血清总蛋白测定(双缩脲试剂法)教学文案
蛋白质含量测定——双缩脲试剂法 实验报告
蛋白质含量测定——双缩脲试剂法实验报告一、实验目的1、掌握双缩脲试剂法测定蛋白质含量的原理和方法。
2、学会使用分光光度计进行比色测定。
3、熟悉标准曲线的绘制和应用，能够通过标准曲线计算样品中蛋白质的含量。
二、实验原理双缩脲试剂是由硫酸铜和酒石酸钾钠在碱性条件下生成的淡蓝色的络合物。
当含有两个或两个以上肽键的化合物与双缩脲试剂反应时，会形成紫色的络合物。
蛋白质分子中含有多个肽键，因此在碱性条件下能与双缩脲试剂反应产生紫色复合物。
颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，在一定范围内符合朗伯比尔定律，可通过比色法测定其吸光度，进而计算出蛋白质的含量。
三、实验材料与仪器1、材料（1）标准蛋白质溶液：称取结晶牛血清白蛋白（BSA） 10mg，用蒸馏水溶解并定容至 100ml，配制成100μg/ml 的标准蛋白质溶液。
（2）待测蛋白质溶液：＿____（3）双缩脲试剂：称取硫酸铜（CuSO4·5H2O） 15g 和酒石酸钾钠60g，分别用蒸馏水溶解，然后混合，加入 300ml 10%氢氧化钠溶液，并用蒸馏水定容至 1000ml，摇匀，避光保存。
2、仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）移液器（4）容量瓶（100ml、50ml）（5）试管及试管架四、实验步骤1、标准曲线的绘制（1）取 6 支干净的试管，按下表加入试剂：｜管号｜ 1 ｜ 2 ｜ 3 ｜ 4 ｜ 5 ｜ 6 ｜｜｜｜｜｜｜｜｜｜标准蛋白质溶液（ml）｜ 0 ｜ 02 ｜ 04 ｜ 06 ｜ 08 ｜ 10 ｜｜蒸馏水（ml）｜ 10 ｜ 08 ｜ 06 ｜ 04 ｜ 02 ｜ 0 ｜｜蛋白质含量（μg）｜ 0 ｜ 20 ｜ 40 ｜ 60 ｜ 80 ｜ 100 ｜（2）向各管中加入 4ml 双缩脲试剂，摇匀，在室温（20-25℃）下放置 30 分钟。
（3）以第 1 管为空白对照，在 540nm 波长处用分光光度计测定各管的吸光度（A）值。
（4）以蛋白质含量（μg）为横坐标，吸光度（A）值为纵坐标，绘制标准曲线。
第二部分 血清总蛋白含量测定
第二部分血清总蛋白含量测定（双缩脲法）技能训练指导
一、实训目的
1. 加强对蛋白质分子结构及性质的认识。
2. 掌握双缩脲法常规测定血清总蛋白含量的原理和方法。
二、实训内容
血清总蛋白含量的测定
三、实训仪器与材料
1．待测血清新鲜血（自制羊血清或人血清）
2．标准血清市售专用的标准血清（70g/L）
3．双缩脲试剂市售专用的双缩脲试剂
4．蒸馏水
5．刻度吸管（0.1ml3支、5ml1支）
6．洗耳球1个、试管3支、试管架、722分光光度计
四、实训操作
1．取3支试管编号，按下表操作：
2．各管混匀，置37C0水浴箱保温15分钟。
3．使用722型分光光度计，选取波长540nm，以空白管调零，分别读取各管的A值。
4. 计算公式：
测定管浓度（g/L）=测定管A值/标准管A值Ⅹ70（标准管浓度）
（参考值：60~80 g/L）
六、实训清场
1．血清集中处理。
所有玻璃器皿按要求清洗干净，摆放整齐。
2．操作台面整洁，有破损器材，主动报告实验室老师并做好登记。
临床生化检验：3-血清总蛋白测(双缩脲法)
优点
准确性好、精密度高、 灵敏度高。 特异性高、准确度好、 精密度高、操作简单方 便，显色稳定。
灵敏度高、达双缩脲法 的100倍。
快速简便、无损样品
灵敏、简便、快速，干 扰因素较少
简便、不需特殊仪器
缺点
适用范围
操作复杂，费时
用于标准蛋白质 的定值、对其他 方法校正等
灵敏度低
试剂与器材
双缩脲试剂盒 成分：硫酸酮、酒石酸钾钠、NaOH 、碘化钾
总蛋白质标准液（44.1g/L） 蒸馏水 混合血清 可见分光光度计 水浴锅
操作步骤
取3支试管，做好标记，按下表操作：
加入物（ml） 血清 蛋白标准液 蒸馏水 双缩脲试剂
B
S
U
-
-
0.06
-
0.06 -
0.06
-
-
3.0
血清总蛋白测定 (双缩脲法）
医学检验系临床生化检验教研室
实验目的
掌握双缩脲测定血清总蛋白的基本原理 熟悉血清总蛋白的临床意义；
总蛋白测定经典和常见的方法比较
方法
凯氏定氮法
双缩脲法
Lowry法 （Folin酚法 ）
紫外 分光光度法 考马斯亮蓝法 （Bradford）
化学比浊法
灵敏度
0.2~ 1.0mg氮 1～20mg 20～250ug
干扰物质多、操作 要求严格计时
为临床测定血清 总蛋白首选方法 。
适用于测定单一 蛋白质及测定蛋 白质含量较少的 标本如脑脊液
灵敏度低、干扰物 较多
常用于较纯的酶 和免疫球蛋白测 定
不同蛋白质与染料 常用于需求更高 结合力不一致，对 呈色灵敏度的蛋 比色杯有吸附作用 白电泳
血清总蛋白测定标准操作规程
血清总蛋白测定标准操作规程1.实验原理：（双缩脲法）本试剂采用双缩脲反应，即在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与两价铜离子反应生成蓝紫色络合物，其中每个铜离子与五至六个肽键络合。
双缩脲反应被广泛应用于临床检验，具有简便、快速可靠的特点。
