细胞融合技术·干细胞工程·克隆技术
细胞工程应用PPT课件
干细胞是具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞，是构成人体各种组织器官 的原始细胞。根据分化能力的不同，干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞。
详细描述
干细胞具有自我复制的能力，即产生与自身完全相同的细胞，保持数目恒定。 同时，干细胞具有多向分化的潜能，在特定条件下可分化成不同类型的细胞， 参与组织器官的修复和再生。
02
细胞培养技术
细胞培养的定义与分类
定义
细胞培养技术是指将生物组织或细胞从体内取出，并在体外模拟 体内环境进行培养、繁殖和维持其生命活动的过程。
分类
根据培养目的和应用的不同，细胞培养技术可以分为原代细胞培 养、传代细胞培养、干细胞培养和肿瘤细胞培养等。
细胞培养的基本条件
温度
细胞生长和代谢需要稳定的温度条件，一般维持 在37°C左右。
组织工程
通过细胞培养技术构建组织或 器官，用于移植治疗和再生医 学研究。
毒理学研究
利用细胞培养技术检测化学物 质、药物等的毒性作用，为新 药研发和安全性评估提供依据 。
基因工程
通过细胞培养技术实现基因转 移、基因敲除和基因编辑等操 作，为基因功能研究和基因治
疗提供手段。
03
干细胞工程
干细胞定义与分类
在医学方面，克隆技术 可以用于生产用于移植 的器官和组织，以及用 于研究人类疾病和开发 新药的细胞系。
在农业方面，克隆技术 可以用于繁殖优良品种 的动植物，提高农业生 产效率。
在生物多样性保护方面 ，克隆技术可以用于保 护濒危物种和恢复生态 平衡。
05
基因编辑技术
基因编辑技术简介
基因编辑技术主要依赖于特定的核酸酶，如ZFNs（锌 指核酸酶）、TALENs（转录激活因子样效应物核酸酶） 和CRISPR-Cas9系统等，这些核酸酶能够识别并切割 DNA或RNA分子，从而实现对其的精确编辑。
细胞工程期末复习-名词解释
细胞工程复习题一、名词解释[1]细胞工程：是指主要以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。
[2]细胞融合：是指使用人工方法使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技术。
[3]细胞重组：从活细胞中将细胞器及其组分分离出来，再在体外一定条件下将不同来源的细胞器及其组分重新组合，使之重新装配成为具有生物活性的细胞或细胞器的一种实验技术[4]细胞培养：泛指所有体外培养，其含义是指从动物活体体内取出组织，于模拟体内生理环境等特定的体内条件下，进行孵育培养，使之生存并生长[5]细胞全能性：指分化细胞保留全部的核基因组，具有生物个体生长、发育所需要的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能。
[6]细胞分化：是指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程，包括时间上和空间上的分化。
[7]细胞核移植：是一种利用显微操作技术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核成熟卵细胞内的技术。
主要包括胚胎细胞核移植和体细胞核移植。
[8]细胞悬浮培养：是将细胞接种于液体培养基中并保持良好的分散状态的培养方式[9]细胞系：由原代培养经传代培养纯化，获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。
第一次传代培养后的细胞即称之为细胞系[10]细胞株：是指从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株[11]细胞凋亡：也叫程序性细胞死亡是机体维持环境稳定、有基因控制的细胞自主的有序性死亡[12]细胞团培养：细胞培养时，本身代谢就慢或者脆弱，细胞密度太低或者太高都会导致细胞的凋亡，死亡的细胞裂解物包裹未凋亡的细胞形成絮状物，这些絮状物在显微镜下看就是细胞聚集。
[13]体细胞核移植：体细胞核移植又称体细胞克隆，原理即细胞核的全能性，是动物细胞工程技术的常用技术手段[14]冠瘿组织：是由根癌农杆菌感染引起的植物肿瘤组织，它能在无外加植物激素的培养基上生长。
《现代科学技术概论》提纲第二章到第四章
现代科学技术概论提纲第二章1.现代物理学包括狭义相对论、广义相对论、量子力学与基本粒子理论。
2.两朵乌云：第一朵是黑体辐射问题；第二朵是关于光速的迈克耳逊-莫雷实验。
3.牛顿力学把绝对空间做匀速直线运动的参照系称为“惯性系”。
4.爱因斯坦采取的态度是：先确定宇宙中相互联系的基本过程——光速，这是一个宇宙常数，然后定义异地时间。
5.时间间隔与空间距离的相对性：两事件的时间间隔相对性、空间距离的相对性。
6.广义相对性原理：惯性系与非惯性系不可区分。
7.等效原理：引力质量与惯性质量无法区分。
8.英国物理学家汤姆逊把广义相对论称作为人类历史上最伟大的成就之一，一方面是由于这个理论的立论基础如此简单与完美，另一方面是因为它引起了人类思想的全面变革。
9.霍金与广义相对论：他被认为当代最重要的广义相对论专家和宇宙论家，被称为在世的最伟大的科学家。
10.霍金代表作《时间简史》11.黑洞面积：随时间增加，面积不变12.相对论的意义（论述）13.如果说迈克耳逊-莫雷实践等引起的光速之谜导致了相对论的提出，那么，关于黑体辐射的“紫外灾难”则导致了量子力学的创建14.所谓“绝对黑体”指的是百分之百吸收照射到其上的物体15.绝对黑体内高于某一频率的无限多的驻波，其能量总和将必然是无限的！这就是著名的“紫外灾难”16.老三论：世界系统结构的科学（解释名词）●信息概念与信息论●“可能性空间”与控制论●整体性与系统论17.申农的“最小努力量原理”——人们总是力图用最小的力量来完成既定事件18.传播信息的通道称为信道。
