沙门氏菌国标检测方法
GB 4789.4-2010食品微生物学检验 沙门氏菌检验
食品微生物学检验 沙门氏菌检验GB GB 4789.44789.44789.4-20-20-201010北京陆桥技术有限责任北京陆桥技术有限责任公司公司技术服务电话：010-******** 销售服务电话：010-********技术部邮箱：luqiaotech@www. beijinglandbridge .com北京陆桥技术有限责任公司目 录�沙门氏菌简介�2010版国标主要修订内容�沙门氏菌的检验步骤及注意事项�沙门氏菌检验过程中的常见问题www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司沙门氏菌简介�沙门氏菌属沙门氏菌属：肠杆菌科：肠杆菌科�沙门氏菌能引起胃肠炎、伤寒、败血症等人类疾病，严重时能导致死亡。
�种类繁多，抗原结构复杂，种类繁多，抗原结构复杂，在在《ANTIGENIC FORMULAE OF THE SALMONELLA SEROVARS FORMULAE OF THE SALMONELLA SEROVARS》》(2007 9th edition)(2007 9th edition)中已公布了中已公布了2579个血清型个血清型。
�食物是人类感染沙门氏菌的主要途径。
www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司�形态特征：形态特征：革兰氏阴性革兰氏阴性革兰氏阴性、、两端钝圆短杆菌两端钝圆短杆菌，，无芽孢无芽孢，，一般无荚膜，除鸡沙门氏菌一般无荚膜，除鸡沙门氏菌和和雏沙门氏菌外，都有周身鞭毛，运动力强�培养特性：需氧或兼性厌氧，10℃~42℃都可生长，最适生长温度为37℃，最适pH 为6.8~7.8�革兰氏阴性、需氧或兼性厌氧无芽孢杆菌沙门氏菌简介：生物学特征www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司�修改了标准的中英文名称�修改了标准的范围�修改了培养基和试剂；�修改了设备和材料；�修改了附录修改了附录A A （规范性附录）培养基和试剂2010版国标主要修订内容www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司——关于培养基和试剂的修订说明�修改了修改了HE HE HE琼脂和三糖铁琼脂的配方。
沙门氏菌检验
沙门氏菌检验程序
36 ℃±1 ℃，18 h～24 h XLD（或HE、科玛嘉显色培养基） 36 ℃±1 ℃，18 h～24 h
挑取可疑菌落
TSI，赖氨酸，NA， 靛基质， 尿素 (pH 7.2)， KCN H2S+靛基质- 尿素KCN- 赖氨酸+ H2S+ 靛基质 + 尿 素- KCN-赖氨酸+ H2S-靛基质-尿素 -KCN- 赖氨酸+/-
食品卫生微生物学检验（GB/T4789.4）
吉林省疾病预防控制中心
刘桂华
1 前增菌； 2选择性增菌；
3 分离；
4 生化鉴定；
5. 血清学鉴定；
6.报告。
1 2 3 4 5
前增菌 选择性增菌 分离 鉴定 报告
检样 25g（mL）样品+225 mLBPW 36 ℃±1 ℃，8 h～18h 1 mL+TTB 10 mL 42 ℃±1 ℃，18 h～24 h BS 36 ℃±1 ℃，40 h～48 h 1 mL+SC10 mL
河生肠杆菌20E鉴定结果
应用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片进行测试，卡片含 有干燥的抗菌药物和生化基质。先制备一定浓度的欲鉴定菌
株的菌悬液，然后将菌悬液接种到各种细菌的小卡上，将其
放入具有读数功能的孵箱内，每隔一定时间，仪器会自动检 测培养基的发酵情况，并换算成能被计算机所接受的生物编
码。最后由计算机判定，打印出鉴定结果。
I-BS
C-HE
I-HE
I-XLD
C-XLD（变形菌落-错误）
样品+BPW+SC+BS
I-BS
C-BS
C-BS
I-BS
I-BS
C-BS
食品沙门氏菌检测
食品沙门氏菌检测沙门氏菌为肠道细菌科，即引发食物中毒细菌。
根据既有研究结果表明，因沙门氏菌导致的食物中毒病例占比较高，所以对食品中沙门氏菌检测的重要性逐渐突显出来，并且备受关注。
而对食品沙门氏菌的检测需从多个角度展开分析，以解决食品安全问题。
1 沙门氏菌有哪些生物学特性？沙门氏菌会对人和动物的健康带来严重危害，是十分常见的致病菌。
此病菌的型别诸多且抗原复杂，其对于外界环境的抵抗性较为明显，而且能够在食品中存活较长时间，在粪便内的存活时间达到1-10个月之久。
沙门氏菌的传播路径一般包括肉产品、禽和蛋等，在身体状况的基础上，还和菌株血清型存在一定关联，会严重危害老人与孩童，或者是免疫有缺陷的人。
所以说，有必要对容易被污染的食品进行分类型地管理，以免沙门氏菌对我们的身体健康造成负面影响。
2 检测沙门氏菌的国标方法如何？现阶段，根据国家规定对沙门氏菌进行检测的方法被称作是国标方法。
