小鼠基因型鉴定
基因工程小鼠饲养繁育及鉴定策略
基因工程小鼠饲养繁育及鉴定策略基因工程小鼠是研究基因功能和疾病机制的重要模型生物，它们通过基因工程技术进行特定基因的敲除、突变或过表达，从而模拟人类疾病的发生和发展过程。
然而，饲养和繁育基因工程小鼠以及对其进行鉴定是一个复杂而关键的过程。
本文将介绍基因工程小鼠饲养繁育及鉴定的策略。
一、基因工程小鼠饲养繁育策略1. 选择合适的饲养环境：基因工程小鼠对其饲养环境的要求较高，应提供适宜的温度、湿度和光照条件，以及清洁的饮水和饲料。
饲养箱应定期消毒，确保小鼠的健康生长。
2. 选择合适的饲料：基因工程小鼠的饲料应根据其基因改造的特点进行调整。
例如，敲除特定基因的小鼠可能需要特殊的饲料补充物来维持其生存和生长。
3. 繁殖管理：基因工程小鼠的繁殖需要进行严格的管理。
通常采用配对交配的方式进行繁殖，确保后代的基因遗传稳定。
此外，对于一些特殊基因型的小鼠，可能需要进行人工授精或胚胎移植等技术手段来实现繁殖。
4. 健康监测：定期对基因工程小鼠进行健康监测，包括体重、行为观察和疾病筛查等。
如发现异常情况，应及时采取相应的处理措施，以保证小鼠的健康状况。
二、基因工程小鼠鉴定策略1. 基因型鉴定：通过PCR、Southern blotting、Western blotting等技术来检测基因工程小鼠是否成功敲除、突变或过表达目标基因。
这些技术可以通过检测目标基因的DNA或蛋白质来确定小鼠的基因型。
2. 表型鉴定：基因工程小鼠的表型鉴定是评估其外部表现和生理特征的过程。
通过观察小鼠的行为、外貌、器官形态等方面的变化，可以初步判断基因改造对小鼠的影响。
3. 功能鉴定：基因工程小鼠的功能鉴定是评估其基因改造对生物学功能的影响。
可以利用行为学实验、生理学指标测定、组织学分析等技术手段来评估小鼠的功能变化，进一步揭示基因改造对生物过程的影响机制。
4. 遗传稳定性鉴定：基因工程小鼠的遗传稳定性鉴定是评估其基因改造是否稳定传递给后代的过程。
小鼠基因型鉴定是什么？小鼠基因型鉴定详细操作步骤
小鼠基因型鉴定是什么？小鼠基因型鉴定详细操作步骤小鼠基因型鉴定是指通过一定的生物学检测方法确定小鼠基因型的技术。
常用的方法包括PCR，Realtime PCR，HRM以及PCR结合测序等。
操作步骤：1、样品DNA的提取（1）剪鼠尾脚趾，1mm（2）加100ul lysls buffer， 2ul protease K，55℃消化2h（3）95℃灭活protease K 5min（4）快速离心（12000rpm 5min）注：DNA产物-20℃条件下保存鼠尾是去动物房拿的，3楼，一个房间-20℃的冰箱里。
加buffer的时候先把鼠尾戳到管子底部，再把buffer打进去，保证鼠尾沉在buffer里面（不要漂浮在上面，更不要还在管壁上）高温的仪器在窗户边上，铁锅和离心机旁边。
12000rpm的离心机是右边比较小的那台2、取20ul DNA产物，配置10管20ul PCR反应体系，具体如下：样品2ul+3种引物（每种各1ul）+ mixture 10ul + 5ulH2O=20ulprimer1：OIMR4182 commonprimer2：OIMR4183 WTprimer3：OIMR7297 muT先用比较大的EP管，加3种引物各10ul，mixture100ul，H2O50ul。
这几样东西都是放在冰箱里的管子里的，以后做，还是让学姐拿一下，毕竟我不太认识。
再分别加入10个小的EP管里，再加2ul样品。
3、PCR扩增反应reaction conditionstep temp/℃ time1 95 5min2 94 30s3 62 35s4 72 45s5 72 3min6 4 Hold。
小鼠基因型鉴定原理
竭诚为您提供优质文档/双击可除小鼠基因型鉴定原理篇一：小鼠表型鉴定小鼠发育阶段特点出生为红色（若要换窝，要带一点周围的木屑，否则鼠妈不认识）→生后4-5天开始长毛→生后7天剪脚趾和剪尾巴做基因型鉴定→生后10天开眼→生后20天断奶→生后40天可以合笼→怀孕20天后产崽。
小鼠性别判断：雌鼠的后腹部左右两侧有明显的乳头。
小鼠发情判断：雌鼠一般出生后40天开始发情，发情时肛门（或阴道口）为红色。
之后一直处于可以生育阶段。
