生物化学实验教案(全)

生物化学实验―教案―目录实验一糖的颜色反应 (1)实验二糖的还原作用 (3)实验三多糖的实验 (4)实验四糖的旋光性和变旋现象 (5)实验五血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法） (7)实验六人血清中总胆固醇的测定 (8)实验七牛奶中粗脂肪含量的测定 (9)实验八牛奶中酪蛋白的提取 (11)实验九牛奶中酪蛋白含量的测定 (12)实验十氨基酸的纸层析 (14)实验十一醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质 (16)实验十二蛋白质的颜色反应 (18)实验十三蛋白质的沉淀反应 (20)实验十四 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量 (22)实验十五双缩脲法测定蛋白质浓度 (23)实验十六考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度 (25)实验十七紫外光吸收法测定蛋白质浓度 (26)实验十八血清谷丙转氨酶的测定 (28)实验十九过氧化物酶的作用 (29)实验二十溶菌酶的提纯结晶 (30)实验二十一酵母RNA的提取 (31)实验二十二 RNA的定量测定（苔黑酚法） (32)实验二十三 DNA的提取及含量测定 (33)实验二十四荞麦中总黄酮的定性定量研究 (33)实验一糖的颜色反应[实验目的及要求]1. 掌握莫式（Molisch）试验鉴定糖的原理和方法。

2. 掌握塞式（Seliwanoff）试验鉴定酮糖的原理和方法。

3. 掌握杜式(Tollen)试验鉴定酮糖的原理和方法。

[实验原理]1．莫式试验：糖经无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与а-萘酚生成紫红色缩合物。

2．塞式试验：酮糖在浓酸的作用下，脱水生成5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应；有时亦同时产生棕红色沉淀，此沉淀溶于乙醇，成鲜红色溶液。

3．杜式试验：戊糖在浓酸溶液中脱水生成糠醛，后者与间苯三酚结合成樱桃红色物质。

[实验仪器及用品]仪器：水浴锅。

器皿：吸管、试管。

实验药品：蔗糖、葡萄糖、淀粉、果糖、阿拉伯糖、半乳糖、а-萘酚、浓硫酸、95%乙醇、间苯二酚、盐酸、间苯三酚。

[实验试剂]莫式试剂：а-萘酚5g,溶于95%乙醇并稀释至100ml。

现用现配，并贮于棕色试剂瓶中。

塞式试剂：间苯二酚50mg，溶于100ml盐酸（V H2O：V HCl=2:1），现用现配。

杜式试剂：2%间苯三酚乙醇溶液（2g间苯三酚溶于100ml95%乙醇中）3ml,缓缓加入浓盐酸15ml 及蒸馏水9ml。

临用时配制。

[实验内容及步骤]一、莫式实验于4支试管中，分别加入1 ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1 ml水中），然后各加莫式试剂2滴，摇匀，将试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5 ml （切勿振摇！），硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。

二、塞式试验于4支试管中，分别加入0.5 ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%果糖溶液，然后各加塞式试剂2.5ml，摇匀，同时置沸水浴内，比较各管颜色及红色出现的先后顺序。

三、杜式试验于3支试管中加入杜式试剂1ml，再分别加入1滴1%葡萄糖溶液、1%半乳糖溶液和1%阿拉伯糖溶液，混匀。

将试管同时放入沸水浴中，观察颜色的变化，并记录颜色变化的时间。

四、实验现象记录仔细观察实验中的颜色变化，对于塞式试验和杜式试验还需记录下颜色变化的时间。

实验二糖的还原作用[实验目的及要求]掌握糖的还原反应来鉴定糖的原理和方法。

[实验原理]费林(Fehling)试剂和本尼迪(Benedict)试剂均为含Cu2+的碱性溶液，能使具有自由醛基或酮基的糖氧化，其本身则被还原成红色或黄色的Cu2O，此法常用作还原糖的定性或定量测定。