某一信道1秒内能够通过的信息量（比特）是信道的传播速率，称比特率19.用信息论的观点来分析事物、理解事物和改造事物的方法，称为“信息方法”20.控制论的最基本的思想要素是“可能性空间”。
维纳—“可能性空间”21.负反馈（课本71页图）22.“新三论”又称“自组织理论”23.耗散结构理论—普利高津、哈肯的协同学理论、艾根的超循环理论。
克隆技术发展简介
克隆技术简介克隆技术，是由同一个祖先细胞分裂繁殖而形成的纯细胞系，该细胞系中每个细胞的基因彼此相同。
一个克隆就是一个多细胞生物在遗传上与另外一个生物完全一样。
克隆可以是自然克隆，例如由无性生殖或是由于偶然的原因产生两个遗传上完全一样的个体（例如同卵双生一样）。
但是我们通常所说的克隆是指通过有意识的设计来产生的完全一样的复制。
“克隆”的来源及发展克隆技术，已经经历了三个发展时期：第一个时期是微生物克隆，即用一个细菌很快复制出成千上万个和它一模一样的细菌，而变成一个细菌群；第二个时期是生物技术克隆，比如用遗传基因――DNA克隆；第三个时期是动物克隆，即由一个细胞克隆成一个动物。
克隆绵羊“多利”由一头母羊的体细胞克隆而来，使用的便是动物克隆技术。
克隆技术的设想是由德国胚胎学家于1938年首次提出的，1952年，科学家首先用青蛙开展克隆实验，之后不断有人利用各种动物进行克隆技术研究。
由于该项技术几乎没有取得进展，研究工作在80年代初期一度进入低谷。
后来，有人用哺乳动物胚胎细胞进行克隆取得成功。
1996年7月5日，英国科学家伊恩·维尔穆特博士用成年羊体细胞克隆出一只活产羊(多莉)，给克隆技术研究带来了重大突破，它突破了以往只能用胚胎细胞进行动物克隆的技术难关，首次实现了用体细胞进行动物克隆的目标，实现了更高意义上的动物复制。
多莉与那头6岁母羊具有完全相同的基因，可谓是它母亲的复制品。
具体有四个步骤如下①从一只六岁雌性的芬兰多塞特(Finn Dorset)白面绵羊（称之为A）的乳腺中取出乳腺细胞，将其放入低浓度的培养液中，细胞逐渐停止分裂，此细胞称之为供体细胞。
②从一头苏格兰黑面母绵羊（称之为B）的卵巢中取出未受精的卵细胞，并立即将细胞核除去，留下一个无核的卵细胞，此细胞称之为受体细胞。
③利用电脉冲方法，使供体细胞和受体细胞融合，最后形成融合细胞。
电脉冲可以产生类似于自然受精过程中的一系列反应，使融合细胞也能像受精卵一样进行细胞分裂、分化，从而形成胚胎细胞。
生物技术概论考试复习题解答
现代生物技术概论复习题一、名词解释1、生物技术：也称生物工程，是人们以现代生命科学为基础，结合先进的工程技术手段和其他基础科学的科学原理，按照预先的设计，改造生物体或加工生物原料，为人类生产出所需产品或达到某种目的的一门新兴的、综合性的学科。
2、基因组DNA文库：将某一种基因DNA用适当的限制酶切断后，与载体DNA重组，再全部转化宿主细胞，得到含全部基因组DNA的种群，称为基因组DNA文库。
3、蛋白质工程是指：利用基因工程的手段，在目标蛋白的氨基酸序列上引入突变，从而改变目标蛋白的空间结构，最终达到改善其功能的目的。
4、基因工程：在体外将外源基因进行切割并与一定的载体连接，构成重组DNA分子并导入相应受体细胞，使外源基因在受体细胞中进行复制、表达，使目的基因大量扩增或得到相应基因的表达产物或进行定向改造生物性状。
简单概括，就是将外源目的基因与载体重组后再进入宿主细胞的过程。
5、发酵工程：是发酵原理与工程学的结合，是研究由生物细胞（包括动植物、微生物）参与的工艺过程的原理和科学，是研究利用生物材料生产有用物质，服务于人类的一门综合性科学技术。
6、基因和基因组DNA分子中具有特定生物学功能的片段称为基因（gene）。
一个生物体的全部DNA序列称为基因组（genome）5、载体：把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术，送进受体细胞中去进行繁殖或表达的工具称为载体。
6、cDNA文库：即由mRNA经过反转录成cDNA,然后来构建文库，构建的文库不包含内含子。
7、转化:外源DNA导入宿主细胞的过程称之为转化。
8、重叠基因：一个基因序列中，含有另一基因的部分或全部序列。
9、基因组文库：把某种生物基因组的全部遗传信息通过载体贮存在一个受体菌克隆子群体中，这个群体即为这种生物的基因组文库。
10、细胞工程：以生物细胞、组织或器官为研究对象，运用工程学原理，按照预定目标，改变生物性状,生产生物产品，为人类生产或生活服务的科学。
新教材高中生物第2章细胞工程 动物细胞融合技术与干细胞技术教师用书苏教版选择性必修3
第2课时动物细胞融合技术与干细胞技术课标内容要求核心素养对接1.阐明动物细胞融合是指通过物理、化学或生物方法,使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
2．概述细胞融合技术是单克隆抗体制备的重要技术。
3．简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值。
生命观念：以细胞结构与功能为基础,理解动物细胞融合的过程及原理。
科学思维：结合具体实例,以流程图的形式表示单克隆抗体的制备过程。
社会责任：说明干细胞在疾病治疗、新药的研制和开发等领域的应用及发展潜力。
一、动物细胞融合技术及其应用1．动物细胞融合技术(1)概念：在一定条件下将两个或多个动物细胞,通过物理、化学或生物方法,结合形成一个细胞的技术。
(2)诱导方法①生物方法：仙台病毒、疱疹病毒、腮腺炎病毒。
利用仙台病毒诱导动物细胞融合的过程示意图如下：②化学方法：聚乙二醇诱导融合法成功率高,但有一定毒性。