一般繁殖合笼为一雄配二三雌，一般不将两只雄鼠和一只雌鼠放在一起，因为两只雄鼠会打架。
在做完基因型鉴定之后要尽快把不需要的小鼠处死，因为小鼠太多雌鼠会奶水不足，当雌鼠奶水不足时，会吃掉鼠崽。
小鼠基因型鉴定配方：bufferA0.5meDTA(ph8.0)10mol/Lnaoh双蒸水定容到250mL室温储存100uL625uLbufferbTribase浓盐酸调ph到3.0室温储存40mm步骤：1．小鼠出生7天后剪尾巴（一小点就行），若出生30天后剪耳朵；2．75uLbufferA100℃煮40min，每20min摇一次；3．225uLbufferb12000r/min3min，上清为DnA，跑pcR 鉴定。
篇二：转基因小鼠鉴定实验转基因小鼠鉴定实验在刚出生产出的鼠仔中，属转基因小鼠者，约占全部仔小鼠的20％-30％。
因此，对转基因小鼠必须进行鉴定筛选。
1．转基因整合检测鉴定转基因小鼠最简单的方法是从小鼠尾尖提取基因组DnA，检测其基因型。
检测方法包括pcR和shouthern杂交。
（1）基因组DnA的提取：1）将离乳期小鼠（>4周龄）麻醉标记。
2）用一只手抓住小鼠，另一只手持消毒剪剪下约1cm的鼠尾。
（2）pcR检测：转基因的初始筛选通常采用pcR检测技术。
该技术操作简便、快速、费用低而有效，适合大量标本的分析。
由于该技术特别敏感，可能产生假阳性结果。
因此，在操作过程中必须特别小心，避免质粒DnA或其它标本的基因组DnA的污染。
小鼠基因筛选实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景基因是生物体内控制遗传信息传递的基本单位，基因突变是生物进化的重要驱动力。
为了研究特定基因的功能，我们采用小鼠作为模型生物，通过基因筛选实验，旨在鉴定和验证与特定表型相关的基因。
二、实验目的1. 构建小鼠基因文库。
2. 通过分子生物学技术筛选与特定表型相关的基因。
3. 验证筛选得到的基因的功能。
三、实验材料1. 实验动物：C57BL/6小鼠。
2. 工具酶：限制性内切酶、DNA连接酶、Taq DNA聚合酶等。
3. 试剂：PCR引物、DNA标记物、DNA探针、克隆载体等。
4. 仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、显微镜等。
四、实验方法1. 构建小鼠基因文库（1）提取小鼠基因组DNA。
（2）使用限制性内切酶切割基因组DNA，获得特定长度的DNA片段。
（3）将切割后的DNA片段连接到克隆载体上，构建小鼠基因文库。
2. 基因筛选（1）根据已知表型，设计特异性引物，用于PCR扩增目的基因。
（2）对小鼠基因文库进行PCR扩增，筛选出与特定表型相关的基因片段。
（3）将筛选得到的基因片段进行测序，确定其序列。
3. 基因功能验证（1）将筛选得到的基因片段克隆到表达载体中，构建重组表达载体。
（2）将重组表达载体转化大肠杆菌，获得表达目的蛋白的菌株。
（3）通过免疫印迹、免疫荧光等技术检测目的蛋白的表达和活性。
五、实验结果1. 成功构建了小鼠基因文库，文库容量达到预期目标。
2. 通过PCR扩增，成功筛选出与特定表型相关的基因片段。
3. 对筛选得到的基因片段进行测序，确定其序列。
4. 通过基因功能验证，成功表达了目的蛋白，并验证了其功能。
六、实验讨论1. 基因筛选实验中，PCR扩增和DNA测序是关键步骤，需要严格控制实验条件，确保结果的准确性。
2. 在基因功能验证过程中，需要选择合适的表达系统和检测方法，以确保目的蛋白的正确表达和活性。
3. 本研究筛选得到的基因可能与特定表型相关，但其具体功能还需进一步研究。
敲基因小鼠鼠尾基因鉴定实验报告
碱法提取小鼠总DNA及基因鉴定：一、实验器材：加样枪（1ml、200ul、20ul、10ul）、枪头（大中小一套）、EP管（20ul、1.5ml、10ml）、试管架、浮标、温度计、胶布、手套、记号笔、锥形瓶、称量匙、冰盒二、实验试剂：A液、B液、引物、mix、双蒸水、三蒸水、琼脂糖、TBE（5x、1x、回收液）、核苷酸染料、Marker三、母液配置：1.10M NaOH: NaOH 40g加双蒸水至90ml，待NaOH完全溶解冷却后定容至100ml2.0.5M EDTA：EDTA.Na2盐18.61g, NaOH 1.5g, 加双蒸水至80ml,逐滴加入10M NaOH至EDTA完全溶解后加双蒸水定容至100ml3.1M TrisHCl（pH8.0）：Tris碱12.1g，加水至70ml，边搅拌边加入浓盐酸4ml，然后边逐滴加入1M HCl边测PH值，直至PH升至8.0（+\-0.05），定容至100ml（pH=8.8的TrisHCl中边加入浓盐酸边测PH值至PH=8.0（+\-0.05）为止）四、实验步骤：1.