触，这也说明了细
胞间的主要物质是蛋白质，但是由于细胞膜的主要
成分之一也是蛋白质，因此要控制好处理的时间， 不能太长，否则会损伤细胞。由于多数动物细胞培 养的适宜pH为7.2～7.4，因此不能使用胃蛋白酶分 散细胞。
2．2.1 动物细胞培养和核移植技术
课标领航
1．简述动物的细胞培养及条件。
2．举例论证动物细胞培养技术的应用及意义。
3．简述动物核移植的过程及意义。 【重点】 程。 【难点】 原代培养和传代培养的概念。 动物细胞培养的过程；动物核移植的过
情景导航 克隆羊多利的诞生，为动物细胞工程的发
基础自主梳理
核心要点突破
知能过关演练
基础自主梳理
一、动物细胞培养的概念 动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织， 单个 细胞，然后，放在适宜的培养基 将它分散成______ 中，让这些细胞生长和增殖。
二、动物细胞培养的过程
1．流程图：
原代 培 动物组织― ― →单个细胞―→细胞悬液―→_____
1．过程
2．用于核移植的供体细胞一般都选用10代以内 的细胞，目的是为了保证细胞正常的遗传基础。
减数第 3．接受细胞核的卵母细胞必须体外培养到_______ 二次分裂中 期，原因是此期细胞核的位置靠近第 ____________
一极体，用微型吸管可将二者一并吸出，并且此时
使细胞核的全能性表现出来的物质已近成熟。 七、体细胞核移植技术的应用前景 遗传改良 进程，促 1．在畜牧生产中，可加速家畜_________ 进优良畜群繁育。
制，细胞在培养瓶壁上只能形成单层细胞，A错；
克隆培养法中细胞都是由一个细胞经过有丝分裂而
2．培养过程
动物细胞培养的过程如下所示：
特别提醒 用胰蛋白酶处理组织块，可使细胞分散开，这样做 的目的是使细胞与组织液充分接触，这也说明了细
胞间的主要物质是蛋白质，但是由于细胞膜的主要
成分之一也是蛋白质，因此要控制好处理的时间， 不能太长，否则会损伤细胞。由于多数动物细胞培 养的适宜pH为7.2～7.4，因此不能使用胃蛋白酶分 散细胞。
【课件】动物细胞培养和核移植技术课件2022-2023学年高二下学期生物人教版选修3
6．我国科学家利用基因编辑技术获得一只彻底敲除BMAL1基因（控制 生物节律的核心基因之一）的猕猴甲，发现其出现睡眠紊乱的症状。将
该猕猴的体细胞核植入去核的卵母细胞中得到重组细胞，然后培育重组
A 细胞得到了五只具有睡眠紊乱症状的克隆猴。相关叙述不正确的是（ ）
A．五只具有睡眠紊乱症状的克隆猴DNA完全相同 B．克隆猴的胚胎发育过程中会发生细胞凋亡 C．重组细胞需要物理或化学方法激活，使其完成细胞分裂和发育过程 D．通过上述技术可批量制备疾病动物模型用于科学研究
用胰蛋白酶处理 分瓶传代培养 10代细胞
传代培养
50代细胞
无限传代
思考：
（1）为什么要将组织块分散成单个细胞培养？ 分散成单个细胞便于从培养液中获得营养，排出代
谢废物，利于继续培养。
（2）动物细胞培养能否最终培养成新个体？
不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发 育成新的动物个体。
思考：
（3）胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 能够用胃蛋白酶代替吗？ 胰蛋白酶除了消化细胞间的蛋白外，长时间的作
（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分 有 _动__物__血__清_________等。在此瓶中培养一段
时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第 代，到1这0 时的培养称为__ 。 原代培养
（4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用 胰蛋白酶 处理，然后配置成 细胞悬液 ，再分
装。
学习活动三：
③若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质的角度分
析其原因是_卵___母__细__胞___的__细___胞__质___中__的___遗__传___物__质___会__对___克__隆__动___物__的___性__状___产__生__影_。响 ④与克隆羊“多莉（利）”培养成功一样，其他克隆动物的成功获得 也证明了__动__物__已__分__化__体_细__胞__的__细__胞__核__具__有__全__能__性_____。
动物细胞培养和核移植技术课件
(3)如何区分原代培养与传代培养？ 答案 ①原代培养：通常将动物组织消化后的初次培养称 为原代培养。 ②传代培养：贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处 理，然后分瓶继续培养，让细胞增殖，即为传代培养。
