荧光免疫层析技术原理进展.
荧光免疫层析技术原理进展
荧光免疫层析技术原理进展荧光免疫层析技术（Fluorescent Immunoassay，FIA）是一种基于荧光标记物的免疫分析技术，具有高灵敏度、高选择性和高速度的特点。
近年来，随着发展和进步，荧光免疫层析技术在医学诊断、药物研发和生物分析等领域得到了广泛应用，并取得了重要的进展。
荧光免疫层析技术的原理主要分为两个方面：一是免疫反应，二是荧光检测。
免疫反应在采样点的免疫固定区域进行，通过特定抗体与待测物结合形成复合物。
荧光检测则是利用荧光标记的抗体或荧光标记的近红外荧光染料对复合物进行检测和测量。
荧光标记的抗体在光源的照射下会发出荧光信号，这个信号可以通过荧光分析仪器进行定量检测和计算。
在技术进展方面，荧光免疫层析技术主要表现在以下几个方面：1.荧光标记物的改进：荧光免疫层析技术中使用的荧光标记物是整个技术的核心，近年来，研究者们不断改进和优化荧光标记物的性能，如改进荧光染料的光稳定性，提高荧光信号的强度和稳定性，提高荧光标记的抗体的经济性和稳定性等。
2.抗体的改进：抗体作为免疫反应的关键组分，对免疫分析的灵敏度和特异性具有重要影响。
随着单克隆抗体技术的发展，研究者们可以定制更加特异和高亲和力的抗体，从而提高了荧光免疫层析技术的检测灵敏度和准确性。
3.生物纳米技术的应用：荧光免疫层析技术与生物纳米技术的结合为技术的发展提供了新的契机。
生物纳米技术可以提高免疫反应的效率和精确性，通过改变纳米材料的形态和物理化学性质，使得荧光信号和靶标物之间的相互作用更加紧密和稳定。
4.自动化分析系统的发展：荧光免疫层析技术在实验室中的自动化分析系统的发展为技术的应用提供了更多的可能性。
自动化系统可以提高检测的速度和精确性，减少操作的复杂性和人为误差的发生，使得技术更加实用和可靠。
总的来说，荧光免疫层析技术在过去几年取得了很多进展，不仅在医学诊断和生物分析等领域表现出了广泛应用的潜力，也为技术的进一步发展提供了很多的新思路和新方法。
荧光免疫层析技术原理进展课件
控制和监测，包括自动加样、自动洗涤、 智能等技术手段对检测结果进行自动分
自动读数等环节。这不仅可以减少人为 析和解释。这有助于提高检测的准确性
误差和操作时间，还可以提高检测的准 和可靠性，并可应用于临床诊断和治疗
确性和可重复性。
方案的制定。
04
荧光免疫层析技术挑战 与前景
技术瓶颈与解决方案
技术瓶颈
荧光标记物是荧光免疫层析技术中的关键要素，其性能直接影响检测的灵敏度和特 异性。近年来，科研人员致力于研发新型荧光标记物，以提高检测性能。
新型荧光标记物包括量子点、上转换发光材料和多色荧光染料等。这些新型荧光标 记物具有更高的发光强度和稳定性，能够提高检测的灵敏度和准确性。
此外，新型荧光标记物还具有优异的光学性质，如长寿命、宽激发光谱和窄发射光 谱等，有助于实现多色标记和多重检测，提高检测的特异性。
技术在生物医学领域的前景
01
02
03
疾病诊断
荧光免疫层析技术具有高 灵敏度和特异性的特点， 可广泛应用于传染病、肿 瘤等疾病的早期诊断。
药物研发
荧光免疫层析技术可用于 药物筛选、药效评估和药 物代谢等方面的研究，加 速新药研发进程。
生物安全
荧光免疫层析技术可用于 检测生物武器和生物恐怖 袭击物质，保障国家安全 和公共卫生安全。
实例二：肿瘤标志物检测中的应用
总结词
荧光免疫层析技术用于肿瘤标志物检测，有助于早期发现肿瘤，提高患者生存率。
详细描述
通过检测患者血清或尿液中的肿瘤标志物，如癌胚抗原、甲胎蛋白等，利用荧光免疫层析技术可实现 肿瘤的早期诊断。该技术具有高灵敏度和特异性，能够提高肿瘤检出率，为患者早期治疗提供有力支 持。
分离机制