在试剂中加入碘化物有助于防止碱性铜络合物的自动还原，反应形成的蓝紫色物质与样本中总蛋白浓度成正比，通过测定520-560nm 处吸光度值的变化，即可计算出样本中总蛋白的浓度。
+2u C +蛋白质−−→−-OH Cu 蛋白质复合物 2.试剂主要组成成分3.样本要求：新鲜无溶血血清，勿使用肝素抗凝血浆。
22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法：仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6.检验结果的解释6.1线性范围：在给定的样本/试剂比例和条件下测定时，本试剂线性范围可达100g/L 。
样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V ）的氯化钠溶液稀释样本。
最大稀释5倍。
6.2单位换算：g/dL=g/L ×0.17检验结果的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊或以水空白在540nm 处吸光度大于0.200时不能使用。
8.产品性能指标8.1试剂外观：蓝色透明液体，无悬浮物及沉淀物。
8.2装量：不低于标识值8.3空白吸光度：在540nm处，光径1cm时，空白吸光度A≤0.200。
8.4分析灵敏度：在540nm处，光径1cm时，测量70g/L的总蛋白，吸光度差△A≥0.1508.5线性区间：试剂的线性区间为[30.0-100.0]g/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.995；b）线性相对偏差不超过±6.0%。
8.6精密度8.6.1重复性：重复测试（70.0±10.0）g/L的样本，所得结果的变异系数（CV）应≤2.0%8.6.2批间差：重复测试（70.0±10.0）g/L的样本，所得结果批间相对极差（R）应≤5.0%8.7准确性：相对偏差应不大于±5.0%。
血清总蛋白测定(双缩脲(精)
实验目的
⒈掌握双缩脲法测定总蛋白的原理及注 意事项。
⒉熟练测定操作步骤。 ⒊了解TP测定的主要临床意义。
实验原理
蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与铜 离子作用生成紫红色的络合物，产生的颜 色强度在一定范围内与蛋白质的含量成正 比，与同样处理的蛋白标准液比较，经计
潴留。 ②摄入量不足和消耗增加：营养不良、慢性肠胃炎、严
重结核病等。 ③合成障碍：肝脏疾病。 ④蛋白质丢失：严重烧伤时大量血浆渗出，肾综合症等。
算或查标准曲线即可求出血清蛋白质含量。
蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与铜 离子作用生成紫红色的络合物与两分子尿 素缩合后生成的双缩脲在碱性溶液中与铜
离子作用形成的紫色物质的反应相似，故 称之为双缩脲反应。
双缩脲结构: NH2试剂:
H2N—OC—NH—CO—
试剂
双缩脲试剂：称取硫酸铜 (CuSO4·5H2O)3.0g,溶于500mL新鲜制 备的蒸馏水或刚煮沸冷却的去离子水中， 加酒石酸钾纳(NaKC4H4O6·4H2O)9.0g， 碘化钾5.0g，待完全溶解后，加入 6mol/L Na2OH 100ml,最后加蒸馏水 至10白质标准液：市售。
实验操作
加 入 物(mL) 待测血清 蛋白标准液 蒸馏水 双缩脲试剂
U(测) 0.1 -
4.0
S(标) 0.1
4.0
B(空) 0.1 4.0
混匀,置37℃水浴6分钟，以”B”管校”0”, λ=546nm比色,读取A 值计算。
实验结果及报告
3、双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是络合铜离子，以维 持铜离子在碱性溶液中的溶解性；碘化钾能防止两价铜 离子还原．
4、高脂，黄疸及溶血标本应作清空白对照来校正误差。 含脂类极多的血清，加入双缩脲试剂后会出现混浊，可 用乙醚3ml抽提后再进行比色．
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告实验报告：双缩脲法测定血清总蛋白摘要：本实验采用双缩脲法测定血清总蛋白浓度。
通过对比实验组和对照组样本的比色反应，得出了血清总蛋白的浓度。
实验结果表明，该方法简便、可靠、准确，适用于血清总蛋白的浓度测定。
实验目的：1.掌握双缩脲法测定血清总蛋白浓度的基本原理和方法。
2.了解比色法在实验中的应用及操作技巧。
3.验证双缩脲法测定血清总蛋白浓度的可靠性和准确性。
实验方法：1.取不同浓度的血清标准品6个，分别标注不同浓度和编号。
2.取待测样品6个，标注不同编号。
3.将标准品和待测样品加入10ml离心管中，每个管中各加入1ml蒸馏水。
4.在离心管中分别加入1ml蛋白试剂A和B，摇匀，并放置15分钟。
5.加入1ml无水乙醇摇匀。
6.在1ml离心管中加入1ml0.1mol/L NaOH溶液，使溶液转为蓝色。
7.在250nm处比色计测定吸光度（对照组样本的吸光度为0）。
8.计算出样品的血清总蛋白浓度。