2．条件 (1)无菌、无毒的环境：培养液应进行_无__菌___处理。 (2)营养：合成培养基的成分为糖、__氨__基__酸___、促生长 因子、无机盐、微量元素、_血__清___、血浆等。 (3)温度和 pH：适宜的温度为__3_6_._5_±_0_.5__℃_____；pH 为 _7_._2_～__7_._4___。 (4)气体环境：_空__气___ 95%和 CO25%的混合气体。
【归纳提炼】 1．不同层次的克隆
(1)分子水平：如DNA复制。 (2)细胞水平：动物细胞培养。 (3)个体水平：“多利”羊的诞生。 2．动物细胞核移植的条件及结果 (1)核移植一般选择去核的卵母细胞，因为卵母细胞体 积大，易操作，含有促使细胞核全能性表达的物质和营 养条件。一般不选择生殖细胞作为供核细胞，因为生殖 细胞与正常体细胞相比，遗传物质减半。
【归纳提炼】 动物细胞培养与动物组织培养的比较
【活学活用】
1．判断下面关于动物细胞培养的叙述的正误。
(1)动物细胞培养的原理是动物细胞的全能性
()
(2)需要对细胞进行一次脱分化处理和两次蛋白酶处理 ( )
(3)原代培养的细胞是指从贴壁生长到发生接触抑制的细胞
()
(4)恒温条件下，细胞周期持续时间长短不随细胞培养进程而
5．应用 (1)加速家畜_遗__传___改良进程，促进优良畜群繁育。 (2)增加濒危动物数量，保护_濒__危___物种。 (3)生产医用蛋白。 (4)作为_异__种__移植的供体。 (5)用于组织器官的移植。
动物细胞培养和核移植技术 课件
3．特点：核移植过程中细胞核只来自于一个个体，因此核 遗传物质与供核个体相同，不会改变生物体的基因型，属于无 性繁殖。
动物细胞培养的要点 【例1】下列属于动物细胞培养与植物组织培养主要区别 的是( ) A．培养基成分不同 B．动物细胞培养不需要在无菌条件下进行 C．动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能 D．动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株
动物细胞培养和核移植技术
动物细胞工程 1．常用的技术手段：动物细胞培养、动物细胞__核__移__植____、 动物细胞融合、生产单克隆抗体等。 2．基础：_动__物__细__胞__培__养__技术。
动物细胞培养
1．概念：取动物机体中相关的组织，将它分散成_单__个__细__胞___ 后，在适宜的培养基中让其生长和繁殖的过程。
2．动物细胞培养的条件： (1)无菌、无毒的环境：对培养液和培养用具作无菌处理； 在培养液中加入一定量抗生素；定期更换培养液。 (2)营养：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素， 另外，合成培养基需加入血清、血浆等天然成分。 (3)温度和pH：适宜温度为36.5 ℃±0.5 ℃；适宜pH为7.2～ 7.4。 (4)气体环境： ①O2：细胞代谢所必需。 ②CO2(5%)：维持培养液的 pH。
【名师点拨】动物细胞培养与植物组织培养有许多相似之 处，也有许多不同点。其主要不同点是它们的培养基的成分不 同。动物细胞培养的培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机 盐和维生素，另外还有动物血清。植物组织培养所需要的培养 基包含植物生长和发育的全部营养成分，如矿质元素、蔗糖、 维生素、植物激素和有机添加物，但没有动物血清。
①蛋白质生物制品的生产 ②皮肤移植材料的培育 ③检测有毒物质 ④生理、病理、药理学研究
取材
课件9：2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
ห้องสมุดไป่ตู้2. 原理
细胞增殖
3. 材料
用培养的动物细胞与组织大多数取自动物胚胎 或出生后不久的幼龄动物的器官或组织。
4.动物细胞培养的过程
（1）原代培养 （2）传代培养
（1）原代培养
胚胎或幼龄动物器官组织
定义：人们通常 将动物组织消化 后的初次培养称 为原代培养。
取出组织
剪碎
胰蛋白酶处理
单个细胞
原代培养
。
（3）培养液中添加抗生素是为了抑制细菌生长，但要 注意选择抗生素的 种类和剂量 ，以保证抗生素对肝
脏无害。
08年宁夏卷回答下列有关动物细胞培养的问题： ⑴在动物细胞培养的过程中，当贴壁细胞分裂生长到 细胞表面 相互接触 时，细胞会停止分裂增殖，这种 现象称为细胞的 接触抑制 。此时，瓶壁上形成的细胞 层数是 单层 ，要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来， 需要用酶处理，可用的酶是 胰蛋白酶 。
10代细胞
传
少数
代 培
继续传代培养少部分细胞获得不死性，
40-50代细胞
养
细胞突变，遗传物质已经改变，等同于
少数
癌细胞。
无限传代
5.动物细胞培养条件
（1）无菌、无毒的环境
