植物组培培养基及其配制
植物组织培养实验报告
院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师）年级13级学号17130208 组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期2016.3-6指导老师实验名称植物组织培养综合实验一、实验目的1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法；3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法；4.了解组织培养的基本程序；5.掌握接种的方法和材料的培养过程；6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术；7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体；8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别二、实验原理1.植物细胞的全能性一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。
植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。
2.植物细胞表现出全能性的条件1.离体状态；2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）；3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型3.无菌条件把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。
用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。
在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。
组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。
4.脱分化与愈伤组织已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。
脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。
所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。
5.培养基植物组织培养常用的培养基为MS培养基。
常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。
植物组织培养实验所需材料
植物组织培养实验所需材料实验所需药品：50%酒精、95%酒精、HCl盐酸、 NaOH苛性钠、 PH试纸、蔗糖、琼脂（只有一小罐可能不够）、0.2%升汞、甲醛、高锰酸钾、过氧化氢、84消毒液、脱脂棉、称量纸、标签纸、组培专用封口膜（直径14cm+配线绳）、啪啦膜、活性炭、吐温80仪器设备磁拌电热炉、电磁炉配锅（3l-10l）、温湿光记录仪、器材：果酱组培瓶240ml+密封盖X30培养瓶：大小在250-500ml间的玻璃锥形瓶X50试剂瓶：茶色玻璃 1000ml X2烧杯：1000 ml 、500 ml 、250 ml、100 ml 、50 ml（各X5）移液管：1 ml、2 ml、 5 ml （各X3）数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺（各X3）解剖刀（4号刀柄+22号刀片、7号刀柄+11号刀片），枪镊26cm、解剖针、接种切盘（不锈钢+直径16cm）镊子，酒精喷雾器、周转框、等工具（各X5）吸管若干、瓶刷、记号笔、三角瓶或试管、试管架、滴瓶、锡铂纸、酒精灯（250ml）纱布、棉塞、牛皮纸、才培纯、不锈钢小推车、镊子垫架、实验服、酒精喷壶等若干。
培养基制备药品：大量元素类：(NH4)2SO4/ KNO3 /CaCl2·2H2O/ MgSO4·7H2O/ KH2PO4铁盐:Na2- EDTA/ FeSO4·7H2O微量元素类:MnSO4·4H2O/ ZnSO4·7H2O/ H3BO3/ KI有机物质:盐酸硫胺素(VB1)/ 烟酸/盐酸吡哆醇(VB6)/ 甘氨酸生长调节物质：生长素类：吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。
分裂素：玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)、激动素(Kt)。
赤霉素：赤霉酸(GA3)维生素类：盐酸吡哆醇（维生素B6）、盐酸硫胺素（维生素B1）泛酸钙、肌醇。
植物组培培养基配方
植物组培培养基配方嘿，咱来聊聊植物组培培养基的配方。
这植物组培培养基啊，就像是植物宝宝的专属营养餐，配方可重要啦。
最基本的呢，要有大量元素。
这就像我们吃饭得有主食一样。
大量元素主要是氮、磷、钾这些。
氮就像是植物的活力小能手，能让植物的枝叶长得郁郁葱葱的。
磷呢，是植物的能量小卫士，对植物的开花结果有很大的帮助。
钾就像是植物的健康保镖，让植物的身体棒棒的，能抵抗各种小毛病。
比如说，在培养一些花卉的时候，足够的氮能让花朵的叶子又绿又大，漂亮极了。
除了大量元素，微量元素也不能少。