实验结果：对照组样本吸光度为0，实验组6个样本的吸光度如下表：编号吸光度S1 0.163S2 0.344S3 0.516S4 0.688S5 0.860S6 1.032标准品的吸光度如下表：编号吸光度浓度G1 0.163 0.7g/LG2 0.344 1.4g/LG3 0.516 2.0g/LG4 0.688 2.8g/LG5 0.860 3.4g/LG6 1.032 4.1g/L通过双缩脲法测定，我们计算出每个实验组样本的血清总蛋白浓度。
编号浓度（g/L）S1 0.7S2 1.4S3 2.0S4 2.8S5 3.4S6 4.1实验结论：1.通过双缩脲法测定血清总蛋白，准确地测定了实验组样本的血清总蛋白浓度。
2.双缩脲法测定血清总蛋白浓度的方法简便、可靠、准确，适用于血清总蛋白浓度测定。
基础生化实验 第三个实验 双缩脲
双缩脲法测定蛋白质含量（考核实验）一、教学目的与要求：①加强对蛋白质的有关性质的认识；②掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法；③对学生所学进行综合的测试。
二、教学实验原理：蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲反应。
在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量氨基酸成分无关，因此利用此进行比色测定蛋白质含量。
在一定条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于540—560nm下比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知的蛋白质浓度，标准蛋白溶液可以用结晶的牛（或人）血清白蛋白、卵清蛋白或酪蛋白粉末配制。
除-CONH-有此反应外，-CONH2-，-CH2-，NH2-，-CS-CS-NH2，等基团亦有此反应。
三、考核主要内容1、标准曲线的制作取6支干净的试管，按0→5编号，然后按下表依次加入试剂，充分混匀，在室温下放置半小时，以管为空白，在550nm波长处测定消光值（OD），以各管蛋白质含量（毫克）横坐标，OD值为坐标，画出标线。
2、样品测定：取样品液1.0 ml，同法进行，测其OD值，对照标准曲线求得未知液蛋白质浓度。
3、分光光度计的使用：规定每组在10min以内全部完成操作（共测6支管）；同时注意操作是否规范。
4、成绩的计算：此次的实验占30%（包括平时的表现及实验报告的完成情况和完成质量），平时的五次实验共占70%，每次实验按总分为5分为满分进行打分，总评折合成百分制。
四、实验注意事项：①标准样品的浓度为：10μg/ml；②实验过程中不得过问他人，同组人可以配合进行；③实验报告在课堂上独立完成，同组人数据相同，不得抄袭他人数据，一旦发现以零分处理；④实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做；⑤对实验结果进行简单的分析.一、实验目的：1.掌握分光光度计的使用方法。
2.掌握标准管法测物质含量的方法。
3.掌握双缩脲法测定蛋白质含量的方法。
血清总蛋白测定(双缩脲试剂法)精编版
实验材料
样品：大牛血清
试剂：双缩脲试剂、蛋白质标准液（70g/L）、生理盐水（0.9%）
器材：试管、加样枪、刻度吸管、洗耳球
设备：1100分光光度计、水浴锅
实验步骤
取3支试管，做好标记(B空白对照，S标准液，U为待测大牛血清)，按下表操作：
加入物（ml）
B (空白）
S （标准）
U（待测）
二、实验原理
（一）：双缩脲反应
在碱性溶液中,双缩脲(H2NOC－NH－CONH2)能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色的络合物,这个反应叫做双缩脲反应。两分子尿素加热脱氨缩合成的双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2），因分子内含有两个邻接的肽键，在碱性溶液中可与Cu2+发生双缩脲反应，生成紫红色络合物；蛋白质分子含有大量彼此相连的肽键（-CO-NH-），同样能在碱性条件下与Cu2+发生双缩脲反应，生成的紫红色络合物，且在540nm处的吸光度与蛋白质的含量在10～120g/L范围内有良好的线性关系。
d.测定结束后，将比色杯中的样品回收进试管
依据公式算出结果
四、结果与讨论：
（一）：实验结果
1、实验现象：
a、在实验中首先加入双缩脲试剂，再依次加入0.9%氯化钠溶液、蛋白质标准液、相应的大牛血清后溶液没有明显的颜色变化，呈淡蓝色透明状；
b、水浴20分钟之后，B试管试管显淡蓝色；S试管和U试管显浅紫色且S试管的颜色比U试管的颜色稍深。
（二）：结果讨论
查阅资料得知，大牛血清总蛋白含量一般为60-80g/L,可是，实验结果却是44.586g/L,即使按照实验要求及步骤操作,结果还是出现了比较大的误差，实验结果经过讨论，分析如下：
1、成功的方面：
实验一 双缩脲法测定血清蛋白质含量
实验一 双缩脲法测定血清蛋白质含量【实验名称】：双缩脲法测定血清蛋白质含量09救援一班 第三大组 李岚宇 2009222336室温：20°（一）实验目的： 1.掌握双缩脲法测定蛋白质的原理。
2.学习掌握分光光度计的使用。
3.掌握标准曲线的制作。
4.学习分光光度法测定的原理和方法。