[实验仪器及用品]实验仪器：水浴锅实验器皿：吸管、试管实验试剂：硫酸酮、氢氧化钠、酒石酸钾钠、柠檬酸钠、无水碳酸钠、淀粉、蔗糖、葡萄糖。

[实验试剂]1. 费林试剂试剂A：CuSO4·5H2O 34.5 g,溶于蒸馏水并稀释至500 ml。

试剂B：氢氧化钠125 g，酒石酸钾钠137 g，溶于蒸馏水并稀释至500 ml。

临用时将试剂A与试剂B等体积混合。

2. 本尼迪试剂：柠檬酸钠（Na3C6H3O7·11H2O）及50 g无水碳酸钠，溶于400 ml蒸馏水中。

另溶解8.5 g硫酸铜于50 ml热水中。

将硫酸铜溶液缓缓加入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如有沉淀可过滤。

此混合液可长期使用。

[实验内容及步骤]于3支试管中加入费林试剂A和B各1 ml，混匀，分别加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液和1%淀粉溶液1 ml，置沸水浴中加热数分钟，取出，冷却，观察各管的变化。

另取3支试管，分别加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液和1%淀粉溶液1 ml，然后每支试管加本尼迪试剂2 ml，置沸水浴中加热数分钟，取出，冷却，和上面结果比较。

实验三多糖的实验[实验目的及要求]1．熟悉淀粉多糖的碘试验反应原理和方法。

2．进一步了解淀粉的水解过程。

[实验原理]淀粉广泛分布于植物界，谷、果实、种子、块茎中含量丰富，工业用的淀粉主要来源于玉米、山芋、马铃薯。

本实验以马铃薯为原料，利用淀粉不溶或难溶于水的性质来制备淀粉。

淀粉遇碘呈蓝色，是由于碘被吸附在淀粉上，形成复合物，此复合物不稳定，极易被醇、氢氧化钠和加热等使颜色褪去，其他多糖与碘呈特异的颜色，此类呈色物质极不稳定。

淀粉在酸催化下加热，逐步水解成分子较小的糖，最后水解成葡萄糖。

[实验仪器及用品]器材：研钵、布氏漏斗、抽滤瓶、表面皿、白瓷板、胶头滴管、电炉、石棉网、纱布、试管、烧杯、吸管、量筒、试管夹。

试剂：碘化钾、碘、淀粉、氢氧化钠、本尼迪试剂，浓硫酸、碳酸钠。

[实验内容及步骤]一、马铃薯淀粉的制备将马铃薯去皮，在研钵中充分研碎，加水混合，用纱布过滤，除去粗颗粒，滤液中的淀粉很快沉到底部，多次用水洗淀粉，抽滤，滤饼放在表面皿上，在空气干燥中即得。