剪取鼠尾（约芝麻大小）储存于-20度冰箱（-20度冰箱，主要是防止DNA降解，4度不行）2.提取DNA：1)配置工作液——20ml体系A液：50ul 10M NaOH 加双蒸水至20ml8ul 0.5M EDTAB液：800ul 1M TrisHCl（pH8.0）加双蒸水至20ml2)加150ulA液（液体应完全浸没标本），95度水浴锅煮1.5h（将EP管插入浮标中后用胶布缠好防止EP管在加热过程中爆开）3)加150ulB液，混匀（上下颠倒3-5下）4)12000r/min 4度离心5分钟（可储存于-20度冰箱）3.PCR（冰上操作）：P1 0.5ul（P为AC3I，G为AAA）1)配置PCR体系——15ul体系P2 0.5ulMix 7.5ul三蒸水4.5ulDNA 2ul2)加2ul上述离心后的上清液至PCR体系，瞬离3)PCR仪扩增，参数设定：预变性：94度——3min变性：94度——30s退火：55度——30s 30个循环延伸：72度——24s72度——5min4度——∞4.琼脂糖凝胶电泳：1)制胶——2%琼脂糖凝胶配方：总体积（ml）20 30 40 50 60 120琼脂糖（g）0.4 0.6 0.8 1 1.2 2.4TBE 1x（ml）20 30 40 50 60 120Tris-base 13.6gTBE 5x配方：硼酸 6.56gEDTA 0.73g双蒸水up to 250mlEg：50孔大胶的配置：琼脂糖2.4g 微波炉加热5min左右冷却至适温后加染料7.5ulTBE 1x 150ml（需考虑蒸发量）2)加样——Marker 0.5ul，样品8ul（加样前吹打2次，从右向左加样）3)电泳——150V，300mA，20min（加样孔在近负极侧）5.成像分析：Image lab 新建核酸凝胶（第一项）最后一项滤光片拨至中间放置凝胶运行保存图像编辑拍照保存6.结果及分析：1)AAA分子量为700+？2)AC3I分子量为400+？3)AAA型——只出现AAA一条带AC3I型——只出现AC3I一条带双阳型——两条带都出现野生型——AAA型老鼠没出现AAA条带或AC3I型老鼠没出现AC3I条带或双阳型两条带均未出现4)出现浅带的原因？判定为阴性还是阳性？我觉得阴性更多。
F1代小鼠基因型鉴定的步骤
F1代小鼠基因型鉴定的步骤
通过以上步骤的工作，我们就可以获得F0代基因突变鼠。
待F0代小鼠性成熟后将其与具有相同突变类型的小鼠进行交配，获得具有稳定突变的F1代纯合小鼠。
具体步骤如下：
1.F0代突变小鼠与具有相同突变类型的小鼠进行交配，按雌雄比例为1:1合笼；
2.新生F1代小鼠进行基因型鉴定，此时可直接进行测序分析；
3.根据实验要求，在F1代小鼠中选择纯合、杂合小鼠进行实验操作；
4.分别选取F1代小鼠中纯合及杂合小鼠进行传代繁殖。
基因编辑小鼠繁殖示意图。
小鼠基因鉴定常见问题_概述及解释说明
小鼠基因鉴定常见问题概述及解释说明1. 引言1.1 概述小鼠基因鉴定是一项关键的科学研究技术，它通过识别小鼠个体的遗传信息和基因组成，为我们解析小鼠表型和功能的分子基础提供了有力的支持。
随着基因研究的发展，对小鼠基因的认知越来越深入，小鼠逐渐成为了研究人类健康和疾病模型中不可或缺的工具。
1.2 文章结构本文将首先介绍小鼠基因鉴定常见问题方面的相关内容，包括针对什么是小鼠基因鉴定、常见的小鼠基因鉴定方法以及小鼠基因鉴定在科学研究中的应用领域等内容。
随后，我们将进一步解释说明进行小鼠基因鉴定的原因、意义和价值，并探讨这一领域未来发展的前景与趋势。
最后，在结论部分对总述概况进行归纳，并展望和建议关于小鼠基因鉴定问题的未来方向。
1.3 目的本文旨在全面了解和阐述小鼠基因鉴定常见问题，旨在帮助读者更好地理解和认识小鼠基因鉴定的重要性和意义。
通过阐述该领域的相关知识，我们希望能进一步促进和推动小鼠基因研究领域的发展，并为相关研究人员提供指导和参考。