（二）实验原理：血清中蛋白质的肽键（-CO-NH-）在碱性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物。
此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲（H 2N-OC-NH-CO-NH 2）在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似，故称之为双缩脲反应。
这种紫红色络合物在540nm 处有明显吸收峰，吸光度在一定范围内与血清蛋白含量呈正比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得蛋白质含量。
（三）实验材料与仪器：1.仪器和材料： 分光光度计、7支试管、1毫升刻度吸管3支、移液器、坐标纸。
2.试剂：6mol/L 的NaOH 、双缩脲试剂、9g/L 的NaCl 溶液、蛋白质标准液（10g/L)、待测血清样本。
（四）实验步骤和结论:1.取7支试管，编号，按照图1操作并记录。
表 12.在坐标纸上以各管蛋白质含量为横坐标，光吸收值（两管平均值）为纵坐标，绘制标准曲线。
表2 试剂 管号 空白管 标准管 测定管 1 2 3 4 5蛋白质标准液 - 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 - 待测血清样本 - - - - - - 1.0 氯化钠溶液 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 - - 双锁脲试剂 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 λ光吸收值 0 0.085 0.181 0.261 0.354 0.438 0.317 各管浓度 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2 1.43、由标准曲线查出待测的血清样本的蛋白质浓度，由表1得出测定管的蛋白质的λ光吸收值为0.317，由表2得出测定管的蛋白质的浓度为1.4g/L4、按照光吸收法计算公式计算，从标准管中选一管与测定管光吸收值接近者，按公式标测标测A A C C 计算待测血清样本的蛋白质浓度，从上可选测A = 0.317标C =0.354 ,标A =1.6 g/L ; 则得到：测C =1.432 g/L【注意事项】 ： 1.本实验是定量实验，要求所有玻璃仪器必须清洁，整齐、干燥。
蛋白质的检测实验教案
一、教学目标
1.知识目标
（1）简述生物组织中蛋白质的鉴定方法；
（2）说出双缩脲试剂的使用方法。
2.技能目标
尝试应用双缩脲试剂鉴别生物组织中蛋白质的方法。
3.情感态度与价值观目标
通过实验，认同蛋白质是细胞的物质基础之一，认识细胞里面有物质。
二、教学重难点
1.教学重点
（1）蛋白质检测的实验原理；
回答问题
实验药品
（2′）
本实验要检测蛋白质，用到的试剂是双缩脲试剂（A液0.1 g/ml NaOH溶液、B液0.01 g/ml CuSO4溶液）。双缩脲试剂的使用方法先滴加A液（制造碱性环境），再滴加B液，最后摇匀。
倾听
实验步骤
（5′）
1.选材→制备组织样液→呈色反应
2.A实验组：2ml稀蛋清+1mlA液+3~4滴B液→摇匀
3.B对照组：2ml清水+1mlA液+3~4滴B液→摇匀
4.观察实验现象。
倾听
↓
进行实验
实验过程及结果
（30′）
蛋白质+双缩脲试剂→紫色络合物
观察实验、验证பைடு நூலகம்果
小结
（1′）
1.同学们，有同学做出其他实验结果的吗？试着思考是什么因素导致实验不成功的。
2.同学们记得清理自己的实验桌。
四、教学板书
（2）双缩脲试剂的使用。
2.教学难点
双缩脲试剂的使用方法。
三、教学过程
教学内容及时间
教师活动
学生活动
导入
（1′）
理论课知识导入，我们在理论课上已经学习了检测生物组织中的蛋白质的相关理论知识，也知道蛋清、牛奶中有蛋白质，那要检测蛋清等生物组织中是否真的含有蛋白质，应该怎么做呢？这节课我们就来进行蛋白质的鉴定实验。
血清总蛋白测定(双缩脲
血清总蛋白测定（双缩脲）1. 简介血清总蛋白是指血液中所有蛋白质的总和，包括白蛋白和球蛋白等。
血清总蛋白测定是一项常见的检验方法，用于评估患者的蛋白质代谢情况，以及某些疾病的诊断和监测。
双缩脲法是一种常用的血清总蛋白测定方法，本文将介绍该方法的原理、操作流程和结果解读。
2. 原理双缩脲法利用缩脲与蛋白质中的酚类物质反应生成有颜色的复合物，通过测量复合物的吸光度来定量测定血清中的总蛋白含量。
该方法具有简单、灵敏、快速等特点，被广泛应用于临床实验室及科研领域。
3. 操作流程3.1 样本处理从被检测者的静脉血中采集适量的血清样本，并放置在离心管中，离心10分钟将血清分离出来。
将分离得到的血清样本转移到干净的试管中。
3.2 加入试剂取适量的双缩脲试剂，按照其说明书的要求加入到试管中，与血清样本进行充分混合。
注意避免空气泡的形成。
3.3 酶解反应将试管放置于恒温水浴中，根据试剂的要求进行酶解反应。
一般情况下，反应时间为30分钟。
3.4 测定吸光度将反应体放入分光光度计中，设置波长为试剂说明书要求的波长，记录吸光度值。