而这种检测方法的步骤较为繁杂，需经过增菌→增菌→分离→生化试验→血清学检定等多个环节完成。
正是因为国标检测沙门氏菌的程序复杂，所以需要耗费较多的时间与精力，一般在4-7天之间才能够获得所要的检测结果。
3 采用分子生物学方法检测沙门氏菌第一种，扩增片段长度多态性技术的应用。
这种对沙门氏菌进行检测的技术相对便利且快速，可以获得稳定且可靠性较高的结果，因而在检测微生物方面的应用较为常见。
在众多研究中，针对沙门氏菌株展开了扩增片段长度多态性指纹分析，并了解到血清型的差异所获得的扩增片段长度多态性指纹图也有所差异，具有较高的分辨率，进而对不同的菌株进行有效地区分。
第二种，聚合酶连反应技术的应用。
聚合酶连反应技术本身敏感性与特异性较为突出，且应用十分便捷，同样被使用在检测微生物方面。
大部分研究者通过对聚合酶连反应技术的合理运用，开展了沙门氏菌的检测工作。
在对聚合酶连反应技术进行应用的过程中，对食品中的沙门氏菌进行检测，在和增强化学发光反应相互结合的基础上，即可实现交杂扩增产物的目的，最终实现了检测方法的成功研发。
食品沙门氏菌测试方法标准
食品沙门氏菌测试方法标准
食品沙门氏菌测试方法标准主要包括以下步骤：
1.样品采集：从待检测的食品中采集适量样品，确保样品的代表性。
2.样品处理：将采集的样品进行适当处理，如破碎、研磨等，以便后续的
检测操作。
3.增菌培养：将处理后的样品接种到选择性培养基中，进行增菌培养。
选
择性培养基可以抑制其他微生物的生长，促进沙门氏菌的增殖。
4.分离培养：将增菌培养后的样品划线接种到鉴别培养基上，进行分离培
养。
鉴别培养基可以进一步筛选出沙门氏菌，并对其进行鉴别。
5.生化鉴定：对分离培养得到的沙门氏菌进行生化鉴定，以确定其是否为
沙门氏菌。
常用的生化鉴定方法包括API 20E、三糖铁试验等。
6.血清学鉴定：对生化鉴定为沙门氏菌的菌株进行血清学鉴定，以确定其
具体血清型。
常用的血清学鉴定方法包括玻片凝集试验、试管凝集试验等。
7.药敏试验：对分离得到的沙门氏菌进行药敏试验，以确定其对不同药物
的敏感性，为临床治疗提供参考。
需要注意的是，食品沙门氏菌测试方法标准可能因不同国家和地区而有所差异。
因此，在实际操作中，应根据当地的标准和法规进行相应的调整和操作。
食品卫生微生物学检验 沙门氏菌检验
沙门氏菌检验程序
1 取消样品分类，前增菌液统一为“缓冲蛋白胨 水” 原国标：BPW FDA、AOAC：多种前增菌液 ISO：BPW
2 对所有样品均进行8-18h前增菌 原国标只对冻肉、乳品、蛋品等加工食品进 行前增菌，FDA、AOAC、ISO、Canada MFHPB、CCFRA等组织或国家对所有样品都 进行前增菌。
65.3 81.0 52.0 83.2 80.0 83.0 86.2 106.6 77.7 68.4 98.4 71.6 100.0
I： 进口 C：国产
SS琼脂 上面的志 贺氏菌和 沙门氏菌
C-BS
I-BS
C-HE
I-HE
I-XLD
C-XLD（变形菌落-错误）
I-XLD
样品+BPW+SC+BS
DUPONT Qualicon BAX System 应用DNA分子核酸探针或基因探针技 术制造的全自动PCR分析仪。将已知核 苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法 标记，加入已变性的被检DNA样品中， 在一定条件下即可与该样品中有同源序 列的DNA区段形成杂交双链，从而达到 鉴定样品中DNA的目的。
AOAC 967.25－967.28
处理样品 35℃ 1mL+10mLSC 35℃ 24±2h XLD & HE & BS 35℃ TSI 35℃ 纯培养物 尿素酶＋ 非沙门菌 尿素酶－ 24±2h（BS 24h&48h） & LIA 24±2h 不纯培养物 MAC or XLD or HE 纯培养物 非 沙 门 菌 非 沙 门 菌 24±2h 1mL+10mLTT
35± 1℃ 18~24h & 48h TSI & LIA 血清学试验
沙门氏菌检测的三种方法比对的结果与讨论
沙门氏菌检测的三种方法比对的结果与讨论
梁先龙 代真真 白莉敏 戚修欢(安徽中青检验检测有次能力验证再次确认实验室检测能力；探 求快速、灵敏、可靠的食品中沙门氏菌的检测方法。方法：采用 沙门氏菌的国标方法、PetrifilmTM 测试纸片法和 VIDAS 免疫法 的定性研究。结果：编号为 CODE 2 和 CODE4 的样品为阳性 结果，其余四个样品均未检出。结论：3 种方法检测沙门氏菌均 取得满意结果；进一步确认了本实验室对本实验的能力；Petri⁃ filmTM 测试纸片法，简单，方便准确率高，在食品检测中应用中 值得推广。
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2018 年 09 月
质量与检测
1.5.3.3 接种与判读:使用无菌接种环(直径 3mm 左右)蘸取每
份样品，打开测试片并快速移动到凝胶上，进行一步划线。将