免疫荧光层析法 化学发光
免疫荧光层析法化学发光免疫荧光层析法（Immunofluorescence Assay，简称IFA）和化学发光（Chemiluminescence）是两种常用的检测技术，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和生物工程等领域。
本文将介绍这两种技术的原理、步骤和应用，以及它们之间的区别和优缺点。
免疫荧光层析法是一种利用抗体与特定抗原结合后可发出荧光信号的检测方法。
它的原理是将标记有荧光染料（如荧光素）的抗体与待检样品中的目标抗原结合，形成免疫复合物。
通过荧光显微镜观察，可以检测到目标抗原的存在与否。
这种方法具有高灵敏度、高特异性和无需放射性标记物的优点，被广泛应用于病原微生物的检测、抗体的定量和细胞蛋白的定位等研究领域。
化学发光是一种利用化学反应产生的光信号来检测目标物质的方法。
它的原理是将待检样品中的目标物与标记有化学发光底物的抗体结合，形成免疫复合物。
当加入特定的激发剂后，底物会发生化学反应，产生可见的光信号。
通过光电倍增管或摄像机的检测，可以定量地测量化学发光强度，从而判断目标物的含量。
化学发光方法具有高灵敏度、宽线性范围和较低的背景信号等优点，因此在临床诊断和生物工程领域得到广泛应用。
免疫荧光层析法和化学发光在实验步骤上存在一些差异。
免疫荧光层析法的步骤包括样品制备、抗体标记、免疫反应、洗涤和显微镜观察等。
而化学发光的步骤则包括样品制备、抗体标记、免疫反应、洗涤和化学反应等。
两种方法的原理都是基于抗体与抗原的特异性结合，但在标记物和检测信号的产生上有所不同。
免疫荧光层析法和化学发光在应用上也存在一些差异。
免疫荧光层析法常用于检测细胞表面标记物、病原微生物和抗体等，广泛应用于免疫学研究和临床诊断。
而化学发光常用于检测肿瘤标志物、药物残留和基因表达等，被广泛应用于药物研发和生物工程领域。
两种方法在不同领域有着各自的优势和适用范围。
总的来说，免疫荧光层析法和化学发光是两种常用的生物分析技术，具有高灵敏度、高特异性和广泛应用的特点。
荧光免疫层析技术的原理与进展
荧光免疫层析技术的原理与进展荧光免疫层析技术（Fluorescence immunoassay）是一种通过利用特定抗原与抗体之间的特异性结合来检测和定量分析生物标志物的技术。
该技术结合了免疫学和荧光分析技术，具有高灵敏度、高选择性、快速性和准确性等优点。
荧光免疫层析技术的原理基于免疫体系，其中一种成分是特异性结合抗原的抗体，另一种成分是标记有荧光染料的抗体。
荧光染料发射的荧光信号与所检测的生物标志物的浓度成正比，因此可以通过测量荧光信号的强度来定量分析目标物质的浓度。
荧光免疫层析的步骤包括样品预处理、荧光标记、免疫反应和信号检测等。
首先，样品需要进行预处理，包括去除干扰物和处理样品矩阵，以提高分析的准确性和灵敏度。
然后，通过将荧光染料与特异性抗体偶联，将其标记到待测分析物上。
标记过的抗体用于与待测物质发生特异性结合。
在免疫反应中，样品和荧光标记的抗体混合反应，使待测物质与标记抗体发生结合。
最后，通过荧光检测设备检测荧光信号的强度，从而定量分析待测物质的浓度。
荧光免疫层析技术在医学、生物学、环境监测等领域得到了广泛的应用与进展。
在临床诊断中，荧光免疫层析技术可以用于检测病毒、细菌、代谢产物等生物标志物，帮助医生进行疾病的早期筛查和诊断。
在生物学研究中，该技术可以用于定量检测蛋白质、细胞因子等生物分子，研究其功能和作用机制，为生物学研究提供重要的实验手段。
在环境监测和食品安全领域，荧光免疫层析技术可以用于检测污染物和有害物质，提高检测速度和准确性。