这就像是给植物加餐的小零食。
像铁、锰、锌这些微量元素，虽然植物需要的量不多，但是少了它们可不行。
铁就像是植物的化妆师，要是缺铁，植物可能就会脸色发黄，也就是叶片失绿。
锰呢，就像是植物的小教练，能让植物的光合作用这个运动项目进行得更顺利。
锌就像是植物的小管家，对植物体内的各种小活动进行调节。
我记得有一次在培养一种小绿植的时候，因为没有注意添加足够的锌，那植物长得就有点歪歪扭扭的，后来补上了锌，就慢慢变好了。
还有植物激素，这可是培养基里的魔法小精灵。
像生长素和细胞分裂素，它们能决定植物是先长根还是先发芽，或者是让植物的细胞快快分裂，长得壮壮的。
生长素就像是植物的生长小指挥，它会告诉植物的细胞，“嘿，你们往这边长，快长根！”细胞分裂素就像是植物的细胞小闹钟，“叮铃铃，细胞们，该分裂啦，快长大！”在培养一些珍稀植物的时候，合理使用植物激素，就能让植物更快地繁殖。
另外，碳水化合物也是重要的成分。
这就像是植物的能量饮料。
蔗糖是比较常用的碳水化合物，它能为植物提供能量，让植物在培养基里也能活力满满。
就像我们跑步的时候需要能量胶一样，植物在组培的时候也需要蔗糖来加油。
我给你举个例子哈。
我有个朋友在实验室里做兰花的组培。
他的培养基配方里，有合适的大量元素，让兰花的叶子长得很好；微量元素也加得很精准，没有出现叶片发黄之类的问题；植物激素用得恰到好处，兰花很快就生根发芽了；还有足够的蔗糖，让兰花在培养基里茁壮成长。
植物组织培养步骤
植物组织培养概念（广义）又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
植物组织培养概念（狭义）指用植物各部分组织，如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
组织培养的步骤一、培养基配制配制培养基有两种方法可以选择，一是购买培养基中所有化学药品，按照需要自己配制；二是购买商品的混合好的培养基基本成分粉剂，如MS、B5等。
自己配制可以节约费用，但浪费时间、人力、且有时由于药品的质量问题，给实验带来麻烦。
就目前国内的情况看，大部分还是自己配制。
为了方便起见，现以MS培养基为例介绍配置培养基的主要过程。
1、配制几种母液（1）配制MS大量元素母液一般将大量元素分别配制成100倍的母液，使用时再分别稀释100倍。
分别称取NH4NO3 165g KH2PO4 17gKNO3 190g CaCl2·2H2O 44gMgSO4·7H2O 37g各自配成1L的母液。
倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
（2）配制MS微量元素母液一般将微量元素配制成100倍母液。
依次称取KI 0.083g Na2MoO4·2H2O 0.025gH3BO3 0.62g CuSO4·5H2O 0.0025gMnSO4·H2O 1.69g CoCl2·6H2O 0.0025gZnSO4·7H2O 0.86g配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O 由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调整液。
分别称取CuSO4·5H2O 0.05g CoCl2·6H2O 0.05g各自配成100ml的调整液，然后取5ml就还有0.0025g的量。
组培实验一 培养基的配制与灭菌
实验一培养基的配制与灭菌一、目的掌握培养基母液的配制方法；培养基的配制和灭菌技术；不同质地实验用品的灭菌方法。
二、方法步骤1.玻璃器皿清洗2.母液配制一般大量元素、微量元素和其它成分分别配制成100－200倍母液, 使用时按比例稀释即可。
配好的母液需贮存于2～4℃的冰箱中, 定期检查有无沉淀和微生物污染, 如果出现沉淀或微生物污染, 则不能使用。
同学们只要配大量元素母液, 按教科书P32页上进行, 但不是20倍, 配10倍即可。
其他母液老师已经配制好, 请注意试剂瓶上的浓度, 即浓缩的倍数。
3.植物激素母液配制植物激素一般配制成浓度为0.1—1.0mg/ml的溶液, 贮存在2～4℃下备用。
由于多数激素难溶于水, 所以配制时应按下面步骤进行:IAA: 先用少量95%乙醇使之充分溶解, 再加蒸馏水定容至需要浓度的体积。
NAA: 可溶于热水中, 也可采用与IAA同样的方法配制。
2,4-D: 先用少量1mol/L的NaOH溶液充分溶解, 然后缓慢加入蒸馏水定容至需要浓度体积。
细胞分裂素类: KT和BA等细胞分裂素类物质均溶于稀盐酸, 应先用少量1mol/L的HCl溶解后再稀释至需要浓度。
赤霉素: 赤霉素的水溶液稳定性较差, 一般用95%的乙醇配制成5～10mg/ml的母液低温保存, 使用时再稀释。
4.培养基配制按实际配制培养基体积, 取各母液的需要量加入一适当体积的烧杯或其它配制培养基的容器中, 再加入实际配制培养基体积约2/3—3/4的蒸馏水, 然后以每升所用蔗糖的量称取放入培养基并使其溶化: 30g, 以0.6%—0.8%的比例加入琼脂: 9g。
搅拌加热使琼脂完全溶化, 用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调整pH至5.6—5.8, 并用蒸馏水定容至终体积: 1L。
5.各激素培养基和灭菌（1）对照组: 纯MS培养基: 250 ml, 分装10瓶。
不加激素, 分别接种烟草子叶、胡萝卜块根和菊花花瓣各接3-4瓶, 每瓶4-5块组织。
植物组培1-培养基配制