2. 小鼠基因鉴定常见问题2.1 什么是小鼠基因鉴定：小鼠基因鉴定是指通过分析和检测小鼠DNA或RNA中的遗传信息，以确定小鼠个体的基因组中是否存在特定的基因变异或突变。
它可以帮助研究人员识别和验证与小鼠表型特征相关的关键基因。
2.2 常见的小鼠基因鉴定方法：常用的小鼠基因鉴定方法包括：- Polymerase Chain Reaction (PCR)：PCR是一种广泛应用于分子生物学领域的技术，可在体外扩增目标DNA片段。
通过PCR反应，我们可以对感兴趣的DNA区域进行快速而精确的放大，从而便于后续分析。
- Southern blotting：Southern blotting结合了电泳和杂交技术，能够检测目标DNA序列。
该方法适用于检测某一特定片段在小鼠基因组中是否存在。
- Northern blotting：类似于Southern blotting，但Northern blotting主要用于检测RNA分子。
基因敲除小鼠鉴定 解读
基因敲除小鼠鉴定解读基因敲除小鼠鉴定解读，这事儿就像一场神秘的探索之旅。
咱们先得知道啥是基因敲除小鼠。
简单来说，就好比是在小鼠这个小世界里，我们用特殊的手段把某个基因像拆除小零件一样给去掉了。
这时候的小鼠就成了研究这个基因功能的绝佳模型。
那怎么知道这个基因是不是真的被敲除了呢？这就需要鉴定啦。
鉴定基因敲除小鼠，就像检查一件精心打造的艺术品有没有瑕疵。
一种常见的方法是通过基因测序。
这就像是给小鼠的基因密码本进行逐字逐句的校对。
测序的结果就像是一把钥匙，如果发现原本应该存在的基因片段不见了，那很可能这个基因就被成功敲除了。
不过，这可不是唯一的办法哦。
还有一种办法叫PCR检测。
这PCR检测呀，就像是一场基因的放大镜游戏。
我们通过特定的引物，就像是专门寻找特定宝藏的小钩子，去钓出我们感兴趣的基因片段。
如果在基因敲除小鼠里钓不到这个片段，而在正常小鼠里能钓到，那这也是基因敲除成功的一个标志。
这感觉是不是有点像寻宝呢？那鉴定出来之后，又怎么解读这些结果呢？这可就更有趣了。
如果确定基因敲除成功了，就像是我们找到了打开一扇神秘大门的钥匙。
这个时候，我们就能观察小鼠的各种表现了。
比如说，要是敲除的是一个和毛发颜色有关的基因，那小鼠的毛发颜色可能就会变得很奇怪。
这就像一幅画里原本该是红色的花朵，我们把负责红色的颜料给拿走了，那花朵就不是红色的了。
从行为上也能看出很多东西。
假如敲除的基因和小鼠的运动能力有关，那这只基因敲除小鼠可能就会比正常小鼠跑得慢或者动作不协调。
这就好比一辆汽车，如果我们拆掉了发动机里的某个关键零件，汽车肯定就跑不起来或者跑得歪歪扭扭的。
但是呢，解读结果也不是那么简单的事儿。
有时候可能会出现一些假象。
就像我们在雾里看花一样，看起来好像基因被敲除了，但实际上可能还有一些残留的基因功能在悄悄发挥作用。
这时候就需要我们更加仔细地去分析。
比如说，小鼠的某个表型变化可能不仅仅是因为这个基因被敲除了，还可能受到其他因素的影响。
【干货】基因敲除小鼠鉴定方法
【⼲货】基因敲除⼩⿏鉴定⽅法
1、基因敲除阳性⿏的鉴定
在敲除的⽚段两端设计引物，扩增后电泳。
理论上敲除成功的⼩⿏扩增出的⽚段⼤⼩=野⽣型⼩⿏的⽚段⼤⼩－敲除的⽚段⼤⼩，所以可通过电泳图的条带⼤⼩来进⾏鉴别，但实际上，若敲除的⽚段过⼤，有的酶是扩增不出来野⽣型⽚段的，⽐如有的酶，1.5K以下基本可以P出条带，⼤于1.5K的⼤部分是P不出的，所以当野⽣型的条带⽆法扩增时，这对引物就不能鉴定纯杂合了。
PCR鉴定⽆阳性，都是⼩⿏的错？
1.1、野⽣型⽚段扩增不出来时
敲除的⽚段较⼤时，野⽣型相应的⽚段往往扩增不出来。
电泳结果若是⽆条带，则为野⽣型；若是只有⼀条条带，则为敲除⼩⿏（纯合或杂合）。
PS:条带⼤⼩=野⽣型⽚段⼤⼩-敲除⽚段⼤⼩
PCR鉴定⽆阳性，都是⼩⿏的错？
1.2、野⽣型⽚段可以扩增出来时
假设
条带1⼤⼩=野⽣型条带⼤⼩
条带2⼤⼩=野⽣型⽚段⼤⼩-敲除⽚段⼤⼩
当野⽣型的⽚段可以扩增出来时，电泳结果若是只有条带1，则为野⽣型；若是既有条带1⼜有条带2，则为杂合敲除⼩⿏；若是只有条带2，则为纯合敲除⼩⿏。
所以这种情况就不需要再设计引物鉴定纯杂合了。
基因型鉴定-中科院版