近年来，随着纳米技术、微流控技术和生物传感器技术的发展，荧光免疫层析技术也得到了一系列的改进和创新。
例如，通过利用纳米颗粒标记抗体，增强荧光信号的强度和稳定性，提高了荧光免疫层析技术的灵敏度和稳定性。
此外，微流控技术的应用可以实现样品的自动化处理和分析，提高了分析的速度和准确性。
生物传感器技术的引入，使荧光免疫层析技术具有更大的灵活性和可扩展性，为多种分析需求提供了解决方案。
荧光免疫层析法
荧光免疫层析法
荧光免疫层析法是一种检测指标物质的新技术，它可以准确、灵敏、可重复地检测分
子量小于1000Da的蛋白质、神经递质以及其他少量或微量物质。
荧光免疫层析法可以同
时检测一个以上指标物质，从而大大提高了检测效率，是一种具有重要意义的廉价、高效、可重复的增强技术，在生物医学领域受到越来越多的关注。
荧光免疫层析法的原理是利用特定的抗体分子与指标物质结合，使用荧光染料指示物
灵敏地检测抗体的结合，在一定的光度下，抗体沉淀越多，发射的荧光越强，可用于检测
少量和极少量的电子发射物质。
其特点是，它可以迅速检测大量物质，而且在试样量小、
检测灵敏度高时，仍能有较好的特异性检测能力。
荧光免疫层析法应用 tableView 检测时，常需要经过亲和缓冲体的处理，这样可以
避免B＃的重组，从而提高检测的准确性和灵敏度。
另外，还需要补充不同蛋白质的抗体，以提高检测的特异性和灵敏度。
在操作过程中，还可以采用模拟多元抗体反应，以提高检
测的准确度。
在荧光免疫层析法检测时，实验条件也影响最终结果，实验室应为每个指标物质选定
一组实验参数，以保证实验质量，以防止偏差。
此外，常规维护也是非常重要的，荧光免
疫层析仪需要定期维护，以确保其精确性、稳定性及准确性。
总之，荧光免疫层析法是一种准确且灵敏的检测技术，它可以准确、快速地检测指标
物质的含量，具有很多优势，已广泛应用于免疫检测和生物样品分析等技术中。
但同时，
它也需要精心调整实验条件，，再加上定期的维护，才能确保检测结果的准确性和可靠性，才能发挥最大的性能。
免疫荧光层析法原理
免疫荧光层析法原理The principle of immunofluorescence assay (IFA) involves the use of antibodies to detect the presence of specific antigens in a sample. Immunofluorescence is a powerful tool that relies on the specific binding of antibodies to their target antigens, followed by the detection of this binding using fluorophore-conjugated secondary antibodies.免疫荧光层析法的原理是利用抗体来检测样本中特定抗原的存在。
免疫荧光是一种强大的工具，它依赖于抗体与其靶抗原的特异性结合，随后使用荧光素标记的二抗来检测这种结合。
When a sample is applied to a slide or a well, the primary antibodies in the assay will bind to the specific antigen if it is present in the sample. This binding event is then visualized by the addition of fluorescently labeled secondary antibodies, which will bind to the primary antibodies. The resulting fluorescent signal can be observed under a fluorescence microscope, allowing for the detection and localization of the antigen within the sample.当样本被应用到载玻片或孔板上，如果样本中存在特定抗原，则检测中的一抗会与其结合。