上层薄膜放下遮住测试片。然后去气泡。在 41.5 C 的田建霞培
养 24h. 将测试片的有色面朝上，最多可叠加 20 个测试片。取出
测试片进行判读，测试片上带黄色圈或有气泡或以上两者都有
ClassⅡBSC 生物安全柜 (中国海尔)、高压灭菌锅(上海博 讯)、生 化 培 养 箱 ( 上 海 博 讯)、、生 物 显 微 镜 、移 液 器（Eppen⁃ dorf）。 1.5 方法
三 种 方 法 ：国 标 方 法 、PetrifilmTM 测 试 纸 片 法 和 酶 标 免 疫法
样品前处理根据 GB4789.4-2016《食品微生物学检验 沙门
氏菌检验》和安徽省食品安全检验机构提供的作业指导书进行 检测。
1.5.1 国标方法 1.5.1.1 前增菌 吸取 5ml 灭菌 BPW 稀释样品作为原液，吸取 4ml 原液至 36ml 缓冲蛋白胨溶液中,为预防及保证样品的准确性，同时在食 药局发的无菌离心管中加入 9ml 缓冲蛋白胨水，漩涡振荡均 匀, 放入生化培养箱中 36℃培养 18 h。取标准菌株肠炎沙门氏 菌 CICC21482 和伤寒沙门氏菌 ATCC14028 一环接种于 10m L 灭菌的 BPW 增菌液同步培养，作为阳性对照。 1.5.1.2 选择性增菌 前增菌样液用移液枪轻吹打均匀，取其增菌液 1 m L 于 10 m L SC 增菌液中,36℃培养 24 h, 同时另取 1 m L 于 10 m L TTB 增菌液中,42℃培养 24 h。 1.5.1.3 选择性分离 取增菌液 1 环, 用接种环分别划线于沙门氏菌属显色平板、 XLD 平板和 BS 平板。XLD 琼脂平板和沙门显色培养基平板 36℃培养 24 h，而 BS 琼脂平板于 36℃培养 48 h, 培养至上述时 间后观察各平板上是否有可疑沙门氏菌属菌落。 1.5.1.4 生化鉴定实验 挑取上述选择性分离中的平板的可疑菌落 2 个或以上, 纯 化至 NA 平板上 36℃培养 18h,而后接种于沙门氏菌干制生化鉴 定盒中进行生化实验。 1.5.1.5 血清学鉴定 将生化实验符合沙门氏菌的菌株做血清凝集实验。采用 玻片凝集法, 在洁净玻片上滴加 1 滴 A-F 群多价 O 抗血清, 用 接种针挑取菌落与血清混合, 并轻碾均匀, 将玻片倾斜摇动混 合 1 min, 观察有无凝集现象, 同时生理盐水作为对照。A-F 群多价 O 抗血清凝集的菌落按 GB 4789.4-2010[2]标准中血清 分型进行 O 抗原的鉴定。将菌落点种于 Swarm 琼脂平板过夜 培养, 取远端菌进行 H 抗原的鉴定。 1.5.2 酶标抗体（ELISA）法
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式沙门氏菌是一种常见的细菌引起的食源性疾病，可能会导致严重的胃肠道感染。
为了保障食品安全，确保公众的健康，我们需要进行沙门氏菌的国标检验。
下面是一份生动、全面且有指导意义的文章，详细介绍了沙门氏菌检验的国标检验步骤和接种方式。
第一步：样品准备在进行沙门氏菌检验之前，我们首先需要准备样品。
常见的样品包括食品、水、动物排泄物等，可能携带沙门氏菌。
样品应该收集自具有代表性的地点，并采取无菌采样容器进行收集。
收集样品时要注意避免污染，并确保样品的数量足够进行检验。
第二步：样品处理样品处理的目的是将潜在的沙门氏菌分离出来，并进行后续的检测。
可以采用不同的方法进行样品处理，常见的方法包括富集培养和选择性培养。
富集培养是将样品放入富集培养基中，利用培养基中的营养物质以及特定条件促使沙门氏菌生长。
选择性培养则是利用培养基中的特殊抑制剂抑制其他细菌的生长，从而使沙门氏菌生长出来。
第三步：菌落鉴定在样品处理后，我们需要对培养基上的菌落进行鉴定，确认是否为沙门氏菌。
常见的鉴定方法包括形态学鉴定、生理生化鉴定和分子生物学鉴定。
形态学鉴定主要通过观察菌落的形状、颜色和大小等特征来判断细菌的种类。
生理生化鉴定则是通过检测菌落对特定物质的代谢情况来确定细菌的种类。
分子生物学鉴定是利用特定的DNA序列来识别沙门氏菌的基因，通常使用PCR技术进行检测。
第四步：抗菌药敏试验沙门氏菌的抗菌药敏性检测是为了确定对何种抗生素具有敏感性。
通过抗菌药敏试验，我们可以选择合适的药物来治疗感染。
可以使用各种常见的抗生素盘进行试验，然后观察沙门氏菌对不同抗生素的反应。
根据抗生素的抑菌效果，可确定沙门氏菌的耐药性情况。
第五步：结果分析与报告最后一步是对检验结果进行分析，并撰写检验报告。
检验结果要结合国家标准进行评估，确定样品是否合格。
如果样品中检测到沙门氏菌，还需要评估其数量以及对公众健康可能造成的风险。
在撰写报告时，需要详细记录样品的来源、处理方法、检验步骤和结果，以及相应的建议和措施。
沙门氏菌鉴定流程
沙门氏菌的检测方式主要包括血常规检查、便常规检查、ELISA法检查等，能够判断疾病的严重程度。
1、血常规检查：感染沙门氏菌时，多数患者的白细胞、中性粒细胞以及嗜酸性粒细胞计数出现偏低的情况，大儿童的白细胞计数通常出现升高的现象，该项结果可以辅助诊断沙门菌病。
