食品微生物检验技能试题及答案

食品微生物检验技能试题一

一、有两管菌种，一管为金黄葡萄球菌，一管为大肠杆菌，但标签已脱落，请通过染色实验将其分开。（40分）

1、涂片、干燥、固定（10分）

2、染色（15分）

3、镜检（10分）

4、报告（5分）

二、酱油中细菌总数的测定（60分）

1、实验准备（20分）

2、样品稀释与培养（20分）

3、菌落计数方法（10分）

4、菌落计数的报告（10分

答案要点

一、菌种区分

1、涂片、干燥、固定

（1）取两块洁净载玻片，分别在载玻片中央滴一滴生理盐水，用无菌操作分别挑取菌种于载玻片的水滴中，调匀涂成薄膜，直径1.5cm左右。

（2）干燥室温干燥或用电吹风吹干。

（3）固定涂片面上，在酒精灯上过火三次，使细胞质凝固，以固定细菌的形态，并使其不易脱落。但不能在火焰上烤，否则，形态会破坏。

2、染色

（1）初染加草酸铵结晶紫染色液染色1分钟，用水冲洗。

（2）媒染滴加碘液冲去残水，并用碘液覆盖1分钟，水洗。

（3）脱色将载玻片上的水甩干净，在载玻片下衬以白色背景，滴加95%的酒精脱色，直洗至流出的酒精刚刚不出现紫色为止（0.5分钟），立即用水冲净酒精。

（4）复染用番红染液染1-2分钟，水洗。

3、镜检干燥后，置显微镜下观察。

4、报告球状、染成紫色者为金黄葡萄球菌，杆状、染成红色者为大肠杆菌。

二、酱油中细菌总数的测定

1、实验准备

（1）酱油

（2）1ml与10ml吸管将吸管洗净烘干，塞入少量脱脂棉，卷好防潮纸进行干热灭菌（160℃、2小时）或加压灭菌。（121℃、30分钟）

（3）平皿将平皿分为10个一卷，用防潮纸包好，同上述吸管一起进行灭菌。（4）备一瓶90ml和三管9ml的生理盐水，配以松紧适度的棉塞，用防潮纸将口部包好，同上述材料一起进行加压蒸汽灭菌，但需使灭菌后仍能保持原有毫升数（也可应用生理盐水灭菌后直接吸取的办法）。

（5）培养基蛋白胨牛肉膏氯化钠琼脂培养基。将培养基用碱液调至PH7.2-7.4,装入灭菌的试管中约15ml,进行加压灭菌后，保温45℃备用。

2、样品稀释与培养

（1）用10ml无菌吸管将酱油样品注入90ml无菌生理盐水内，充分摇匀，作成1：10的稀释液。应严格无菌操作。

（2）用1ml无菌吸管，吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml无菌生理盐水的试管内，振荡试管混合均匀，做成1：100的稀释液。

（3）另取1ml无菌吸管，按上项操作顺序做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，即换用一支灭菌吸管，配成1：1000和1：10000的稀释液。

（4）再取三支1ml无菌吸管（或使用该稀释度的吸管），分别吸取1：10、1：100和1：1000的稀释液各1ml于平皿内，每个稀释度做两个平皿。

（5）立即将15ml已冷却至45℃的培养基注入平皿内，并转动平皿，使其混合均匀。

（6）待琼脂凝固后，用纸包好，反转平皿，置于37℃恒温箱内培养24小时后取出，计算平皿内细菌菌落数目，成以稀释倍数，即得每毫升样品所含菌落总数。

4、菌落计数方法

（1）从温箱中取出平皿，用蜡笔将皿底分为若干等分区域（若菌落稀少，也可不分）

（2）以左手拇指、无名指、小指持握平皿，斜置自然光下，皿底以食指、中指衬托显出昏暗背景以利菌落观察，右手持蜡笔式钢笔计点菌落数，每数一区，于边上标记计数，再用放大镜检查，有无遗漏。合计各区菌落数即为一皿的菌落总

数。如平皿菌落很多不易读数时，亦可选择代表区读计菌落数，然后再求出全皿菌落数。

5、菌落计数的报告

（1）平皿菌落的选择选取菌落数在30-300之间的平皿作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平皿应采用两个平皿平均数，其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落分布很均匀，则可于计数半皿后乘以2代表全皿菌落数。

（2）稀释度的选择

①规定选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，以平皿菌落数乘以稀释倍数，所得菌落总数作为报告。

②若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30-300之间，则应视二者（高稀释度菌落数与低稀释度菌落数）之比大小来决定。若其比值小于2，应报告平均数；若大于2，则报告其中较小数字。

③若所有稀释度其平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数进行报告。

④若所有稀释度其平均菌落数均小于30，则应按稀释倍数最低的平均菌落数乘以稀释倍数进行报告。

⑤若所有稀释度其平均菌落数不在30-300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最小接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数进行报告。

（3）菌落数的报告菌落数在100以内时，按实有数报告；大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入法计算，为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示。

食品微生物检验技能试题二

一、肉膏蛋白胨培养基的配制（60分）

1、称量、加热溶解（20分）

2、调值（10分）

3、过滤（10分）

4、分装（10分）

5、加棉塞（10分）

二、培养基的灭菌（40分）

1、包扎（10分）

2、灭菌（10分）

3、摆斜面（10分）

4、无菌检查（10分）

答案要点

一、配制

1、称量加热溶解：按配方准确称取牛肉膏2.5克，蛋白胨5克，NaCl2.5克于的大烧杯中，取450ml水于800ml烧杯中加入，搅匀，加热溶解，待溶液沸腾后，加入琼脂，继续加热使琼脂完全溶化，并不断搅拌，以免糊底烧焦。最后待冷却后补足水至500ml。

2、调PH值在未调PH前，先用精密试纸测定培养基的原始PH值，然后滴加1molNaOH或1molHCL调节，直至7.0-7.2

3、过滤趁热用四层纱布过滤。一般无特除要求，可省略。

4、分装将制好的培养基分装入试管或三角瓶内。注意不要使培养基沾粘管口或瓶口，以免浸湿棉塞而引起污染。分装的培养基，不超过试管长度的五分之一，不超过三角瓶容积的一半。

5、加棉塞瓶（管）口塞上用非脱脂棉制作的棉塞，棉塞形状、大小、松紧度与试管口完全适合。加塞时三分之一在管外，三分之二在管内。

二、培养基的灭菌