[高等教育]动物细胞培养和核移植技术讲课
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细胞贴壁。 5.什么叫接触抑制？
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就 会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 6、如何理解原代培养和传代培养？
上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养， 之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养 8、传代培养的细胞都能一直传代下去吗？ 不都能 9、有些为何能一直传下去？
不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还 有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞
剪碎 胰蛋白酶处理
细胞悬液
细胞贴壁、接触抑制
10代细胞
50代细胞
细胞株
培养液培养
细胞系
无限传代
3、条件：
1、无菌、无毒
2、添营加养一（定培量养的基抗生成素分） （ 血糖清定培、、期养氨血更 液基 浆换 和酸等培 培、。养 养促）液器生具长无因菌子处培、理无养机基盐的、不微同量是元素、 3、适宜的温度和PH值 动物细胞培养和
胚胎组织或幼龄动物的组织或器官生命力旺盛， 分裂能力强 2、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ 先用剪刀剪碎,后用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 3、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？
不能，因为动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境 下胃蛋白酶没有活性。
探究
4.什么叫细胞贴壁？ 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为
有关概念
细胞贴壁: 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，
称为细胞贴壁。
接触抑制: 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，就会停
止分裂增殖，称为接触抑制。
原代培养：单个细胞传至十代左右（分装前的细胞培养） 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，分装到两个或两个以
上的培养瓶中继续培养。
补 细胞株： 10到50代的细胞，遗传物质没发生改变。 充 细胞系： 超过50代的细胞，遗传物质发生改变，可无限增
植物细胞和动物细胞培养的比较
比较项目
植物组织培养
动物细胞培养
原理
细胞的全能性
细胞增殖
培养基性质
固体培养基
液体培养基
培养基特有成分
植物激素
Leabharlann Baidu
动物血清
培养结果 培养目的
植株
细胞株、细胞系
快速繁殖、培育 获得细胞或
无病毒植株等
细胞产物
二、动物细胞核移植技术和克隆动物
1.动物细胞核移植的概念、种类： 2.体细胞核移植的过程： 3.体细胞核移植技术的应用前景： 4.体细胞核移植技术存在的问题：
① 加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 ② 保护濒危物种，增加存活数量 ③ 克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 ④ 可以作为异种移植的供体 ⑤ 可以用于组织器官的移植
4.体细胞核移植技术存在的问题：
• ① 成功率低 • ② 克隆动物存在健康问题 • ③ 克隆动物食品的安全性问题存有争议
思考题
如何界定原代培养和传代培养；细 胞株和细胞系？
细胞 悬浮 液
细胞株
细胞系
10代 细胞
50代 细胞
无限传 代
原代培养
传代培养
2胰、蛋白过酶除程了可
消化细胞间的蛋
白质外，长时间 作用也会消化细
动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官
胞膜蛋白，对细 一胞般有而损言伤，作1用0 ， 增以代 正 核因胰时殖至以常型蛋此间会于内二白必。逐完能倍酶须渐全保体的控缓停原持的消制慢止代好化，，培养 这时部分细胞的 细胞核可能会发 生变化， 传代培养
4、3必6要.5的+气0.体5条度件 O2植 重和物 要CO组 的2 织 区培别养最 PH为7.2-7.4
CO2的主要作用是维持培养液的PH
4、应用
• 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、 干扰素、单克隆抗体）
• 基因工程的受体细胞 • 培养的动物细胞可以用于检测有毒物
质，判断某种物质的毒性
• 用于生理、病理、药理等方面的研究， 为治疗和预防疾病提供理论依据
常用 技术 手段
动物细胞培养 （基础）
动物细胞核移植 动物细胞融合 单克隆抗体制备
一、动物细胞培养
1、概念： 动物细胞培养就是从动物机体内 取出相关的组织，将它分散成单 个细胞，然后，放在适宜的培养 基中，让这些细胞生长和增殖。
原理：细胞增殖
2、过程
动物胚胎或幼龄 动物的组织、器官
动物组织细胞间隙剪碎中含
1.动物细胞核移植的概念、种类：
概念：
将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核 的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎， 这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）
分 胚胎细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易 类 体细胞核移植： 细胞分化程度高，恢复全能性不容易
2.体细胞核移植的过程：
胰蛋白酶或胶原蛋白酶
有一定量蛋白质
单个细胞
动物细胞培养适 宜的PH为7.2— 7.4，此环境下 胃蛋白酶（2.0） 没有活性，而胰 蛋白酶(7.2-8.4) 的活性较高。
加培养液
细胞悬液
原代培养
10代细胞
50代细胞 传代培养
无限传代
探究
1、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动 物的组织或器官，请解释原因？
１、核在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母 细胞的核？
为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动 物提供的细胞。 ２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细 胞，为什么？ 10代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，未突变
3、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行 了100%的复制吗？为什么？
黑面绵羊去 核卵细胞
白面绵羊乳 腺细胞核
例：克隆羊
细胞核移植 重组细胞
电脉冲刺激
早期胚胎 胚胎移植
另一头绵羊的子宫
妊娠、出生
克隆羊多利
核移植技术
Ａ母绵羊
Ｂ母绵羊
多 卵细胞
乳腺细胞
莉
羊
细胞质
细胞核
的 培 细胞核移植
融合后的卵细胞 卵裂
育