免疫荧光层析原理
免疫荧光层析原理嘿，朋友们！今天咱来唠唠免疫荧光层析原理。
你说这免疫荧光层析，就好像是一场微观世界里的奇妙探险！想象一下，在我们看不见的地方，有那么一群“小战士”和“信号使者”在忙碌着。
免疫荧光层析的核心呢，就在于那些神奇的抗体和荧光标记物。
抗体就像是一个个精准的“小爪子”，专门去抓住它们要找的目标，而荧光标记物呢，就像是闪闪发光的“信号灯”。
当我们把样本加进去后，这就好比是给这些“小战士”下达了任务。
抗体们迅速行动起来，去寻找它们对应的目标，一旦抓住，嘿，那带着荧光标记物的复合物就形成啦！这时候，光就开始发挥作用啦。
就好像在黑暗中突然亮起了一盏盏小灯，这些荧光让我们能够清楚地看到发生了什么。
我们可以通过专门的仪器或者我们的眼睛，去观察这些荧光的分布和强度，从而了解样本中有没有我们想要检测的东西，以及有多少。
你说这是不是很神奇呀？这就好像我们有了一双超级微观的眼睛，能看到那些平常根本看不到的东西。
而且啊，免疫荧光层析的好处可多啦！它快速呀，不用等太久就能出结果，就像短跑选手一样迅速冲过终点线。
它还很灵敏呢，一点点的目标物质都能被检测出来，简直就是微观世界里的“神探”！咱再想想，要是没有免疫荧光层析，好多疾病的诊断该多麻烦呀！医生们可能就像在黑暗中摸索一样，很难准确地找到问题所在。
但有了它，就像是点亮了一盏明灯，指引着正确的方向。
所以呀，免疫荧光层析可真是个了不起的技术！它就像是一个默默工作的小英雄，在我们看不见的地方为我们的健康保驾护航。
咱可得好好珍惜和利用这个神奇的技术呀，让它为我们的生活带来更多的便利和保障。
这不就是科技的魅力所在吗？让我们能更好地了解这个世界，也更好地照顾自己和身边的人。
怎么样，免疫荧光层析是不是很厉害呀！。
量子点荧光免疫层析技术
量子点荧光免疫层析技术量子点荧光免疫层析技术（QD-FLISA）是一种快速、灵敏、特异性高的生物分析技术。
该技术利用量子点荧光材料的独特性质，在生物分析和生物医学成像领域有着广泛的应用。
量子点是一种纳米材料，其大小在1到10纳米之间，表面活性高，具有优异的光学和电学性能。
量子点荧光材料的特性是它们在受到光激发时可以发出强烈的荧光信号，并且荧光颜色可以根据粒子大小和化学成分的不同而改变。
因此，通过选择合适的量子点，可以实现对不同荧光信号的识别和分析。
QD-FLISA技术将量子点荧光材料与传统的酶标免疫层析技术相结合，在生物分析领域有着广泛的应用。
其基本原理是将含有荧光免疫物的混合物加到含有固定免疫物的微孔板中，使免疫物与免疫物配体结合。
然后，加入荧光检测物，使其与免疫物结合并形成荧光免疫复合物。
最后，用激光或其他光源对免疫复合物进行激发，测量荧光信号，并以此来分析免疫反应的结果。
与传统酶标免疫层析技术相比，QD-FLISA技术有着以下几个优点：首先，QD-FLISA技术具有更高的灵敏度。
由于量子点荧光材料的荧光强度比传统荧光物质更强，因此可以检测到更低浓度的免疫物。
其次，QD-FLISA技术具有更高的特异性。
由于不同大小和形状的量子点荧光材料可以被选择性地与免疫物结合，因此可以排除其他非特异反应的影响，从而提高了特异性。
第三，QD-FLISA技术具有更高的多重检测能力。
