第十六章 药物分析新技术PPT课件
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的毛细管柱上分离。
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3．毛细管柱的性能评价
评价指标：分离效率、表面惰性、热稳定性。 评价方法：在一定的色谱条件下，分离各种测试物质， 获得的特征性数据和峰对称性，以此来评价柱效和表 面活性。在测定了柱效和表面活性之后，用流失速率 试验来评价热稳定性。
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（二）进样方式 分流进样：使用方便，对分流比、进样温度 样品和载气的情况、进样体积和 浓度、进样重复性需要注意。 不适于痕量分析和宽沸程样。 适合大多数类型的样品，样品浓 浓高、各组分的浓度相近
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2.色谱条件：HP-5毛细管柱(30ｍ×0.32mm ,膜厚 0.1μ ｍ ) 。 氮 磷 检 测 器 , 不 分 流 进 样 ( 阀 关 闭 时 间 0.75min), 进 样 口 温 度 :280℃, 柱 温:200℃(1min)20℃/min280℃ (15min),载气为高 纯氮(2.2ｍml/min),尾吹气为高纯氮(10ml/min)。
第十六章 药品质量控制中的现 代分析方法与技术
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一、高分辨气相色谱法
毛细管气相色谱法使用的色谱柱是空心的 毛细管柱，叫开管柱：固定液涂渍或固定化在 柱管内壁上，而载气和其中的样品从中心的通 道上通过。柱材料主要是熔融石英（FSOT）。
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（一）色谱柱
1．毛细管柱的类型：
柱类型
柱内径
柱长
普通开管柱 0.2～0.53mm
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（3)萃取液的选择及萃取率:作者进行了多种溶剂萃取 LRZ的研究 ,由经萃取与未经萃取所得色谱峰面积 比计算LRZ的萃取率 ,得(mean±SD)为(83.4±3.1)%。
（4）检出限:以3倍信噪比计算检出限 ,得本法的检出 限为5μg/L。
（5)回收率:由工作曲线计算LRZ的质量浓度及其回收 率 ,得(mean±SD)为(103.3±5.1)%。
壁涂开管柱
多孔层开管柱
担体涂渍开管柱
微内径开管柱 ﹤100μm
大内径开管柱 0.32mm
液膜厚度 5～60m 0.1～1.0μm
1μm或5μm
3
2．毛细管柱的选择 常用的固定液有：SE-31、OV-1、SE-54、SE52、OV-1701、Carbowax 20M。 柱的选择：根据样品组分的沸点，一般地，相差 2℃或2℃以上的组分，采用非极性毛细管柱分离； 若沸点相差在2℃以内的组分，则需在极性较大
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（三）应用示例----人尿中劳拉西泮的检测
1.测定意义：劳拉西泮(简称LRZ)上用为催眠、镇静 和抗癫痫药物 ,常被犯罪分子作为麻醉药物用于麻醉 抢劫等麻醉后犯罪。为了确证这类案件的性质 ,经常 需要对受害人的血、尿等体液中麻醉药物或其代谢物 进行检测。人体摄入该药后其血液中药物浓度较低 , 且犯罪分子所用药量一般不使受害人死亡,而且此类 案件一般报案较迟，因此血中药物浓度较低 ,对其检 测较为困难。该药主要以葡萄糖醛酸苷的形式由尿液 排泄。
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2．手性流动相拆分法（手性洗脱法或手性流动相添 加剂法）：将手性试剂加入流动相中，手性添加剂与 样品形成手性络合物。 常用的手性添加剂：配基交换型手性添加剂、环糊精 类添加剂、手性离子对络合剂
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3．手性固定相拆分法：将手性选择器（如手性流动相 添加剂）固着于多种基质上而制成手性固定相。迄今 为止，尚没有一种通用型的手性柱，需要根据化合物 的分子结构来选择合适的手性柱。 常用的手性固定相：Pirkle型手性固定相、蛋白质类手 性固定相、环糊精类手性固定相。
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3.样品预处理----酶解及萃取 取检尿1ml,加10mg/L的羟乙基氟西泮(HEF)标准工
作液10μl,再加pH4.8的乙酸盐缓冲液 50μl及β-葡萄糖 醛酸苷酶溶液0.1μl,置于55℃水浴中水解4ｈ冷至室温 后加 pH10.8的碳酸盐缓冲液0.5ml及乙醚5ml,涡旋 2min,离心,分取上层有机相4ml置于经硅烷化处理的带 尾管的鸡心瓶中,加甲醇0.4ml,于40℃水浴中挥发至约 0.1ml,进样1μl进行GC分析
体，就要提供一种手性源，使待拆分的对映异构体（样 品）、手性作用物（如固定相）和手性源之间形成一个 非对映异构分子的络合物。在对映体拆分理论中颇为流 行的是“三点手性识别模式”。
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（二）手性HPLC拆分法的类型
直接法：柱前手性衍生化法 间接法：手性流动相拆分法、手性固定相拆分法 1．柱前手性衍生化法：对映体混合物以手性试剂作柱 前衍生化，形成非对映体，然后以常规（偶见手性）固 定相分离。 对手性衍生化试剂的要求：高光学纯度。 常用的手性衍生化试剂：羧酸衍生物类、胺类、异硫氰 酸酯类、异氰酸酯类、萘衍生物类、光学活性氨基酸类、 固相衍生化试剂。
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源自文库
4.方法学评价 （1)选择性: 空白尿1ml及空白尿1ml加LRZ和HEF 标准液,经酶解、萃取后进样分析所得色谱图表明 尿中杂质不干扰检测. （2)线性试验: 用空白尿配制不同浓度的LRZ标准 液进行酶解、萃取、进样分析,将LRZ与HEF色谱峰 面积的比值与LRZ在尿液中的质量浓度进行线性回 归,得到工作曲线方程 :Y=3.1×10-3X –3.0×10 -3 , ｒ =0.998。LRZ在尿中的浓度为50～500μg/L范 围内呈良好的线性.