2、便常规检查：感染沙门氏菌以后，部分患者可能会出现黏液样变或血便的情况，通过明确患者急性胃肠炎的症状来辅助诊断沙门菌病。
3、ELISA法检查：检测患者血清中沙门菌抗原、抗体是否出现异常的情况，有助于沙门菌感染的诊断。
除此之外，沙门氏菌的检测方式还包括B超检查、肥达试验等，如果自身的病情比较严重，建议应及时到正规医院的感染病科进行检查并治疗，以免延误病情。
沙门氏菌的检验国标
沙门氏菌的检验国标沙门氏菌是一类常见的致病菌，引起人和动物的沙门氏菌感染，是一种重要的公共卫生问题。
为了保障食品安全和人民的健康，各国都制定了相应的沙门氏菌检验国标，以确保食品和水源的安全。
沙门氏菌的检验国标是根据沙门氏菌的特性和致病机制制定的，旨在检测食品和水源中是否存在沙门氏菌。
根据国际标准化组织（ISO）和国家标准化组织（CNS）的规定，沙门氏菌的检验国标主要包括以下几个方面。
首先是样品的采集和处理。
在进行沙门氏菌检验之前，需要采集样品并进行处理。
样品的采集应该规范，避免交叉污染。
在样品处理过程中，要注意避免沙门氏菌的繁殖和生长，以防止结果的误判。
其次是培养基的准备和使用。
沙门氏菌的培养需要适当的培养基，以提供菌种生长所需的营养物质。
培养基的制备要符合国家标准，以确保培养过程的准确性和可重复性。
此外，在培养过程中要注意温度、pH值和氧气含量等因素的控制，以保证沙门氏菌能够正常生长。
第三是沙门氏菌的检测方法。
常用的沙门氏菌检测方法包括传统的培养方法和分子生物学方法。
传统的培养方法主要是通过培养基的选择和培养条件的控制，将沙门氏菌培养出来并进行鉴定。
分子生物学方法则是通过检测沙门氏菌的DNA序列来确定是否存在沙门氏菌。
这些方法各有优缺点，可以根据实际情况选择合适的方法进行检测。
最后是结果的解读和报告。
沙门氏菌的检验结果应该进行准确的解读，并进行相应的报告。
根据国家标准，沙门氏菌的检测结果可以分为阴性和阳性。
阴性表示样品中未检测到沙门氏菌，阳性表示样品中存在沙门氏菌。
在报告中，应该详细说明检测的方法、结果和结论，以便相关部门和人员能够及时采取相应的措施。
沙门氏菌的检验国标是保障食品安全和人民健康的重要举措。
通过采集样品、准备培养基、选择合适的检测方法和解读结果，可以有效地检测和防控沙门氏菌感染的风险。
各国应该根据实际情况和国家标准，制定和执行相应的沙门氏菌检验国标，以确保食品和水源的安全，保障人民的健康。
食品微生物检验技术W4304沙门氏菌检验-检验操作程序及要点-传统鉴定-4-微教材
《农产品/食品微生物检验》课程-微教材知识讲解沙门氏菌操作程序及要点——传统鉴定沙门氏菌操作程序及要点分为检验程序和操作步骤一、检验程序根据国标，沙门氏菌的检验程序为: 检样经无菌处理后，称取25 g(mL)样品加入到225 mL BPW中36±1℃培养8~18h；取培养物1mL 接种到10mL的TTB中同时取1mL 接种到10mL 的SC中，分别于42±1℃和36±1℃培养18~24h；取培养后的增菌液分别划线接种于BS琼脂平板和XLD琼脂平板（或HE琼脂平板、显色培养基平板）中，于36±1℃培养18~24h，BS 需延长至40~48h；培养后挑取可疑菌落做生化试验。
挑取2 个以上典型或可疑菌落——接种三糖铁琼脂，赖氨酸脱羧酶试验管和对照管、供做靛基质试验的色氨酸肉汤、尿素（pH7.2)，KCN试验管和对照管，同时划线营养琼脂平板——如5项生化都符合——则直接判定为沙门氏菌——如五项中靛基质阳性——则补做甘露醇和山梨醇试验，如果两项均为阳性——为可疑沙门氏菌，但需结合血清学鉴定结果进行判定——如五项中H2S阴性——则需补做ONPG试验，ONPG阴性，同时赖氨酸脱羧酶阳性——为沙门氏菌——也可在三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验初步判断结果后，使用商品化的生化鉴定系统进行生化鉴定——判定是否为沙门氏菌——如果5项反应中有2项以上不符合——则沙门氏菌阴性——最后报告结果二、操作步骤主要分为：1、样品处理与前增菌；2、增菌；3、分离；4、传统生化鉴定试验；5、系统生化鉴定试验；6、血清学鉴定。
其中传统生化鉴定试验又分为三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验，靛基质、尿素和氰化钾试验、甘露醇、山梨醇以及ONPG试验三个部分。
本片以鸡肉为样品，演示沙门氏菌检验的样品处理和前增菌的操作过程。
1、前增菌：在无菌室内，以75%酒精擦拭样品外包装，尤其是包装的开口处，用无菌剪刀在样品封口处剪开包装袋，换用一个无菌剪刀将鸡肉样品剪碎至无菌罐内，用无菌镊子称取25 g样品至盛有225 mL BPW的样品瓶中，再转入注明样品信息、检测人员以及检测日期的均质袋中，密封，用拍击式均质器拍击2 min。
沙门氏菌检验国家标准
沙门氏菌检验国家标准沙门氏菌是一种常见的致病菌，可以通过食物、水源和接触感染等途径传播，引起食物中毒和肠道感染等疾病。