③物理方法：采用电场诱导融合法。
对细胞伤害小,易操作、控制和观察。
成为细胞融合的重要技术手段。
(3)融合过程细胞质膜出现粘连、破裂和融合→进而细胞质和细胞核的融合→形成杂种细胞→挑选所需要细胞(4)诱导对象：同物种细胞和不同物种的细胞。
2．单克隆抗体(1)概念：单个细胞进行无性繁殖形成的细胞群产生的化学性质单一、特异性强的抗体。
(2)传统抗体的不足含有多种抗体的混合抗体,不能专一性地对付某一类病原体,治疗效果不佳。
(3)单克隆抗体的制备流程(4)应用①制备单克隆抗体靶向制剂：化疗药物与单克隆抗体结合,对肿瘤细胞有较好的选择性杀伤作用。
②疾病诊断：单克隆抗体检测相关抗原是否表达及其表达水平,作为肿瘤诊断的辅助方法；用同位素标记某种单克隆抗体,诊断结肠癌肿瘤病灶是否已经转移。
③导向手术：利用同位素标记的单克隆抗体在体内显示肿瘤位置,用以指导手术范围。
二、干细胞技术及其应用1．干细胞的概念：动物(包括人)胚胎及某些器官中同时具有自我更新和分化能力的细胞。
2．干细胞的形态特点：通常呈圆球形或椭圆球形,细胞体积小,核相对较大。
3.细胞融合及单克隆抗体的制备
(3) 细胞融合： 50%PEG(400~1000), pH8.0, 37oC, 2min
3.融合细胞的筛选
融合后细胞混合液
HAT培养基
2 weeks later
HT培养基
1 week later
正常培养基
4.抗体的检测
常用方法：
要求： ➢ 简便、快速、敏感; ➢ 在短时间内能检测大量样品
+3.6ml M
150ul/孔
E、F、 G、H
调细胞浓度为1-5х103cell/ml 取100个cell于7.2ml完全培养液 (M)中
2个cell/孔
1个cell/孔
0.5个cell/孔
6.杂交瘤细胞的鉴定
染 色 体 核 型 分 析
大规模培养——批量生产单克隆抗体
常用的大规模培养方法：
动物接种法 转瓶培养法
溶液能产生最多杂交细胞。 PEG溶液在pH6.0时细胞融合率最高。
PEG诱导融合的特点：其优点是融合成本低，勿 需特殊设备；融合子产生的异核率较高；融合过 程不受物种限制。其缺点是融合过程繁琐，PEG 可能对细胞有毒害。
PEG的作用机理： Kao等认为，由于PEG分子具有 轻微的负极性，故可以与具有正极性基团的水、蛋 白质和碳水化合物等形成H键，从而在在质膜之间 形成分子桥，其结果是使细胞质膜发生粘连进而促 使质膜的融合；另外，PEG能增加类脂膜的流动 性，也使细胞的核、细胞器发生融合成为可能。
电融合的基本过程：
细胞膜的接触：当原生质体置于电导率很低的溶液
中时，电场通电后，电流即通过原生质体而不是通过 溶液，其结果是原生质体在电场作用下极化而产生偶 极子，从而使原生质体紧密接触排列成串；
细胞工程主要技术PPT课件
通过基因敲除、基因转录和基 因编辑等技术对动物基因进行 修饰，以获得具有特定性状的
动物个体。
植物克隆技术
组织培养技术
将植物的离体组织或细胞培养成植株 的技术。
植物基因转化技术
将外源基因导入植物细胞或组织中， 再通过组织培养获得转基因植株。
植物细胞悬浮培养技术
将植物细胞悬浮在培养基中，进行大 规模培养，以生产次生代谢产物或培 育新品种。
基因敲除技术
基因敲除技术是指通过特定的方法将 生物体中的某个基因敲除或沉默，以 研究其功能的一种技术。
基因敲除技术可以用于研究基因的功 能和作用机制，以及用于治疗某些遗 传性疾病。
该技术通过同源重组或CRISPR-Cas9 等技术，将靶基因敲除或使其失效， 以研究其对生物体生长发育和代谢等 方面的作用。
成体干细胞在医学上具有广泛的应用前景，可用于治疗心肌梗死、脑梗塞等疾病。
诱导多能干细胞（iPS）
诱导多能干细胞（iPS）是通过 基因工程技术将成体细胞诱导 回转录为胚胎干细胞样细胞的 干细胞。
iPS细胞的产生避免了胚胎干细 胞的伦理道德问题，同时具有 与胚胎干细胞相似的多能性。
iPS细胞在医学上具有巨大的应 用潜力，可用于疾病模型的建 立、药物筛选和个性化治疗等 领域。
过程
02
将两个待融合的细胞用聚乙二醇处理，使细胞膜表面张力降低，
细胞膜相互靠近并融合。
应用
03
用于制备杂交瘤细胞、基因转导等。
细胞生物融合
01
02
03
原理
利用病毒或细菌等生物因 子诱导细胞融合。
过程
将病毒或细菌与待融合的 细胞共培养，病毒或细菌 会吸附在细胞表面并诱导 细胞融合。
什么是克隆技术
什么是克隆技术克隆技术是一种利用生物技术手段复制生物体的过程。
它可以通过不同的方法实现对生物体的复制，包括植物、动物和微生物等各类生物体。
克隆技术的发展给科学研究和应用带来了重大的突破和影响。
下面将对克隆技术的定义、分类、原理和应用等进行详细介绍。
一、克隆技术的定义克隆技术是指通过人为手段，利用生物体的细胞、组织或基因等，复制出与原始生物体具有相同或相似遗传信息的新个体的过程。
克隆技术可以分为两种类型：一是重组克隆，即通过基因工程技术将目标基因导入宿主细胞中，使其表达出目标蛋白；二是整体克隆，即通过核移植或胚胎分裂等方式复制整个生物体。
二、克隆技术的分类根据克隆技术的方法和对象的不同，可以将克隆技术分为以下几类：1. 分子克隆技术：通过DNA重组技术将目标基因导入宿主细胞中，实现对基因的复制和表达。
这种克隆技术被广泛应用于基因工程、药物研发和农业改良等领域，如重组DNA技术、基因克隆和表达等。
2. 细胞克隆技术：通过细胞核移植，将一个细胞的细胞核移植到另一个无细胞核的受体细胞中，使其发育成一个与原始细胞相同或相似的新个体。
这种克隆技术被广泛应用于动物繁殖、干细胞研究和医学治疗等领域，如体细胞核移植、胚胎分裂和体外受精等。
3. 植物克隆技术：通过植物组织培养和植物器官再生等技术手段，将植物的细胞或组织培养并分化成一个与原始植物相同或相似的新个体。