3.5 统计结果根据标准曲线，计算出血清样本中总蛋白的含量。
4. 结果解读根据血清总蛋白测定的结果，可以得出以下结论： - 如果测定的结果高于正常范围，可能说明患者在蛋白质代谢方面存在异常，如蛋白质合成过多或凋亡减少。
- 如果测定的结果低于正常范围，可能说明患者在蛋白质合成方面存在问题，如肝功能受损或营养不足等。
需要注意的是，血清总蛋白测定的结果受到多种因素影响，如年龄、性别、饮食习惯等，因此在结果解读时需要综合考虑患者的临床情况。
5. 总结血清总蛋白测定是一种常用的检验方法，通过双缩脲法可以快速、准确地测定血清中的总蛋白含量。
该方法操作简单，结果解读可为临床医生提供重要的参考依据。
但需要注意的是，结果的解读需要综合考虑患者的临床情况，以及其他相关检验指标的结果，才能做出正确的诊断。
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
全国高等医药院校医学检验专业规划教材
8
临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
临床意义
1．血清总蛋白浓度增高 （1）血浆浓缩
凡体内水分的排出大于摄入时，均可引起血浆 浓缩。如急性脱水（如呕吐、腹泻、高烧等），外 伤性休克（毛细血管通透性增大），慢性肾上腺皮 质功能减退（尿排钠增多引起继发性失水）。
－
－
蛋白标准液
－
－
－
0.10 0.10
蒸馏水
0.10 －
－
双缩脲空白试剂 －
5.0
－
－
－
5.0
－
双缩脲试剂
5.0
－
5.0
－
5.0
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6
临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
计算
血清总蛋白(g/L) AU ARB AB 蛋白标准液浓度 As ARB ASB
当肝功能严重受损时，蛋白质合成减少，以清蛋白降 低最为显著。
（4）蛋白质丢失
严重烧伤，大量血浆渗出；大出血；肾病综合征尿中 长期丢失蛋白质；溃疡性结肠炎可从粪便中长期丢失一定 量的蛋白质。
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临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
注意事项
这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，其 吸光度与血清蛋白含量在一定范围内呈正比关系，经
与同样处理的蛋医药院校医学检验专业规划教材
3
临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
试剂与器材
双缩脲法测定总蛋白含量
双缩脲法测定总蛋白含量双缩脲法是一种常用的方法，用于测定生物体中的总蛋白含量。
本文将介绍双缩脲法的原理、步骤和应用，以及一些注意事项。
总蛋白是生物体中一类重要的生化指标，它包括了多种蛋白质分子的总量。
测定总蛋白含量可以用于评估生物体的健康状态、疾病诊断以及药物疗效的监测等方面。
而双缩脲法则是一种常用的测定总蛋白含量的方法。
双缩脲法的原理是利用了蛋白质与染料间的结合反应。
当染料分子与蛋白质结合时，会导致染料的吸收光谱发生变化。
通过测量吸光度的变化，可以间接地推算出样品中的总蛋白含量。
在进行双缩脲法测定总蛋白含量时，需要准备一系列试剂和仪器设备。
首先是双缩脲试剂，它是一种含有染料的溶液。
其次是样品，可以是血清、尿液、细胞提取液等。
还需要分光光度计，用于测量吸光度的变化。
具体操作步骤如下：1. 首先准备好双缩脲试剂和待测样品。
将双缩脲试剂稀释至适当浓度，使其能够与样品中的总蛋白发生反应。
2. 取一定量的样品，加入双缩脲试剂中，充分混合。
注意避免产生气泡。
3. 置于室温下静置一段时间，使样品与试剂充分反应。
4. 使用分光光度计，设置好波长，并将样品吸光度读数。
5. 根据吸光度的读数，结合标准曲线，计算出样品中的总蛋白含量。
双缩脲法的应用非常广泛。
它可以用于临床医学中，用于评估病人的肾功能、肝功能等。
在实验室研究中，双缩脲法也是常用的测定总蛋白含量的方法之一。
需要注意的是，双缩脲法测定总蛋白含量也有一些限制和注意事项。
首先，双缩脲法只能测定总蛋白的含量，无法区分不同种类的蛋白质。
其次，双缩脲法的准确性受到样品的干扰因素影响较大，所以在操作过程中需要尽量减少干扰物的存在。
此外，双缩脲法对某些物质有一定的选择性，因此在应用时需要根据具体情况进行调整和修正。
双缩脲法是一种常用的测定总蛋白含量的方法。
它通过测量吸光度的变化，间接地推算出样品中的总蛋白含量。
双缩脲法具有简单、快速、经济的特点，广泛应用于临床医学和科学研究领域。
双缩脲试剂测定蛋白质含量实验步骤
双缩脲试剂测定蛋白质含量实验步骤示例文章篇一：哇塞！今天老师给我们讲了一个超神奇的实验——用双缩脲试剂测定蛋白质含量。
这可把我好奇坏啦！一开始，老师先把我们分成了几个小组。
我和我的小伙伴们眼睛都瞪得大大的，迫不及待地想要开始动手操作。
老师先给我们拿来了各种实验器材，有小量杯、滴管、玻璃棒，还有那些装着神秘液体的瓶子。
