肺炎支原体抗体IgM金标检测试剂盒作业指导书
《肺炎支原体IgMIgG抗体检测试剂注册技术指导原则》(征求意见稿)
附件1：肺炎支原体IgM/IgG抗体检测试剂注册技术指导原则(征求意见稿)本指导原则旨在指导注册申请人对肺炎支原体IgM/IgG 抗体检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。
本指导原则是对肺炎支原体IgM/IgG抗体检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。
本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。
一、适用范围肺炎支原体（Mycoplasma pneumonia，Mp）属于柔膜体纲，支原体属，是引起人类呼吸道感染的常见病原微生物，是我国儿童和成人社区获得性肺炎（community-acquired pneumonia，CAP）的重要致病原之一。
Mp感染广泛存在于世界各地，平时散在性发病，每隔数年会出现地区周期性流行，每次流行持续数月到数年不等。
对于群聚性发病或初始经验性治疗无效的CAP患者，住院或重症CAP患者，建议进行致病原检查，明确CAP致病原可有助于进行目标性抗感染治疗。
根据肺炎支原体主要黏附基因P1基因的重复序列RepMP2/3或RepMP4，肺炎支原体可分为I型和II型两个基因型，不区分血清型。
肺炎支原体的检测对于支原体肺炎的治疗至关重要，实验室检测方法包括病原体培养、抗原检测、抗体检测和核酸检测。
肺炎支原体培养难度较大，需采用专门的培养基和培养技术，耗时长，敏感性低，但特异性好。
血清特异性抗体检测是目前诊断肺炎支原体肺炎的重要手段，免疫层析法、酶联免疫法和化学发光法抗体检测试剂在临床中广泛应用。
肺炎支原体IgM抗体检测
肺炎支原体IgM抗体检测【预期用途】肺炎支原体( Mycoplasma Pneumoniae,MP)是呼吸道感染性疾病的重要病原体之一,还可引起其他系统的严重并发症,临床表现为头疼、发热、干咳、肌肉疼等症状。
所有年龄组人群都会感染,但中青年和4岁以下儿童感染率较高,所有感染者30%的人群会有全肺感染。
MP分离培养可靠性最高,但费时。
目前MP实验室血清学试验是临床诊断依据之一,抗体检测以其操作简单、快捷、费用低廉而广泛应用于临床。
MP-lgM是机体受肺炎支原体感染后最早产生的特异性抗体,于发病后一周左右可检出,约24周达到高峰,6周左右逐渐下降,2-3个月消失。
检测MPgM抗体可以早期诊断MP感染。
【检验原理】应用重组MPP蛋白和鼠抗人gM单克隆抗体,定性检测人血清/血浆/全血中的MPgM抗体。
当待检标本中含有MP-lgM抗体时,该抗体先与金标单抗形成复合物,并在层析作用下向前移动,再与包被抗原反应,出现一条肉眼可见的检测线T,为阳性结果;未反应的标记物继续向前移动,与羊抗鼠gG抗体结合,形成一条对照线C。
若检测线不出现,结果为阴性。
抗鼠lgG抗体(山羊源性,多克隆抗体)。
样本稀释液:20mM磷酸盐缓冲液。
【样本要求】血清、血浆和全血1.检测用的血清、血浆、全血样本必须收集在一个干净、干燥的容器中,可以采用DTA、枸橼酸钠、肝素或草酸钠作为抗凝剂。
未加抗凝剂的全血样本需立即使用,如全血样本发生凝集现象,则用血清进行检测。
2.样本采集后应马上使用,不可在室温下长时间存放。
血清/血浆样本可在2-8℃冷藏混匀。
反复冻融不超过3次。
发臭、混浊或复温后有明显沉淀等异常样本请勿使用。
3.使用新鲜全血样本。
【检验方法】在进行测试前必须先完整阅读使用说明书,使用前将试剂和样本室温放置30分钟恢复至室温(20℃-30℃)。
在没有准备好之前,不可打开内包装,试剂从内包装取出后应在1小时内使用(湿度:20%-90%,温度;10℃-50℃)。
肺炎衣原体MOMP抗体IgG检测试剂盒胶体金法作业指导书
肺炎衣原体MOMP抗体IgG检测试剂盒胶体金法作业指导书1 目的建立肺炎衣原体MOMP抗体IgG检测试剂盒（胶体金法）作业指导书，确保生产过程处于受控状态。
2 范围适用于肺炎衣原体MOMP抗体IgG检测试剂盒（胶体金法）相关工序的操作者。
3 职责3.1 操作人员应严格执行本作业指导书。
3.2 生产主管负责监督检查。
3.3 质检部质检员负责抽查执行情况。
4 工作内容4.1 生产工艺流程图※★注：※ 关键过程 ★ 特殊过程4.2 作业内容4.2.1 胶体金制备（柠檬酸三钠还原法）氯金酸（HAuCl4）水溶液放入三角瓶内加热至沸腾→加热柠檬酸三钠溶液→混匀，搅拌煮沸10至15分钟→待胶体金溶液颜色由蓝→紫→红，冷却即可。