（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）
（2）营养
（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）
（3）温度和PH 36.5±0.5℃, 7.2-7.4
细胞悬液
转入培养瓶内培养 ( 贴壁生长长成单层细 胞。有接触抑制现象)。
图示
强调一：细胞贴壁
■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在 瓶壁上，称为细胞贴壁。
■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于帖附。
细胞增殖
3. 材料
用培养的动物细胞与组织大多数取自动物胚胎 或出生后不久的幼龄动物的器官或组织。
4.动物细胞培养的过程
（1）原代培养 （2）传代培养
（1）原代培养
胚胎或幼龄动物器官组织
定义：人们通常 将动物组织消化 后的初次培养称 为原代培养。
取出组织
剪碎
胰蛋白酶处理
单个细胞
原代培养
。
（3）培养液中添加抗生素是为了抑制细菌生长，但要 注意选择抗生素的 种类和剂量 ，以保证抗生素对肝
脏无害。
08年宁夏卷回答下列有关动物细胞培养的问题： ⑴在动物细胞培养的过程中，当贴壁细胞分裂生长到 细胞表面 相互接触 时，细胞会停止分裂增殖，这种 现象称为细胞的 接触抑制 。此时，瓶壁上形成的细胞 层数是 单层 ，要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来， 需要用酶处理，可用的酶是 胰蛋白酶 。
10代细胞
传
少数
代 培
继续传代培养少部分细胞获得不死性，
40-50代细胞
养
细胞突变，遗传物质已经改变，等同于
少数
癌细胞。
无限传代
5.动物细胞培养条件
（1）无菌、无毒的环境
（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）
（2）营养
（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）
（3）温度和PH 36.5±0.5℃, 7.2-7.4
细胞悬液
转入培养瓶内培养 ( 贴壁生长长成单层细 胞。有接触抑制现象)。
图示
强调一：细胞贴壁
■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在 瓶壁上，称为细胞贴壁。
■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于帖附。
动物细胞培养和核移植技术课件
规模生产细胞产物，如药物、食 理、药理等方面的研究；④作为
品添加剂、香料、色素等
基因工程的受体细胞
①都需要人工条件下的无菌操作，无菌培养；②都需要配制合成培
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ养基；③都需要适宜的温度、pH 等条件；④培养过程中细胞都进
行有丝分裂，都不涉及减数分裂
【名师点拨】 有关植物组织培养与动物细胞培养的三点提 醒
二、动物体细胞核移植技术和克隆动物(阅读 P47～50) 1．概念 将动物的一个细胞的________，移入一个已经去掉细胞核的 ________中，使其________并发育成一个________，最终发育为 动物个体。 2．分类 包括________移植和________移植，其中________移植较易 成功。
3．体细胞核移植的过程
4．体细胞核移植技术的应用
科研 应
畜牧业 用
保护濒危物种 前
医药卫生领域 景
治疗人类疾病
存在的问题
①研究克隆动物和克隆细胞可使人类更深入地了解胚胎发 育及衰老过程；②利用克隆动物做疾病模型，能使人们更 好地追踪研究研究疾病的发展过程和治疗疾病 加速家畜________进程，促进________ 增加动物的________ 转基因克隆动物可以作为________，生产医用蛋白 转基因克隆动物细胞、组织和器官可以作为________的供 体，人的核移植胚胎干细胞经诱导分化形成的组织、器官 可用于组织器官的移植 ①体细胞核移植技术的成功率非常低；②克隆动物存在健 康问题，表现出________缺陷等；③克隆动物食品的安全 性问题存在争议
(1)原理：动物细胞核的全能性，而不是动物细胞的全能性。 动物体细胞的全能性受到限制，不能经培养直接发育成完整个 体，动物体细胞的细胞核内含有该种动物的全套遗传物质，具有 发育成完整个体的潜能，即用体细胞核移植技术能够得到克隆动 物，说明动物体细胞的细胞核具有全能性。
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胚胎组织或幼龄动物的组织或器官生命力旺盛， 分裂能力强 2、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ 先用剪刀剪碎,后用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 3、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？