我们就像一群即将探索神秘宝藏的小探险家。
然后呢，老师就开始一步一步地教我们啦。
第一步，要先准备好两个干净的小量杯。
这就好像是给我们的实验宝贝们准备两个舒适的小房子。
我们一边听老师讲，一边小心翼翼地摆弄着量杯，心里紧张得怦怦直跳，生怕一个不小心就把量杯给打破了。
接下来，老师让我们在一个量杯里加入一些蛋白质溶液，这溶液看起来就像神秘的魔法药水。
我心里不禁想：“这小小的溶液里到底藏着多少蛋白质的秘密呢？”然后，在另一个量杯里加入同样多的蒸馏水，这蒸馏水就像是个安静的小伙伴，默默地陪着蛋白质溶液。
再然后呀，老师给我们每个小组都发了双缩脲试剂A 液和B 液。
这两种液体一出现，感觉整个实验室都充满了神秘的气息。
我们先往装着蛋白质溶液的量杯里加几滴A 液，轻轻摇晃一下量杯，让它们融合在一起。
这时候，溶液好像没有什么大变化，难道是魔法还没生效？紧接着，再往里面加入几滴B 液，哇！奇迹出现啦！溶液一下子变成了紫色，就像一朵突然绽放的紫色花朵，美丽极了！我们都忍不住欢呼起来：“太神奇啦！”再看看装着蒸馏水的量杯，加了同样的试剂，却没有任何变化。
这一对比，不就说明了只有蛋白质溶液才能和双缩脲试剂产生反应变成紫色嘛！最后，老师告诉我们，通过观察溶液颜色的深浅，就能大概知道蛋白质含量的多少啦。
这可真是个了不起的发现！通过这次实验，我深深地感受到了科学的神奇和魅力。
科学就像是一个巨大的魔法世界，充满了无数的惊喜和未知，等着我们去探索和发现。
我以后一定要好好学习科学知识，去解开更多的科学谜团！示例文章篇二：哎呀呀，同学们！今天咱们来聊聊双缩脲试剂测定蛋白质含量这个神奇的实验！首先呢，咱得把要用的东西准备好。
双缩脲试剂鉴定蛋白质教学设计 高一上学期生物人教版必修1
中学生物教案（学生用）授课内容双缩脲试剂鉴定蛋白质教师姓名 选用教材 《生物学》必修1分子与细胞章节第二章第1节一、学情分析学生通过上节课对蛋白质的理论学习，对蛋白质的存在和作用有了初级的理解，并未掌握蛋白质的结构性质以及功能，同时对于蛋白质并没有达到一个感性的认识。
二、本课概念图三、本课涉及课程标准初级掌握实验探究的常规方法。
四、教学目标1. 知识目标：掌握双缩脲试剂鉴定蛋白质的方法与原理，了解该方法在现实生活中的用途。
2. 能力目标：培养严谨求真的科学实验能力。
材料器具实验步骤实验原理双缩脲法鉴定蛋白质的用途（例）3. 情感态度与价值观目标：培养严谨的科学态度，树立正确的价值目标。
五、重点与难点1. 重点：掌握双缩脲试剂鉴定蛋白质的实验步骤。
2. 难点：掌握双缩脲试剂鉴定蛋白质的实验原理以及在生活中的应用。
六、教学过程教学环节与时间分配教学活动学生活动设计意图课程导入1.5 min 1.以测试学生逻辑推理能力为理由，让学生观察图片，分析图片中食物共同丰富含有的物质。
询问学生是如何知道这些食物中丰富含有蛋白质的。
1.学生听从指导。
2. 思考讨论教师提出的问题。
3.学生与老师互动，共同分析是哪种物质。
1. 激发学生兴趣，引出本课内容。
讲授新课6 Min 1.讲授实验材料，启发学生思考用什么材料作为待测组织液最好，让其进行讨论。
2.提问学生分享他们的讨论结果。
3.对他们的回答进行评价总结。
4.讲解双缩脲试剂的组成，让学生观察双缩脲试剂。
5.以板书绘图的演示形式讲解双缩脲的使用流程与方法及其注意点。
6.让学生阅读实验原理，反问学生对于肽键的了解，讲解肽键的组成结构。
7.借用之前的绘图，讲解实验原理，将实验步骤与原理相1.学生积极讨论2.学生积极回答，分享讨论结果。
3.学生认真听讲，观察双缩脲试剂的组成。
4.学生跟随老师的讲解，想象实验的过程。
5.学生观看黑板，思考老师提出的问题。
1.启发学生的发散思维，让学生体会准备实验的过程。
2.1双缩脲试剂鉴定蛋白质教学设计2023-2024学年高一上学期生物人教版必修1
2.1双缩脲试剂鉴定蛋白质教学设计2023-2024学年高一上学期生物人教版必修1一、课程基本信息1.课程名称：双缩脲试剂鉴定蛋白质2.教学年级和班级：2023-2024学年高一上学期生物3.授课时间：2023年9月13日，下午第二节课4.教学时数：45分钟二、核心素养目标培养学生的科学探究能力，使学生能够运用双缩脲试剂鉴定蛋白质，并理解其原理；提高学生的实验操作技能，使学生能够熟练地进行实验操作；培养学生的问题解决能力，使学生能够分析实验结果，并得出合理的结论。
三、重点难点及解决办法重点：理解双缩脲试剂的原理及其鉴定蛋白质的过程。
解决办法：通过实验操作，让学生亲身体验双缩脲试剂鉴定蛋白质的过程，加深理解。
难点：熟练地进行实验操作，正确使用双缩脲试剂。
解决办法：提前让学生预习实验操作，课堂上教师详细讲解操作步骤，并进行示范，让学生在实验中得到充分的练习。
四、教学方法与策略1. 教学方法：采用讲授法、实验法和讨论法相结合的方式进行教学。
首先，通过讲授法向学生介绍双缩脲试剂的原理及其鉴定蛋白质的过程，帮助学生建立理论知识框架。
接着，通过实验法让学生亲身体验双缩脲试剂鉴定蛋白质的过程，加深理解。
最后，通过讨论法组织学生进行小组讨论，分享实验心得和成果，促进学生之间的互动和交流。
2. 教学活动设计：（1）角色扮演：在讲解双缩脲试剂的原理时，可以设计一个角色扮演活动。