4.2.2 金标抗体（反应膜）制备以0.1M碳酸钾溶液调胶体金溶液pH8.0-9.0→加入抗人IgG单抗，15分钟后加入聚乙二醇→离心，调532nm测OD值5～10，方阵滴定法选定标记工作浓度→用无纺布浸湿胶体金溶液，干燥、平整，检测。
4.2.3 金标抗体反应膜质检将制备好的金标抗体反应膜按5‰比例抽检，与标准反应膜匹配组装成品，同时与标准成品作如下对照检测：a) 符合率：样品稀释液、阴性质控血清无假阳性，阳性质控血清均呈阳性；b) 反应强度：+/+++（阳性反应线/阴性反应线）；c) 反应时间：30s～5min。
确认合格后才能转入下一工序。
4.2.4 NC反应膜制备亲和性高分子硝酸纤维素膜→活化处理12小时→用水洗5次，每次20分钟→室温干燥后→取纯化Cpn重组MOPP抗原和兔鼠IgG抗体溶于10%CS中，浓度均为2mg/ml，用Cpn重组MOPP抗原在NC膜上包被肺炎衣原体抗体阳性检测线→用兔抗鼠IgG抗体在NC膜上包被对照线→干燥后，用BS液封闭，H2O 清洗后，室温干燥，备用。
4.2.5 NC反应膜质检4.2.5.1 常规图形模式检测：将制备好的反应膜按5‰比例抽检，与标准金标抗体反映膜匹配组装成品，同时与标准成品对照检测；观察阳性、阴性包被线及本底，要求图形规则程度均匀，无遗漏或重复包被。
肺炎支原体IgM说明书
肺炎支原体抗体（ IgM ）检测试剂盒（胶体金法）说明书【产品名称】肺炎支原体抗体（IgM ）检测试剂盒（胶体金法）【包装规格】40 人份 /盒或 20 人份 / 盒（详细规格见试剂盒包装标签）【预期用途】定性检测人血清中的肺炎支原体IgM 抗体，可用于支原体肺炎的协助诊疗。
【查验原理】本品应用间接法的胶体金标志免疫斑点渗滤原理，质控线采纳双抗夹心的胶体金标志免疫斑点渗滤原理。
该试剂盒里的斑点反响板上的微孔滤膜固相有肺炎支原体P1 蛋白抗原斑点，当待检测的血清中含有肺炎支原体IgM 抗体时，与微孔滤膜上的肺炎支原体P1 蛋白抗原抗原形成复合物，胶体金标志的羊抗人IgM 抗体与上述抗原抗体复合物联合，形成肉眼可见的红色斑点，即为阳性结果，不然为阴性结果。
微孔滤膜上的质控线含有羊抗人IgM 抗体，当待测血清加入后，人血清中的IgM 抗体与质控线上羊抗人IgM 抗体形成复合物，胶体金标志的羊抗人IgM 抗体再与上述复合物联合，形成肉眼可见的红色质控线。
【主要构成成份】1.斑点反响板： 40 块（或 20 块），每块斑点反响板主要由含固相肺炎支原体P1 蛋白抗原斑点的硝酸纤维膜和吸水纸构成。
2.试剂 A： 1 瓶，约 10ml （或 5 ml），无色澄清溶液，主要成份为PH7.4PBS 缓冲液、吐温－20、硫柳汞（ 0.1%）。
3.试剂 B： 1 瓶，约 8ml（或 4ml），深红色澄清溶液，主要成份为胶体金标志的羊抗人IgM 抗体、牛血清白蛋白、硫柳汞（0.1%）。
【储藏条件及有效期】试剂盒一般采纳冷链运输，并采纳最迅速的运输方式，缩短运输时间；冬季运输应注意防备制品冻结。
试剂盒储藏条件为2℃～８℃，有效期为8 个月。
【样本要求】1.本试剂盒产品仅合用于对血清样本的检测，其余样本（如，胸腹水、脑脊液、尿液等）未经过产品预期用途的有关研究，不合用于本产品的检测。
2. 样本收集：采纳静脉血于干净离心管中，不加任何抗凝剂、保护剂，置于37℃水浴 20～ 30 分钟（或置室温 1 小时以上），待纤维蛋白原充足凝结后离心（4000 转/ 分， 5～ 10 分钟）分别血清。
人肺炎支原体抗体（MP-Ab）酶联免疫分析试剂盒 说明书
人肺炎支原体抗体（MP-Ab）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人MP-Ab，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人组织匀浆、血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中MP-Ab含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗MP-Ab抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗MP-Ab抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的MP-Ab呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
肺炎支原体抗体IgG金标检测试剂盒作业指导书