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不分流进样：须利用溶剂效应或冷阱，操作较难 特别适用于痕量分析和宽沸程样品
柱头进样：必须使用外径为0. 17 ～ 0.23mm的 细针，柱内径必须大于0.32 mm , 不能通过隔垫进样，缓慢进样
对热不稳定、稀的和宽沸程样品较 理想；能给出定量结果
非挥发物在柱的中积累导致柱变性 和柱效损失
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直接进样：样品无须事先浓缩，进样器温度可较 低，载气消耗量小，分析所需样量小 适用于浓度范围要比不分流进样宽一个 数量级以上的样品，有利于对热不稳定 的样品；当样品中含有挥发性低的组分 时，难于定量分析
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5.尿液检测:志愿者口服LRZ 2ｍｇ后,于32小时
, 内收集其排泄的尿液进行检测 LRZ于9h达尿
中最高浓度为444μｇ/L,检测结果表明 ,本方法 适合于麻醉后犯罪案件中ＬＲＺ的检测要求。
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二、手性药物的高效液相色谱法
（一）手性药物拆分机理 为了使对映体转化为化学和物理性质不同的非对映
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3．毛细管柱的性能评价
评价指标：分离效率、表面惰性、热稳定性。 评价方法：在一定的色谱条件下，分离各种测试物质， 获得的特征性数据和峰对称性，以此来评价柱效和表 面活性。在测定了柱效和表面活性之后，用流失速率 试验来评价热稳定性。
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（二）进样方式 分流进样：使用方便，对分流比、进样温度 样品和载气的情况、进样体积和 浓度、进样重复性需要注意。 不适于痕量分析和宽沸程样。 适合大多数类型的样品，样品浓 浓高、各组分的浓度相近
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2.色谱条件：HP-5毛细管柱(30ｍ×0.32mm ,膜厚 0.1μ ｍ ) 。 氮 磷 检 测 器 , 不 分 流 进 样 ( 阀 关 闭 时 间 0.75min), 进 样 口 温 度 :280℃, 柱 温:200℃(1min)20℃/min280℃ (15min),载气为高 纯氮(2.2ｍml/min),尾吹气为高纯氮(10ml/min)。
第十六章 药品质量控制中的现 代分析方法与技术
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一、高分辨气相色谱法
毛细管气相色谱法使用的色谱柱是空心的 毛细管柱，叫开管柱：固定液涂渍或固定化在 柱管内壁上，而载气和其中的样品从中心的通 道上通过。柱材料主要是熔融石英（FSOT）。
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（一）色谱柱
1．毛细管柱的类型：
柱类型
柱内径
柱长
普通开管柱 0.2～0.53mm
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（3)萃取液的选择及萃取率:作者进行了多种溶剂萃取 LRZ的研究 ,由经萃取与未经萃取所得色谱峰面积 比计算LRZ的萃取率 ,得(mean±SD)为(83.4±3.1)%。
（4）检出限:以3倍信噪比计算检出限 ,得本法的检出 限为5μg/L。
（5)回收率:由工作曲线计算LRZ的质量浓度及其回收 率 ,得(mean±SD)为(103.3±5.1)%。
壁涂开管柱
多孔层开管柱
担体涂渍开管柱
微内径开管柱 ﹤100μm
大内径开管柱 0.32mm
液膜厚度 5～60m 0.1～1.0μm
1μm或5μm
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2．毛细管柱的选择 常用的固定液有：SE-31、OV-1、SE-54、SE52、OV-1701、Carbowax 20M。 柱的选择：根据样品组分的沸点，一般地，相差 2℃或2℃以上的组分，采用非极性毛细管柱分离； 若沸点相差在2℃以内的组分，则需在极性较大
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（三）应用示例----人尿中劳拉西泮的检测