量子点荧光材料的荧光颜色可以根据粒子大小和化学成分的不同而改变，因此可以同时检测多个免疫物。
最后，QD-FLISA技术具有更短的检测时间。
由于量子点荧光材料的光激发和荧光衰减速率都比荧光标记的免疫物更快，因此可以更快地完成免疫反应和荧光信号检测。
总之，QD-FLISA技术作为一种新兴的生物分析技术，在生物医学领域具有广泛的应用前景。
随着科技的发展，相信该技术将不断完善和发展，为生物分析和生物医学研究带来更多的可能性。
量子点荧光免疫层析技术
量子点荧光免疫层析技术
量子点荧光免疫层析技术是一种新型的生物分析技术，它结合了量子点荧光技术和免疫层析技术的优点，具有高灵敏度、高特异性、高稳定性等优点，被广泛应用于生物医学领域。
量子点荧光免疫层析技术的原理是利用量子点的荧光性质和免疫层析技术的特点，将待检测的生物分子与特异性抗体结合，形成免疫复合物，然后通过量子点的荧光信号进行检测。
量子点荧光免疫层析技术具有高灵敏度和高特异性的优点，可以检测非常低浓度的生物分子，如蛋白质、核酸等。
量子点荧光免疫层析技术的应用非常广泛，可以用于生物医学领域的疾病诊断、药物筛选、生物分子检测等方面。
例如，在肿瘤标志物的检测中，量子点荧光免疫层析技术可以检测非常低浓度的肿瘤标志物，从而提高了肿瘤的早期诊断率。
在药物筛选中，量子点荧光免疫层析技术可以快速、准确地筛选出具有特定生物活性的化合物，从而加速了新药的研发过程。
量子点荧光免疫层析技术是一种非常有前景的生物分析技术，具有高灵敏度、高特异性、高稳定性等优点，可以广泛应用于生物医学领域，为疾病诊断、药物研发等方面提供了有力的支持。
荧光免疫层析法 定量
荧光免疫层析法定量一、荧光免疫层析法简介荧光免疫层析法（Fluorescent Immunoassay，FIA）是一种常用于生物分析和医学诊断的定量分析方法。
它基于免疫学原理，利用荧光标记的抗体与待测物相互作用，通过测量荧光信号的强度来定量分析待测物的浓度。
二、荧光免疫层析法原理荧光免疫层析法的原理基于免疫学的两个重要原理：抗原与抗体的特异性结合以及荧光标记技术。
1.抗原与抗体的特异性结合荧光免疫层析法利用抗原与抗体的特异性结合来检测待测物。
首先，待测物（通常是蛋白质或分子）被与之特异性结合的抗体捕获。
然后，荧光标记的二抗与被捕获的抗原-抗体复合物结合，形成荧光信号。
待测物的浓度可以通过测量荧光信号的强度来定量。
2.荧光标记技术荧光免疫层析法中，荧光标记的二抗是关键。
荧光标记的二抗是一种与荧光染料结合的二抗，通过荧光染料的发射信号来检测待测物。
常用的荧光染料有荧光素（Fluorescein）、罗丹明（Rhodamine）等。
荧光标记的二抗能够与抗原-抗体复合物结合，形成荧光信号，从而实现待测物的定量分析。
三、荧光免疫层析法的步骤荧光免疫层析法的步骤通常包括样品处理、反应体系构建、免疫反应、荧光信号检测和结果分析等。
1.样品处理样品处理是荧光免疫层析法中的第一步。
样品可以是血液、尿液、细胞培养液等。
在样品处理过程中，需要将样品与适当的缓冲液混合，以提取待测物，并去除干扰物质。
2.反应体系构建反应体系构建是荧光免疫层析法中的第二步。
在这一步骤中，需要将样品与荧光标记的二抗和捕获抗体混合，形成反应体系。
反应体系中的荧光标记的二抗能够与待测物结合，形成荧光信号。
3.免疫反应免疫反应是荧光免疫层析法中的核心步骤。
在这一步骤中，待测物与荧光标记的二抗之间发生特异性结合，形成抗原-抗体复合物。
这种特异性结合是荧光免疫层析法的关键，它使得待测物能够被准确地定量。
4.荧光信号检测荧光信号检测是荧光免疫层析法中的重要步骤。
荧光免疫层析技术原理进展46页PPT
