分析方法验证指南(中文)

分析方法验证指南

1、目的

本文件的目的是为分析方法验证的数据收集提供基本指南。该指南参考了USP，EEC（BP/EP）和ICH 中的分析方法验证指南，能够满足公司的产品的分析方法验证工作。

2、范围本文件中提供的定义和程序是为了促使公司质量方针的基本原则符合所有关于方法验证

的法

规要求。本指南适用于API、原料、中间体的检测和放行的分析方法，并为新药物的应用收集支持性的数据。本指南是为了规范验证为公司的产品提供一个通用和分析方法验证方案。现有的方法中的小变化不需要全面验证，如：对柱子的固定相的生产厂家变化，样品准备的变化（搅拌和超声，震摇和超声）。在实际分析中，方法验证需要提供更多的信息或细节，需要制定的特殊的方案。这个指南不包括微生物分析方法的验证。

3、参考文件

USP<1225>，法定方法的验证

ICH 指南Q2A&Q2B，分析方法验证程序。

公司关于有效数字修约原则

4、定义降解物：降解物是由于一个物质经一段时间的化学变化（经过诸如光照、温度、pH、水分，经与容器发生反应）产生，也叫降解产物或分解产物。大剂量原料药：原料药在产品中的最大剂量大于2g/天。定量限（LOQ）：指试样中的被分析物能够被定量测定的最低值，其测定结果应具有一定的准确度和精密度。线性：在设计的测定范围内，检测结果与供试品中被分析物的浓度直接呈线性关系的程度。通常相关系数（R）在回归线上有一定的斜率（m）。小剂量原料药：原料药的在产品中的最大剂量小于或等于2g/天。

测量精密度（ICH-重复性）：多次测定同一样品时的重现性（%RSD）。在HPLC 或GC 中也叫进样精密度。方法精密度：同一样品或标准品（若有时）准备多份供试品在测定含量时的重现性（%RSD）。回收精密度：测定同一标准时对准确度和线性的评估。也叫水平精密度。报告限度（RL）：低于某一数值的时候报告中就不体现。报告限度一般大于或等于定量限。再现性

（ICH-中间精密度）：在不同检测条件下对样品检测结果的重现性。（不同的实验室、分析人员、仪器、试剂、分析时间、日期等）

5、指南A、总则因为在对产品的物理性质的评估时，分析方法会因测定的准确性和精密性而有所不同，故验证的可接受标准也不同于一般的检测方法。一个可接受的标准可能需要根据方法的特性和检测的指标

来确定。验证项目的选择可参照该指南后面所附的表8-推荐验证项目。在验证之前，应当为验证的分析方法提供一个清楚并简明的格式。该方法应提供所有必要的细节

（参数、条件等）。可以用以下几种方式来描述这些在分析方法验证过程中将要用到的数据。在验证过程中得到的任何意外的或计划外的结果，在此都应当调查并形成文件（包括合理评估的取消某个无效数据）。任何超标的结果也应在验证报告中讨论并记录方法的局限性（若有）。方法应按照USP 中名称分类，参照表1。这里需指出并不是所有的分析方法都适合这1 到4 类。有特殊的方法时，每个数据（以下）都应反复考虑其适用性以满足分析方法的目的。

表1：

a可能需要对相关响应因子（RRF）根据以下方法作进一步的检测。

B、选择性：

1、要求：a)选择性的研究一般优先于其它验证项目。b)收集被分析物的相关文件（色谱图、分析报告、参考文献等），包括杂质、降解物、溶液、相关的或相近的相关物质。c)应有对典型样品的分析。新方法应能对相关降解物和/或杂质具有明确性和选择性。若杂质或降解物的标准不存在，通过对含有杂质或降解物的产品用不同的程序来检测的结果进行对比来研究选择性，这个样品的成分应已得到鉴别确认。为了更适合，这应当包括快到有效期的或相关的强降解条件下的样品：光照、加热、湿度、酸碱水解、氧化等。

2、可接受标准：为证明选择性，需要有重要成分的积极响应和对一些干扰物质的响应的控制。鉴别试验对降解物和杂质的选择性不作要求。

c)精密度、回收率、线性和范围

1、要求

a)线性/回收率：准备两份样品（两份样品，分别在两天准备，每个浓度总共准备4 份）+每天用新的标准（如果需要）。典型的做法是，准备的样品做成五个不同的浓度。具体使用的浓度或多或少

由产品本身和/或所使用的仪器决定。

+注意：在预定的范围内分析物应该加入到合适的赋形剂或空白溶液中，应该用可靠的有代表性的分析试样（比如：大批量的API）。定量溶液的制备应该采用线性/回收率制备的同一批样品，以免引入研究的可变性。

b)准确度—方法的精密度由分析的线性和回收率数据决定。c)范围—具体的范围一般是由线性数据和所要使用的程序决定。这些值的范围在分析方法中能够达到一定的线性、准确度和精密度。d)回收率（由线性/精确度评估）—是由测定单个样品时的%rsd 的值得到，由每个浓度的四

个点组成的回收率决定的。

2、可接受的标准：所有数据都应符合表2 的标准。

3、报告：a)每个浓度的单个和平均百分含量（原料药验证）或回收率（最终产品的验证）都应该计算和报告。在API 验证中，因为没有赋形剂，系数就用百分数表示。

检出量回收率百

分含量= ————————×100

加入量

表2：一般方法可接受的标准D

B：如果线性关系在整个范围内不能得到满足，活性组分和降解的线性关系可以分开；

C：下限代表主成分的％水平，而上限代表降解物的％水平；

D：应该在各个验证方案中先定义好紧缩或宽松的验收标准。

b)这些数据应当表示为检出量比加入量，进行线性回归分析，根据以上要求测得的样品的结果进行绘制得到（每个浓度的四个点）。（y=mx+b，其中y=检出量，m=斜率，x=加入量，b=截距）c)报告相关系数（R），斜率（m），和残差平方和。

d)报告每次加入量浓度所得的回收数据的SD 和%RSD。

D、测量精密度

1、要求—为确定测量精密度，同一化验员多次对同一样品进行检测（每个至少检测6 次）。典型例子，对100%的标准溶液分析进行类别I 的验证。类别II 验证要求对标准品的规格和指标进行