早期胚胎
胚胎移植
过
程
C母绵羊子宫
妊娠 分娩
多莉羊
3.体细胞核移植技术的应用前景：
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就 会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 6、如何理解原代培养和传代培养？
上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养， 之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养 8、传代培养的细胞都能一直传代下去吗？ 不都能 9、有些为何能一直传下去？
不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还 有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞
剪碎 胰蛋白酶处理
细胞悬液
细胞贴壁、接触抑制
10代细胞
50代细胞
细胞株
培养液培养
细胞系
无限传代
3、条件：
1、无菌、无毒
2、添营加养一（定培量养的基抗生成素分） （ 血糖清定培、、期养氨血更 液基 浆换 和酸等培 培、。养 养促）液器生具长无因菌子处培、理无养机基盐的、不微同量是元素、 3、适宜的温度和PH值 动物细胞培养和
胚胎组织或幼龄动物的组织或器官生命力旺盛， 分裂能力强 2、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ 先用剪刀剪碎,后用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 3、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？
不能，因为动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境 下胃蛋白酶没有活性。
探究
4.什么叫细胞贴壁？ 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为
有关概念
细胞贴壁: 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，
称为细胞贴壁。
接触抑制: 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，就会停
止分裂增殖，称为接触抑制。
原代培养：单个细胞传至十代左右（分装前的细胞培养） 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，分装到两个或两个以
上的培养瓶中继续培养。
补 细胞株： 10到50代的细胞，遗传物质没发生改变。 充 细胞系： 超过50代的细胞，遗传物质发生改变，可无限增
植物细胞和动物细胞培养的比较
比较项目
植物组织培养
动物细胞培养
原理
细胞的全能性
细胞增殖
培养基性质
固体培养基
液体培养基
培养基特有成分
植物激素
Leabharlann Baidu
动物血清
培养结果 培养目的
植株
细胞株、细胞系
快速繁殖、培育 获得细胞或
无病毒植株等
细胞产物
二、动物细胞核移植技术和克隆动物
1.动物细胞核移植的概念、种类： 2.体细胞核移植的过程： 3.体细胞核移植技术的应用前景： 4.体细胞核移植技术存在的问题：
① 加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 ② 保护濒危物种，增加存活数量 ③ 克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 ④ 可以作为异种移植的供体 ⑤ 可以用于组织器官的移植
4.体细胞核移植技术存在的问题：
• ① 成功率低 • ② 克隆动物存在健康问题 • ③ 克隆动物食品的安全性问题存有争议
思考题
如何界定原代培养和传代培养；细 胞株和细胞系？
细胞 悬浮 液
细胞株
细胞系
10代 细胞
50代 细胞
无限传 代
原代培养
传代培养
2胰、蛋白过酶除程了可
消化细胞间的蛋
白质外，长时间 作用也会消化细
动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官
胞膜蛋白，对细 一胞般有而损言伤，作1用0 ， 增以代 正 核因胰时殖至以常型蛋此间会于内二白必。逐完能倍酶须渐全保体的控缓停原持的消制慢止代好化，，培养 这时部分细胞的 细胞核可能会发 生变化， 传代培养
4、3必6要.5的+气0.体5条度件 O2植 重和物 要CO组 的2 织 区培别养最 PH为7.2-7.4
CO2的主要作用是维持培养液的PH
4、应用
• 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、 干扰素、单克隆抗体）
• 基因工程的受体细胞 • 培养的动物细胞可以用于检测有毒物
质，判断某种物质的毒性
• 用于生理、病理、药理等方面的研究， 为治疗和预防疾病提供理论依据
常用 技术 手段
动物细胞培养 （基础）
动物细胞核移植 动物细胞融合 单克隆抗体制备
一、动物细胞培养
1、概念： 动物细胞培养就是从动物机体内 取出相关的组织，将它分散成单 个细胞，然后，放在适宜的培养 基中，让这些细胞生长和增殖。
原理：细胞增殖
2、过程
动物胚胎或幼龄 动物的组织、器官
动物组织细胞间隙剪碎中含
1.动物细胞核移植的概念、种类：
概念：
将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核 的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎， 这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）
分 胚胎细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易 类 体细胞核移植： 细胞分化程度高，恢复全能性不容易
2.体细胞核移植的过程：
胰蛋白酶或胶原蛋白酶
有一定量蛋白质
单个细胞
动物细胞培养适 宜的PH为7.2— 7.4，此环境下 胃蛋白酶（2.0） 没有活性，而胰 蛋白酶(7.2-8.4) 的活性较高。
加培养液
细胞悬液
原代培养
10代细胞
50代细胞 传代培养
无限传代
探究
1、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动 物的组织或器官，请解释原因？
１、核在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母 细胞的核？
为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动 物提供的细胞。 ２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细 胞，为什么？ 10代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，未突变
3、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行 了100%的复制吗？为什么？
黑面绵羊去 核卵细胞
白面绵羊乳 腺细胞核
例：克隆羊
细胞核移植 重组细胞
电脉冲刺激
早期胚胎 胚胎移植
另一头绵羊的子宫
妊娠、出生
克隆羊多利
核移植技术
Ａ母绵羊
Ｂ母绵羊
多 卵细胞
乳腺细胞
莉
羊
细胞质
细胞核
的 培 细胞核移植
融合后的卵细胞 卵裂
育
早期胚胎
胚胎移植
过
程
C母绵羊子宫
妊娠 分娩
多莉羊
3.体细胞核移植技术的应用前景：