地贫诊断相关知识与产前诊断讲解

美国西点军校的校训是： 没有任何借口。
请大家要记住：产前诊断要时刻铭记： 如履薄冰，如临深渊！
谢谢！
1、按程序处理羊水，如果污染轻微，对地贫产前 分子诊断的结果影响不大（注：并不是没有）; 中度、重度的母血污染，则误诊的机会非常大 。 2、记录羊水离心后的详细情况，及时通知临床医 生并在报告单上注明“羊水标本严重污染，结果 仅供参考”，建议间隔2周以上再次取样，最好 采用脐带血，以引起临床医生注意。
适宜的方法和技术—优
1、因地制宜，选用灵敏、准确的筛 查和 分子诊断的方法； 2、在具有决定意义的项目上要特别重视红 细胞指数测定、HbA2定量 和铁代谢状态的分 析）。
实验室技术人员——专
1、需要具备相关资历及有关知识，最好有 高水平的人员把关，保证筛查结果的可靠性； 2、PCR上岗证； 3、参加省卫生厅组织的生化免疫遗传和分 子遗传统一考试。
事例及教训两则
早在1993年，国内某知名诊断机构将本应
是重型的β-地贫诊断为轻型β-地贫，赔偿患 者1万。 1994年，我单位开始作地贫产前诊断时， 羊水标本被母血污染，胎儿的实际基因型 SEA SEA 可能为-- /-，但我们的诊断结果是 -SEA /αα，孕24周时出现胎盘增厚，胎儿水 肿等症状，导致引产。
产前诊断标本被母血严重污染的补救方法
1、如果做α-地贫基因诊断，对于基因型为 SEA SEA SEA -/αα的胎儿（实际基因型可能为-/-）可在 孕24周后，定期进行B超下监测，观察心/胸比例、胎盘厚 度、胎儿有无水肿等改变。一经发现胎儿有上述变化，建 议尽快终止妊娠。 2、对于基因型为β-地贫杂合子的胎儿（胎儿的实际 基因型可能为纯合子或双重杂合子）或进行HbH病的 产前诊断，那就必须只能择机重新抽取羊水或胎儿脐带血 复验了，无其他办法弥补。
地贫的产前诊断的原则
1、实验室要严格按临床基因扩增实验室的要求 从事分子诊断； 2、必须签订知情同意书，需要列明该检测涵盖 的突变范围，未检测的突变占地贫中的比例； 3、独立的两次平行测定是保证结果准确的必要 步骤，最好是采用两种不同的实验方法相互验 证。 4、标本的质量和适当保存也是减少风险的重要 环节。
地贫筛查下结论——慎
地贫筛查的结论必须多项目综合考虑： 1、是否有小细胞症？ 2、是否有铁代谢异常？ 3、Hb电泳是否有异常带？ 4、抗碱Hb是否高？ 5、HbA2是否增高？ 6、有无可能为静止型地贫？
红细胞指数在地贫筛查中的重要作用
1、红细胞指数的降低提示地贫的高风险性， 但红细胞指数正常并不能说没有地贫风险； 2、对于处于临界值（如78fl＜MCV＜85fl）的 结果，必须慎重考虑并做进一步的检查； 3、生理变异与病理性因素应考虑在内； 4、MCH比MCV更为可靠；RDW-CV意义不可 小视； 5、血细胞分析必须有严格的质量控制体系
处理：双方均作β地贫基因诊断或者将δβ-地 贫表型阳性者标本送有条件实验室检测。 结果：确定基因型后，建议去产前诊断中心 登记择机检查并提前通知实验室。



情形三：一方为α -地贫表型阳性，另一方为 表型正常。 处理：表型正常的一方须做α -地贫基因诊断。

结果：表型正常者未检出突变，进行产前咨询 后转为常规产检；表型正常者检出静止型突变， 接受HbH病的产前咨询，按知情同意选择原则 进行产前诊断。
产前诊断标本被母血污染的后果
假设孕产妇为轻型地贫，在临床上以此类情况 多见： 1、就可将原本重型或中间型地贫误诊为轻型地 贫，此为灭顶之灾！ 2、将原本为HbH病误诊为轻型α-地贫，这也是 非常麻烦的官司！ 3、将原本正常的胎儿误诊为轻型地贫，这种情 况还算好处理，后果不算严重。

羊水标本被母血污染的处理
地贫筛查和产前诊断
地贫实验室遗传筛查与产前诊断
地贫的血液学表型筛查 地贫的分子诊断 从家系分析进行筛查或排除地贫
产前地贫携带者筛查策略
产检对象（孕妇及其配偶） 血液五分类分析（检测MCV和MCH等RBC指标）
双方的两项指标 均同时正常
双方的两项指标 均同时降低
地贫全套检查
一方正常，另一方 的两项指标降低 异常的一方做地贫全套检查
地贫的产前诊断时间要求
植入前的诊断（PGD）：6~8细胞期。 绒毛取样：孕9-12周； 羊水取样：孕16-22周； 脐血取样：孕20周后； 取样风险：羊水取样风险最小，脐血次之，绒毛 取样风险最大。 脐血标本既可获得较多量的DNA，而且还可通 过Hb电泳对α-地贫进行快速有效的诊断，从而 更有效地保证产前诊断的可靠性。
双方均为 α-地贫特征
双方均为 β-地贫特征
一方为α-地贫特征，另一 方为ID或β-地贫特征
ID或β-地贫特征的一方 做α地贫分子诊断
α-地贫特征
ID
Байду номын сангаас
β-地贫特征
α地贫分子诊断
+
单纯性ID或单 纯性β-地贫
血R正常的 一方做α地
贫分子诊断
+
-
单纯性ID或单 纯性β-地贫
-
+
遗传咨询
夫妇双方基因诊断
知情同意选择