这种克隆技术被广泛应用于植物繁殖、农业生产和园艺育种等领域，如离体培养、植物再生和遗传转化等。
4. 微生物克隆技术：通过微生物的分裂、发酵和复制等过程，复制出与原始微生物具有相同或相似遗传信息的新微生物体。
这种克隆技术被广泛应用于微生物研究、工业生产和环境修复等领域，如微生物发酵、细菌复制和酵母分裂等。
三、克隆技术的原理不同类型的克隆技术有不同的原理和操作步骤，但整体上可以归纳为以下几个关键步骤：1. 获取原始材料：根据克隆的目标和对象，选择合适的细胞、组织或基因等作为原始材料。
细胞融合技术
动物细胞融合
动物细胞融合
有 何 同 ？ 不 同 ？
植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较
细胞工程 实质内容 植物体细胞杂交 动物细胞融合
改变遗传物质、产生新的性状，获得细胞产品 使后代具有双亲 改变遗传物质、产生新的性状，获得细胞产品(使后代具有双亲 的特性) 的特性 细胞膜的流动性;细胞增殖 细胞膜的流动性 细胞增殖 物理法：离心、振动、 物理法：离心、振动、电激 化学法： 化学法：聚乙二醇 生物法： 生物法：灭活的病毒 获得分离的单个动物细胞 (胰蛋白酶处理 胰蛋白酶处理) 胰蛋白酶处理 ↓ 诱导融合 ↓ 动物细胞培养 (细胞产品 细胞产品) 细胞产品 主要用于单克隆抗体的制备 (杂交瘤细胞 杂交瘤细胞) 杂交瘤细胞
细胞膜的流动性;植物细胞全能性 理论基础 细胞膜的流动性 植物细胞全能性 诱导手段 物理法：离心、振动、 物理法：离心、振动、电激 化学法： 化学法：聚乙二醇 去细胞壁 (纤维素酶、果胶酶 纤维素酶、 纤维素酶 果胶酶) ↓ 原生质体融合 (获得杂种原生质体 获得杂种原生质体) 获得杂种原生质体 ↓ 植物细胞培养 (获得植株 获得植株) 获得植株 获得白菜-甘蓝等杂种植物 获得白菜 甘蓝等杂种植物
单克隆抗体
（三）单克隆抗体的应用
①诊断疾病（识别作用， 诊断疾病（识别作用， 如同位素标记单克隆抗 可诊断肿瘤、 体，可诊断肿瘤、心血 诊断乳腺癌单克隆抗体 管畸形等）优点：准确、高效、简易、 管畸形等）优点：准确、高效、简易、快速 ②用于治疗疾病和运载药物 主要用于癌症治疗， （主要用于癌症治疗，也可运 载药物， 生物导弹” 载药物，如 “生物导弹”）
选择培养基上培养
专一抗体 检验阳性
多种杂交细胞
杂交瘤细胞有何特点？ 杂交瘤细胞有何特点？
细胞融合技术、干细胞工程、克隆技术ppt课件(自制)
解析：单克隆抗体是由免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后 的杂交瘤细胞产生的，其制备过程是先用SARS病毒核衣壳蛋 白刺激机体产生相应的B淋巴细胞，将B淋巴细胞(不能无限增 殖但能产生专一性的抗体)与骨髓瘤细胞(能无限增殖但不能产 生专一性的抗体)相融合，经过筛选，去掉相同细胞的融合体， 再经抗原—抗体检测，得到既能无限增殖又能产生专一抗体 的杂交瘤细胞，经体内培养或体外培养就可获得相应的单克 隆抗体。通过单克隆抗体与病毒特异性结合可诊断是否被病 毒感染。 答案：C
目前不适用于高体重成人， 另外，血小板恢复较慢
范围；成功率高
6.干细胞应用前景非常广阔，比如可用于细胞治疗、基因治疗、 药物筛检和毒性的检测、生物体发育机制研究等。其中最吸引 人的应用，是将干细胞分化成某一特定的细胞、组织，甚至器 官，通过移植，使之再建起受损的组织，甚至器官。比如，将 干细胞在体外分化为胰岛细胞，注入病人胰脏中，通过增殖， 构成病人新的胰岛组织，它就可以替代病人受损的胰岛组织， 使依赖注射胰岛素维持生命的病人得到根治。人们预言，干细 胞有可能用于治疗人类几乎所有的组织坏死性或退化性疾病， 它将是人类医疗史上的一次革命。
3．(2009·潍坊模拟)下列关于单克隆抗体制备过程的叙述，正 确的是( ) A．制备过程中不需要动物细胞培养技术 B．杂交瘤细胞具有浆细胞与癌细胞的所有特点 C．经选择性培养基筛选出来的杂交瘤细胞即可用于单克 隆抗体的生产 D．单克隆抗体最广泛的用途是用作体外诊断试剂
解析：单克隆抗体的制备是将骨髓瘤细胞与浆细胞结合，经 过选择培养基的筛选得到杂交瘤细胞并经单一抗体检测后， 培养能产生特定抗体的杂交瘤细胞即可得单克隆抗体，杂交 瘤细胞能无限繁殖但不具有癌细胞的转移能力。 答案：D
4．该技术的目的 植物体细胞杂交的终点是培育成杂种植株，而不是形成杂 种细胞就结束。杂种植株特征：具备两种植物的遗传特征， 原因是杂种植株中含有两种植物的遗传物质。
动物细胞工程发展和现状
动物细胞工程发展和现状摘要：本文简要的介绍了动物细胞工程的一些方法和实际应用，包括细胞培养技术，细胞融合技术，胚胎工程技术，克隆技术等方面，这些技术对今后生物技术的发展奠定了理论基础。
关键词：动物细胞工程细胞培养技术细胞融合技术胚胎工程技术1、动物细胞工程简介动物细胞工程是根据细胞生物学及工程学原理，定向改变动物细胞内的遗传物质从而获得新型生物或特种细胞产品的一门技术。
这一技术在生物制药的研究和应用中起关键作用，目前全世界生物技术药物中使用动物细胞工程生产的已超过80%，例如蛋白质、单克隆抗体、疫苗等。
当前动物细胞工程制药所涉及的主要技术领域包括细胞融合技术、细胞核移植技术、转基因动物技术和细胞大规模培养技术等方面。
细胞培养技术细胞培养是指从体内组织取出细胞摹拟体内出现环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使期生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。
细胞培养的培养物为单个细胞或细胞群。
细胞培养也是研究病毒与研制疫苗的基础技术，因此细胞培养技术在遗传学、免疫学、肿瘤学、病毒学、分子生物学等领域已得到广泛的应用。