肺炎支原体抗体IgG金标检测试剂盒作业指导书4.2.6.1 反应体组装程序：a) 在S6塑料基板上贴双面胶带S5（29，48mm）二条；b) 在S5上贴反应膜S1（20mm），S1上下缘距S6上下缘各29mm；c) 在S6上贴吸水纸S3（30mm），吸水纸下缘与S1上缘交接1mm,上缘与S5的上边缘对齐；d) 在S5下端贴无纺布S2-1，其上缘压住S1下缘1mm；e) 在S2-1上平放金标抗体反应膜S4（10mm）上缘对齐；f) 在S4上平放无纺布S2-2（30mm）上下缘分别S4、S6对齐；g) 将组装成型的反应体系用电脑可调式切割机切成4.2mm测试条，装入干燥器，待包装。
4.2.6.2 成品包装：每支成品先装聚苯乙烯塑料外壳，再用镀铝膜包装加干燥剂，附说明书，打批号入库，每批留样100人份，以备复检．4.2.7 参比品制备4.2.7.1 肺支Ig-G阳性血清质控品取临床确诊肺衣病人（临床症状明显、肺炎衣原体培养阳性）血清15份，间接ELISA测定肺炎衣原体IgM抗体阳性，0D492≥0.3，混合血清加防腐剂,分装-70℃保存。
4.2.7.2 肺支Ig-G阴性血清质控品取健康人血清（体查健康，培养法和间接ELISA测定肺炎支原体IgG抗体均阴性，0D492＜0.10）15份，混合血清加防腐剂,分装-70℃保存。
4.3 成品检测产品技术要求应符合《肺炎支原体抗体IgG金标检测试剂盒》产品注册标要求。
4.3.1 外观4.3.1.1 要求a)检测条：表面应平整、无划伤、开裂、变形及污渍；检测卡各组分附着牢固、内容齐全；b) 检测卡：外壳应平整，上下盖应均匀合拢，无明显间隙；反应芯试条在外壳内应附着牢固；4.3.1.2 检验在自然光线下，用手感和目力观察方法进行检验。
4.3.2 符合率4.3.2.1 阴性符合率4.3.2.1.1要求试剂卡测试肺炎支原体IgG抗体阴性质控血清10份，假阳性判断结果不多于1份，符合率应≥90%。
肺炎衣原体抗体 IgG 检测试剂盒（ELISA）说明书
肺炎衣原体抗体IgG检测试剂盒（ELISA）说明书【产品名称】通用名称：肺炎衣原体抗体IgG检测试剂盒（ELISA）英文名称：SeroCP™ IgG【包装规格】96人份/盒、192人份/盒【预期用途】本试剂盒采用酶联免疫吸附法，用于定性检测人类血清中肺炎衣原体特异性IgG抗体。
本试剂盒可作为肺炎衣原体感染诊断的辅助工具。
仅用于体外诊断。
肺炎衣原体(TWAR)是一种新出现的有传染性的因子，可引起一系列临床表现，包括上呼吸道和下呼吸道感染。
衣原体肺炎感染一般是温和的、无症状的，然而，肺炎衣原体感染可能会引起一些严重的疾病如：咽炎、窦炎、急性支气管炎和社区获得性肺炎。
如果未检测出和未进行治疗，此感染可能会导致长期持久的疾病。
最新的数据显示了肺炎衣原体感染和慢性疾病的关联。
儿童感染肺炎衣原体的几率较低，到中年时感染率急剧增高，到老年时持续增高（>50%）。
样本采集的困难性和被感染部位的不易接近性严重影响直接检测方法的有效性。
因此，在直接检测方法不是很有效的情况下，血清学检测作为远端和慢性衣原体感染鉴定的非入侵性工具，常规应用于临床。
此外，特定的抗体类型的出现也能指示出疾病的状态。
早期衣原体感染的特征是在2-4周内出现IgM抗体，随后6-8周内才有IgA和IgG反应。
在急性感染肺炎衣原体后，IgM抗体在2-6个月内会消失而IgG抗体滴度会慢慢减少，而 IgA抗体趋向于迅速消失。
当怀疑衣原体初步感染时，IgM的检测有高度的诊断意义。
然而，重复和慢性感染时IgM水平是比较低的，因此如果没有检测到IgM并不排除正在感染的可能性。
对于重复感染，IgG和IgA水平升高较快，通常在1至2周内。
IgA抗体是一个可靠的原发性、慢性和再感染性的免疫学标记物。
这些抗体通常在治疗和根除衣原体感染之后快速下降并回复到基线水平。
IgA抗体滴度的维持一般被认为是慢性衣原体感染的标志。
IgG抗体维持长时间并下降较慢。
因此，IgG抗体的出现主要表示衣原体感染尚未解决。
肺炎支原体 IgG 抗体检测试剂盒 酶联免疫法
①甩掉孔中的液体。②在每个孔内加入洗板液，确保孔中 无气泡。③重复以上两步，洗板 5 次。④甩掉孔中的洗板 液，并在纸巾上拍干至目测微孔中无残留液。收集洗板液 至废液缸中，并在实验完毕后用 0.5%次氯酸钠处理。 在自动洗板机上设定洗液体积 300-350l/孔，洗板次数五 次。洗完后置于纸巾上拍干。