植物组织培养-培养基配制一 、【实验目的】1、掌握培养基的配制，灭菌等基本实验操作技术二 、【实验原理】植物组织培养是将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。
而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。
植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。
三、【实验仪器和试剂】仪器：培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL ），烧杯，量筒，培养皿，棉线，接种箱或超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮纸试剂：乙醇、2 ，4 – D （生长素类似物）、次氯酸钠、6- 苄基氨基腺嘌呤（ 6-BA ）、MS 培养基、0.1 mol/L NaOH与 0.1 mol/L HCl 四、【实验步骤及内容】培养基的配制用于配制培养基的水最好是三蒸水。
所用的各种化学药品：分析纯级别的试剂，避免药品的交叉污染和混杂。
配制培养基最方便的方法是预先配制好不同组分的培养基母液，存放在2～4℃冰箱内，使用时按比例稀释配用即可。
1、 MS培养基的配制1）按照配方配制培养基时,先将储存母液按顺序摆放好，根据欲配制的总体积，量取各种不同体积的母液，加入2，4-D(2mg/L)，先加三蒸水至大约400ml2）称取加入蔗糖(浓度3%)，调节pH至5.7-5.83）加入琼脂（8-9g/L）加热搅拌溶解，沸腾后立即端离火源（第一个大气泡从缸底上升顶破泡沫层），分装在100ml的三角培养瓶中（一般以容器的1/3～1/4体积为宜），拧紧瓶盖。
4）培养基的pH值直接影响培养物对离子的吸收，过酸或过碱不仅影响到培养材料的生长，而且还影响到琼脂的凝固。
植物组培培养基及其配制
植物组培培养基及其配制培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。
因此，在组织培养基的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。
一、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。
磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。
钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。
而钙、钠、镁的需要则较少。
培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。
微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。
培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。
2.碳源培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。
因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。
培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。
蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。
3.维生素在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。
培养基中的维生素属于B族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。
4.有机附加物包括人工合成或天然的有机附加物。
最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。
另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。
5.生长调节物质常用的生长调节物质大致包括以下三类：(1)植物生长素类。
如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。
(2)细胞分裂素。
如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。
(3)赤霉素。
组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸(GA3)。
二、常用培养基配方及其特点1.常用培养基配方组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。
植物组培 实验二
植物组培实验报告实验二、培养基的配制及灭菌一、实验目的1、熟悉植物组织培养的一般工作流程。
2、了解培养基的成分、类型及特点。
3、能正确进行培养基的配制及灭菌操作。
二、实验原理植物组织培养是一项技术性强、无菌条件要求高的工作，对场地有一定的要求，需配备必要的仪器设备和器皿、器械，还必须熟练掌握每个环节的操作技术。
植物组织培养的一般程序包括拟定培养方案、初代培养、继代扩繁、生根壮苗培养及驯化移栽，其基本操作技术包括培养基的配制及灭菌、外植体的选择与消毒、无菌接种与培养、试管苗生根与驯化移栽等。