11、用道德的示范来造就一个人，显然比用法律来约束他更有价值。—— 希腊
12、法律是无私的，对谁都一视同仁。在每件事上，她都不徇私情。—— 托马斯
13、公正的法律限制不了好的自由，因为好人不会去做法律不允许的事 情。——弗劳德
14、法律是为了保护无辜而制定的。——爱略特 15、像房子一样，法律和法律都是相互依存的。——伯克
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
Hale Waihona Puke 41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
荧光免疫层析技术原理进展
UCP应用举例
• 中科院报道了一种用 于免疫活性检测的UCP 试纸条读数计，采用 半导体激光器作为光 源，CCD作为光电接收 器，步进电机带动控 制试纸条移动的装置
• UCP 颗粒主要含有如 下三种成分: • 主基质：氧硫化物 （Y2O2S,GdO2S）、氟 化物(YF3,GdF3）、硅 酸盐 (YSi2O5,YSi3O7）... 3+ 3+ 3+ • 吸收子Yb Er Sm 3+ 3+ 3+ • 发射子Er Ho Tm
A3
S2
A2
S1
A1
UCP独特的优势
4有机纳米粒子 • 荧光素衍生物等荧光染料类有机纳米粒子是早期 常用于免疫层析技术中的一大类标志物，如异硫 • 氰酸酯荧光素，标记原理基本都是利用荧光分子 中的异硫氰酸根为反应基团，与蛋白分子中的氨 基结合，实现对蛋白的标记，同时以分子中的荧 光素为检测信号，早期应用研究较多。有机纳米 粒子的荧光发射依赖于粒子本身的化学发光集团 不具有无机纳米粒子的波长可调控的尺寸效应。
④生物相容性好 物理结合
化学偶联
量子点在免疫层析中的应用
• 量子点是一种新的荧光标记物，目前在免疫层析 中得应用相对UCP，胶体金较少见报道。 • 张国华，赖卫华等，量子点标记免疫层析试纸条 快速检测莱克多巴胺的研究[J]，2009，以CdSe 为标记物，对莱克多巴胺(一种苯酚胺类β-肾上腺 素激动剂)快速定量检测。 • 胡华军，付 涛等，CdTe / ZnSe 核壳量子点免疫 层析试纸条检测克伦特罗的研究，2010,检测克伦 特罗( Clenbuterol，CLE) —属于 β-兴奋剂类药物, 又称“瘦肉精”
c反应蛋白荧光免疫层析法
c反应蛋白荧光免疫层析法C反应蛋白荧光免疫层析法是一种常用的检测方法，用于检测体液中的C反应蛋白浓度。
本文将介绍C反应蛋白的概念、荧光免疫层析法的原理和应用，以及该方法的优缺点。
C反应蛋白是一种在炎症和感染等病理状态下产生的血浆蛋白，其浓度的变化可以反映炎症反应的程度。
C反应蛋白是由肝脏合成的一种球蛋白，其在炎症过程中受到刺激后会迅速上升。
因此，通过监测C反应蛋白的浓度可以评估炎症反应的严重程度，并辅助疾病的诊断和治疗。
荧光免疫层析法是一种基于免疫反应原理的检测方法，它结合了荧光技术和免疫层析技术的优势。
该方法利用特异性抗体与待检测样本中的C反应蛋白结合，形成免疫复合物。
随后，将荧光标记的二抗引入体系中，与免疫复合物结合，形成荧光标记的免疫复合物。
最后，通过荧光检测系统对荧光标记的免疫复合物进行定量测定，从而得到待测样本中C反应蛋白的浓度。
荧光免疫层析法具有许多优点。
首先，该方法具有较高的灵敏度和特异性，可以在较低浓度范围内准确检测C反应蛋白。
其次，荧光免疫层析法操作简便，结果可靠，且具有较短的检测时间。
此外，该方法可以同时检测多个样本，提高检测效率。
最重要的是，荧光免疫层析法不需要放射性标记物，对环境和人体健康无害。
荧光免疫层析法在临床诊断中有着广泛的应用。
例如，该方法常用于风湿性疾病、炎症性疾病和感染性疾病的诊断和治疗过程中。
