血型交叉配血

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第五节 血型鉴定及交叉配血
主讲 马丽主任技师
临床检验学教研室
Blood type
授课内容
ABO血型系统
Rh血型系统 血型鉴定及交叉配血
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Blood type
一、ABO ABO 血型系统 血型系统 一、
首个描述的红细胞血型系统,20世纪初由 Landsteiner提出,为最具临床意义的一个系统。
人与Rhesus
monkey
相同抗原
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(二) Rh血型基因、命名及遗传

4种命名法:Fisher-Race、wiener、 数字命法、现代命名;

基因位于1号染色体RHD及RHCE; 推荐Fisher-Race (CDE)命名法:简单明了
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Rh分型卡(人源性)
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Rh血型鉴定方法
Coombs、 蛋白酶、 凝聚胺法 盐水介质法(抗D混合血清) 微柱凝胶法
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1.抗人球蛋白(Coombs)试验技术
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抗人球蛋白实验的原理示意图
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与各抗血清的反应结果
抗 C
+ + + + - - + + + - + + - + + + - 临床检验学教研室
受检者 Rh血型
抗c
+ - + - + + - + - + + + + - - + +
抗D
+ + + + + + + + - - - - - - - - -
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操作流程 (玻片法)
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试管法
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试验结果
阳性:红细胞出现凝集反应或溶血 阴性:红细胞呈现游离混悬状态
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血 型 结 果
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结果判断
ABO血型鉴定 正定型:标准血清(Ab)+RBC(Ag)_介质_凝集
反定型:标准RBC(Ag)+血清(Ab)-介质-凝集
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ABO血型鉴定
盐水凝集法 试管法 玻片法 中性微柱凝胶卡法(不含抗体 微柱凝胶卡法 特异性微柱凝胶法(含抗体) 抗人球蛋白微柱凝胶法
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结构特点
基因→ 转移酶→特异性糖基 +前身物质→ ABH物质→ ABΟ血型 H物质为ABΟ血型共有(oh无) H抗原表达:o>A2> A2B > B >A1> A1B
H抗原性很弱,血清中一般无抗H
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3. 抗原遗传

基因:ABO,位于9号染色体 表型:血型 AA.AO BB.BO → → → → → AB (共现性遗传 ) OO A 型 B 型 AB型 O型
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原则 盐水法 Coombs 蛋白酶 胶体介质 聚凝胺法 微柱凝胶配血 →所有(IgG、IgM)
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→ IgM →无输血和妊娠史
→ IgG→有输血和妊娠史
交 叉 配 血
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CDE命名法
CDE三个基因位点 三对等位基因 6种抗原( Cc、Dd、 Ee)连锁遗传 8种基因组合 36种遗传型。
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C c D d E e
C c D d E e
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(三) Rh血型抗原
1、抗原及分布 共50种,常见Cc、D、Ee 含C、D、E抗原:Rh(+) 含cde抗原:Rh(-) 抗原强弱:D>E>C>c>e
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1.ABO亚型红细胞上的A抗原
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(五) ABΟ血型的亚型
亚型:同一血型抗原在结构性能和抗原 表位上差异 特征:红细胞抗原数量少,与试剂血清表现 为弱凝集或不凝集。
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二、Rh血型 Rh血型 二、
(一) Rh血型的基本概念