为了保障食品安全和公共卫生，我国对沙门氏菌的检验标准进行了规范，制定了相应的国家标准。
首先，沙门氏菌检验国家标准明确了检验对象和范围。
该标准适用于食品、饮用水、环境样品等的沙门氏菌检验，包括沙门氏菌的定性和定量检验方法。
针对不同的检验对象，标准中规定了具体的检验方法和技术要求，确保检验结果的准确性和可靠性。
其次，标准对沙门氏菌的检验方法进行了详细的描述。
在样品的处理和预处理过程中，标准规定了严格的操作要求，包括样品的采集、保存、运输和处理等。
针对不同的样品类型，标准中还规定了不同的处理方法，以确保样品中沙门氏菌的检出率和准确性。
此外，标准还对沙门氏菌的培养和鉴定方法进行了规范。
在培养基的选择和制备过程中，标准明确了培养基的成分和制备方法，以及培养条件和培养时间等。
在沙门氏菌的鉴定过程中，标准规定了生化试剂的选择和使用方法，以及鉴定结果的判定标准，确保鉴定结果的准确性和可靠性。
最后，标准对沙门氏菌的定量检验方法进行了规定。
在定量检验过程中，标准规定了菌落计数方法和计数结果的表达方式，以及检验结果的判定标准。
同时，标准还规定了质控要求和质控方法，确保检验结果的可比性和可靠性。
总的来说，沙门氏菌检验国家标准的制定为我国食品安全和公共卫生提供了重要的技术支撑和保障。
通过严格执行该标准，可以有效地预防和控制沙门氏菌引起的食物中毒和肠道感染等疾病，保障人民群众的身体健康和生命安全。
希望各相关部门和单位能够认真贯彻执行该标准，不断提升沙门氏菌检验工作的水平和质量，为我国食品安全和公共卫生事业作出积极贡献。
沙门菌的检验技术
蛋白胨水、靛基质试剂 氰化钾（KCN ） 培养 尿素琼脂 赖氨酸脱羧酶试验培养基 糖发酵管 邻硝基酚 β-D 半乳糖苷 （ONPG）培养基 半固体琼脂 丙二酸钠培养基 沙门氏菌O 和H 诊断血清。 生化鉴定试剂盒
操作步骤
1、前增菌——第一步使食物样品在含有营养的非选择性培养 基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。 2、选择性增菌——在含选择性抑制剂的促生长培养基中间， 样品进一步增菌的一个步骤。此培养基允许沙门氏菌持续增 殖，同时阻止大多数其他细菌的增殖。 3、选择性平板分离——这一步采用固体选择性培养基，抑制 非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的 识别。 4、生物化学筛选——排除大多数非沙门氏菌。也提供了沙门 氏菌培养物菌属的初步鉴定。 5、血清学技术——提供了培养物菌种的鉴定。
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（三）分离培养
分别用接种环取增菌液1 环，划线 接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼 脂平板（或HE 琼脂平板或沙门氏菌属 显色培养基平板）。于36 ℃±1 ℃分别 培养18 h～24 h（XLD琼脂平板、HE琼 脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板） 或40 h～48 h（BS琼脂平板），观察各 个平板上生长的菌落，各个平板上的菌 落特征见表1。
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HE琼脂：在保证细 菌所需营养的基础 上，加入了一些抑 制剂，如：胆盐、 柠檬酸盐、去氧胆 酸钠等，可抑制某 些肠道致病菌和革 兰氏阳性菌的生长， 但对革兰氏染色阴 性的肠道致病菌则 无抑制作用。
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沙门氏菌检验
沙门氏菌的检验1. 目的规范沙门氏菌检测方法，使产品检验有据可依。
2. 消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃仪器、金属用具及培养基、被污染与接种的培养物等必须经灭菌后方能使用。
注：本实验采用湿热灭菌法，吸管、培养皿、培养基等盖好塞子并包好瓶口在高压灭菌锅中按要求的温度与压力灭菌,一般就是121C （1、5MPa下灭菌20min。
3. 原理沙门氏菌的检验分四个连续阶段：4. 操作步骤4、1准备工作配制实验所需的缓冲蛋白胨水、亚硒酸盐胱氨酸培养基（无需灭菌）、HE培养基、三糖铁培养基等，并将准备好的均质杯、吸管、培养皿、大试管等一起灭菌。
4、2前增菌在无菌环境下,称取25g待检样品放入盛有225ml灭菌好的缓冲蛋白胨水中, 然后放到36±「C的恒温培养箱内进行前增菌4-6h;4、3增菌在无菌环境下，用灭菌好的吸管吸取10ml 前增菌液接种与100ml 亚硒酸盐胱 氨酸培养基中进行二次增菌,恒温培养箱36± 1C ,培养18-24h; 4、4分离培养将增菌培养液摇匀，以无菌操作，用直径3mm 的接种环挑取一环，划线于表面 无凝结水的BS 与SS 琼脂平板各一个，于36± 1C 培养18-24h 。