4.加入酶联物：每孔中加入酶联物 100l。 5.温育：温度：室温(20-25C) 时间：255 分钟。 6.洗板：重复步骤 3 的操作进行洗板。 7.加入显色液(TMB)：每孔中加入 TMB 100l。 8.温育：温度：室温(20-25C) 时间：10-15 分钟。 9.加入终止液：每孔加入终止液 50l 以终止反应。 10.读数：在加入终止液 30 分钟内，将微孔板置于 450nm 波长下 读取每个孔的光密度值，以空白试剂作对照。 【结果判定】 1.质量控制 校正品、阳性对照、阴性对照的 OD 值应符合以下要求： 项目 阴性对照 校正品 阳性对照
结果 阴性标本 可疑标本 阳性标本 【参考值】
标本参考值 ≤0.90 0.91-1.09 ≥1.10
正常人群 MP IgG 抗体呈阴性(标本参考值≤0.90)，每个实验 室应根据当地的实际情况建立自己的正常值参考范围。 【注意事项】 1.酶标板应平衡到室温后从铝箔袋中取出， 剩余的板条立即放回铝 箔袋中并封好(保留铝箔袋)。 2.试剂和样本的交叉污染会导致错误的结果。 3.避免不同批次的试剂混合使用。 【贮存】 试剂盒应在 2-8° C 下保存。
OD值阴性 ≤0.250
OD 值范围
OD值阴性 OD值校正 ≤0.9
OD值阳性 OD值校正 ≥1Biblioteka 25OD值校正 ≥0.300
OD值阳性 ≥0.500
【试剂盒规格】 96T/盒
免疫球蛋白检测作业指导书
免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）检测作业指导书1 检验目的规范免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2 测定方法免疫透射比浊法。
3 检测原理样品中的免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）抗原分别与试剂中的IgG、IgA、IgM抗体发生免疫反应，生成免疫复合物，形成一定浊度，其浊度与免疫球蛋白的含量成正比。
与通过同样处理的校准液比较，即可计算出样品中免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）的含量。
4 样本血清处理方法见生化标本采集程序。
稳定性：2～8℃稳定4天。
5 仪器和试剂5.1 仪器：美国贝克曼-库尔特DXC800全自动生化仪。
5.2 试剂：由武汉元景商贸公司提供原装贝克曼-库尔特试剂（详见试剂说明书），超过失效期的试剂不能使用。
5.3 校准物：Rodan混合校准品，符合WHO标准，贮存、准备严格遵照其说明书。
5.4 质控物：Rodan正常值及病理值质控品，符合WHO 标准，贮存、准备严格遵照说明书。
6 校准6.1 仪器校准：每年由该仪器维修工程师参照厂方的技术规范对仪器进行一次校准。
6.2 项目校准：试剂盒在仪器上放置稳定期后；试剂批号更换后；由质控结果随时决定。
7 操作步骤上机操作，操作程序、质量控制程序见相应生化仪操作程序。
8 参考范围IgG： 7～16.5g/L，IgA： 0.59～3.5g/L，IgM： 0.48～2.12g/L。
9 警告/危急值未规定。
10 性能指标10.1 线形上限：IgG ≤32g/L，IgA ≤7 g/L，IgM≤24g/L。
10.2 精密度：批内CV ≤4%,批间CV≤8%。
10.3 准确度:不准确度≤8%。
10.4试剂贮存:试剂密闭避光贮存2～8℃可稳定12个月。
11 干扰因素及变异的潜在来源标本出现溶血对测定结果有一定影响。
12 临床意义12.1 免疫球蛋白增高：12.1.1 各种感染，特别是慢性细菌感染如骨髓炎、慢性肺脓肿等，血Ig可升高。
肺炎支原体IgM说明书
防腐剂的磷酸盐缓冲液。 3a.阴性对照品，2.0毫升 肺炎支原体抗体阴性的稀释人血清，含有作为防腐
剂的 0.05％Bronidox®和红色显色剂。 3b.临界值对照品，2.0毫升 肺炎支原体 IgM 抗体处于临界值的稀释后人血清，
含有作为防腐剂的 0.05％Bronidox 和红色显色剂。 3c.阳性对照品，2.0毫升 含有0.05％Bronidox®作为防腐剂和红色显色试剂的 人稀释血清。 4.酶结合物，30毫升 缓冲盐溶液，含有专利商品添加剂、红色显色剂、 与辣根过氧化物酶结合的抗人IgM（羊）和作为防腐 剂的0.1％N‐甲基异噻唑酮。 5.TMB底物溶液，即用型, 18毫升 含有专用商品添加剂和0.01％凯松作为防腐剂的 3,3',5,5'‐四甲基联苯胺和过氧化氢柠檬酸缓冲 液。 6.终止液，25毫升 0.45 M H2SO4 7.洗涤液，100毫升 浓缩的柠檬酸缓冲盐水、含有专有添加剂和作为防 腐剂的0.05％Bronidox®。 微孔板贴膜 2个 试剂槽 6 个 注：试剂应保存在+2℃~+8℃下。 每个组分的标签及包装上均印有效期。
肺炎支原体IgM汇总.