二、淀粉与碘的反应1．置少量自制淀粉于白瓷板上，加1-3滴稀碘液（配制2%碘化钾溶液，加入适量碘，使溶液呈淡黄棕色即可），观察颜色变化。

2．取试管1支，加0.1%淀粉5 ml，再加2滴稀碘液，摇匀后，观察其颜色变化。

将管内液体分成3份，其中1份加热，观察颜色是否褪去。

冷却后，颜色是否全部恢复。

另2份加入乙醇或10%NaOH 溶液，观察颜色变化并解释之。

三、淀粉的水解反应在一小烧杯中加入1%淀粉溶液25 ml及20%硫酸1 ml，放在石棉网上小火加热，微沸后每隔两分钟取出反应液2滴置于白瓷板上做碘试验。

与此同时另取反应液三滴，用10%碳酸钠中和后，做本尼迪试验，记录试验结果并解释之。

实验四糖的旋光性和变旋现象[实验目的及要求]1．了解糖的变旋现象，掌握用糖的旋光性测定糖浓度的方法。

2．学会使用旋光仪。

[实验原理]光是一种电磁波，光波振动的方向与光的前进方向垂直。

普通光的光波在各个不同的方向上振动。

但如果让它通过一个尼科尔(Nicol)棱镜（用冰洲石制成的棱镜），则透过棱镜的光就只在一个方向（偏振面）上振动，这种光就叫做平面偏振光。

偏振光能完全通过晶轴与其偏振面平行的尼科尔棱镜，而不能通过晶轴与其偏振面垂直的尼科尔棱镜。

当平面偏振光通过某种介质时，有的介质对偏振光没有作用，即透过介质的偏振光的偏振面保持不变。

而有的介质却能使偏振光的偏振面发生旋转。

这种能旋转偏振光的偏振面的性质叫做旋光性。

具有旋光性的物质叫做旋光性物质或光活性物质。

具有不对称结构的手性化合物都有旋光性。

能使偏振光的偏振面向右旋的物质，叫做右旋物质；反之，叫做左旋物质。

通常用"d"（拉丁文dextro的缩写，"右"的意思）或"+"表示右旋；用"l"（拉丁文laevo的缩写，"左"的意思）或"-"表示左旋。

偏振光的偏振面被旋光物质所旋转的角度，叫做旋光度，用"α"表示。

旋光度的大小不仅取决于物质的本性，还与溶液的浓度、液层的厚度、光的波长、测定温度以及溶剂的性质等等有关。

偏振光通过厚度为1dm，浓度含有1g/ml的待测物质的溶液所测得的旋光度称为比旋光度[α]，它是物质的一个特性常数，如下式所示：[α]λt=α/cl式中 t：测定时的温度；λ：测定时所用光源的波长；α：实测的旋光度；c：溶液的浓度（g/ml）；l：玻管的长度（dm）。

一个有旋光性的溶液放置后其比旋光度改变的现象称为变旋。

变旋的原因是糖从α-型变为β-型或由β-型变为α-型。

一切单糖都有变旋现象。

无α-，β-型的糖类即无变旋性。

[实验仪器及用品]仪器：旋光仪、电子天平。

器皿：容量瓶、烧杯、玻棒。

试剂：未知浓度的蔗糖溶液、10%葡萄糖溶液。

[实验内容及步骤]一、利用糖的旋光性测定糖的浓度1．转开样品管螺母，洗净玻管，然后向管中注满蒸馏水，盖上玻片，注意管中不能有气泡，玻片上的水渍必须擦干。

2．把样品放入旋光仪内，打开电源，待钠光源稳定1-2min 后，转动刻度盘，使目镜中两半圆的亮度相等，记下刻度盘的读书，以此为零点。

3．用蔗糖代替蒸馏水测其旋光度，并按公式计算出蔗糖的浓度。

二、糖的变旋现象用新配制的10%葡萄糖溶液按上法测其旋光度并计算比旋光度，以后每隔2h 测定其旋光度，计算比旋光度直至比旋光度不再改变，说明α-，β-型互变已达平衡。

实验五 血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法）[实验目的及要求]掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的原理和方法。

[实验原理]D-葡糖糖 D-葡萄糖酸+ H 2O 2[实验仪器及试剂]试管、移液管、UNICO-2000型分光光度计、恒温水浴锅。

酶试剂：葡萄糖氧化酶（GOD ）、过氧化物酶（POD ）、4-氨基安替吡啉（4-AAP ）。

酚试剂：苯酚。

标准葡萄糖溶液：100 mg/dL (5.55 mmol/L)。

[实验步骤]按下表加入各反应物：GODPOD H 2O 2+4-AAP+苯酚 红色醌化物+H 2O计算 血糖含量=A 样/A 标×标准溶液浓度 [实验注意事项]1. 分离血清要求使用未溶血样品，否则测定结果偏大。

2. 要求在30 min 内分离血清，糖酵解在全血中以7%/h 进行。

3. 样本在4℃-8℃可稳定24h,样本放置时间过长会使结果偏低。

实验六 人血清中总胆固醇的测定[实验目的及要求]学会利用氧化酶法测定血清中总胆固醇含量的原理和方法。

[实验原理]胆固醇脂+H 2O 胆固醇+游离脂肪酸胆固醇+O 2 ⊿4胆甾烯酮+H 2O 2 2H 2O 2+4-AA+4-氯仿醌亚胺（红色）+4H 2O CEH ：胆固醇脂酶 POD ：过氧化物酶 CHOD ：胆固醇氧化酶 4-AA ：4-氨基安替吡啉醌亚胺在500nm 有特征吸收，且生成量与样本中的胆固醇含量成正比，可通过测定标准品反应生成的醌亚胺的吸光度值，计算出样本中胆固醇的浓度。