三、实验内容1、培养基的成分以MS培养为例，其成分可以分为水、无机盐、有机物、天然复合物、培养体的支持材料等五大类。
１．水作用：原生质体的组成成分，代谢过程的介质和溶媒。
它是生命活动过程中。
配制：培养基母液时要用蒸馏水：配培养基时可用自来水。
但在少量研究上尽量用蒸馏水。
２．无机元素大量元素，指浓度大于0.5mmol/l的元素，有Ｎ、Ｐ、Ｋ、Ｃa、Ｍg、Ｓ等。
其作用是：(1)N功能：是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，是生命结构和功能物质不可缺少的。
供应形式：含有ＮＯ3－N又含ＮＨ4－N。
ＮＨ4－N对植物生长较为有利。
在制备培养基时以这两种形式供应。
供应的物质有ＫＮＯ3、、ＮＨ4ＮＯ3等。
有时，也添加氨基酸。
(2)P功能：是磷脂的主要成分，而磷脂又是细胞膜、细胞核的重要组成部分。
磷也是核酸、ＡＴＰ、辅酶等的组成成分。
组织培养中，磷不仅增加养分、提供能量，而且也促进对Ｎ的吸收，增加蛋白质在植物体中的积累。
供应形式：常用的物质有ＫＨ2ＰＯ4或ＮaＨ2ＰＯ4等。
(3)K功能：Ｋ对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切关系，它具有活化酶的作用。
Ｋ增加时，蛋白质合成增加，维管束、纤维组织发达，对胚的分化有促进作用。
但浓度不易过大，一般为１～３mg/l 为好。
供应形式：制备培养基时，常以ＫＣl、ＫＮＯ3 等盐类提供。
LS植物组织培养基配制使用方法
LS培养基植物组培在植物组培中，LS培养基是Linsmaier & Skoog植物组织培养基的简称，作为特别适合于包括烟草在内的草本植物的组织培养基，LS培养基由包括8种微量元素和5种大量元素在内的总共13种无机盐组分，还有2种维生素构成，其特点是成分相对比较简单。
与MS培养基基本成分相比，LS培养基去掉了甘氨酸、盐酸吡哆醇和烟酸，比较适合烟草等植物的组织培养。
Linsmaier与Skoog通过了解烟草组织在MS培养基中对金属离子的需求，系统的研究了烟草组织培养过程中养料需要。
实验结果发现，MS培养基中的众多维生素中，只有维生素B1（Thiamine）、肌醇（Inositol）是烟草组培所必需的。
并且维生素B1盐酸盐的最佳浓度为0.4 mg/l （而MS培养基中为0.1 mg/l），其浓度越低则生长越慢，并且在4周后组织细胞会出现坏死症状。
肌醇也有类似的刺激效应，只是不像维生素B1那样必要。
所有其他的Murashige & Skoog培养基中的维生素对于细胞生长并不是必需的，并且在不添加的情况下也不影响植物的生长。
叶酸（Folic acid）、p-氨基苯酸（p-Aminobenzoic acid）、L-谷氨基酸（l-Glutamic acid）和维生素C（Ascorbic acid）对烟草的生长有促进作用，但是不如维生素B1、肌醇的促进效应。
对于LS植物组织培养基的配制，由于LS培养基含有10多种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。
这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成混合培养液，再加入到煮沸的琼脂中，最后使用蒸馏水定容后搅拌均匀。
我们也推荐您直接购买美国植物培养专家Caisson的LS植物组织培养基粉末，这是因为商业化的培养基产品能确保批次的一致性，以及各组分的有效性。
药用植物组培快繁培养基及配制技术
培养基的配制步骤
▪ 4.按顺序用量筒或 移液管按照计算结 果吸取各种营养成 分的母液放在干净 的烧杯中混合。
培养基的配制步骤
▪ 5.把所取的各种 营养成分的混合 母液倒入煮好溶 化的琼脂液中， 再加水至需配制 培养基的最终容 积。
培养基的配制步骤
▪ 6.调整培养基的pH 值为6.0。
▪ ※ 培养基高温灭 菌后pH会下降0.2个 单位，因此在调整 培养基的pH时适当 提高0.2个单位。
成分名称 药品 名称
原配方量 (mg)/ L
MS
NH4NO3
1650
KNO3
1900
大量元素 CaCl2·2H2O
440
MgSO4 ·7H2O
370
（
KH2PO4
170
二
MnSO4·H2O
22.3
）
ZnSO4·7H2O
8.6
CoCl2·6H2O
0.025
培 养 基
微量元素
CuSO4·5H2O H3BO3 Na2MoO4·2H2O KI
培养基的配制步骤
▪ 7.把培养基分装到 所选用的培养容器 中并盖好盖子。
▪ 8.灭菌。
▪ ⑵生长调节剂母液吸取量计算
▪ 吸取量=配方浓度×培养基配制数/母液浓度
▪ ⑶琼脂和糖称取量的计算
▪ 称取量=配方浓度 ×培养基配制数
根据下面培养基配制单进行计算并写出培养基配制步骤
配方 MS+6-BA2.0mg/L+ NAA0.1mg/L+糖3%+ 琼脂0.4%，
母液
倍数 （浓度）
大量元素 20
微量元素 1000
有机物 50
铁盐
100
植物组培培养基及其配制
植物组培培养基及其配制培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。
因此，在组织培养基的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。
一、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。
磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。
钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。
而钙、钠、镁的需要则较少。
培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。
微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。
培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。
2.碳源培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。
因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。
培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。
蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。
3.维生素在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。
培养基中的维生素属于B 族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。
4.有机附加物包括人工合成或天然的有机附加物。
最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。
另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。
5.生长调节物质常用的生长调节物质大致包括以下三类：(1)植物生长素类。
如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。
(2)细胞分裂素。
如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。
(3)赤霉素。
组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸(GA3)。
二、常用培养基配方及其特点1.常用培养基配方组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。
植物组织培养的培养基
★植物组织培养培养基的主要成分1.无机营养物：无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。
磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。
钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。
而钙、钠、镁的需要则较少。
培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。
微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁,这些元素有的对生命活动的某个过程十分有用，有的对蛋白质或酶的生物活性十分重要，有的是参与某些生物过程的调节。
培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA（螯合剂）的混合。
2.碳源：培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。
因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。
培养基中的碳水化合物通常是蔗糖或D-葡萄糖，用量通常为2%-4%，高者可达5%，亦可用市售的白糖所代替，但一般应增加用量，而且最好用比较固定的厂家生产的产品，以保证实验的稳定性。
3.有机营养成分：包括人工合成或天然的有机附加物（包括维生素，氨基酸及其它有机物质等）。
最常用的有酪朊水解物(水解乳蛋白、水解酪蛋白CH)、酵母提取物、玉米胚乳、麦芽浸出物、西红柿汁、椰子汁(CM)及各种氨基酸如甘氨酸（氨基乙酸）等。
维生素：在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。
培养基中的维生素属于B族维生素，其中效果最佳的有硫氨素（维生素B1）、盐酸吡哆醇（维生素B6）和维生素H（生物素）、泛酸钙等、肌醇（环己六醇）、烟酸。
在部分培养基中还添加维生素BX（氨酰苯甲酸）、维生素C（抗坏血酸）、维生素E（生育酚）、、维生素B12（氰钴胺酸）、维生素BC（叶酸）、维生素B2（核黄素）和氯化胆碱等维生素。
这些可能对某些植物或植物的某些代谢过程有重要作用，如肌醇主要以磷酸肌醇和磷脂酰肌醇的形式参与由Ca介导的信号转导。
月季植物组培方案
月季植物组培方案月季是一种常见的观赏花卉，其花朵色彩丰富，花期长，是花坛、花境、花笼和花圃中常见的植物。
然而，传统的繁育方法存在效率低下、时间长、容易受到病害感染等问题。
因此，利用组织培养技术进行月季植物的繁育具有十分重要的意义。
一、材料准备1.可供选择的月季植株，选择健康无病害的茎干作为外植体。
2.组培基质：可以选择MS培养基，配制麦芽糖浓度为30g/L，琼脂浓度为7g/L。
3.消毒液：例如75%酒精、10%双氧水、0.1%漂白粉。