不能，因为动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境 下胃蛋白酶没有活性。
探究
4.什么叫细胞贴壁？ 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为
1.动物细胞核移植的概念、种类：
概念：
将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核 的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎， 这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）
分 胚胎细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易 类 体细胞核移植： 细胞分化程度高，恢复全能性不容易
2.体细胞核移植的过程：
4、3必6要.5的+气0.体5条度件 O2植 重和物 要CO组 的2 织 区培别养最 PH为7.2-7.4
CO2的主要作用是维持培养液的PH
4、应用
• 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、 干扰素、单克隆抗体）
• 基因工程的受体细胞 • 培养的动物细胞可以用于检测有毒物
质，判断某种物质的毒性
• 用于生理、病理、药理等方面的研究， 为治疗和预防疾病提供理论依据
１、核在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母 细胞的核？
为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动 物提供的细胞。 ２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细 胞，为什么？ 10代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，未突变
3、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行 了100%的复制吗？为什么？
胰蛋白酶或胶原蛋白酶
有一定量蛋白质
单个细胞
动物细胞培养适 宜的PH为7.2— 7.4，此环境下 胃蛋白酶（2.0） 没有活性，而胰 蛋白酶(7.2-8.4) 的活性较高。
加培养液
细胞悬液Hale Waihona Puke 原代培养10代细胞
50代细胞 传代培养
无限传代
探究
1、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动 物的组织或器官，请解释原因？
细胞贴壁。 5.什么叫接触抑制？
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就 会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 6、如何理解原代培养和传代培养？
上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养， 之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养 8、传代培养的细胞都能一直传代下去吗？ 不都能 9、有些为何能一直传下去？
剪碎 胰蛋白酶处理
细胞悬液
细胞贴壁、接触抑制
10代细胞
50代细胞
细胞株
培养液培养
细胞系
无限传代
3、条件：
1、无菌、无毒
2、添营加养一（定培量养的基抗生成素分） （ 血糖清定培、、期养氨血更 液基 浆换 和酸等培 培、。养 养促）液器生具长无因菌子处培、理无养机基盐的、不微同量是元素、 3、适宜的温度和PH值 动物细胞培养和
如何界定原代培养和传代培养；细 胞株和细胞系？
细胞 悬浮 液
细胞株
细胞系
10代 细胞
50代 细胞
无限传 代
原代培养
传代培养
2胰、蛋白过酶除程了可
消化细胞间的蛋
白质外，长时间 作用也会消化细
动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官
胞膜蛋白，对细 一胞般有而损言伤，作1用0 ， 增以代 正 核因胰时殖至以常型蛋此间会于内二白必。逐完能倍酶须渐全保体的控缓停原持的消制慢止代好化，，培养 这时部分细胞的 细胞核可能会发 生变化， 传代培养
不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还 有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞
植物细胞和动物细胞培养的比较
比较项目
植物组织培养
动物细胞培养
原理
细胞的全能性
细胞增殖
培养基性质
固体培养基
液体培养基
培养基特有成分
植物激素
动物血清
培养结果 培养目的
植株
细胞株、细胞系
快速繁殖、培育 获得细胞或
无病毒植株等
细胞产物
二、动物细胞核移植技术和克隆动物
1.动物细胞核移植的概念、种类： 2.体细胞核移植的过程： 3.体细胞核移植技术的应用前景： 4.体细胞核移植技术存在的问题：
黑面绵羊去 核卵细胞
白面绵羊乳 腺细胞核
例：克隆羊
细胞核移植 重组细胞
电脉冲刺激
早期胚胎 胚胎移植
另一头绵羊的子宫
妊娠、出生
克隆羊多利
核移植技术
Ａ母绵羊
Ｂ母绵羊
多 卵细胞
乳腺细胞
莉
羊
细胞质
细胞核
的 培 细胞核移植
融合后的卵细胞 卵裂
育
早期胚胎
胚胎移植
过
程
C母绵羊子宫
妊娠 分娩
多莉羊
3.体细胞核移植技术的应用前景：
有关概念
细胞贴壁: 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，
称为细胞贴壁。
接触抑制: 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，就会停
止分裂增殖，称为接触抑制。
原代培养：单个细胞传至十代左右（分装前的细胞培养） 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，分装到两个或两个以
上的培养瓶中继续培养。
补 细胞株： 10到50代的细胞，遗传物质没发生改变。 充 细胞系： 超过50代的细胞，遗传物质发生改变，可无限增
① 加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 ② 保护濒危物种，增加存活数量 ③ 克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 ④ 可以作为异种移植的供体 ⑤ 可以用于组织器官的移植
4.体细胞核移植技术存在的问题：
• ① 成功率低 • ② 克隆动物存在健康问题 • ③ 克隆动物食品的安全性问题存有争议
思考题
常用 技术 手段
动物细胞培养 （基础）
动物细胞核移植 动物细胞融合 单克隆抗体制备
一、动物细胞培养
1、概念： 动物细胞培养就是从动物机体内 取出相关的组织，将它分散成单 个细胞，然后，放在适宜的培养 基中，让这些细胞生长和增殖。
原理：细胞增殖
2、过程
动物胚胎或幼龄 动物的组织、器官
动物组织细胞间隙剪碎中含
不能，因为动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境 下胃蛋白酶没有活性。
探究
4.什么叫细胞贴壁？ 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为
1.动物细胞核移植的概念、种类：
概念：
将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核 的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎， 这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）
分 胚胎细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易 类 体细胞核移植： 细胞分化程度高，恢复全能性不容易
2.体细胞核移植的过程：
4、3必6要.5的+气0.体5条度件 O2植 重和物 要CO组 的2 织 区培别养最 PH为7.2-7.4
CO2的主要作用是维持培养液的PH
4、应用
• 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、 干扰素、单克隆抗体）
• 基因工程的受体细胞 • 培养的动物细胞可以用于检测有毒物
质，判断某种物质的毒性
• 用于生理、病理、药理等方面的研究， 为治疗和预防疾病提供理论依据
１、核在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母 细胞的核？
为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动 物提供的细胞。 ２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细 胞，为什么？ 10代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，未突变
3、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行 了100%的复制吗？为什么？
胰蛋白酶或胶原蛋白酶
有一定量蛋白质
单个细胞