2、细胞融合技术简介细胞融合就是指在外力(诱导剂或促融剂)作用下，两个或两个以上的异源(种、属间)细胞或原生质体相互接触，从而发生膜融合、胞质融合和核融合并形成杂种细胞的现象称为细胞融合或细胞杂交。
如取材为体细胞则称体细胞杂交，体细胞融合后可形成四倍体或多倍体细胞，由此形成的杂交细胞，其特性会有很大的变化。
细胞融合不受种属的局限，可实现种间生物体细胞的融合，使远缘杂交成为可能，因而是改造细胞遗传物质的有力手段。
细胞融合技术避免了分离、提纯、剪切、拼接等基因操作，在技术和仪器设备上的要求不像基因工程那样复杂，投资少，有利于广泛开展研究和推广，有着重大的实践意义，正得到科学界的日益重视。
细胞融合技术可用于基因定位和绘制人类基因图谱，生产树突状细胞抗肿瘤疫苗，生产单克隆抗体，细胞疗法。
细胞工程(动物部分)
绪论1.细胞培养与组织培养：属于体外培养，是指生物细胞和组织在离体条件下的生长和增值。
细胞的离体培养称为细胞培养，组织的离体培养称为组织培养。
2.细胞融合：又称细胞杂交，是指两个或两个以上的细胞融合形成一个细胞的过程。
3.细胞核移植：是利用显微镜操作技术将细胞核与细胞质分离，然后再将不同来源的核与质重组，形成杂合细胞的过程。
4.干细胞：是动物体内具有分化潜能、并能自我更新的细胞，分为胚胎干细胞和组织干细胞。
5.转基因动物：是通过基因工程技术将外源的目的基因导入受体动物染色体内，外源基因与动物基因整合后随细胞的分裂而扩增，在体内表达并能稳定地遗传给后代的动物。
第一章1.细胞工程实验室与其他一般实验室的区别：要求保持严格无菌环境、避免微生物及其他有害因素的影响。
2.细胞工程能进行的六方面工作：无菌操作、培养、制作、清洗、消毒灭菌处理和储藏。
3.植物细胞工程实验室特殊的设置：光照条件的培养箱、试管苗需要温室和移植驯化室。
4.细胞工程实验室通用的仪器设备：超净工作台、二氧化碳培养箱、倒置显微镜、电热干燥箱、水纯化装置、低温装置、高压蒸汽消毒器。
5.实验室的生物安全分为p1，p2 ，p3 和p4四个生物安全等级，其中P4生物安全实验室等级最高。
第二章1.清洗的主要目的是清除培养器皿中的杂质和微生物等影响细胞生长的成分。
2.细胞培养过程中主要使用两类消毒方法:物理灭菌法法和化学消毒法。
物理法灭菌法：a.紫外线法适用于无菌室或超净工作台的台面等大面积消毒。
紫外线照射工作台面的距离不应超过1.5cm,照射时间以30min左右为宜。
（注意：紫外灯关闭5min后方可进入使用）b. 湿热消毒:适用于含有不耐热成分的培养基和试剂的消毒，为121.3℃，20min .（注意点：加足水、排尽气、气压降到0时才能打开盖）c.干热消毒法:适用于消毒玻璃仪器，160℃以上，并保持90~120min，以杀死细菌和芽孢 d.过滤除菌：是将液体或气体用微孔薄膜过滤,薄膜0.22~0.45um直径。
细胞工程(cell engineering)技术
细胞工程（cell engineering）技术广义的细胞工程（cell engineering）指所有应用于生物学和医学的、以细胞为操作对象的技术手段，其中也包括细胞培养。
一般地说，细胞工程主要指应用各种手段对细胞不同结构层次(整体、细胞器、核、基因等)进行改造，如进行细胞融合、核移植、基因转移等，以获得具有特定生物学特性的细胞。
一．细胞融合技术在细胞自然生长情况下，或在其他人为添加因素存在下，使同种细胞之间或不同种类细胞之间相互融合的过程，即为细胞融合（cell fusi on）。
通过细胞融合，可将来源于不同细胞核的染色体结合到同一个核内，结果形成一个合核体的杂种细胞。
细胞在生长过程中，可能发生自发的融合，但几率很低。
在实际工作中常采用各种促融合手段，包括病毒类融合剂如仙台病毒、化学融合剂如聚乙二醇（PEG）及电激融合法等。
在进行细胞融合反应和适当时间的培养后，需要通过一定方法对两种亲本细胞融合产生的具有增殖能力的杂种细胞进行筛选。
筛选方法主要包括药物抗性筛选、营养缺陷筛选和温度敏感性筛选等。
细胞融合最典型的应用是单克隆抗体技术。
细胞融合技术的发展和骨髓瘤细胞株的建成促成了B细胞杂交瘤技术的建立和单克隆抗体技术的成功。
1975年Koehler和Milstein将用绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞和体外培养能长期繁殖的小鼠骨髓瘤细胞融合，获得了具有两种亲本细胞特性的杂交细胞，即既能在培养条件下长期生长增殖，又能分泌特异的抗绵羊红细胞的抗体的B淋巴细胞杂交瘤。
对这种融合细胞进行克隆化以后，即可获得来自同一细胞克隆的抗体，这种抗体具有高度的均一性，称为单克隆抗体。
二．核移植技术细胞核移植（nuclear transfer）是指将一个双倍体的细胞核（可来自胚胎细胞或体细胞）移植到去核的成熟卵母细胞或受精卵中。
重组的卵细胞可以植入母体，并能发育为与供核细胞基因型相同的后代，因此又称为动物克隆技术。
1997年诞生的克隆羊“多利”就是体细胞核移植技术的产物。
生物技术概论细胞工程
5、融合细胞的发育动态 (1)核质重组 核1+质1+核2+质2 核1+质1+核2 核1+核2+质2 核1+质1+质2 核2+质1+质2 核1+质2 质1+核2
(2)细胞器重组：线粒体 叶绿体 (3)部分核物质或细胞器丢失 (4)核分裂的非同步性 6、融合体细胞杂种的特点 形态上的趋中性：大小、形状等 变异幅度大 非整倍性 双亲性状的共显性 偏亲现象
3、微生物细胞工程：微生物遗传改良、创造。
三、细胞工程基本技术
1、无菌操作技术：保持材料、培养基、材料生长环境无
菌的操作技术。
2、细胞培养技术：细胞在体外无菌条件下的保存、生长
和发育成新的个体的技术。
3、细胞融合技术:使两个及以上细胞细胞膜发生重排，细
胞合并、遗传物质重组的技术。