情形六 ：一方为HbH病，不管另一方MCV 和MCH正常与否 。
处理：非HbH病的一方必须进一步做α-地贫 基因 。 结果：如非HbH病的一方排除α-地贫突变， 产前咨询后转入常规产检；如非HbH病的一 方为α-地贫，必须进行产前诊断。



情形七 ：一方为α-地贫表型阳性合并异常血 红蛋白病，但另一方α-地贫表型阳性又未检 测出已知突变。

情形四：一方为β-地贫表型阳性，另一方为α地贫表型阳性时。 处理：β-地贫表型阳性的一方须做α-地贫基因 诊断 。 结果：如果β-地贫表型阳性合并α-地贫，按同 为α-地贫处理；如果β-地贫表型阳性未合并α地贫，产前咨询后转入常规产检。



情形五：一方为缺铁（多为孕妇），另一方 情况不明。 处理：缺铁的一方必须做α-地贫基因诊断。 结果：如果ID合并α-地贫，对方也必须做α地贫基因诊断；如果ID未合并α-地贫，对方 可不做α-地贫基因诊断，产前咨询后转入常 规产检。
红细胞脆性试验的局限性
1、此方法仅适用于无血细胞分析仪的基 层单位，当然增加项目创收也可以，但不宜 单独使用（案例见后） 2、此方法不适用于孕产妇和婴幼儿的地 贫筛查； 3、使用该指标时必须排除其它红细胞膜 的病变。
地中海贫血的分子诊断的目的
1、用于地贫筛查表型阳性的明确诊断; 2、排除地贫表型不明显者的常见突变; 3、用于静止型地贫的分子诊断; 4、排除ID合并α地贫； 5、用于胎儿出生前的诊断（产前诊断）; 注意： 1、分子诊断结果一定要与地贫筛查结果综合考虑； 2、单独使用时一定要将所有可能的情况均考虑在内， 即使这样也有可能漏诊。
胎儿产前基因诊断
地贫的产前筛查原则
1、地贫高发区内夫妻双方尽早作地贫筛查； 2、因地制宜选用合适的方法、仪器； 3、科学合理的筛查流程以减少假阴性的发生； 4、血液学表型结合分子诊断，必要时进行家系 分析，综合各种检查结果才能得出结论； 5、表型与基因诊断结果有不符之处时，要慎之 又慎，需用其它分子诊断方法进一步分析。

产前诊断标本的处理
1、产前诊断的标本标识特别重要，实行唯一 标识制度，这是保证产前诊断准确的前提。 2、产前诊断的标本及时处理，有问题及时与 实验室技术人员进行沟通。 3、羊水标本按取样的先后最好分为三管，标 识清楚，以防母血污染。 4、脐带血的处理同外周血一样，可以电泳或 抗碱Hb测定鉴定是否是脐带血。
哪些情况必须作基因诊断？

情形一：双方同为α或β地贫表型阳性
处理：双方均进行α或β地贫基因诊断。
结果：如果分子诊断确定双方均为同类型的 地贫，建议去产前诊断中心登记，择机进行 产前诊断；如果一方确定突变，另一方表型 阳性但未检测出突变，抓紧时间鉴定未知突 变。

情形二 ：一方为β地贫表型阳性，另一方为 δβ-地贫表型阳性时 。

处理：抓紧时间检测未知突变，建议产前诊 断中心抽脐带血做产前诊断。
结果：分子诊断结合脐带血电泳的结果进行 产前诊断。

地中海贫血的产前诊断
地贫的产前诊断的意义
地贫的产前诊断（胎儿出生前的诊
断）是最后一道关卡，是决定是否 淘汰胎儿的决定性依据，需要特别 谨慎处理，无论多么小心都不为过， 否则一不小心就会带来灭顶之灾！
育龄夫妻筛查的时间—早
1、育龄夫妻尽可能早筛查，在婚前检查时 最好或孕早期，因孕妇缺铁的比例较低，有利于 红细胞指数的应用和排除缺铁性贫血对地贫筛查 结果的判断。 2、有足够的时间完成特殊病例或未知突变的 分子诊断。 3、有利于合理安排时间进行产前诊断，如果 有条件可早期绒毛取样进行产前诊断，在孕中期 可采集羊水标本，孕晚期用脐带血标本比较合 适。
总结
1、产前筛查是基础，产前诊断是决定性
的步骤，两者同等重要，没有准确的产前 筛查，就会对产前诊断产生干扰或想当然 的放弃产前诊断； 2、产前诊断的重要性不言而喻，每一步 骤的严格要求是保证结果准确的前提； 3、建立全面的质量控制来保证结果准确 性。
什么是职业道德？ 职业道德就是一个人的责任心！ 什么是优秀？ 优秀不是一种品质，而是一种习惯！