动物细胞培养适 宜的PH为7.2— 7.4，此环境下 胃蛋白酶（2.0） 没有活性，而胰 蛋白酶(7.2-8.4) 的活性较高。
加培养液
细胞悬液Hale Waihona Puke 原代培养10代细胞
50代细胞 传代培养
无限传代
探究
1、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动 物的组织或器官，请解释原因？
细胞贴壁。 5.什么叫接触抑制？
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就 会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 6、如何理解原代培养和传代培养？
上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养， 之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养 8、传代培养的细胞都能一直传代下去吗？ 不都能 9、有些为何能一直传下去？
剪碎 胰蛋白酶处理
细胞悬液
细胞贴壁、接触抑制
10代细胞
50代细胞
细胞株
培养液培养
细胞系
无限传代
3、条件：
1、无菌、无毒
2、添营加养一（定培量养的基抗生成素分） （ 血糖清定培、、期养氨血更 液基 浆换 和酸等培 培、。养 养促）液器生具长无因菌子处培、理无养机基盐的、不微同量是元素、 3、适宜的温度和PH值 动物细胞培养和
如何界定原代培养和传代培养；细 胞株和细胞系？
细胞 悬浮 液
细胞株
细胞系
10代 细胞
50代 细胞
无限传 代
原代培养
传代培养
2胰、蛋白过酶除程了可
消化细胞间的蛋
白质外，长时间 作用也会消化细
动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官
胞膜蛋白，对细 一胞般有而损言伤，作1用0 ， 增以代 正 核因胰时殖至以常型蛋此间会于内二白必。逐完能倍酶须渐全保体的控缓停原持的消制慢止代好化，，培养 这时部分细胞的 细胞核可能会发 生变化， 传代培养
不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还 有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞
植物细胞和动物细胞培养的比较
比较项目
植物组织培养
动物细胞培养
原理
细胞的全能性
细胞增殖
培养基性质
固体培养基
液体培养基
培养基特有成分
植物激素
动物血清
培养结果 培养目的
植株
细胞株、细胞系
快速繁殖、培育 获得细胞或
无病毒植株等
细胞产物
二、动物细胞核移植技术和克隆动物
1.动物细胞核移植的概念、种类： 2.体细胞核移植的过程： 3.体细胞核移植技术的应用前景： 4.体细胞核移植技术存在的问题：
黑面绵羊去 核卵细胞
白面绵羊乳 腺细胞核
例：克隆羊
细胞核移植 重组细胞
电脉冲刺激
早期胚胎 胚胎移植
另一头绵羊的子宫
妊娠、出生
克隆羊多利
核移植技术
Ａ母绵羊
Ｂ母绵羊
多 卵细胞
乳腺细胞
莉
羊
细胞质
细胞核
的 培 细胞核移植
融合后的卵细胞 卵裂
育
早期胚胎
胚胎移植
过
程
C母绵羊子宫
妊娠 分娩
多莉羊
3.体细胞核移植技术的应用前景：
有关概念
细胞贴壁: 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，
称为细胞贴壁。
接触抑制: 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，就会停
止分裂增殖，称为接触抑制。
原代培养：单个细胞传至十代左右（分装前的细胞培养） 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，分装到两个或两个以
上的培养瓶中继续培养。
补 细胞株： 10到50代的细胞，遗传物质没发生改变。 充 细胞系： 超过50代的细胞，遗传物质发生改变，可无限增
① 加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 ② 保护濒危物种，增加存活数量 ③ 克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 ④ 可以作为异种移植的供体 ⑤ 可以用于组织器官的移植
4.体细胞核移植技术存在的问题：
• ① 成功率低 • ② 克隆动物存在健康问题 • ③ 克隆动物食品的安全性问题存有争议
思考题
常用 技术 手段
动物细胞培养 （基础）
动物细胞核移植 动物细胞融合 单克隆抗体制备
一、动物细胞培养
1、概念： 动物细胞培养就是从动物机体内 取出相关的组织，将它分散成单 个细胞，然后，放在适宜的培养 基中，让这些细胞生长和增殖。
原理：细胞增殖
2、过程
动物胚胎或幼龄 动物的组织、器官
动物组织细胞间隙剪碎中含