• 肺炎支原体 (Mycoplasma pneumoniae，MP)是 介于病毒和细菌之间的一种微生物，是一类能在 无生命培养基上生长繁殖的最小原核细胞型微生 物。MP感染可在任何年龄发生，尤其以5～20岁 更多见。MP通过飞沫以气溶胶微粒的形式传播， 感染后引起肺炎支原体肺炎（Mycoplasmal pneumonia，MPP），每隔3～5年出现一次地区 性流行，占各类肺炎总数的10%～20%，入伍新 兵患肺炎者30%～50%由肺炎支原体引起；约占 非细菌性肺炎的1／3以上。另外还可引起肺外各 系统改变，且有死亡病例报道，已引起临床关注。
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【产品名称】肺炎支原体抗体检测试剂盒（胶体金法）【包装规格】24人份/盒 48人份 /盒【预期用途】用于检测试验血清中的肺炎支原体抗体（IgG/IgM）【检验原理】用肺 炎支原体抗原固相硝酸纤维素膜，应用渗滤式间接法原理，检测血清中肺炎支原体抗 体。【主要组成成份】1、 反应板 24份或48份2、 试剂Ⅰ 1瓶 0.02mol/L PH7.4PBS3、 试剂Ⅱ 1瓶 胶体金标记物【储存条件及有效期】产品应储存在2℃～8℃条件中，不能 冷冻；有效期24个月。【样本要求】1、 血清样品不能溶血，应为新鲜血清或2℃～ 8℃条件保存不超过一周。2、 高脂血症血清不能使用。【检验方法】1、 滴入二滴试 剂Ⅰ于反应板中央孔中，待完全渗入；2、 滴入100μl血清于反应板孔中，待完全渗入； 3、 滴加三滴试剂Ⅱ于反应板孔中，待完全渗入；4、 渗入三滴试剂Ⅰ于反应板孔中， 待完全渗入。【结果解释】阳性：反应板孔中C端出现红色圆斑，为肺炎支原体抗体阳 性；阴性：反应板孔中C端出现红色圆斑，为肺炎支原体抗体阴性。失效: 反应板孔中 C端不出现红色圆斑，或C端、T端均不出现红色圆斑，为试剂盒失效。【检验方法的 局限性】1、 本试剂试验仅用于检测肺炎支原体抗体而非直接检测肺炎支原体，因而阳 性结果并不能确诊是肺炎支原体感染。对患者状况的诊断应结合患者临床体征与症状 和试验结果的综合分析。2、 抗体含量低的血清样品，不能被检测出来是可能的。部份 肺炎支原体感染的患者，不产生抗体或产生少量的抗体。此时，可能显示阴性结果。3、 试验结果可疑时，应用培养基进行培养确诊。【产品性能指标】1、 批内精密度：阳性 符合率和阴性符合率均应≥95%，反应斑点颜色深浅程度应接近。2、 批间精密度：阳 性符合率和阴性符合率均应≥95%。【注意事项】1、 本产品尚未获得产品注册证号,仅 供研究,不用于临床诊断。2、 试验一旦开始操作，应按操作步骤连续进行，直至结束。 3、 试剂盒从冰箱取出时，应使试剂恢复至室温。
肺炎支原体IgMIgG联合检测项目推荐书
肺炎支原体IgM/IgG联合检测项目推荐书1 前言肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae，Mp)是一类无细胞壁、大小介于病毒与细菌之间、可在无生命培养基中生长繁殖的最小原核细胞型微生物。
Mp仅寄生于人类，人群对其普遍易感。
Mp感染不但引起呼吸道症状，如支气管炎、肺炎(我国社区获得性肺炎的首要病原学)等，而且25％感染患者易伴发神经、心血管、血液、免疫和皮肤等多系统损害。
近些年来，Mp感染的病例日渐增多，特别是因Mp感染造成的死亡已越来越引起人们的关注。
1.1 流行病学特点1.1.1 传染源与传播途径MP 仅寄生于人类，传染源是患者和携带者。
MP 由感染者的鼻、咽、喉、气管等分泌物排出，借飞沫和气溶胶而传播。
1.1.2 易感人群人类对MP 普遍易感，但高发人群是年长儿童。
MP 感染可发生于婴幼儿甚至新生儿，但其发病率明显低于年长儿，5 岁以上儿童肺炎中MP 感染者可高达50％以上。
尽管年幼儿MP 感染率低于年长儿，但常更为严重。
一般成人感染者症状轻微或无症状。
免疫功能低下者MP 常引起严重感染，且带菌状态可持续很长时间。
1.1.3 流行特征MP感染呈常年流行趋势,与以往每隔4～5年1次的流行规律似乎已有所不同,根据我们的检测资料,因肺炎住院的儿童患者中有20%左右的MP IgM抗体呈阳性。