4.无菌器皿：例如培养瓶、试管、平皿等。
5.显微镜及显微镜片：用于观察、检验组培过程中的细胞分裂情况。
6.整枝针和剪刀：用于取样。
二、外植体消毒处理1.将外植体的茎干从月季植株上剪下。
2.将茎干进行无菌处理，先用70%酒精擦拭，再浸泡于10%双氧水中10-15分钟，最后用无菌水洗净。
3. 将处理后的茎干切成0.5-1.0cm长的段，并观察切割的部位是否出现霉变，如有则再次进行消毒处理。
三、组培基质配制1.取适量MS培养基粉末，按照说明书配制，加入适量麦芽糖并充分溶解。
2.将溶解的培养基过滤灭菌，滤液加热至煮沸并充分搅拌，再加入适量琼脂并搅拌均匀。
3.将配制好的培养基灌装到无菌器皿中，如培养瓶、试管或平皿。
四、组培过程1.将处理好的茎段放置于准备好的无菌器皿中，使其埋入培养基中。
2.将无菌器皿密封，并放入无菌环境，通常应保持在25-28℃、光周期为16/8小时（光照/黑暗）的条件下，以促进茎段的快速生长。
3.在培养过程中，应定期观察外植体的生长情况，如出现异常或病害感染，应及时更换培养基或采取其他措施进行处理。
4.经过3-4周后，可观察到茎段的侧芽开始发生增殖，此时外植体可进行移植。
五、移植1.在移植之前，应先准备好新的无菌器皿和培养基。
2.将茎段取出，用消毒液进行消毒处理，然后将其移植到新的培养基中。
3.将培养皿重新密封，并放回无菌环境中继续培养。
4.经过数周后，可将外植体移植到普通培养基中，进行生根和生长。
植物组织培养基配制
培养基的配制植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。
MS培养基的配制包括以下步骤。
培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。
这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。
现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。
大量元素(母液Ⅰ) mg／LNH4NO333 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇20 000ⅣB烟酸100盐酸吡哆醇(维生素B6)100盐酸硫胺素(维生素B1)100甘氨酸400以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。
其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。
母液Ⅲ的配制方法是：将称好的Fe SO4·7H2O和N a2-EDTA·2H2O 分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。
组培MS培养基配制
植物组织试剂及MS培养基配制
一、试验设备及试剂
一．主要设备：
1、高压灭菌锅、超净工作台
2、接种工具：包括镊子、剪刀、解剖刀、酒精灯或接种灭菌器等。
3、培养设备：包括空调机、培养架、摇床、恒温培养箱、人工培养箱等。
4、化学实验及分析设备：包括分析天平、普通天平、酸度计、蒸馏水器、烘箱或玻璃仪器烘干器、磁力搅
拌器、电炉、药品柜、冰箱、晾干架等。
5、其他耗材：封口膜，培养瓶，试管，培养皿，专用记号笔，托盘，三角烧瓶，烧杯，量筒，试管架，试管刷，容量瓶，刻度吸管．
二．组织培养试剂：
1.生长调节剂类：①细胞分裂素：6-苄氨基嘌呤（6-BA）、6-糠氨基嘌呤（KT、激动素）、②生长素：α-萘乙酸（NAA）、3-吲哚乙酸（IAA）、3-吲哚丁酸（IBA）、2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）。
2.有机物类：烟酸、肌醇、盐酸硫胺（VB1）、盐酸吡哆辛（VB6）、甘氨酸、叶酸、核黄素（VB2）、抗坏血酸（VC）、精氨酸、腺嘌呤硫酸盐、蔗糖、葡萄糖。
3.无机物类：硫酸铁、乙二胺四乙酸二钠盐、乙二胺四乙酸铁钠盐、硼酸、氯化钴、碘化钾、钼酸钠、无水氯化钙、二水氯化钙、干燥氯化钙、硝酸钙、泛酸钙、磷酸三钙、硫酸铜、硝酸胺、硝酸钾、结晶硫酸镁、硫酸亚铁、磷酸二氢钾、硫酸锰、硫酸锌、磷酸二氢钠、三氧化钼、氯化钾、氢氧化钾、硫酸铵
4.日用耗材：琼脂粉、活性炭粉。
5.消毒试剂类：酒精、高锰酸钾、次氯酸钠、升汞
二、培养基配制程序
三、试验试剂及MS培养基配制
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植物组培培养基及其配制培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。
因此，在组织培养基的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。
一、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。
磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。
钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。
而钙、钠、镁的需要则较少。
培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。
微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。