观察各个平板上 有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落。
如无典型或可疑菌落 ，应再继续培养24 ± 2h 。
然后观察培养的平板（黄色的菌落就是大肠杆菌；蓝绿色或蓝色，产硫化氢, 菌落中心黑色或几乎全黑色为可疑沙门氏菌）。
沙门氏菌属各亚属在其她选择性琼脂平板的菌落特征4、5生化实验用灭菌好的接种针在培养平板上挑取可疑的沙门氏菌单菌落，接种到三糖铁 培养基上,恒温培养箱36 ± 1C ,培养18-24h;典型沙门氏菌培养物斜面显红色（碱性）,底端显黄色（酸性），有气体产生，形成硫化氢（琼脂变黑） 三糖铁培养基变化表肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果斜面底层产气硫化氢可能的菌属和种/沙门氏葡属.弗劳地氏柠檬酸杆菌、变形+ + +杆嚙属、缓慢爱徳华氏苗沙门氏菌皿、弗劳地氐拧樣酸杆菌、普通+ + +变形杆菌_ 沙门氏菌属、大肠埃希氏菌*蜂窝哈夫尼+ +■亚曲、摩根氏曲、普罗菲登斯菌属伤寒沙门氏菌、鸡沙门氏莆、志贺氏葡属S + - - 大肠埃希氏曲、蜂窝哈夫尼亚菌•摩很氏菌"普罗菲登斯菌属大肠埃希氏菌、肠杆菌属、克雷伯氏菌+ +■属.沙雷氏菌属•弟劳地氏拧檬酸杆菌注：+表示阳性；-表示阴件；+/ -表示多数阳性.少数阴性。
沙门氏菌的检验
沙门氏菌的检验食品学院14食品质量与安全1班文敏柳基炜卫杰恒温紫君5 6 1 2摘要：本实验采用GB/T4789.4-2010的检测方法测定鸡场中的沙门氏菌。
通过本实验学习沙门氏菌的检测方法和技术，了解沙门氏菌的一些生化特性；本实验先用显色培养基找出可疑菌落，再做生化试验找出可疑的典型性的沙门氏菌，再通过血清学试验最终确定是否为沙门氏菌属。
关键词：沙门氏菌接种生化试验血清学鉴定前言沙门氏菌病是公共卫生学中具有重要意义的人畜共患病种之一，其病原沙门氏菌属于肠道细菌科。
沙门氏菌是一个统称，泛指 2000 多种有紧密连系的细菌，包括引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。
虽然只有少数人因沙门氏菌而患病，但是，在世界围的细菌性食物中毒事件中，由沙门氏菌引起的占大多数。
因此，采用科学、合理的方法检验食品中沙门氏菌，已经成为了人们最关心的问题之一[1]。
国标法(GB4789.4-2010)是目前中国规定的食品中沙门氏菌的标准检测方法,也是基层实验室普遍采用的检测方法,它根据沙门氏菌的生长特点和生化特性,采取前增菌、增菌、分离、生化试验和血清学鉴定5个步骤进行[2]。
1材料与方法1.1实验材料1.1.1仪器设备均质器、三角烧瓶、平皿、玻璃棒、接种棒恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃吸管：1 mL（具 0.01 mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度或微量移液器及吸头电子天平PL602-S，梅特勒-托利多仪器（）；手提式不锈钢压力蒸汽灭菌锅SYQ-DSX-280B，申安医疗器械厂1.1.2试剂药品鸡肠、靛基质试剂、沙门氏菌O和H诊断血清、API20E生化试剂盒或VITEKGNI 生化鉴定卡1.1.3培养基蛋白胨水（BPW)、四硫磺酸钠煌绿（TTB）、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、亚硫酸铋（BS）琼脂、HE琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、尿素琼脂、氰化钾、氰化钾对照、赖氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶对照、甘露醇、山梨醇、β-D半乳糖苷（ONPG）培养基1.2 实验方法1.2.1培养基的制备1.2.1.1培养基的配制步骤蛋白胨水（BPW）：称取蛋白胨10g、氯化钠5g、磷酸氢二钠9g、磷酸二氢钠1.5g、蒸馏水1000ml，将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约 10 min，煮沸溶解，调节 pH，高压灭菌 121 ℃，15 min。
沙门氏菌国标
沙门氏菌国标
沙门氏菌（Salmonella）是一类能够引起人和动物肠胃感染的细菌，其治疗难度大，对人类健康产生了严重的威胁。
为了防止沙门氏
菌感染的发生，中国国家标准制定了沙门氏菌国标，其详细内容如下：
1. 检测方法：
国标规定了沙门氏菌的检测方法，包括常规菌落计数法和PCR等
分子生物学检测方法。
常规菌落计数法是通过将样本以一定的稀释倍
数加入培养基，培养一定的时间后，观察菌落数量来定量检测沙门氏菌。
PCR技术通过扩增特异性DNA序列，从而检测样本中是否存在沙门氏菌。
2. 检测标准：
