生物化学实验教案(全)

生物化学实验―教案―

目录

实验一糖的颜色反应 (1)

实验二糖的还原作用 (3)

实验三多糖的实验 (4)

实验四糖的旋光性和变旋现象 (5)

实验五血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法） (7)

实验六人血清中总胆固醇的测定 (8)

实验七牛奶中粗脂肪含量的测定 (9)

实验八牛奶中酪蛋白的提取 (11)

实验九牛奶中酪蛋白含量的测定 (12)

实验十氨基酸的纸层析 (14)

实验十一醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质 (16)

实验十二蛋白质的颜色反应 (18)

实验十三蛋白质的沉淀反应 (20)

实验十四 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量 (22)

实验十五双缩脲法测定蛋白质浓度 (23)

实验十六考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度 (25)

实验十七紫外光吸收法测定蛋白质浓度 (26)

实验十八血清谷丙转氨酶的测定 (28)

实验十九过氧化物酶的作用 (29)

实验二十溶菌酶的提纯结晶 (30)

实验二十一酵母RNA的提取 (31)

实验二十二 RNA的定量测定（苔黑酚法） (32)

实验二十三 DNA的提取及含量测定 (33)

实验二十四荞麦中总黄酮的定性定量研究 (33)

实验一糖的颜色反应

[实验目的及要求]

1. 掌握莫式（Molisch）试验鉴定糖的原理和方法。

2. 掌握塞式（Seliwanoff）试验鉴定酮糖的原理和方法。

3. 掌握杜式(Tollen)试验鉴定酮糖的原理和方法。

[实验原理]

1．莫式试验：糖经无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与а-萘酚生成紫红色缩合物。

2．塞式试验：酮糖在浓酸的作用下，脱水生成5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应；有时亦同时产生棕红色沉淀，此沉淀溶于乙醇，成鲜红色溶液。

3．杜式试验：戊糖在浓酸溶液中脱水生成糠醛，后者与间苯三酚结合成樱桃红色物质。

[实验仪器及用品]

仪器：水浴锅。

器皿：吸管、试管。

实验药品：蔗糖、葡萄糖、淀粉、果糖、阿拉伯糖、半乳糖、а-萘酚、浓硫酸、95%乙醇、间苯二酚、盐酸、间苯三酚。

[实验试剂]

莫式试剂：а-萘酚5g,溶于95%乙醇并稀释至100ml。现用现配，并贮于棕色试剂瓶中。

塞式试剂：间苯二酚50mg，溶于100ml盐酸（V H2O：V HCl=2:1），现用现配。

杜式试剂：2%间苯三酚乙醇溶液（2g间苯三酚溶于100ml95%乙醇中）3ml,缓缓加入浓盐酸15ml 及蒸馏水9ml。临用时配制。

[实验内容及步骤]

一、莫式实验

于4支试管中，分别加入1 ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1 ml水中），然后各加莫式试剂2滴，摇匀，将试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5 ml （切勿振摇！），硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。

二、塞式试验

于4支试管中，分别加入0.5 ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%果糖溶液，然后各加塞式试剂

2.5ml，摇匀，同时置沸水浴内，比较各管颜色及红色出现的先后顺序。

三、杜式试验

于3支试管中加入杜式试剂1ml，再分别加入1滴1%葡萄糖溶液、1%半乳糖溶液和1%阿拉伯糖溶液，混匀。将试管同时放入沸水浴中，观察颜色的变化，并记录颜色变化的时间。

四、实验现象记录

仔细观察实验中的颜色变化，对于塞式试验和杜式试验还需记录下颜色变化的时间。

实验二糖的还原作用

[实验目的及要求]

掌握糖的还原反应来鉴定糖的原理和方法。

[实验原理]

费林(Fehling)试剂和本尼迪(Benedict)试剂均为含Cu2+的碱性溶液，能使具有自由醛基或酮基的糖氧化，其本身则被还原成红色或黄色的Cu2O，此法常用作还原糖的定性或定量测定。

[实验仪器及用品]

实验仪器：水浴锅

实验器皿：吸管、试管

实验试剂：硫酸酮、氢氧化钠、酒石酸钾钠、柠檬酸钠、无水碳酸钠、淀粉、蔗糖、葡萄糖。[实验试剂]

1. 费林试剂

试剂A：CuSO4·5H2O 34.5 g,溶于蒸馏水并稀释至500 ml。

试剂B：氢氧化钠125 g，酒石酸钾钠137 g，溶于蒸馏水并稀释至500 ml。

临用时将试剂A与试剂B等体积混合。

2. 本尼迪试剂：柠檬酸钠（Na3C6H3O7·11H2O）及50 g无水碳酸钠，溶于400 ml蒸馏水中。另溶解8.5 g硫酸铜于50 ml热水中。将硫酸铜溶液缓缓加入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如有沉淀可过滤。此混合液可长期使用。

[实验内容及步骤]

于3支试管中加入费林试剂A和B各1 ml，混匀，分别加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液和1%淀粉溶液1 ml，置沸水浴中加热数分钟，取出，冷却，观察各管的变化。

另取3支试管，分别加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液和1%淀粉溶液1 ml，然后每支试管加本尼迪试剂2 ml，置沸水浴中加热数分钟，取出，冷却，和上面结果比较。

实验三多糖的实验

[实验目的及要求]

1．熟悉淀粉多糖的碘试验反应原理和方法。

2．进一步了解淀粉的水解过程。

[实验原理]

淀粉广泛分布于植物界，谷、果实、种子、块茎中含量丰富，工业用的淀粉主要来源于玉米、山芋、马铃薯。本实验以马铃薯为原料，利用淀粉不溶或难溶于水的性质来制备淀粉。

淀粉遇碘呈蓝色，是由于碘被吸附在淀粉上，形成复合物，此复合物不稳定，极易被醇、氢氧化钠和加热等使颜色褪去，其他多糖与碘呈特异的颜色，此类呈色物质极不稳定。

淀粉在酸催化下加热，逐步水解成分子较小的糖，最后水解成葡萄糖。

[实验仪器及用品]

器材：研钵、布氏漏斗、抽滤瓶、表面皿、白瓷板、胶头滴管、电炉、石棉网、纱布、试管、烧杯、吸管、量筒、试管夹。

试剂：碘化钾、碘、淀粉、氢氧化钠、本尼迪试剂，浓硫酸、碳酸钠。

[实验内容及步骤]

一、马铃薯淀粉的制备

将马铃薯去皮，在研钵中充分研碎，加水混合，用纱布过滤，除去粗颗粒，滤液中的淀粉很快沉到底部，多次用水洗淀粉，抽滤，滤饼放在表面皿上，在空气干燥中即得。

二、淀粉与碘的反应

1．置少量自制淀粉于白瓷板上，加1-3滴稀碘液（配制2%碘化钾溶液，加入适量碘，使溶液呈淡黄棕色即可），观察颜色变化。

2．取试管1支，加0.1%淀粉5 ml，再加2滴稀碘液，摇匀后，观察其颜色变化。将管内液体分成3份，其中1份加热，观察颜色是否褪去。冷却后，颜色是否全部恢复。另2份加入乙醇或10%NaOH 溶液，观察颜色变化并解释之。

三、淀粉的水解反应