获取靶基因的方法
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你所感兴趣和想研究的基因，称为目的基因。
第四章 靶基因的获得
直接分离DNA 基因组文库或cDNA文库筛选
人工合成较短的DNA片段
PCR或RT-PCR扩增目的基因
直接分离DNA
适用于简单的原核生物的基因的获取
需要克隆的DNA片段
构建基因文库筛选目的基因
DNA文库
基因文库
cDNA文库
mRNA
反转录酶
应用PCR获取目的基因
例:ADAM10
Thp1细胞 mRNA
MMLV反转录酶
cDNA
TaqDNA聚合酶
PCR
HindIII
gccAAGCTTcagcggaaga tggtgttgct
ttaCTCGAGcggcgtctcatgtgtcccatttg
源自文库XhoI
HindIII和XhoI双酶切消化
PCR产物
cDNA集合 基因重组
克隆集合
化学合成法合成基因
适用条件： 分子量较小的目的基因； 采用传统钓取法较困难的基因（如丰 度较低的基因）； 自然界不存在的基因； 密码子需优化的基因等……
补充一些常识：
合成方向：3’ 5’ 合成效率：97-98%/步 引物纯化：PAGE 全基因合成：合成，退火，连接
教学要求
•掌握：如何用PCR法获取目的基因 •熟悉：人工合成DNA片段方法 •了解：直接分离DNA和基因组文库或cDNA文 库筛选获取靶基因方法
载体
索要靶基因
Dear Dr. Kreutz, I am studying the mechanism of soluble MHC class I release mediated by the metalloproteinase pathway in Dr.Yuri Bushkin's lab. ADAM19 is one of our candidate metalloproteinases. From your paper, I noticed that you have human ADAM19 cDNA cloned into pcDNA 3.1/V5 vector. So, would it be possible to obtain from you this plasmid? Thank you very much. Yours sincerely, Dr.Jinrong Zhao Room W350T.1 UMDNJ-PHRI 225 WarrenStreet Newark，NJ 07103 USA
第四章 靶基因的获得
直接分离DNA 基因组文库或cDNA文库筛选
人工合成较短的DNA片段
PCR或RT-PCR扩增目的基因
直接分离DNA
适用于简单的原核生物的基因的获取
需要克隆的DNA片段
构建基因文库筛选目的基因
DNA文库
基因文库
cDNA文库
mRNA
反转录酶
应用PCR获取目的基因
例:ADAM10
Thp1细胞 mRNA
MMLV反转录酶
cDNA
TaqDNA聚合酶
PCR
HindIII
gccAAGCTTcagcggaaga tggtgttgct
ttaCTCGAGcggcgtctcatgtgtcccatttg
源自文库XhoI
HindIII和XhoI双酶切消化
PCR产物
cDNA集合 基因重组
克隆集合
化学合成法合成基因
适用条件： 分子量较小的目的基因； 采用传统钓取法较困难的基因（如丰 度较低的基因）； 自然界不存在的基因； 密码子需优化的基因等……
补充一些常识：
合成方向：3’ 5’ 合成效率：97-98%/步 引物纯化：PAGE 全基因合成：合成，退火，连接
教学要求
•掌握：如何用PCR法获取目的基因 •熟悉：人工合成DNA片段方法 •了解：直接分离DNA和基因组文库或cDNA文 库筛选获取靶基因方法
载体
索要靶基因
Dear Dr. Kreutz, I am studying the mechanism of soluble MHC class I release mediated by the metalloproteinase pathway in Dr.Yuri Bushkin's lab. ADAM19 is one of our candidate metalloproteinases. From your paper, I noticed that you have human ADAM19 cDNA cloned into pcDNA 3.1/V5 vector. So, would it be possible to obtain from you this plasmid? Thank you very much. Yours sincerely, Dr.Jinrong Zhao Room W350T.1 UMDNJ-PHRI 225 WarrenStreet Newark，NJ 07103 USA