1.鼠尾DNA提取第一天：1.剪取小鼠尾尖（同样适用于脚趾，胚胎组织，卵黄膜等，若不立即提取，可以放置4℃数日）放入1.5ml EP 管。
2.每管加入鼠尾裂解液350ul +10ul 蛋白酶K（简称PK，10mg/ml，现用现加）。
3.55℃水浴消化过夜第二天：4.用劲将消化好的组织摇匀（可用振荡器摇匀）。
5.每管加入350ul 酚/氯仿（苯酚：氯仿：异戊醇25:24:1，事先配好，4℃保存）。
6.上下充分混匀，室温静置3分钟后，离心，12000转，30分钟。
7.取出离心后的EP管，可见液体分为三层，取上层无色水相液体约200μl于新1.5ml EP管中，注意勿吸取中层液体。
（不能将中间的蛋白层吸起来，否则会对后续的实验造成影响。
为防止压力过大，可使用切去尖端的枪头）。
8.向新EP管中加入400μl无水乙醇（为2倍于上清的体积），上下颠倒混匀，此时应可看到白色丝状样的DNA。
9.离心12000转，10分钟。
10.可看到有白色沉淀，弃去上清，加入1ml的75%乙醇，将沉淀弹起，以便去除DNA上过多的离子。
11.离心，12000转，10分钟。
12.弃去上清，倒置EP管于吸水纸上，室温干燥约15分钟（注意不能过分干燥，以免基因组DNA难溶解）。
13.加入150-200μl (根据DNA沉淀的量)无菌蒸馏水或者是TE Buffer，可放置37℃助溶。
14.短期4℃，长期-20℃保存。
相关配方：1.鼠尾裂解液配方1000ml溶解液中含：100mM5mM EDTA%SDS200mM NaCl室温保存。
2.蛋白酶K溶液：取100mg 蛋白酶K，加去离子水10ml使成10mg/ml，分装后冻存于-20℃，用时溶解。
3.酚/氯仿：取Tris平衡酚50ml，氯仿48ml，异戊醇2ml加入100ml棕色试剂瓶中混匀，4℃避光保存。
2.基因鉴定PCR反应标准的PCR反应体系：10×扩增缓冲液10ul4种dNTP混合物各200umol/L引物各10～100pmol模板DNA 0.1～2ugTaq DNA聚合酶UMg2+加双或三蒸水至100ul以我们实验室常用的PCR25ul体系为例：10xbuffer：dNTP 2ulMgCl2：Primer F：1ulPrimer R：1ulTaq酶：DNA模板：1~3ul去离子水加至：25ul退火温度根据引物合成说明书决定PCR操作注意事项：1)PCR的复合管配制需在冰上进行，尤其taq酶需始终放于冰上，或者在最后加入时从-20°冰箱拿出，加完后立即放回。
小鼠脚趾DNA提取以及基因型鉴定
小鼠脚趾DNA提取以及Macf1fl/flC57BL/6-Prrx1-Cre小鼠基因型鉴定张茹2016年3月15日一．小鼠脚趾DNA提取【原理】1.提取过程真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是即要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。
提取DNA的过程是将动物组织在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的消化液中消化分解蛋白质，再用酚抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA析出来。
2.裂解液各成分作用在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可使蛋白变性并溶解细胞膜中的脂质，从而使细胞裂解，并使组织蛋白与DNA分离。
EDTA可以整合镁离子，这样将会抑制细胞中Dnase的活性；因为该酶必须在有镁离子存在下才会起作用。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在下保持很高的活性。
并且可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分离出来。
3.Tris苯酚作用酚是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚挤去，使蛋白失去水合状态而变性。
经过离心，变性蛋白质的密度比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的DNA分开。