培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。
2.碳源培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。
因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。
培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。
蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。
3.维生素在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。
培养基中的维生素属于B族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。
4.有机附加物包括人工合成或天然的有机附加物。
最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。
另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。
5.生长调节物质常用的生长调节物质大致包括以下三类：(1)植物生长素类。
如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。
(2)细胞分裂素。
如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。
(3)赤霉素。
组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸(GA3)。
二、常用培养基配方及其特点1.常用培养基配方组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。
不同培养基有不同特点，适合于不同的植物种类和接种材料。
开展组织培养活动时，应对各种培养基进行了解和分析，以便能从中选择使用。
下面介绍组织培养几种常用培养基的配方见表9－1。
培养基中的激素种类和数量，随着不同培养阶段和不同材料而有变化，因此各配方中均不列入。
2.几种常用培养基的特点(1) MS培养基。
MS培养基是目前普遍使用的培养基。
它有较高的无机盐浓度，对保证组织生长所需的矿质营养和加速愈伤组织的生长十分有利。
由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存、消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不致影响离子间的平衡。
MS固体培养基可用来诱导愈伤组织，或用于胚、茎段、茎尖及花药培养，它的液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显成功。
这种培养基中的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。
因此，一般情况下，无须再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。
与其它培养基的基本成分相比，MS 培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的明显特点。
(2)B5培养基。
B5培养基的主要特点是含有较低的铵，这是因为铵可能对不少培养物的生长有抑制作用。
经过试验发现，有些植物的愈伤组织和悬浮培养物在MS培养基上生长得比B5培养基上要好，而另一些植物，在B5培养基上更适宜。
(3)N6培养基。
N6培养基特别适合于禾谷类植物的花药和花粉培养，在国内外得到广泛应用。
在组织培养中，经常采用的还有怀特(While，1963)培养基、尼许(Nitsch，1951)培养基等。
它们在基本成分上大同小异。
怀特培养基由于无机盐的数量比较低，更适合木本植物的组织培养。
三、培养液的配制1.制备母液为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。
这样，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。
现将培养液中各类物质制备母液的方法说明如下。
(1)大量元素。
大量元素包括硝酸铵等用量较大的几种化合物。
制备时，按表中排列的顺序，以其10倍的用量，分别称出并进行溶解，以后按顺序混在一起，最后加蒸馏水，使其总量达到1升，此即大量元素母液。
(2)微量元素。
因用量少，为称量方便和精确起见，应配成100倍或1000倍的母液。
配制时，每种化合物的量加大100倍或1000倍，逐次溶解并混在一起，制成微量元素母液。
(3)铁盐。
铁盐要单独配制。
由硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)5.57克和乙二胺四乙酸二钠(Na—EDTA)7.45克溶于1升水中配成。
每配1升培养基，加铁盐5毫升。
(4)有机物质。
主要指氨基酸和维生素类物质。
它们都是分别称量，分别配成所需的浓度(0.1～1.0毫克/毫升)，用时按培养基配方中要求的量分别加入。
(5)植物激素。
最常用的有生长素和细胞分裂素。
这类物质使用浓度很低，一般为0.01～10毫克/升。
可按用量的100倍或1000倍配制母液，配制时要单个称量，分别贮藏。