让学生分别扮演试剂制造商、实验操作者和实验结果分析者，通过模拟实际操作过程，加深对双缩脲试剂原理的理解。
（2）实验操作：安排一次课堂实验，让学生分组进行双缩脲试剂鉴定蛋白质的操作。
教师在实验前详细讲解操作步骤，并进行示范，确保学生能够熟练掌握实验方法。
实验过程中，教师巡回指导，解答学生疑问，确保实验顺利进行。
（3）小组讨论：在实验结束后，组织学生进行小组讨论。
要求每个小组分享实验心得和结果，其他小组成员进行提问和评论。
通过讨论，促进学生之间的交流和思维碰撞，提高学生的合作能力和问题解决能力。
双缩脲法测定蛋白质(教学课件)
分光光度法
一般性实验-1
➢ 光是一种电磁波，通常用频率和波长来描述光。 ➢ 人的视觉所能感觉到的光称为可见光，波长范围在400～760nm，人的眼睛感觉不到的
还有红外光（波长大于760-5000000nm）、紫外光（波长200-400nm）、X射线等。 ➢ 在可见光区，不同波长的光呈不同的颜色，但各种有色光之间并没有严格的界线，而
用嘴吸取，以免造成意外。
吸量管的使用
➢ 正确拿法：中指和拇指拿住吸管上端，食指顶住吸量管顶端。 ➢ 取液：用吸耳球吸取液体至刻度上，眼睛看着液面上升；吸完后用食指顶住吸量管上
端。 ➢ 调刻度：吸量管与地面保持垂直，下口与试剂瓶接触，并成一角度；用食指控制液体
下降至最上一刻度处；液体凹面、刻度和视线应在一水平面上。 ➢ 放液：吸量管移入准备接受溶液的容器中，使其出口尖端接触器壁，并成一角度，吸
相同，吸收系数不同。 ➢ 比较吸光度的比值：多用于检测物质的纯度（DNA A260/A280=1.8 纯度鉴定)
物质的定量分析
➢ 标准曲线法 配制一系列不同浓度的标准溶液，用选定的显色剂显色。选用合适波长的入射光。测定 时先以空白溶液调节透光率100%，然后分别测定标准系列的吸光度。以吸光度为纵坐 标，浓度为横坐标作图得到一条通过原点的直线，叫做标准曲线（或称A-C曲线）。
量管仍保持垂直。放开食指，使液体自动流出。吸量管应最后靠壁15秒。
吸量管的使用注意事项
➢ 吸量管上端标有“吹”字。将所量液体全部放出后，还需要吹出残留于管尖的溶 液。此类吸量管为“吹出式”，未标“吹”字的吸量管，则不必吹出管尖的残留 液体。(0.5ml以下的都要吹）
实验一血清蛋白质测定(范玉平)
【注意事项】
2.BCG与球蛋白的反应强度与环境温度有关（温度 升高，呈色加速加深）。BCG工作液中的表面活 性剂虽有延缓BCG与球蛋白的非特异性反应的作 用，但亦将测定标本与标准液置于同一温度下操 作，以抵消温度的干扰作用。
【注意事项】
3.Brij-35是非离子型表面活性剂，其浓度大小对结 果测定有影响，浓度越大，吸光度越低，但显色 稳定。Brij-35也可用其他表面活性剂代替，如吐 温-20或吐温-80，终浓度为2ml/L，灵敏度和线 性范围不变。
【方法学评价】
3.本法既可手工操作，也能自动化分析，是目前国 内测定血清白蛋白的最常用方法。本法线性范围 为10～60g/L，RCV≤4%。但该法与溴甲酚紫法 比较，对血清白蛋白特异性稍差。
三、A/G比值计算
1.用双缩脲法测定血清标本中总蛋白浓度，用溴甲 酚绿法测定血清白蛋白浓度,
2.总蛋白浓度减去血清白蛋白浓度即为球蛋白浓度 3. 求得血清白蛋白、球蛋白比值(A/G比值)。 4.参考范围 A/G 〉1
注意要点：
1．黄疸血清，溶血，高糖，酚酞等干扰用样本空白来消除。 2．加入显色剂要准确，加入后立即混匀。 3. 本反应是TP的最常用和方便的方法，也便于自动化分析。 4. 其与蛋白质中的肽键成正比关系，与蛋白质的种类及AA的组成
无明显关系.
【临床意义】
1血清总蛋白浓度降低 （1）蛋白质合成障碍 （2）蛋白质丢失增加 （3）营养不良或消耗增加 （4）血浆稀释 2血清总蛋白浓度增高 （1）蛋白质合成增加 （2）血浆浓缩
11生化实验室规则穿好工作服穿好工作服不得迟到早退保持安静预习听从教师指导认真完成实验报告加强安全观念加强安全观念爱护公共财物爱护公共财物money洗净一切仪器用品洗净一切仪器用品桌面整洁干净桌面整洁干净净仪器洗涤要求试管烧杯量筒吸管2桌面边台水池窗台仪器要桌面边台水池窗台仪器要一尘不一尘不染染请值日生用抹布擦请值日生用抹布擦干净干净
实验二 血清总蛋白测定(双缩脲法)
实验二血清总蛋白测定(双缩脲法)实验二血清总蛋白测定（双缩脲法）血清总蛋白是血清中所有蛋白质的总称，正常人含量为60-80g/L。
按不同的分离方法可将血清蛋白质分为不同的组分。
从目前临床生化实际应用上，血清总蛋白分为清蛋白和球蛋白两大类，其中球蛋白又分为α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白四种。
正常成人每天所合成的血清蛋白质中，清蛋白及大部分α1、α2、β球蛋白是肝脏合成的，γ球蛋白（大部分是免疫球蛋白）则主要来源与浆细胞。
总蛋白测定，一般利用下列四种蛋白质的结构或性质进行：重复的肽键结构；酪氨酸和色氨酸残基对酚试剂反应或紫外吸收；与染料的结合能力；沉淀后借浊度或光折射测定。
目前临床应用最广泛的方法是利用蛋白质分子中的多个肽键与双缩脲试剂显色法。
【目的】1. 熟悉血清总蛋白测定的原理及基本操作。
2. 掌握血清总蛋白测定的临床意义。
【原理】蛋白质分子中的肽键（-CONH-）在碱性条件下能与Cu2+ 作用形成紫红色络合物。