而酚作为有机溶剂比重更大，保留在最下层。
【实验材料】1.耗材1.5ml离心管，水浴锅，高速冷冻离心机，1ml移液枪，200ul移液枪，通风橱，1ml移液枪枪头，200ul移液枪枪头。
2.试剂Tris-HCl，EDTA，NaCl，SDS，灭菌水，Tris苯酚，无水乙醇，75％乙醇，1倍TE缓冲液【实验步骤】1.SNET裂解液（50ml）：100mM Tris-HCl（10ml，PH8.0），200mM EDTA（1.25ml PH8.0），1M NaCl（20ml），10% SDS（5ml），水（13.75ml）。
（裂解液在常温下结晶，使用之前在55℃水浴锅中预热）蛋白酶K（PK）：储存浓度：10mg/ml；终浓度：100ug/ml2、操作步骤：1)小鼠标记编号，并收集小鼠脚趾样品于1.5mlEP管中（提前高压灭菌）。
基因敲除小鼠基因型鉴定--鼠尾血压测量实验前准备2017.2.6
鼠尾基因型鉴定及血压测量前需要准备：1、耳钉（对每一只鼠进行标号）需要购买，耳钉上有编号便于对鼠进行标记；2、我们还需要四个笼位对鼠进行分笼；3、目前第一代小鼠（最早一批有8只到2017.2.11有8周龄）陆续可以进行鉴定，所以我们可以先暂时不让原代雌雄鼠进行交配；4、鼠尾基因型鉴定时需要鼠尾裂解液需要购买，剪鼠尾的剪刀需要购买。
耳钉标、手术剪、饭盒、裂解液试剂盒已购买（2017.2.6）GALNT4基因敲除小鼠子代基因型鉴定1、整理好基因型鉴定方法2、鼠尾血压测定方法。
间接法，即尾动脉容积法：也就是常说的尾压法（Tail-cuff法）。
将传感器套在老鼠尾部，通过充气、放气对尾动脉加压和释压的同时监测血流信号，得出血压值。
原理类似于袖带测压法此方法简单无创，但是测量前要对小鼠加温加压，易引起小鼠燥烦不安，导致血压反射性增高，因此需要在正式实验前训练小鼠3天左右使其适应这一应激状态。
优点：①无创，不需手术，需要测量的时候，把老鼠固定在特定装置里，套上传感器，3分钟就出结果。
尤其适用于需要重复测量的情况。
②相对于直接测量法，成本低，而且操作起来容易。
不足：①测量的是某个时间点的血压，不能得到连续的血压曲线，无法监测血压微小的变化②舒张压的准确度有待商榷。
有文献报道，将间接法和直接法比较，74%的舒张压误差大于5mmHg。
注意了，所有的间接法都有这个问题，跟设备无关。
对舒张压准确度要求非常高的话，请选用直接法。
鼠尾基因型鉴定Protocol1、用耳钉标对P1代每一只小鼠进行区分标记1、高压手术剪、饭盒，耳钉标，手术盘，实验前一天或半天拿到动物房紫外消毒2、准备1.5ml 离心管16个（每只鼠两个离心管，可以多准备几个），离心管置于冰上3、剪鼠尾cm置于冰上的离心管中，如不能及时开始鼠尾的裂解，可以将放入-20℃冰箱中4、匀浆机将鼠尾组织绞碎（四楼有匀浆机），然后加入ul鼠尾裂解液（看试剂盒说明），封口膜封好5、放入55℃的（杂交炉中旋转），孵育过夜6、取出，室温静置10-15min，使样品温度降至室温，将离心管颠倒混匀后13000rpm，室温离心15min，吸取400ul上清至另一新的离心管中7、加入等体积的异丙醇，立即温和的上下翻转，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀，室温下12000rpm离心10min，弃上清8、往离心管中加700ul冰冷的75%乙醇漂洗温和的上下翻转，12000rpm，室温离心5min，将上清液全部吸除9、在超净台中风干约3-5min10、用50-100ul GIBCO纯水（根据DNA量确定用水量）重悬，55℃溶解2h11、检测DNA的浓度，取100-200ng的DNA用作PCR模板。
apcmin小鼠的鉴定方案
apcmin小鼠的鉴定方案APCmin小鼠的鉴定方案APCmin小鼠是一种常用的遗传模型，用于研究癌症发生和治疗。
APC基因是调控肠道上皮细胞增殖和分化的关键基因，而APCmin 小鼠则是通过敲除APC基因而产生的小鼠模型。
鉴定APCmin小鼠的方法主要包括基因分型和表型特征分析两个方面。
进行基因分型。
由于敲除APC基因导致小鼠体内发生多种遗传突变，因此需要通过PCR扩增和DNA测序来确认APC基因的缺失情况。
一般可以设计一对特异性引物，扩增包含APC基因缺失位点的DNA片段，然后将扩增产物进行测序分析，确认APC基因的缺失。