4、细胞分离技术:获得用于培养的单细胞方法。
二、花药培养
首先报道通过花药培养获得单倍体植株成功的是印度学者 Guha和Maheshwari (1964, 1966)。目前已有250多种植物花 药培养成功。
花药培养的基本程序是： 外植体选择－外植体(花蕾)预处理—外植体消毒—剥取花 药—接种—诱导培养—分化培养
1．外植体的选择： 遗传背景、 生理状态、 花粉的发育时期
第四节 原生质体融合与培养
一、原生质体的概念
·1、原生质体(protoplast)：指除去细胞壁的细胞或是一个被 质膜所包围的裸露细胞。 ·2、亚原生质体(subprotoplast)：丢失部分细胞内含物的原 生质体。 ——核质体(nuclearplast)：由原生质膜和薄层细胞质包围细 胞核形成的亚原生质体。 ——胞质体（cytoplast）：不含细胞核而仅含有部分细胞质 的亚原生质体。
细胞融合方法
细胞融合方法细胞融合方法是一种将两个或多个细胞融合在一起的科学技术。
这项技术广泛应用于生物医学研究和生物技术领域，包括细胞研究、干细胞研究、胚胎发育以及生物制药等。
细胞融合方法通过将细胞膜和细胞质融合在一起，实现细胞间的基因、蛋白质和其他细胞组分的交换。
这种方法不仅可以研究细胞的功能和相互作用，还可以创建具有特定特征和功能的细胞。
1. 介绍细胞融合方法的背景和意义细胞融合方法的发展源于人们对于细胞间相互作用的好奇和对于创造具有特定特征细胞的需求。
通过将来自不同细胞的基因和蛋白质相互组合，研究人员可以探究细胞的功能、发育机制以及潜在的疾病治疗方法。
细胞融合方法也为生物制药领域带来了新的机会，可以用于生产具有特定功能的蛋白质或抗体。
2. 细胞融合方法的基本原理和技术细胞融合方法主要包括物理法、化学法和基因工程法。
物理法通过使用电脉冲、超声波或激光等物理手段，破坏细胞膜的完整性，使细胞融合。
化学法则是通过特定的化学药物破坏细胞膜，使细胞质混合。
基因工程法则是通过基因工程技术将目标基因导入到一种带有融合能力的细胞中，从而实现细胞融合。
3. 细胞融合方法在生物医学研究中的应用细胞融合方法在生物医学研究中有广泛的应用，特别是在细胞功能和相互作用的研究中。
通过融合不同类型的细胞，研究人员可以分析它们在发育、分化和疾病进程中的相互作用。
细胞融合也可用于修复损伤组织和生成新的组织工程。
4. 细胞融合方法在干细胞研究中的应用干细胞是一种具有自我更新和多向分化潜能的细胞。
通过细胞融合方法，研究人员可以将干细胞与其他类型的细胞融合，形成单个细胞具有多种分化潜能的合成细胞。
这种方法可以有效地增加干细胞的分化效率，并为再生医学和组织工程提供新的可能性。
5. 细胞融合方法在生物制药中的应用细胞融合方法在生物制药领域也有重要的应用。
通过将人类细胞与其他物种的细胞融合，可以生产具有特定功能的蛋白质或抗体。
这项技术被广泛应用于生物药物的生产和治疗疾病。
细胞融合技术综述
细胞融合技术姓名：王洋专业：生物化学与分子生物学学号：3117107细胞融合技术作为细胞工程的核心基础技术之一,已在农业、医药、环保等领域取得了开创性的研究成果,而且应用领域不断扩大。
细胞融合技术不仅为核质关系、基因调控、遗传互补、细胞免疫学、肿瘤发生、基因定位、衰老控制等理论领域的研究提供了有力的手段,而且被广泛应用于免疫学、遗传学、发生生物学,特别是在单克隆抗体及动植物远缘杂交育种等方面具有十分重要的意义。
随着细胞融合技术研究的不断深入,细胞融合技术的发展前景及其产生的影响将日益显著。
1细胞融合及其意义1.1细胞融合的概念所谓细胞融合就是指在外力(诱导剂或促融剂)作用下,两个或两个以上的异源(种、属间)细胞或原生质体相互接触,从而发生膜融合、胞质融合和核融合并形成杂种细胞的现象称为细胞融合(cell fusion)或细胞杂交(cell hybridization)。
如取材为体细胞则称体细胞杂交(somatic hybridization)。
体细胞融合后可形成四倍体或多倍体细胞,由此形成的杂交细胞,其特性会有很大的变化。
1.2细胞融合的机理最近研究表明 ,细胞融合与病毒和细胞之间的融合以及细胞内的膜泡融合有许多相似之处 ,即带包被的病毒 (或细胞)通过转膜病毒蛋白介导与宿主细胞的细胞膜进行融合。
I类病毒融合蛋白包括流感病毒红血球凝集素( HA)和人类免疫缺陷病毒包被蛋白 ,它们都具有相似的结构域,即都具有a-螺旋结构。
病毒和细胞之间正是通过这些蛋白来完成融合过程 (伴随有构象的变化)的。
细胞内的膜泡融合也是如此 ,其相关融合蛋白包括 GTPases 及SNARE家族。
因此推测细胞融合采用相似的机理。
然而细胞融合蛋白并不全具有a-螺旋结构 ,提示a-螺旋并非融合所必需。
1.3细胞融合的意义细胞能不受种属的局限可实现种间生物体细胞的融合,使远缘杂交成为可能,因而是改造细胞遗传物质的有力手段。
它的意义在于从此打破了仅仅依赖有性杂交重组基因创造新种的界限,扩大了遗传物质的重组范围。
第2章细胞工程高二生物必背知识清单(沪科选择性必修3)
第2章细胞工程细胞工程1.定义：以细胞生物学和分子生物学为基础，结合现代工程技术手段，在细胞或亚细胞水平、组织水平上进行设计与操作，是构建优良细胞、组织、器官以及生物体的综合性生物工程。
2.分类：植物细胞工程：植物组织培养技术、植物细胞培养、植物体细胞杂交技术动物细胞工程：动物细胞培养技术、动物细胞融合技术、核移植技术、干细胞技术1、细胞的全能性①定义：离体的植物细胞在合适的条件下能够发育成为完整的植株。
②物质基础：细胞中具有本生物的全套遗传信息。
③表达条件：含有全套遗传信息的活细胞；处于离体状态；提供适宜的营养和环境条件。
④全能性大小：分化程度越高，全能性越低2、植物组织培养①定义：将离体的植物细胞、组织或器官（外植体）在适宜的培养条件下经脱分化形成愈伤组织，然后经过再分化，形成芽、根并最终发育成完整植株，这一过程称为植物组织培养。