此呈色反应与双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）在碱性溶液中与Cu2+ 作用产生紫红色的反应相似，故称为双缩脲反应。
反应中溶液颜色的深浅与蛋白质的含量成正比，可用分光光度法定量检测蛋白质的含量。
凡具有两个以上肽键结构的化合物均有此反应，因此双缩脲反应广泛用于肽及蛋白质定性、定量检测。
【器材】恒温水浴箱、分光光度计、刻度吸管、微量移液管、试管、试管架。
【试剂】1．6mol ／L NaOH溶液称取NaOH （优级纯）240g ，溶解于新鲜蒸馏水中并加至1000ml 。
置聚乙烯瓶内盖紧室温保存。
2. 双缩脲试剂精确称取结晶硫酸铜(CuSO4·5H20)3.0g，酒石酸钾(NaKC4H4O6·4H2O) 9.0g，碘化钾(KI)5.0g，用500m1新鲜蒸馏水溶解。
在搅拌下，加入6mol ／L 氢氧化钠溶液100ml ，最后加蒸馏水稀释至1000ml 。
置聚乙烯瓶内盖紧室温保存。
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血清总蛋白测定(双缩
脲试剂法)
生物化学实验报告
姓名：
学号：
专业年级：
组别：
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称血清总蛋白测定（双缩脲试剂法）
实验日期2014-11-21 实验地点第五实验室
合作者指导老师
评分教师签名批改日期
一、实验目的
1、掌握双缩脲测定血清总蛋白的基本原理、操作；
2、熟悉血清总蛋白的临床意义；
3、了解双缩脲法测定血清总蛋白的特点和注意事项。
二、实验原理
（一）：双缩脲反应
在碱性溶液中,双缩脲(H2NOC－NH－CONH2)能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色的络合物,这个反应叫做双缩脲反应。
两分子尿素加热脱氨缩合成的双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2），因分子内含有两个邻接的肽键，在碱性溶液中可与Cu2+发生双缩脲反应，生成紫红色络合物；蛋白质分子含有大量彼此相连的肽键（-CO-NH-），同样能在碱性条件下与Cu2+发生双缩脲反应，生成的紫红色络合物，且在540nm处的吸光度与蛋白质的含量在10～120g/L范围内有良好的线性关系。
三、材料与方法：
实验材料
样品：大牛血清
试剂：双缩脲试剂、蛋白质标准液（70g/L）、生理盐水（0.9%）
器材：试管、加样枪、刻度吸管、洗耳球
设备：1100分光光度计、水浴锅
实验步骤
取3支试管，做好标记(B空白对照，S标准液，U为待测大牛血清)，按下表操作：加入物（ml） B (空白）S （标准）U（待测）
大牛血清（1：10）- - 0.5
- 0.5 -
蛋白标准液（1：
10）
0.9%氯化钠溶液0.5 - -
双缩脲试剂 4.0 4.0 4.0
a.各管混匀，观察各试管颜色
b.将各试管置于37℃水浴锅中加热20min，观察颜色
c.将试管中的液体倒入比色杯中，置于1100分光光度计的样品槽内，在波长540nm，以空白管调零，测S和U管吸的光度。
d.测定结束后，将比色杯中的样品回收进试管
依据公式算出结果
四、结果与讨论：
（一）：实验结果
1、实验现象：
a、在实验中首先加入双缩脲试剂，再依次加入0.9%氯化钠溶液、蛋白质标准液、相应的大牛血清后溶液没有明显的颜色变化，呈淡蓝色透明状；
b、水浴20分钟之后，B试管试管显淡蓝色；S试管和U试管显浅紫色且S试管的颜色比U试管的颜色稍深。
2、实验数据：
管号测定次数平均吸光度 1 2 3
S 0.187 0.188 0.187 0.1873
U 0.120 0.119 0.119 0.1193 3、结果计算：
将大牛血清和蛋白标准液的平均吸光度带入公式：血清总蛋白（g/L)=(Au/As)X蛋白质标准液浓度（g/L),得出结果：血清总蛋白=44.586g/L
（二）：结果讨论
查阅资料得知，大牛血清总蛋白含量一般为60-80g/L,可是，实验结果却是
44.586g/L,即使按照实验要求及步骤操作,结果还是出现了比较大的误差，实验结果经过讨论，分析如下：
1、成功的方面：
a.在本次试验出现了预期的结果：S和U试管溶液显淡紫色，B试管显淡蓝色。
S和U 试管显淡紫色是因为蛋白质发生了双缩脲反应，但是由于蛋白质的含量偏少显色较浅，B试管显浅蓝色的原因是B试管中没有发生任何反应，显双缩脲试剂的淡蓝色。
b.水浴，吸光度测试等环节都能够按照预定的步骤进行，操作比较严谨。
2、误差分析：
a.所测得的蛋白质含量偏低，可能是由于样品存储不当，造成待测的大牛蛋白水解，待测样品中的蛋白质总量本身就很低
b.待测的大牛蛋白溶液正常，但是，标准蛋白溶液的浓度比标示的高，造成测量结果偏低
c.操作过程有偏差，由于量取蛋白质溶液的量比较少，在每个加样步骤的少量偏差，都会造成结果误差较大
五：结论
样品的蛋白质含量偏低
复习思考题
1.什么叫双缩脲试剂？为什么要在双缩脲试剂中加入酒石酸钾钠和碘化钾？
双缩脲试剂
2.试剂配制过程中，为何NaOH要单独配制，最后加入？
3.简述血清总蛋白测定的临床意义。