1.2 临床表现临床表现多样性、不典型性是小儿MP 感染又一特点。
部分患儿病情较重，常累及全身多个系统，主要症状5 ～10 天消失，但肺部X 射线改变可持续4 ～6 周才消失。
1.2.1 呼吸道感染症状与体征支原体肺炎一般起病缓慢，临床症状较轻，以咳嗽、发热、头痛、咽喉痛和肌肉痛为主。
体检可见咽部充血，少数有鼓膜充血、水肿，胸部体征多不明显，肺炎患者可闻及水泡音或细湿啰音，有的始终听不到啰音，无肺实变体征。
胸部X 线表现可见近半数患者两侧被侵犯。
1.2.2肺外并发症MP 除引起下呼吸道感染导致感染性肺炎外，还可引起上呼吸道感染，导致化脓性扁桃体炎，以及肺外多系统症状，值得重视的是以肺外症状为首发症状时易误诊、误治。
作业指导书(医疗器械)
作业指导书编制：李志远批准：李克生发布日期：2012年12月20日. 实施日期：2013年1月1日兰州雅华生物技术有限公司1.0主题内容和适用范围本规程对公司生产的结核抗体金标检测卡、结核抗体金标阵列检测试剂盒、肺炎支原体抗体IgM金标检测试剂盒、肺炎支原体抗体IgG金标检测试剂盒、肺炎衣原体MOMP抗体IgM检测试剂盒（胶体金法）、肺炎衣原体MOMP抗体IgG检测试剂盒（胶体金法）、沙眼衣原体金标检测试剂盒、解脲支原体MB蛋白金标检测试剂盒（胶体金法）、弓形虫抗体（TOXO）检测卡九种产品性能的简介。
1结核抗体金标检测卡结核抗体金标检测卡按2005版《医疗器械分类目录》，属临床医学检验辅助设备（6840）。
管理类别为Ⅱ类。
产品简介如下：1.1结构组成1.1.1产品结构1.1.2检测卡:由检测条和聚苯乙烯塑料外壳制成。
1.1.3检测条:由已包被了检测线和对照线的硝酸纤维素膜、化学偶合物膜、样品吸收膜，胶纸等部分经层压而成，再分切成固定宽度的条状。
1.2主要原材料1.2.1重组结核特异蛋白抗原：为三种基因重组表达结核特异蛋白抗原用于包被硝酸纤维素膜检测线。
1.2.2抗人免疫球蛋白G单克隆抗体：纯化的抗人免疫球蛋白G单克隆抗体，用于胶体金的标记。
1.2.3抗鼠免疫球蛋白G抗体：纯化的兔抗鼠免疫球蛋白G抗体，用于包被硝酸纤维素膜控制线。
1.2.4金标检测条：由S1—S7部分构成：S1选用亲和性高分子纤维素膜，经预先处理后制备成反应膜用来显示整体系统的反应结果；S2、S3选用可使液体爬行速度较快，吸附力较强的粗纤维吸水纸或无纺布，其作用在于被粘贴在反应体的不同部位吸收待检样品标本；S4同样选取吸附力较强的无纺布，作为金标记抗体的固相吸附材料；S5为不同规格的双面胶，用于固定各种反应膜和吸水材料于S7上；S6塑料基板，作为测试条反应体的支撑物；S7单面胶带，用于固定金标反应膜和吸水材料于S6上；1.3基本参数1.3.1 试剂盒的基本参数应符合表1的规定。
肺炎支原体IgM抗体检测SOP
肺炎支原体IgM抗体检测SOP一、检验目的规范实验室人员操作，以保证实验结果的准确性。
二、预期用途该产品用于定性检测血清、血浆或全血中的肺炎支原体IgM抗体。
是引起社区获得性呼吸道感染的主要病原体之一，可以导致支气管炎和非典型性肺炎。
主要引起人非典型肺炎、气管炎及支气管炎，多经口和呼吸道等途径传播，多发于儿童和青年人。
MP感染已占小儿呼吸道疾病30%以上，且有增加趋势。
人体感染肺炎支原体后，能产生特异性IgM和IgG抗体。
IgM 抗体出现早，一般在感染后1周出现，3~4周达高峰，以后逐渐降低。
再次感染或重复感染后，常在1-2周内出现较高水平的IgG抗体。
MP肺炎与一般呼吸道感染和肺炎的临床症状没有明显区别，MP感染早期诊断有利于MP肺炎的治疗。
血青学诊断法是临床常用的主要诊断方法之一，灵敏度和特异性适中，常用的主要有酶联免疫吸附试验和凝集试验。
三、检验原理本产品以胶体金作为指示标记，用胶体金标记抗人IgM单抗，以基因工程技术表达肺炎支原体P1蛋白抗原标被硝酸纤维素膜，应用“间接法”免疫层析技术原理，检测的肺炎支原体感染病人血清、血浆或全血中的肺炎支原体抗体IgM,在检测过程中，若样本中存在肺炎支原体抗体gM, 则肺炎支原体抗体1gM与样本吸附垫中的胶体金一抗人IgM单抗结合物形成复合物，复合物沿硝酸纤维素膜移动到检测区，与检测线上包被的肺炎支原体P1蛋白抗原结合，多余的未被结合的结合物继续移动到质控区，与质控线上包被的羊抗鼠IgG 抗体结合，反应膜上出现1条红色的检测线和1条红色的质控线；若样本中不存在肺炎支原体抗体IgM,则胶体金一抗人IgM单抗结合物直接沿硝酸纤维素膜移动到质控区，与质控线上包被的羊抗鼠IgG抗体结合，仅形成一条红色的质控线。