1.测定意义：劳拉西泮(简称LRZ)上用为催眠、镇静 和抗癫痫药物 ,常被犯罪分子作为麻醉药物用于麻醉 抢劫等麻醉后犯罪。为了确证这类案件的性质 ,经常 需要对受害人的血、尿等体液中麻醉药物或其代谢物 进行检测。人体摄入该药后其血液中药物浓度较低 , 且犯罪分子所用药量一般不使受害人死亡,而且此类 案件一般报案较迟，因此血中药物浓度较低 ,对其检 测较为困难。该药主要以葡萄糖醛酸苷的形式由尿液 排泄。
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2．手性流动相拆分法（手性洗脱法或手性流动相添 加剂法）：将手性试剂加入流动相中，手性添加剂与 样品形成手性络合物。 常用的手性添加剂：配基交换型手性添加剂、环糊精 类添加剂、手性离子对络合剂
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3．手性固定相拆分法：将手性选择器（如手性流动相 添加剂）固着于多种基质上而制成手性固定相。迄今 为止，尚没有一种通用型的手性柱，需要根据化合物 的分子结构来选择合适的手性柱。 常用的手性固定相：Pirkle型手性固定相、蛋白质类手 性固定相、环糊精类手性固定相。
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3.样品预处理----酶解及萃取 取检尿1ml,加10mg/L的羟乙基氟西泮(HEF)标准工
作液10μl,再加pH4.8的乙酸盐缓冲液 50μl及β-葡萄糖 醛酸苷酶溶液0.1μl,置于55℃水浴中水解4ｈ冷至室温 后加 pH10.8的碳酸盐缓冲液0.5ml及乙醚5ml,涡旋 2min,离心,分取上层有机相4ml置于经硅烷化处理的带 尾管的鸡心瓶中,加甲醇0.4ml,于40℃水浴中挥发至约 0.1ml,进样1μl进行GC分析
体，就要提供一种手性源，使待拆分的对映异构体（样 品）、手性作用物（如固定相）和手性源之间形成一个 非对映异构分子的络合物。在对映体拆分理论中颇为流 行的是“三点手性识别模式”。
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（二）手性HPLC拆分法的类型
直接法：柱前手性衍生化法 间接法：手性流动相拆分法、手性固定相拆分法 1．柱前手性衍生化法：对映体混合物以手性试剂作柱 前衍生化，形成非对映体，然后以常规（偶见手性）固 定相分离。 对手性衍生化试剂的要求：高光学纯度。 常用的手性衍生化试剂：羧酸衍生物类、胺类、异硫氰 酸酯类、异氰酸酯类、萘衍生物类、光学活性氨基酸类、 固相衍生化试剂。
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源自文库
4.方法学评价 （1)选择性: 空白尿1ml及空白尿1ml加LRZ和HEF 标准液,经酶解、萃取后进样分析所得色谱图表明 尿中杂质不干扰检测. （2)线性试验: 用空白尿配制不同浓度的LRZ标准 液进行酶解、萃取、进样分析,将LRZ与HEF色谱峰 面积的比值与LRZ在尿液中的质量浓度进行线性回 归,得到工作曲线方程 :Y=3.1×10-3X –3.0×10 -3 , ｒ =0.998。LRZ在尿中的浓度为50～500μg/L范 围内呈良好的线性.
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不分流进样：须利用溶剂效应或冷阱，操作较难 特别适用于痕量分析和宽沸程样品
柱头进样：必须使用外径为0. 17 ～ 0.23mm的 细针，柱内径必须大于0.32 mm , 不能通过隔垫进样，缓慢进样
对热不稳定、稀的和宽沸程样品较 理想；能给出定量结果
非挥发物在柱的中积累导致柱变性 和柱效损失
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直接进样：样品无须事先浓缩，进样器温度可较 低，载气消耗量小，分析所需样量小 适用于浓度范围要比不分流进样宽一个 数量级以上的样品，有利于对热不稳定 的样品；当样品中含有挥发性低的组分 时，难于定量分析
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5.尿液检测:志愿者口服LRZ 2ｍｇ后,于32小时
, 内收集其排泄的尿液进行检测 LRZ于9h达尿
中最高浓度为444μｇ/L,检测结果表明 ,本方法 适合于麻醉后犯罪案件中ＬＲＺ的检测要求。
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二、手性药物的高效液相色谱法
（一）手性药物拆分机理 为了使对映体转化为化学和物理性质不同的非对映