国标规定了样品中沙门氏菌的检测标准，要求样品中沙门氏菌的
检出限制高于1 CFU/g。
同时，国家对于不同食品中沙门氏菌的检测标准也有所不同。
比如生食蔬菜中沙门氏菌的限制值是10 CFU/g，而熟
食肉制品中沙门氏菌的限制值则是5 CFU/g。
3. 检测流程：
国标对于沙门氏菌样品检测的流程进行了详细的规定，包括样品
采集、样品处理、检测方法选择、样品检测标准等环节的细节要求。
4. 参考资料：
为了保证国标的科学性和专业性，国标中还详细列出了参考文献，包括国内外的学术著作、标准、规范以及相关判定标准等。
总之，沙门氏菌国标的制定对于保障人类健康和食品安全具有重
要意义。
只有严格执行国标，加强沙门氏菌的检测和监测工作，才能
预防和控制该菌的传播和感染。
肠道沙门氏菌检测标准
肠道沙门氏菌检测标准涉及多个方面，包括样本采集、处理、培养、鉴定以及确认等步骤。
以下是一些关键的检测标准和指南：
1. 样本采集：应按照适当的程序采集肠道样本，比如粪便样本，以避免污染。
采集的样本应当妥善保存，并尽快送至实验室进行分析。
2. 预处理：样本到达实验室后通常需要进行预处理，如稀释、富集等，以便于后续的培养和检测。
3. 培养：使用选择性培养基进行培养，以分离和增殖沙门氏菌。
培养条件需要严格控制，以确保沙门氏菌的生长。
4. 筛选与初步鉴定：通过观察菌落的形态、颜色以及生化试验对分离出的菌株进行初步筛选和鉴定。
5. 血清学鉴定：利用血清学方法对疑似沙门氏菌进行进一步鉴定，确定其血清型。
6. 分子生物学鉴定：在必要时，可以通过PCR等分子生物学技术对沙门氏菌的特定基因进行检测，以提高鉴定的准确性。
7. 抗生素敏感性测试：为了指导临床治疗，需要对分离出的沙门氏菌进行抗生素敏感性测试，以确定其对抗生素的敏感性。
8. 确认：最终的鉴定结果需要由具备资质的实验室确认，并出具相应的检测报告。
沙门氏菌检测的具体标准和操作流程可能因国家和地区的法规、实验室的技术能力以及检测目的的不同而有所差异。
因此，执行检测时应遵循当地的法规和指南，并使用经过验证的检测方法和试剂。
在食品安全和公共卫生领域，沙门氏菌检测尤为重要，以确保食品的安全性并防止疾病的传播。
食品中沙门氏菌检测方法比对
食品中沙门氏菌检测方法比对摘要：本实验采用国标、VIDAS和快速测试片三种检测方法，对ACAS组织的冻干粉（模拟食品）中沙门氏菌的测定能力验证样品进行检测，证明VIDAS和快速测试片具有检测灵敏度高、特异性强、时耗短和效率高等特点。
关键词：GB 4789.4-2016； VIDAS；快速测试片；沙门氏菌沙门氏菌是一群寄生于人或动物肠道内的革兰氏阴性肠道杆菌，是一种重要的人畜共患病原菌。
主要通过动物的消化道传染致病，可引起伤寒、食物中毒、急性肠胃炎等多种疾患，由于沙门氏菌在自然界广泛存在，且对人类健康具有很大的威胁，故世界各国普遍规定食品中不得检出沙门氏菌。
我实验室在2022年ACAS组织的“冻干粉（模拟食品）中沙门氏菌的测定的能力验证”中应用 VIDAS、快速测试片和GB 4789.4-2016三种不同的检测方法检出了四例沙门氏菌，现报告如下：１．材料和方法1.1供试样品ACAS提供的四份能力验证样品、一份自制阳性质控样品和一份自制阴性质控样品。
1.2仪器VIDAS：购于法国生物梅里埃公司。
生化培养箱：购于上海一恒科技公司。
实验菌株：沙门氏菌标准菌株和粪肠球菌标准菌株，由CICC菌种保藏中心提供。
1.3试剂VIDAS沙门氏菌试剂盒：购于法国梅里埃公司。
沙门氏菌生化鉴定试剂盒：购于北京陆桥技术股份有限公司。
沙门氏菌诊断血清：购于兰州生物制品研究所。
1.4培养基沙门氏菌增菌培养基:BPW、SC、TTB、RVS和M肉汤。
沙门氏菌选择性培养基：BS、XLD和沙门氏菌显色培养基。
沙门氏菌初步鉴别培养基：三糖铁琼脂（TSI）。
沙门氏菌快速测试片，以上培养基均购于北京陆桥技术股份有限公司1.5检测方法1.5.1 VIDAS法：按VIDAS工业试剂培训手册执行1.5.2国标法：GB 4789.4-20161.5.3快速测试片法：快速测试片使用说明1.6检测步骤1.6.1GB 4789.4-2016检测步骤1.6.1.1无菌操作吸取25mL样品于225mL灭菌BPW中，拍打均质1min，36℃培养18h。
粪便中沙门氏菌测定试验设计
粪便中沙门氏菌测定试验设计试验编号：20181101试验人员：康慧鑫殷莉阳试验时间：2018年11月日-2018年月日试验地点：山西农业大学病理实验室1.试验目的与依据沙门氏菌属是人类和动物常见的一组肠道致病菌，是肠道传染性疾病流行时，评价粪便无害化处理效果的主要指标。
依据国标GB7959-2012规定的检测标准进行该项试验。