四、主要组成成份1、试剂盒组分包括肺炎支原体1gM抗体检测卡，样品稀释液。
1.1、检测卡主要组分：包括金标垫和硝酸纤维素检测膜，金标垫内包被有胶体金标记的抗人IgM单克隆抗体；硝酸纤维素检测膜的检测线上包被有基因工程技术表达的肺炎支原体P1蛋白抗原，质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体。
肺炎支原体抗体IgM金标检测试剂盒作业指导书
肺炎支原体抗体IgM金标检测试剂盒作业指导书1目的建立肺炎支原体抗体IgM金标检测试剂盒作业指导书，确保生产过程处于受控状态。
2范围适用于肺炎支原体抗体IgM金标检测试剂盒相关工序的操作者。
3职责3.1操作人员应严格执行本作业指导书。
3.2生产主管负责监督检查。
3.3质检部质检员负责抽查执行情况。
4工作内容4.1生产工艺流程图※胶体金制备★胶体抗胶体单克隆体金反金应膜抗体检标检测制备进测记★肺炎支原体重组抗原的表达※NC膜处理兔抗鼠IgG抗体制备抗原检测NC膜检测★NC膜包被抗体检测质装产贴切量卡品分NC 检检板条包反测测应膜检测入库注：※关键过程★特殊过程4.2作业内容4.2.1胶体金制备（柠檬酸三钠还原法）氯金酸（HAuCl4）水溶液放入三角瓶内加热至沸腾→加热柠檬酸三钠溶液→混匀，搅拌煮沸10至15分钟→待胶体金溶液颜色由蓝→紫→红，冷却即可。
4.2.2金标抗体（反应膜）制备以0.1M碳酸钾溶液调胶体金溶液pH8.0-9.0→加入抗人IgM单抗，15分钟后加入聚乙二醇→离心，调532nm测OD值5～10，方阵滴定法选定标记工作浓度→用无纺布浸湿胶体金溶液，干燥、平整，检测。
4.2.3金标抗体反应膜质检将制备好的金标抗体反应膜按5‰比例抽检，与标准反应膜匹配组装成品，同时与标准成品作如下对照检测：a)符合率：样品稀释液、阴性质控血清无假阳性，阳性质控血清均呈阳性；b)反应强度：+/+++（阳性反应线/阴性反应线）；c)反应时间：30s～5min。
确认合格后才能转入下一工序。
4.2.4NC反应膜制备亲和性高分子硝酸纤维素膜→活化处理12小时→用水洗5次，每次20分钟→室温干燥后→取纯化Cpn重组MOPP抗原和兔鼠IgG抗体溶于10%CS中，浓度均为2mg/ml，用Cpn重组肺炎支原体抗原在NC膜上包被肺炎支原体抗体阳性检测线→用兔抗鼠IgG 抗体在NC膜上包被对照线→干燥后，用BS液封闭，H2O清洗后，室温干燥，备用。
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肺炎支原体抗体IgM金标检测试剂盒作业指导书
4.2.6.1 反应体组装程序：
a) 在S6塑料基板上贴双面胶带S5（29，48mm）二条；
b) 在S5上贴反应膜S1（20mm），S1上下缘距S6上下缘各29mm；
c) 在S6上贴吸水纸S3（30mm），吸水纸下缘与S1上缘交接1mm,上缘与S5的上边
缘对齐；
d) 在S5下端贴无纺布S2-1，其上缘压住S1下缘1mm；
e) 在S2-1上平放金标抗体反应膜S4（10mm）上缘对齐；
f) 在S4上平放无纺布S2-2（30mm）上下缘分别S4、S6对齐；
g) 将组装成型的反应体系用电脑可调式切割机切成4.2mm测试条，装入干燥器，待包装。
4.2.6.2 成品包装：每支成品先装聚苯乙烯塑料外壳，再用镀铝膜包装加干燥剂，附说明书，打批号入库，每批留样100人份，以备复检．
4.2.7 参比品制备
4.2.7.1 肺支阳性血清质控品
取临床确诊肺支病人（临床症状明显、肺炎衣原体培养阳性）血清15份，间接ELISA测定肺炎支原体IgM抗体阳性，0D492≥0.3，混合血清加防腐剂,分装-70℃保存。
4.2.7.2 肺衣阴性血清质控品
取健康人血清（体查健康，培养法和间接ELISA测定肺炎支原体IgM抗体均阴性，0D492＜0.10）15份，混合血清加防腐剂,分装-70℃保存。
4.3 成品检测
产品技术要求应符合《肺炎支原体抗体IgM金标检测试剂盒》产品注册标要求。