进行表型特征分析。
APCmin小鼠在肠道肿瘤的形成上具有明显的表型特征，主要包括多发的肠道腺瘤和结肠腺癌。
因此，可以通过解剖学检查和组织病理学分析来鉴定APCmin小鼠是否具有肠道肿瘤。
一般可以观察小鼠的肠道形态，如肠道长度、肠道腺瘤的数量和大小等，然后取相应的组织样本进行组织切片和染色，进一步确认肠道腺瘤和癌变的程度。
除了基因分型和表型特征分析，还可以结合其他辅助方法来鉴定APCmin小鼠。
例如，可以通过免疫组化染色来检测APCmin小鼠肠道中关键信号通路的活性，如Wnt信号通路的活性，进一步揭示肠道肿瘤的发生机制。
此外，还可以进行遗传连锁分析，确定APCmin小鼠是否具有其他遗传突变，如肿瘤抑制基因p53的突变等。
在鉴定APCmin小鼠时，需要注意一些技术细节。
首先，要保证实验动物的纯合性，即确保APC基因的双等位突变。
其次，要选择合适的对照组，通常选择野生型小鼠作为对照组，以比较肠道肿瘤的发生率和表型特征。
此外，要注意标本的处理和保存，以保证实验结果的准确性和可重复性。
总结起来，APCmin小鼠的鉴定方案主要包括基因分型和表型特征分析两个方面。
通过PCR扩增和DNA测序可以确定APC基因的缺失情况，而通过解剖学检查和组织病理学分析可以确认肠道肿瘤的发生。
此外，还可以结合其他辅助方法来进一步揭示肿瘤的发生机制。
小鼠脚趾DNA提取以及基因型鉴定
小鼠脚趾DNA提取以及Macf1fl/flC57BL/6-Prrx1-Cre小鼠基因型鉴定张茹2016年3月15日一．小鼠脚趾DNA提取【原理】1.提取过程真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是即要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。
提取DNA的过程是将动物组织在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的消化液中消化分解蛋白质，再用酚抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA析出来。
2.裂解液各成分作用在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可使蛋白变性并溶解细胞膜中的脂质，从而使细胞裂解，并使组织蛋白与DNA分离。
EDTA可以整合镁离子，这样将会抑制细胞中Dnase的活性；因为该酶必须在有镁离子存在下才会起作用。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在下保持很高的活性。
并且可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分离出来。
3.Tris苯酚作用酚是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚挤去，使蛋白失去水合状态而变性。
经过离心，变性蛋白质的密度比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的DNA分开。
而酚作为有机溶剂比重更大，保留在最下层。
【实验材料】1.耗材1.5ml离心管，水浴锅，高速冷冻离心机，1ml移液枪，200ul移液枪，通风橱，1ml移液枪枪头，200ul移液枪枪头。
2.试剂Tris-HCl，EDTA，NaCl，SDS，灭菌水，Tris苯酚，无水乙醇，75％乙醇，1倍TE缓冲液【实验步骤】1.SNET裂解液（50ml）：100mM Tris-HCl（10ml，PH8.0），200mM EDTA（1.25ml PH8.0），1M NaCl（20ml），10% SDS（5ml），水（13.75ml）。
（裂解液在常温下结晶，使用之前在55℃水浴锅中预热）蛋白酶K（PK）：储存浓度：10mg/ml；终浓度：100ug/ml2、操作步骤：1)小鼠标记编号，并收集小鼠脚趾样品于1.5mlEP管中（提前高压灭菌）。
小鼠基因型鉴定说明书Mouse Genotyping
One Step Mouse Genotyping Kit
PD101-01
Vazyme biotech co., ltd.