2.试验材料恒温培养箱（36±1）℃ 厂家：上海智诚型号: ZXGP-A2050 恒温培养箱（44±0.5）℃ 厂家：上海BOXUN公司型号: BZF-50高压蒸汽灭菌器厂家：HIRAYAMA 型号: HVE-50双倍料缓冲蛋白胨水厂家：青岛高科技工业园海博生物技术有限公司批号:HB4084氯化镁孔雀绿增菌液厂家：青岛高科技工业园海博生物技术有限公司批号:HB4092亚硫酸铋琼脂厂家：青岛高科技工业园海博生物技术有限公司批号:HB4090三糖铁琼脂厂家：青岛高科技工业园海博生物技术有限公司批号:HB4088 SS琼脂厂家：青岛高科技工业园海博生物技术有限公司批号:HB4089革兰氏染液厂家：青岛高科技工业园海博生物技术有限公司批号:HB8278沙门氏菌属诊断血清厂家：宁波天润生物药业有限公司批号:20180101 100mL锥形瓶12个、20mL试管24个、75mm平皿24个、天平、乳钵或均质器、水浴箱、冰箱、平皿、10 mL移液枪、玻片、接种环（针）、采样瓶、玻璃珠。
3.试验方法3.1培养基和试剂配制3.1.1样品稀释液制备制法：将氯化钠溶解于去离子水中，分装到加玻璃珠的锥形瓶内，每瓶90 mL，121℃，20min高压蒸汽灭菌。
表1 样品稀释液配制3.1.2双倍料缓冲蛋白胨水（BP）制备制法：将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH7.2，分装到内有玻璃珠的锥形瓶中，每瓶90 mL，121℃，15min高压蒸汽灭菌。
表2 双料蛋白胨水配制3.1.3氯化镁孔雀绿增菌液（MM）制备表3 氯化镁孔雀绿增菌液配制3.1.4亚硫酸铋琼脂（BS）制备表4 亚硫酸铋琼脂（BS）配制注：此培养基为淡绿色，不需高压灭菌，制备过程不宜过分加热，以免降低其选择性，应在临用前1d制备，贮存于室温暗处，超过48h不宜使用。
饮料中沙门氏菌检测实验报告
饮料中沙门氏菌检测实验报告
自19世纪后期，沙门氏菌首次被鉴定为人类的一种病原以来，检测方法学都是建立在采取感染病人的粪便或血液作为临床病料的基础上。
此后的60年间，用于从饮料中分离沙门氏菌的方法实质上与那些用于临床病料的方法是相同的。
但由于沙门氏菌在污染饮料中含量较低以及饮料对检测的干扰给沙门氏菌的检测带来了一定的困难，同时饮料加工过程中的诸多因素的作用，使沙门氏菌受到了亚致死性的损伤或称“致伤”。
因此在选择培养基上直接培养“致伤”的沙门氏菌通常是以细菌死亡和试验失败而告终。
随着DNA和抗体技术的发展，近20年间出现了很多改进的方法，其中许多方法可以在48 h内检出沙门氏菌。
1 传统的培养方法(国标法 GB 4789.4-2010)
用于沙门氏菌分析的传统方法是食物样品分步增菌，以增加病原的可检出率，这种培养方法总体可分3个不同阶段或步骤。
第一步(预增菌)，将样品加到缓冲蛋白胨水中，进行前增菌，对未加工饮料无需前增菌。
然后接到TTB培养基或SC培养基上。
第二，是选择性增菌步骤，目前应用的主要有如下2种类型:亚硫酸铋琼脂平板、XLD 琼脂平板(或HE琼脂平板、WS琼脂平板或SS琼脂平板)。
由于没有任何一种培养基可以全面地保持所有饮料基质或各种沙门氏菌血清型，所以，较适当的做法就是使用两种培养基平行地进行试验。
第三步是分离步骤，即选择性培养物在含一种或多种抑制非沙门氏菌生长制剂的琼脂平板上划线培养，然后对平板上肉眼可见的特征性菌落
进行确认，并对该菌落分离物进行一系列生化试验和血清学检测，以作出鉴定。
传统沙门氏菌检测法全过程需时至少4,7 d，才能得出明确的诊断结果。
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沙门氏菌国标检测方法
一、样本采集
在采集样本时，应确保采集的样本具有代表性，且无菌操作。
通常采集食品、动物粪便、环境样本等。
对于食品，应采集不同种类，如肉类、禽类、奶制品等。
对于动物粪便，应采集新鲜样本，避免受到污染。
环境样本应采集可能存在沙门氏菌的表面或水样。
二、增菌培养
增菌培养是沙门氏菌检测的重要步骤，目的是增加细菌的数量，使其更容易分离和检测。
常用的增菌培养基有肉汤培养基和缓冲葡萄糖胨水培养基等。
将采集的样本接种到培养基中，在37℃下培养18-24小时。
三、分离培养
将增菌培养后的培养物划线接种于选择性培养基（如SS 琼脂、麦康凯琼脂等）上，在37℃下培养18-24小时。
选择性培养基可以抑制其他细菌的生长，有利于沙门氏菌的分离。
四、初步鉴定
对分离培养得到的单个菌落进行初步鉴定，包括菌落形态、染色特性、镜下形态等观察。
同时进行革兰氏染色和氧化酶试验，以初步判断是否为沙门氏菌。
五、生化试验
生化试验是确定分离菌株是否为沙门氏菌的关键步骤。
常用的生化试验包括赖氨酸脱羧酶试验、尿素试验、靛基质试验等。
根据试验结果，对分离菌株进行初步分类。
六、血清学分型
为了确定分离菌株的具体血清型，需要进行血清学分型。
通过与已知抗血清进行反应，确定细菌的特异性抗原，从而确定其血清型。
血清学分型对于追踪沙门氏菌的来源和传播途径具有重要意义。
七、报告结果
根据以上各步骤的检查结果，综合分析并得出最终结果。
对于疑似沙门氏菌的样本，应进行复核和确认。
最终结
果应以书面形式报告给相关单位或个人，报告应包括样本来源、检测方法、检测结果等内容。
同时，应对检测结果进行解释和说明，提供相应的建议和措施。