4.3.1 外观
4.3.1.1 要求
a)检测条：表面应平整、无划伤、开裂、变形及污渍；检测卡各组分附着牢固、
内容齐全；
b) 检测卡：外壳应平整，上下盖应均匀合拢，无明显间隙；反应芯试条在外壳内应附着
牢固；
4.3.1.2 检验
在自然光线下，用手感和目力观察方法进行检验。
4.3.2 符合率
4.3.2.1 阴性符合率
4.3.2.1.1要求
试剂卡测试肺炎支原体IgM抗体阴性质控血清10份，假阳性判断结果不多于1份，符合率应≥90%。
4.3.2.1.2 测试
a)试剂
1) 样品稀释液；
2) 测定样品液：肺炎支原体IgM抗体阴性质控血清。
b) 测定方法
随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡，测定阴性质控血清10份。
测定时取10μl阴性质控血清加在检测卡加样孔中，再加100μl样品稀释液，平放，等待3～5分钟观察检测卡中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。
c) 结果
以下结果为合格：检测线不显色，只有对照线显色。
4.3.2.2 阳性性符合率
4.3.2.2.1要求
试剂卡测试肺炎支原体IgM抗体阳性质控血清10份，假阴性判断结果不多于1份，符合率应≥90%。
4.3.2.2.2 测试
a)试剂
1) 样品稀释液；
2) 测定样品液：肺炎衣原体IgM抗体阳性质控血清。
b) 测定方法
随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡，测定阳性质控血清10份。
测定时取10μl阴性质控血清加在检测卡加样孔中，再加100μl样品稀释液，平放，等待3～5分钟观察检测卡中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。
c) 结果
以下结果为合格：检测线和对照线均显色。
4.3.3 重复性
4.3.3.1 阴性重复率
4.3.3.1.1 要求
使用试剂盒检测同一份阴性质控血清10次，同一份质控血清的阴性判定结果应基本一致，假阳性判定结果不多于1份，阴性重复率应≥90%。
4.3.3.1.2 测定
随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡，测定时取10μl阴性质控血清加在检测卡加样孔中，再加100μl样品稀释液，平放，等待3～5分钟观察检测卡中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。
4.3.3.2 阳性重复率
4.3.3.2.2 要求
使用试剂盒检测同一份阳性质控血清10次，同一份质控血清的阳性判定结果应基本一致，假阴性判定结果不多于1份，阴性重复率应≥90%。
4.3.3.2.2 测定
随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡，测定时取10μl阳性质控血清加在检测卡加样孔中，再加100μl样品稀释液，平放，等待3～5分钟观察检测卡中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。
4.3.4 精密性
4.3.4.1 要求
每批试剂盒随机抽取10个检测卡样品，用同一份阳性质控血清进行检测，要求各检测卡的显色应均一。
4.3.4.2 测定
随机从同批待测试剂盒中抽取10个检测卡进行检测。
测定时取10μl阳性质控血清加在检测卡加样孔中，再加100μl样品稀释液，平放，等待3～5分钟观察检测卡中部检视窗的结果，但不可超过20分钟读结果。
4.3.5 稳定性
4.3.
5.1 要求
a）在37 C条件下加速破坏试验放置12天，检测卡的符合率和精密度应符合要求；
b）在有效期后一个月内的留样检测卡的符合率和精密性应符合要求。
4.3.
5.2 测定
肺炎支原体IgM金标检测试剂盒成品进行稳定性实验：
测定方法同4.3.2、4.3.4。
5 相关文件
《肺炎支原体抗体IgM金标检测试剂盒》产品标准。
6 质量记录
6.1 《进货检验报告》
6.2 《肺炎支原体抗体IgM金标检测试剂盒批生产记录》。