口腔鳞癌及癌前病变

口腔鳞癌及癌前病变

作者：殷操，沈丽佳，谢思明，谢立群

【关键词】热休克蛋白;HSP70;HSP90;口腔癌;口腔扁平苔藓

【摘要】目的：检测热休克蛋白70，90在口腔鳞癌及癌前病变中的表达情况，探讨其在口腔癌中的作用及其意义.

方法：

采用SABC法免疫组化方法检测42例口腔鳞癌、22例口腔扁平苔藓、20例口腔白斑、10例正常黏膜中HSP70，90蛋白表达的情况. 结果：

HSP70在OLP组中主要以阳性和强阳性表达为主，占91%(20/22)，明显高于正常黏膜、口腔白斑和口腔鳞癌组(P<0.05); HSP90在OLP,

OSCC组中主要以弱阳性和阳性表达为主，分别占73%(16/22)和70%(14/20)，明显高于正常组和口腔白斑组(P<0.05). 结论： HSP70，90在口腔扁平苔藓中均起着一定的作用;同时HSP90可能还参与口腔鳞癌的发生和发展过程.

0引言

热休克蛋白(heat shock protein, HSP)，是一类非常保守的蛋白质分子家族.

自从20世纪80年代确定HSP的序列和基因结构位点以来[1]，很多研究发现，HSP在细胞保护、免疫应答、信号转导及调节凋亡等方面具有重要作用，还能诱导细胞毒T淋巴细胞活性，特异杀伤肿瘤细胞. 目前有关HSP在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell

carcinoma，OSCC)及癌前病变中的表达和作用的研究较少，为此，我们通过检测HSP70及HSP90在OSCC及其癌前病变中的表达，探讨HSP70，90在OSCC发生发展过程中的作用.

1材料和方法

1.1材料1999/2003年本院手术及活检标本94例(患者术前均未采用化疗、放疗)，其中正常口腔黏膜(normal oral mucosa，NOM)10例，口腔扁平苔藓(oral lichen planus，OLP)22例，口腔白斑(oral

leukoplakia，OLK)20例，OSCC共42例，按照其分化程度分为I级20例，II级12例，III级10例.

所有标本均经HE染色，并经口腔病理专家确诊. 鼠抗人HSP70 mAb(浓缩型)、鼠抗人HSP90

mAb(浓缩型)均购自DAKO公司，工作浓度分别为1∶300和1∶200. SABC法试剂盒及DAB显色液均购自DAKO公司.

1.2方法常规石蜡连续切片4 μm，常规脱蜡、梯度乙醇水化至水，微波修复，自然冷却至室温.

采用SABC法免疫组织化学染色，DAB显色3～5 min，苏木素复染5 min，盐酸乙醇分化数秒，流水返蓝15

min，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片. 用TBS代替一抗作为空白对照，已知阳性片作阳性对照.

结果在光学显微镜下进行观察. HSP70阳性定位于胞质及胞膜，HSP90阳性定位于胞质，呈黄色或棕黄色颗粒.

采用双盲法统计实验结果.

随机选取10个高倍视野进行计数，计数阳性细胞所占的百分比，根据阳性细胞的比例分为以下四个等级：<5%为阴性(-)，5 %～25%为弱阳性(±)，26%～75%为阳性(+)，>75%为强阳性().

统计学分析：

采用SPSS12.0统计软件包进行统计，因各组指标均为等级资料，故其组间的比较采用非参数秩和检验Kruskal Wallis Test，检验水准取双侧α=0.05.

2结果

2.1HSP70的表达见表1.

HSP70在口腔正常黏膜中以阳性表达为主，占70%(7/10)，主要表达在基底层及棘层;在OLP组中主要以阳性和强阳性为主，占91%(20/22)，主要表达在基底层及棘层，固有层淋巴细胞和血管内皮细胞也有阳性表达(图1A).

在OLK中以阳性和强阳性表达为主，占90%(18/20). OSCC组中则以弱阳性和阳性表达为主(图1B)，占76%(32/42).

各组间经非参数秩和检验Kruskal Wallis Test， χ2=17.348，P=0.001<0.05，有统计学差异. NOM, OLK,

OSCC三组间经非参数秩和检验，χ2=5.058，P=0.08>0.05，差异无统计学意义.

将这三组合并为非OLP组后与OLP组相比，χ2=12.948，P=0.000<0.05，有统计学意义，提示HSP70在OLP中表达上调. OSCC各级相比，χ2=0.006，P=0.997>0.05，差异无统计学意义.

2.2HSP90的表达见表1.

HSP90在口腔正常黏膜中以阴性表达为主，占70%(7/10);在OLP组中主要以阳性和弱阳性为主，占73%(16/22).

在OLK组中主要以阴性和弱阳性表达为主(图1C)，占70%(14/20).

OSCC组中则以弱阳性和阳性表达为主(图1D)，占62%(26/42). 各组间经非参数秩和检验Kruskal Wallis Test，

χ2=11.233，P=0.011<0.05，有统计学差异. NOM与OLK相比，χ2=1.091，P=0.296>0.05，差异无统计学意义. OLP与OSCC相比，χ2=0.747，P=0.387>0.05，差异无统计学意义.

将OLP与OSCC合并成一组，NOM与OLK合并成另一组后相比，χ2=9.149, P=0.002<0.05，提示HSP90在OLP, OSCC组中表达上调. OSCC各级相比，χ2=7.066，P=0.029<0.05，以OSCC

I级表达较低，提示HSP90与OSCC分化程度有关.

3讨论

生物细胞在受到各种理化因素刺激后发生应激反应，诱导HSP的合成. HSP广泛存在于原核和真核

资料来源：携康长荣肿瘤网