通过检测C反应蛋白的浓度变化，可以帮助医生评估疾病的进展和治疗效果，指导疾病的治疗方案。
然而，荧光免疫层析法也存在一些限制和局限性。
首先，该方法对样本的处理要求较高，需要对待测样本进行预处理，以提取和纯化C反应蛋白。
其次，荧光免疫层析法的设备和试剂成本较高，对于一些医疗资源匮乏的地区可能不太适用。
此外，该方法在特定的样本类型中可能存在干扰物，可能会影响结果的准确性。
C反应蛋白荧光免疫层析法是一种可靠、快速、灵敏和特异的检测方法，在临床诊断中具有广泛的应用价值。
它可以帮助医生评估炎症反应的程度，指导疾病的诊断和治疗。
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双抗体夹心法
待测液含抗原Ag
(k)Ab1-Ag
(k)Ab1-Ag-Ab2
Ab3-(k)Ab1
(k)Ab1
阳性结果T,C均有颜
Ab2
色
T
C
待测液，不含抗原 Ag
(k)Ab1 (k)Ab1
(k)Ab1 Ab2
Ab3-(k)Ab1
阴性结果T无颜色， C有颜色
T
C
双抗体加心法检测原理图 K代表某一标记物
结合垫
• 待测பைடு நூலகம்在T线处发生特异性免疫反应。 • 游离物在C线处发生免疫反应。
待
层析方向
免疫反应
测
物
T
C
免疫层析技术基本原理示意图
精品课件
常用荧光免疫层析法
夹心法
竞争法
•双抗原夹心法 双抗体夹心法
精品课件
竞争法
待测物中的某种抗原与T（检测线）线处 同种抗原竞争性地与标记抗体相结合的过 程。
精品课件
竞争法
待
层析方向
免疫反应
测
物
T
C
免疫层析技术基本原理示意图
精品课件
荧光（fluorescence）
• 荧光物质吸收激发光的能量后，电子从基态跃
迁到激发态，当其回复至基态时，以发射光形式 释放出能量，称为荧光。
发射光谱和激发光谱
➢ 发射光谱是指固定激发波长，在不同波长下
记录的样品发射荧光的强度。
➢ 激发光谱是指固定检测发射波长，用不同波
精品课件
荧光淬灭
• 定义:荧光物质在某些理化因素作用下，发 射荧光减弱甚至消退称为荧光淬灭。
• 引起荧光淬灭的因素：有如紫外线照射、 高温、某些硝基化合物、重氮化合物等。
精品课件
• 免疫层析技术以固定有检测线和控制线的条状纤 维层析材料为固定相，测试液为流动相，通过毛 细作用使待测物在层析条上移动。
结合垫
含抗原 A
精品课件
免疫层析法检测的实物 图
Y1:A的单抗与标记物的偶联体 Y2：抗原A Y3:羊抗鼠二抗
夹心法
• 待测物中某种抗体（抗原）与T线处抗原A （抗原A）以及荧光标记的抗原（抗体）特 异性相结合的过程，在T线处形成抗体A+抗 原+抗体B形式的夹心结构。
结合垫
精品课件
免疫层析法检测的实物 图
精品课件
免疫层析法
• 免疫层析技术是建立在层析技术和抗 原一抗体特异性免疫反应基础上的一 项新兴免疫检测技术。
精品课件
• 免疫层析技术以固定有检测线和控制线的条状纤 维层析材料为固定相，测试液为流动相，通过毛 细作用使待测物在层析条上移动。
• 待测物在T线处发生特异性免疫反应。 • 游离物在C线处发生免疫反应。
• 由于蛋白分子牢固地结合在金颗粒表面，形成一 个蛋白层，阻止了胶体金颗粒的相互接触，而使 胶体金处于稳定状态。
精品课件
• 胶体金作为标志物有以下优势: • ①几乎可标记所有的蛋白分子，过程简单
，效率高，用量少，便宜，基本不改变被 标记蛋白的活性。且稳定，无毒，使用方 便，保质期长。 • ②不同直径的纳米金可以用于多重标记。 • ③结果判断只需普通光学仪器或直接肉眼 观察。
• ③使用简便，安全无毒，可适用于定量分析与多 重分析，在一般的实验室或野外现场都可轻松应 用.