产品简介
本试剂盒包含整套的DNA粗提取以及PCR扩增体系，可用于小鼠基因型快速鉴定(Rapid Genotyping)。该试剂盒可用于从 小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织快速提取基因组DNA，提取产物可直接进行PCR扩增，无需匀浆、破碎、过夜消化、酚氯 仿抽提、DNA沉淀或柱式纯化等操作，极大缩短了实验耗时。使用时，将组织浸泡在预添加了Proteinase K的裂解液中， 55oC孵育20 min再95oC加热5 min灭活Proteinase K。裂解产物经离心后可直接用做PCR扩增模板，经反复测试广泛适用于 2 kb以内目标片段扩增，并适用于4对引物以内的多重PCR反应。 试剂盒中配有2 × Taq Plus Master Mix(Dye Plus)(P212)，包含高性能的Taq Plus DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓 冲体系。PCR反应时只需加入引物和模板即可进行扩增，减少了开管/移液等操作，显著降低了样品交叉污染并且提高了检 测通量和结果的重现性。独特的保护剂使得Taq Plus Master Mix经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。体系中预混有电泳 缓冲液和染料，可在反应结束后直接进行电泳，使用方便快捷。PCR产物的3’端带A，可克隆至T载体，并适用于 ClonExpressTM快速克隆试剂盒(C112/C113)。
应用实例
操作注意事项： - 用70%的乙醇(自备)预先清洗组织分离过程中所使用的所有工具； - Proteinase K灭活步骤(95oC，5min)必须进行，其残留活性会抑制后续PCR反应； - PCR反应体系配制过程应于冰水浴中进行，以提高扩增特异性(热启动)。
小鼠基因型鉴定结果
小鼠基因型鉴定结果引言基因型鉴定是通过对生物体的基因进行分析，确定其基因组的具体构成。
小鼠是一种常见的实验动物，在科学研究中广泛应用。
基因型鉴定结果可以为科学家提供关于小鼠遗传特性的重要信息，有助于深入研究小鼠的生物学特性以及与人类疾病之间的关联。
小鼠基因型鉴定方法小鼠基因型鉴定的方法有很多种，其中常用的方法包括PCR（聚合酶链式反应）、限制性片段长度多态性分析（RFLP）、单核苷酸多态性分析（SNP）等。
这些方法可以通过特定的试剂和实验步骤，对小鼠的基因进行扩增、分离、测序等操作，最终得到基因型鉴定结果。
PCRPCR是一种常用的基因型鉴定方法，通过扩增目标基因片段，从而得到足够的DNA样本进行后续分析。
PCR的原理是利用DNA聚合酶酶解DNA双链，然后引物与目标序列特异性结合，DNA聚合酶在引物的作用下合成新的DNA链。
通过多轮循环反应，可以在短时间内扩增出大量目标基因片段。
RFLPRFLP是一种通过酶切DNA片段的方法进行基因型鉴定。
在RFLP分析中，首先将DNA样本进行限制性内切酶消化，然后通过凝胶电泳将酶切后的DNA片段进行分离。
由于不同基因型的DNA片段长度存在差异，因此可以通过凝胶电泳的结果判断小鼠的基因型。
SNPSNP是单核苷酸多态性分析的缩写，是一种通过检测DNA序列中单个碱基的变异来进行基因型鉴定的方法。
SNP分析可以通过PCR扩增目标区域的DNA片段，然后利用测序技术对扩增产物进行测序，最终确定小鼠的基因型。
小鼠基因型鉴定结果的意义小鼠基因型鉴定结果对于科学研究具有重要意义。
首先，基因型鉴定可以帮助科学家确定小鼠的遗传特性，包括其携带的基因突变和变异，这些特性对于深入研究小鼠的生物学功能至关重要。
其次，基因型鉴定结果可以为研究人员提供关于小鼠模型的有效性和可靠性的信息，有助于确定小鼠是否适合作为特定疾病模型的研究对象。
最后，基因型鉴定结果还可以为研究人员提供有关小鼠与人类疾病之间的关联的线索，有助于揭示疾病的发病机制和寻找新的治疗方法。