ABO基因 → (复等位基因 )
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4.抗原表达
胎儿5-6周测出, 出生时低,仅占成人25%-50%, 20岁恒定, 老年降低, 终身不变,两低一恒定。
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(四)ABΟ血型抗体
存在于缺乏相应抗原的血清中 出生后3-6月产生, 5-10岁高峰,老年降低。
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微柱凝胶法血型检测的意图
反应腔
凝胶分离柱
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抗体
离 心
离心开始
离心3分钟
游离红细胞能通过凝胶间隙(1)
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离 心
离心6分钟
离心结束
游离红细胞能通过凝胶间隙(2)
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2.酶处理实验技术
原理:破坏RBC表面唾液酸,降低负电 荷;改变RBC结构,暴露隐蔽抗原位点。
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3.聚凝胺介质试验技术 试剂-聚凝胺试剂盒
低离子介质(LIM) 聚凝胺液(polybrene solution) 解聚液(Resuspending solution)中和液
血清IgM(IgG)+RBC —> RBC特异凝集 解聚液中和聚凝胺正电荷,如果是抗体介导 的特异性凝集,加入解聚液后,凝集不消散; 如是聚凝胺引起的非特异性凝集加入解聚液 后,凝集解散。
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4.盐水介质法
单克隆抗D混合血清 (IgG+IgM) + RhD抗原
凝集(肉眼可见)
阴性反应
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抗体
离 心
离心开始
离心3分钟
凝集红细胞不能通过凝胶间隙(1)
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离 心
离心6分钟
离心结束
凝集红细胞不能通过凝胶间隙(2)
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阳性反应
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试验结果
判断
正向定型
抗A 抗B + + 抗A,B + + + +
反向定型
A细胞 B细胞 O细胞 + + -
结果 O A B AB
+ +
+
+ -
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2.微柱凝胶卡法
原理 Ag(RBC) + Ab (IgM)_凝胶__凝集
(亲和效应 分子筛效应)
பைடு நூலகம்
种类:中性凝胶、特异性凝胶、抗人球蛋白凝胶 结果:肉眼观察或血型分析仪 优点:灵敏、准确、特异、标准化、微机化管理 不足:特殊试剂、配套离心机,成本高。
抗E
+ - - + + - + + - + + - + + + + -
抗e
+ + + - - + + - + - + + + - + - + CcDEe CCDee CcDee CCDEE ccDEE ccDee CCDEe CcDEE CCdee ccdEe CcdEe Ccdee ccdEe CCdEE CCdEe CcdEE ccdee
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天然性抗体 形成 天然、出现早 特点 完全抗体 存在 A、B型血 分子量 大(100万) 化学性质 IgM 胎盘屏障 不能通过 反应介质 盐水(盐水抗体) 反应温度 4 ℃—10℃(冷抗体) 血型物质 可中和 新生儿溶血 无意义 输血反应 重要
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免疫性抗体 接触抗原、出现晚 不完全抗体 Ο型血多 小(16万) IgG 能通过 胶体、酶、抗人球 37 ℃ (温抗体) 不中和 主要原因 重要
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质量保证-分析后
结果分析:正反定性不一致 结果记录 结果报告 标本保存
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临床意义
输血 妊娠 器官移植 遗传学、法医学
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(二) Rh血型鉴定
1.抗D标准血清鉴定(临床) 凝集 Rh阳性 抗D血清+受者RBC 反之 Rh阴性 2.抗C、c、D、E、e血清鉴定(分型)
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Rh血型的质量控制 (自学)
分析前:方法、标本、试剂、器材 分析中:对照、介质、温度、浓度、离心 分析后:结果分析、复核、标本留存
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临床意义
溶血性输血反应 新生儿溶血病
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质量保证-分析前
方法选择:微柱凝胶正定型 标准血清 试剂红细胞:混合红细胞、洗涤、3%-5%浓度 器材:清洁干燥、试剂有效性、水平离心机 标本:新鲜
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质量保证-分析中
建立sop文件 标记:清楚 试剂、标本:比例、顺序(血清、抗体、细胞) 反应温度与时间:20~24 ℃,37 离心速度、时间: 结果观察:白色背景、震摇,特异性、凝集溶血
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临床: 有D抗原→ Rh (+) 无D抗原→ Rh (-)
分布 : 少数民族地区Rh (-)问题
重点: Rh (-)问题
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(四) Rh血型抗体
免疫性、IgG为主, 主要抗体:抗D、E、C、c、e 特点:盐水介质中致敏RBC,肉眼观察不 凝集,判断错误,输血反应。
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(一)基本概念
血型:血液各种成分抗原的遗传性状,血液的 主要特征之一。 血型系统:由单个基因座或多个紧密连锁的基 因座上的等位基因所产生的一组抗原。
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(二)ABO血型分类和命名
血型:A型、 B型、 AB型 、O型
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(三)ABO血型抗原-存在、结构、遗传、表达 1. 存在部位
完全抗原(如ABH抗原)血细胞、上皮细胞 半抗原(血型物质):体液、分泌液
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血型物质
血型物质(blood-group substance)分泌性基因Se (FUT2)控制,存在于体液或分泌液中的可溶性 ABH抗原。 分泌型个体:体液、分泌液中含血型物质 非分泌型个体:体液或分泌液中不含血型物质
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血型物质
性质:能与相应的抗体反应 分布:唾液、血清、尿液、羊水等(除CSF) 意义:
9 9 9
辅助鉴定ABΟ血型(唾液) 预测血型 抗体鉴别(中和天然抗体,检测免疫性抗体)
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2.抗原结构
基本物质:多聚糖类血型前体Ⅱ型链; (分泌型抗原的基本物质是血型前体Ⅰ型链) H抗原是形成A、B抗原的结构基础; 基因为H(FUT1)。
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三、血型鉴定及交叉配血 三、血型鉴定及交叉配血
(一) ABO血型鉴定 原理:Ab (IgM)+ Ag(RBC)_介质__凝集
正定型(检查Ag)(forward grouping) 反定型(血清Ab) (reverse grouping)
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鉴 定 方 法
(含IgG+C3)
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1.盐水介质法
原理: Ag(RBC) + Ab (IgM)_盐水__凝集 应用:血型鉴定,IgM抗体筛查鉴定, 盐水介质交叉配血 方法:试管法、玻片法、微孔板法
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方法评价
试管法: 离心增加凝集,反应时间短, 可发现亚型或弱抗原抗体反应,用于急诊定型, 常规检查方法。 玻片法:简单,普查,不时宜反定型、弱凝集。 微孔板法:大样本血型鉴定,需特殊设备。
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原理:
⑴RBC非特异性凝集
LIM:降低介质离子强度—>降低RBC的Zeta电 位,促进RBC与相应Ab结合 Polybrene:(多价阳离子氨基聚合物)溶解 产生大量正电荷,中和RBC表面的负电荷,促 RBC凝集
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⑵RBC特异性凝集
(三)交叉配血

目的:受者和供者是否存在 血型抗原和抗体不符合的情况

意义: 验证血型是否相符, 发现不规则抗体
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发现亚型
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交叉配血的方法及评价
方法 盐水配血试验 酶介质配血法 抗球蛋白试验 聚凝胺试验 微柱凝胶配血 优点 缺点
ABO、简单、快速、经济 不能检测IgG Rh、简单、快速、经济 准确性较差 不完全抗体灵敏、准确 所有抗体灵敏、准确 所有抗体、准确,上机 复杂、昂贵 特殊试剂 试剂昂贵
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