②原理：植物细胞的全能性③条件：离体、适宜的营养物质、植物激素、无菌、温度、湿度、光照、氧气。
④相关概念影响脱分化和再分化俩步骤的原因：多种内部因素和外部因素⑤过程：a.取材与消毒：取离体的植物器官、组织或细胞进行消毒b.接种：将外植体插入MS培养基中（不要倒插）。
c.培养：外植体（记得消毒）↓脱分化愈伤组织↓再分化（需光，利于叶绿素合成）芽、根↓植物体d.移栽：先炼苗，再移栽。
影响脱分化和再分化俩步骤的原因：多种内部因素（如植物遗传性状和生理状况等）和外部因素（如营养和环境条件等）生长素和细胞分裂素的浓度比对愈伤组织的生长和分化产生不同的影响。
⑥植物激素的浓度控制：（使用顺序）生长素的浓度＞细胞分裂素，有利于诱导植物根的生成；生长素的浓度＜细胞分裂素，有利于诱导植物芽的生成；生长素的浓度≈细胞分裂素且都较高时，（外植体脱分化形成愈伤组织）有利于愈伤组织的形成。
1.选材与消毒选取枝条中具腋芽的月季嫩茎作为外植体。
将外植体用自来水冲洗干净，分装到烧杯中，然后放在超净工作台上。
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(1)图中诱导动物细胞融合常用的诱导因素有____ (至少写出两种 )，再用特定的____培养基进行筛选，得到杂种细胞。 (2)培养杂种细胞时，根据细胞所需营养物质的种类和数量严格配 制培养基，此外经常会在培养基中加入____。培养过程中细胞需 置于含CO2的混合气体的培养箱中培养，CO2的主要作用是维持培 养液的____。 (3)若只考虑人的成纤维细胞与鼠细胞两两融合形成的杂种细胞， 假如每种杂种细胞只保留了人的1条染色体，从染色体组成的角度 考虑，杂种细胞可能有____种。
3~5细胞融合技术·干细胞工 程·克隆技术
动物细胞融合与单克隆抗体 1.植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较
植物体细胞杂交
原 细胞膜的流动性、细胞 理 的全能性
动物细胞融合 细胞膜的流动性
植物体细胞杂交
动物细胞融合
过 程
植物体细胞杂交
相
关
纤维素酶和果胶酶
酶
融 合 物理法:离心、电激、振动； 方 化学法:聚乙二醇等试剂诱导 法
答案:(1)给予大于800lx的光照 (2)植物细胞的全能性 克服了远缘杂交不亲和的障碍 (3)既能无限增殖，又能产生特定抗体 特异性强、灵敏度高、化学性质单一 B淋巴细胞不能无限增殖 (4)
植物体细胞融合 【典例训练2】通过细胞工程技术，利用甲、乙两种植物的各自优 势(甲耐盐、乙高产)，培育高产耐盐的杂种植株。请完善下列实 验流程并回答问题：
(3)植物细胞融合时，核质都应该进行融合，当细胞壁再生时，合 成功。植物体细胞杂交虽然克服了远缘杂交不亲和的障碍，但 让杂合体表达出两种植物的优良性状有时还比较困难。
答案：(1)纤维素酶和果胶 融合的原生质体 耐盐 有耐盐高产和耐盐不高产两种 (2)植物组织培养 脱分化 再分化 无菌 (3)再生出新的细胞壁 不能按照人的意愿表达两个亲本的性状 克服远缘杂交不亲和的障碍
【解题指南】 1.知识储备：植物体细胞杂交过程和植物组织培养过程。 2.解题关键：(1)明确诱导原生质体融合后产生的杂种细胞有多种 ，需经筛选。 (2)注意流程图中关键字眼：“用钠盐浓度为0.6%的固体培养基 培养”，即筛选掉了不耐盐的愈伤组织。
【解析】植物细胞经纤维素酶和果胶酶处理后，去除细胞壁，得 到原生质体。两个原生质体经PEG诱导后融合，再生出细胞壁后 变成杂种细胞，利用植物组织培养技术可得到愈伤组织、丛芽结 构和试管苗，并非每个细胞都能表达出耐盐性状，需要利用含盐 培养基进行选择。 (2)C细胞是杂种细胞，形成植株需要植物组织培养过程，经历了 细胞的脱分化和再分化过程。该过程涉及到培养基培养过程，所 以无菌操作非常重要。
(1)①过程发生的化学变化是_______。 (2)将若干a和b 等量混合后转移到培养基上培养，再经过②和③ ，c的细胞类型有_______。 (3)在采用化学法进行过程②时，一般是用_______作为诱导剂。 (4)植物体细胞杂交与自然状况下的生殖细胞杂交相比，前者的主 要意义是_______。
【解析】(1)①是细胞核，②是细胞核移植技术得到的胚胎干细 胞，④是重组载体导入受体细胞。 (2)③是细胞核移植，⑤是动物细胞培养得到早期胚胎。PCR技 术可快速扩增DNA，该技术需要耐高温的DNA聚合酶催化。 (3)转基因动物培养常用受精卵或早期全能胚胎干细胞作受体细 胞。 (4)该图为治疗性克隆，自身细胞细胞核移植后得到的克隆器官 不会发生免疫排斥反应。
动物细胞融合和单克隆抗体制备 【典例训练1】有性生殖的生物产生后代需进行受精作用，植物 体细胞杂交要进行原生质体的融合，单克隆抗体的制备需进行 动物细胞融合，可见细胞的融合技术有着广泛的应用。下列为 细胞融合的简略过程，据图回答相关问题：
(1)若a、b分别是基因型为Hhrr、hhRr两个烟草品种的花粉，且这 两对基因分别位于两对同源染色体上。由于受一对隐性纯合基因 (rr或hh)的作用，在光照强度大于800lx时都不能生长。要想从融 合细胞的培养液中分离出基因型为HhRr的杂种细胞，较为简便的 筛选方法是_____。 (2)若a、b表示两种植物体细胞，则由d细胞形成杂种植株的原理 是_____，这种育种方法的优点是_____。
【解析】(1)a的花粉基因型为Hr和hr，b的花粉基因型为hR和hr ，只有HhRr的基因组合方式没有隐性纯合基因，所以杂种细胞 HhRr能在光照强度大于800lx时生长。 (2)植物体细胞杂交形成植株，是植物细胞全能性的表现，克服了 自然条件下物种之间的生殖隔离。