配制植物生长素时，应先按要求浓度称好药品，置于小烧杯或容量瓶中，用1～2毫升0.1N(克当量浓度)氢氧化钠溶解，再加蒸馏水稀释至所需浓度。
配制细胞分裂素时，应先用少量0.5或1N的盐酸溶解，然后加蒸馏水至所需量。
以上各种混合液(母液)或单独配制药品，均应放入冰箱中保存，以免变质、长霉。
至于蔗糖、琼脂等，可按配方中要求，随称随用。
2.配制培养基的具体操作①根据配方要求，用量筒或移液管从每种母液中分别取出所需的用量，放入同一烧杯中，并用粗天平称取蔗糖、琼脂放在一边备用。
②将①中称好的琼脂加蒸馏水300～400毫升，加热并不断搅拌，直至煮沸溶解呈透明状，再停止加热。
③将①中所取的各种物质(包括蔗糖)，加入煮好的琼脂中，再加水至1000毫升，搅拌均匀，配成培养基。
④用1N的氢氧化钠或盐酸，滴入③中的培养基里，每次只滴几滴，滴后搅拌均匀，并用pH试纸测其pH值，直到将培养基的pH 值调到5.8。
⑤将配好的培养基，用漏斗分装到三角瓶(或试管)中，并用棉塞塞紧瓶口，瓶壁写上号码。
瓶中培养基的量约为容量的1/4或1/5。
培养基的成分比较复杂，为避免配制时忙乱而将一些成分漏掉，可以准备一份配制培养基的成分单，将培养基的全部成分和用量填写清楚。
配制时，按表列内容顺序，按项按量称取，就不会出现差错。
成分单的格式与内容见表9－2。
3.培养基的灭菌与保存培养基配制完毕后，应立即灭菌。
培养基通常应在高压蒸汽灭菌锅内，在汽相120℃条件下，灭菌20分钟。
如果没有高压蒸汽灭菌锅，也可采用间歇灭菌法进行灭菌，即将培养基煮沸10分钟，24小时后再煮沸20分钟，如此连续灭菌三次，即可达到完全灭菌的目的。
经过灭菌的培养基应置于10℃下保存，特别是含有生长调节物质的培养基，在4～5℃低温下保存要更好些。
含吲哚乙酸或赤霉素的培养基，要在配制后的一周内使用完，其它培养基最多也不应超过一个月。
在多数情况下，应在消毒后两周内用完。
组培室设计规划之仪器设备配置篇在植物组织培养过程中，根据所培养的植物种类、生产规模，选择合适的器材、设施是十分必要的，只有这样才能确保整个操作过程的顺利进行。
在器材、设施的选择上，不要贪大求洋，应该在其是否实用上多下功夫。
在研究型的组织培养操作中，往往对器材、设施的要求较高；而在生产型的组织培养中，则对器材、设施的要求却较为粗放，因此管理者必须根据实际情况来进行培养器材、设施的遴选。
在植物组织培养的过程中，从外植体的采收到试管苗的定植都必须要在特定的环境中进行，例如，培养基的配制要在专用的器材、设施中进行；外植体的接种要在专用的器材、设施中进行。
应该根据植物组织培养不同阶段的需要，选择不同的器材、设施。
只有从降低投入、提高工效、节约劳力等诸方面加以考虑，才能降低培养成本、提高培养效率。
在植物组织培养过程中，所使用的器材种类较多，但它们通常可以分为通用器具、盛具、计量器械、灭菌器械、接种器械、培养器械等几种类型。
在使用这些容器、设备时，必须要了解它们的基本用途，并学会它们的基本用法。
例如，不能给容量瓶加热；必须用磨砂玻璃灯罩来熄灭正在燃烧的酒精灯；应该定期更换超净工作如的无菌滤膜等等。
详细操作可参考具体设备、容器的使用说明。
（1）通用器械①烧杯：用来盛放、溶解化学药剂等。
常用的规格有50ml、100ml、250ml、500ml、1000ml。
②烘箱：用来烘干器械。
③恒温水浴：用来溶解琼脂等物质。
④玻璃搅拌棒：用来配制培养基。
⑤洗耳球：用来辅助吸取、转移少量液体。
⑥冰箱：用来贮存化学药剂、植物材料等。
⑦牛角勺：用来转移化学药剂。
⑧玻璃漏斗：用来过滤溶液。
⑨剪刀：用来修剪外植体或剪切嫩茎。
⑩器械架：在无菌操作期间用来放置灭菌的器械。
（2）各种盛具①搪瓷浅盘：用来承载各种器械容器。
②塑料盆：用于清洗培养容器。
③铁丝筐：用来盛放灭菌容器等物品。
④纯水水桶：用来存放去离子水或蒸馏水。
常用的规格有10L、20L。
⑤塑料桶：用来存放洗涤溶液、废弃溶液。
⑥各种规格的磨砂玻璃瓶：用来盛放培养母液，以及各种植物生长物质。
（3）计量器械①量筒：用来量取一定体积的液体。
常用的规格有25ml、50ml、100ml、500ml、1000ml。
②容量瓶：用来配制标准溶液。
常用的规格有50ml、100ml、500ml、1000ml。
③大肚移液管：用来吸取定量溶液。
常用的规格有1ml、5ml、10ml。
④刻度移液管：用来吸取定量植物生长物质溶液。
常用的规格有1ml、5ml、10ml。
⑤移液管架：用来放置、固定移液管。
⑥酸度计：用来检测培养基的pH。
⑦药物天平：用来称取配制培养基的药品。
⑧分析天平：用来称取少量有化学试剂，进行化学分析。
（4）灭菌器械①磨砂口玻璃瓶：用来对植物材料进行表面灭菌。
②酒精灯：用来进行接种器材的表面灭菌。
③细菌过滤器：用来过滤不能进行高温灭菌的试剂溶液。
④无菌滤纸：用来汲取器材、植物材料表面的水分。
⑤无菌脱脂棉：用来进行器械、植物材料表面的灭菌处理。
⑥真空泵：用来吸滤灭菌。
⑦高压灭菌锅：对培养基、接种器材进行灭菌处理。
⑧可调试电炉：用来加热高压灭菌锅。
⑨皮下注射器：用来对溶液进行过滤、除菌。
⑩紫外线灭菌灯：用来对接种室、培养室、操作室等工作环境进行灭菌处理。
（5）接种器械①超净工作台：用来过滤通过接种工作台面的空气，以便进行无菌操作。
②小型喷雾器：装载灭菌药液，来给超净工作台等处喷雾灭菌。
③钝头镊子：在接种操作、继代培养时移取植物材料。
④尖头镊子：用来分离植物材料。
⑤解剖刀：用来切割植物材料。
⑥打孔器：用来切取大小一致的圆柱形植物材料。