精品课件
胶体金作为标记物的应用
精品课件
试孕纸
精品课件
精品课件
应用（定量）
• 08天津大学精密仪器 与光电子工程学院与 天津市进出口检验检 疫局合作开发研发一 种便携式仪器。
• 竞争法原理 • 用于农药残留定量检
测
精品课件
2 镧系元素 • 镧系元素又称为稀土金属元素，指元素周
期表中原子序数 57～71 的所有元素。
长的激发光激发样品记录的相应的荧光发射
强度。
精品课件
荧光效率
定义:荧光物质分子将光能转变成荧光的百分率
计算公式:
发射荧光的光量子荧 数光 （强度）
荧光效率= 吸收光的光量子数发 （光 激强度）
荧光寿命
➢定义:荧光物质被激发后所产生的荧光衰减到一定程 度时所用的时间。 ➢各种荧光物质的荧光寿命不同。
精品课件
免疫层析法检测的实物 图
双抗原夹心法
双抗原夹心反应模式阳性检测（左）与阴性检测（右）
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• 利用荧光免疫层析试纸条可以实现对待测 物的定性或者定量检测.
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其他 碳纳米管
胶体金 标记物
量子点 镧系元素
纳米磁性材料
有机纳米粒子
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胶体金
• 金颗粒之间存在的静电斥力使其在水中保持相 对稳定的状态，形成稳定的水溶性胶体，即称 为胶体金
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• 固定相是固体物质或固定于固体物质上的 成分。
• 流动相是可以流动的物质，如水或各种溶 剂。
• 层析过程：当待分离混合物随流动相通过 固定相时，由于混合物各组分的理化性质 的差异，与固定相相互作用弱的组分随流 动相移动时受到的阻滞作用小，向前移的 速度快；与固定相相互作用强的组分向前 移动的速度慢。从而实现混合物中各组分 的分离。
荧光免疫层析技术的原理与进展
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荧光免疫层析技术的基本原理
层析法(chromatography)的原理是利用混 合物中各组分的物理性质之差(如吸附力、 分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、 分配系数等)而建立来的一种分离技术。 层析系统是由固定相(stationary phase) 和流动(Mobile Phase)相组成。
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• 两种不同镧系元素离子( 分别作为光 吸收子和发射子) 掺杂入亚微米尺寸 的陶瓷颗粒( 作为主基质) 中，会构 成一类能上转发光产生荧光的特殊材 料。—— UCP( up-converting phosphor，UCP) 颗粒。
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• UCP 颗粒主要含有如
A3
下三种成分:
• 主基质：氧硫化物（
Y2O2S,GdO2S）、氟化
物(YF3,GdF3）、硅酸 S2
A2
盐(YSi2O5,YSi3O7）...
• 吸收子Yb3+ Er3+ Sm3+
• 发射子Er3+ Ho3+ Tm3+ S1
A1
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UCP独特的优势
• ①高敏感性，有报道 UCP 的灵敏度可达胶体金的 100 倍。
• ②高稳定性，UCP 的发光信号不受检测环境或样 品腐蚀或标志物自身衰变等的影响，可长期存放 和可重复。
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• 胶体金既有明亮的色彩， 又有高电子密度，可以吸 附生物大分子，且不影响 生物分子的活性，故可作 为生物分子的标志物，用 于免疫反应中抗原或抗体 的标记定位，定性甚至定 量研究。层析试纸标记用 金颗粒的直径大多在 20 ～ 40 nm，呈深红色。
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• 胶体金标记蛋白质的过程是蛋白被动吸附到金颗 粒表面的过程。