(3)在单克隆抗体产生过程中细胞d是杂交瘤细胞，具备了融合前 两种细胞的优点，能无限增殖且产生特定抗体。而且反复筛选的 细胞d产生的抗体品质优良。B淋巴细胞能产生特定抗体，但不能 无限增殖，无法得到大量的抗体。 (4)只能注射特定抗原后才能得到特定的B淋巴细胞，再与骨髓瘤 细胞融合，经筛选后可体内培养也可体外培养以得到大量单克隆 抗体。
结 果
杂种植株
意 克服了远缘杂交的不亲和性 义 ,获得杂种植株
动物细胞融合
胰蛋白酶或胶原蛋白酶
除物理法和化学法外还 可以用灭活的病毒诱导
杂交细胞 突破了有性杂交方法的 局限,使远缘杂交成为可 能
2.单克隆抗体的制备 (1)制备过程：
注射特定抗原 的免疫小鼠
骨髓瘤 细胞
筛选培养
克隆上述 杂交细胞
B淋巴细胞
1.如图表示高等动、植物细胞融合的部分过程，请据图回答：
(1)若上图表示植物体细胞杂交的部分过程，欲将丁细胞培育成 植株，可选用_____技术，这一技术的两个关键步骤是_____和 _____。 (2)若上图表示制备单克隆抗体的部分过程，甲细胞为小鼠的骨 髓瘤细胞，则乙细胞为_____。在分离乙细胞之前，应对小鼠进 行的处理是_____。过程①区别于植物细胞常用的诱导方法是 _____，过程②可利用_____培养基进行筛选，筛选得到的丁细 胞还需进行_____和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量 的能分泌所需抗体的细胞。上述制备过程涉及到的生物技术有 _____。
【解析】准确理解植物体细胞杂交的过程是解题的关键。 (1)植物体细胞杂交亦称为原生质体融合，是以植物的体细胞为材 料，经特殊的酶处理后，用去掉了细胞壁的裸细胞——原生质体 为亲本进行融合的一种新型的生物技术。 (2)将若干a和b 等量混合后转移到培养基上培养，经过细胞融合 ，c的细胞类型包括没有融合的细胞、相同细胞的融合和不同细胞 的融合，即AA、BB、AAAA、BBBB、AABB。 (3)在采用化学法进行过程②时，一般是用聚乙二醇(PEG)作为诱 导剂。 (4)植物体细胞杂交的主要意义是克服了不同生物间远缘杂交不亲 和的障碍。
【高考警示钟】 1.植物体细胞杂交与动物细胞融合中酶的作用对象不同，纤维素 酶和果胶酶作用于细胞壁，而胰蛋白酶等作用于细胞间质。 2.灭活的病毒保持了其抗原性，但毒性消失。 3.植物杂交细胞在激素诱导下能表达出全能性，但动物杂交细胞 的全能性不能表达。
比较三种造血干细胞移植的优点和缺点
骨髓移植
优点
(1)A是_____酶，B是_____，D是具有_____优良性状的幼芽。D长 成的幼苗需要选择的原因是_____。 (2)由C形成植株的过程利用了_____技术，形成愈伤组织需要经过 _____过程，愈伤组织形成D需要经过_____过程。整个培养过程要 在_____条件下进行。 (3)植物体细胞融合成功的标志是_____。目前植物体细胞杂交还 存在许多问题没有解决，如_____，尽管如此，这项新技术在 _____等方面取得的重大突破还是震撼人心的。
杂交细胞 专一抗体 检验阳性
专一抗体 检验阳性
将不同杂交 并克隆专一抗体，
细胞分开,
检验阳性细胞
体外培养
体内培养
从培养液 中提取
从小鼠腹水 中提取
单克隆抗体
(2)关键环节： ①取相应B淋巴细胞前必须先注射相应抗原，否则不能获得单克隆 抗体。 ②细胞融合后需经二次筛选： 第一次：在特定的选择性培养基上，未融合的亲本细胞(B淋巴细 胞和骨髓瘤细胞)和融合的具有同种核的细胞(BB融合细胞、瘤瘤 融合细胞)都会死亡，只有杂交瘤细胞才能生长。其特点是既能迅 速大量繁殖，又能产生单一的特异性抗体。 第二次：经选择培养的杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细 胞(很多种杂交瘤细胞)，需经克隆化培养和抗体检测，经筛选后 才可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。
答案：(1)纤维素和果胶发生水解 (2)AA、BB、AAAA、BBBB、AABB (3)聚乙二醇(PEG) (4)克服了不同生物间远缘杂交不亲和的障碍(或扩大了可用于杂 交的亲本基因组合的范围)
4.如图表示将人成纤维细胞与小鼠细胞进行融合，获得部分杂种 细胞的过程(注：杂种细胞中人类的染色体会随机丢失，各种杂种 细胞保留人类染色体的种类和数量是不同的)。请回答下列问题：
(1)图中①、②所示的结构分别是_______、_______，④过程常 用的方法是_______。 (2)图中③、⑤所示的生物工程技术分别是_______、_______， 利用_______技术快速扩增健康胰岛B细胞基因的过程中，目的 基因受热形成单链并与引物结合，在酶的作用下延伸形成DNA， 该酶的特点是_______。该技术的原理是_______。 (3)过程④通常用②做受体细胞的原因是_______。 (4)图示治病的方法叫做_______，与一般的异体移植相比最大 的优点是_______。
答案：(1)植物组织培养 脱分化 再分化 (2)B淋巴细胞 将抗原注射入小鼠体内 用灭活的病毒诱导 特 定的选择 克隆化培养 动物细胞融合技术、动物细胞培养技术
2.(2012·哈尔滨模拟)如图是利用现代生物工程技术治疗遗传 性糖尿病(基因缺陷导致胰岛B细胞不能正常合成胰岛素)的过程 设计图解，请据图回答：
【解题指南】 1.考查实质：植物体细胞杂交与单克隆抗体的制备。 2.解题关键： (1)hr是a、b产生配子中相同的配子，另外两种配子分别是Hr、hR 。 (2)两个不同的细胞形成的杂种细胞发育成植株。 (3)骨髓瘤细胞特点、B淋巴细胞特点与融合后的细胞具备的特点之 间的关系。 (4)单克隆抗体产生的过程由细胞融合和杂交细胞的培养两部分组 成。