动物细胞工程的应用共105页
高二生物苏教版课件:动物细胞工程及其应用
2。特异性差、纯度低;产量低、反应不够灵敏
抗原 刺激 动物体内 效应B 抗体
抗原不纯
抗体不纯
筛选单一效应B细胞
不能增值产生大量抗体
-化学性质单一、特异性强的抗体。 Nhomakorabea计方案: 一个B淋巴细胞--只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞--能无限增殖
杂种细胞
单克隆抗体制备过程
注射抗原
B淋巴细胞
骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选
A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成
5.上图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。
( l )动物细胞培养 技术是单克隆抗体技术的基础。
( 2 )根据培养基的用途分类,图中 HAT 培养基属于 选择性 培养基,目的是 筛选出杂交瘤细。胞在培养的过程中需要添加无机盐,但要注意营养物的 种类和数,量
• 动物细胞培养就是从动物机体内取出相 关的组织,将它分散成单个细胞,然后, 放在适宜的培养基中,让这些细胞生长 和增殖。
动物细胞培养的原理:细胞增殖 • 过程:
动物细胞的培养过程
取动物器官 和组织
幼龄动物
剪碎组织
胰蛋白酶处理
单个细胞
细胞培养
动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术 的基础
加培养液
1、选材:
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,它 们细胞增殖能力强,分裂旺盛,分化程度 低,容易培养。
2.分散成单个细胞 ❖在进行动物细胞培养时,用胰蛋白酶分散 细胞,说明细胞间的物质主要是蛋白质。动 物细胞培养适宜的pH为7.2—7.4,此环境下 胃蛋白酶(2.0)没有活性,而胰蛋白酶 (7.2-8.4)的活性较高。
动物生物技术研究中动物细胞工程的运用-生物工程论文-生物学论文
动物生物技术研究中动物细胞工程的运用-生物工程论文-生物学论文——文章均为WORD文档,下载后可直接编辑使用亦可打印——摘要:随着科学技术的不断发展,我国的科学研究水平越来越高,其中细胞工程是当前生物工程领域的重要组成部分,其在制药、医疗、动物繁殖、植物育种等各领域都得到了广泛应用。
本文主要是论述了动物细胞工程在动物生物技术中的相关应用,具体包括特殊动物、单克隆抗体和细胞因子、器官和组织的生产、细胞治疗等几方面。
关键词:动物细胞工程; 动物生物技术; 应用;细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学的理论和方法,按照人们的设计蓝图进行基于细胞水平上的遗传操作,或者是大规模的细胞和组织培养。
而动物细胞工程已经成为的当前生物技术的重要任务,包括细胞融合、细胞拆合、染色体导入和基因转移这四个方面的技术应用,其对当前的生物技术发展具有十分重要的现实意义。
一、生产特殊动物(一)在牲畜养殖的优化改良上当前我国畜牧的发展速度越来越快,出于对牲畜及其相关产品品质的高质量要求,其品种的优化改良也成为当前动物生物技术重要的研究方向,而动物细胞工程中的人工受精、胚胎移植等技术在畜牧业生产中的应用逐渐普及,在生产实践中,越来越多的技术人员开始利用胚胎分割技术、显微操作技术、核移植技术、细胞融合技术、转基因技术等等多项技术的综合使用来使得动物的卵细胞得到改变,经过改造的卵细胞会比动物自然排出的卵细胞具有更优良的性能,比如在奶牛上试验可以培养出高产奶牛,在猪上试验可以培育出瘦肉型猪,为当前畜牧业的生产提供动力。
比如体外受精技术与胚胎性别控制技术的应用。
体外受精技术能使得优良母畜的繁殖潜力得到充分的发挥,并保存动物机体优质的遗传资源,尤其是在一些即将灭绝动物的拯救与保护上有着较高的效果。
目前,该项技术主要是应用在奶牛这种单胎生且能带来较大经济价值大的动物身上,通过体外受精能有效地增加奶牛数量,有利于进一步扩大畜牧业养殖规模。
胚胎性别控制技术则是用人工的方式控制繁殖出来的动物的性别,通常雄性动物生长速度快,适合供应市场肉质产,而雌性动物适用于蛋奶的供应,因此可以根据其特性进行性别控制,通过离心分离法、免疫学分离法、PCR扩增法等可以进行有效的控制,进一步提高选育强度,从而提高畜牧业的经济效益。
动物细胞工程在动物生物技术中的应用
动物细胞工程在动物生物技术中的应用1. 引言1.1 动物细胞工程在动物生物技术中的应用动物细胞工程在动物生物技术中的应用,是指利用现代生物工程技术对动物细胞进行基因编辑、修饰和调控,以达到改良动物品质、疾病模型建立、器官移植、动物遗传资源保护和利用、生物安全和动物健康监测等目的的一种生物技术手段。
这一领域的发展为动物生产、医学研究、生态保护等领域带来了巨大的变革和进步,为人类社会的可持续发展做出了积极贡献。
动物细胞工程技术的应用领域非常广泛,涵盖了动物生物技术的多个重要方面。
通过基因编辑技术,可以针对性地改良动物品质,提高其生长速度、抗病性和产量,为现代畜牧业的发展提供了新的途径。
利用动物细胞工程建立各种疾病模型,可以帮助科研人员更好地理解疾病的发生机制,加速新药的研发和临床应用。
动物细胞工程还为器官移植和再生医学提供了重要的支持,使这一领域取得了突破性的进展。
动物细胞工程在动物生物技术中的应用具有重要意义,为人类社会的发展带来了许多机遇和挑战。
随着技术的不断进步和创新,相信未来这一领域将有更广泛的应用前景,为促进动物生产、改善人类生活质量和保护生态环境做出更大的贡献。
2. 正文2.1 基因编辑用于改良动物品质基因编辑技术是近年来在动物生物技术中广泛应用的一项重要工具。
通过基因编辑,科研人员可以精确地修改动物基因,从而实现对动物品质的改良。
在动物农业领域,基因编辑技术被广泛应用于提高畜禽的生产性能和抗病能力。
通过修改鸡的基因,科研人员成功地培育出了产蛋率更高、生长更快、肉质更优的优质家禽品种。
这些改良的动物品种不仅可以提高畜禽养殖的经济效益,还可以为人类提供更安全、健康的动物产品。
基因编辑技术还可以用于改良宠物品种,如狗和猫。
科研人员可以通过基因编辑技术调整宠物的外表特征、性格特征和健康状况,使其更适合人类的需求。
通过基因编辑,宠物犬可以被培育成更聪明、更友好、更易驯养的品种,而宠物猫则可以被改良成更具有独特性格和美丽外表的品种。
高中生物苏教版选修3课件第二章 第三节 动物细胞工程的应用
第第 二三 章节
2 把握·命题热 点
3 应用·落实体 验
知识点一 知识点二 知识点三
命题点一 命题点二 命题点三
课堂回扣练习 课下综合检测
第三节
动物细胞工程的应用
1.动物细胞与组织培养是指在体外模拟动 物体内环境,将动物细胞或组织在无 菌、温度适宜和营养充足的条件下培 养,使其增长、增殖并维持原有结构和 功能的技术。
(2)传代培养: ①含义:将原代培养的细胞_分__离__稀__释__后转入_新__的__培__养__瓶__中 继续培养。 ②原因:在原代培养过程中,由于培__养__空__间__的限制、营__养__物__ _质__的消耗等导致细胞的生长和增殖逐渐减缓。 ③培养次数:_1_0_~__5_0_次。
1.为什么选用胚胎或幼龄动物组织进行细胞培养? 提示:幼龄动物组织或胚胎的细胞分化程度低,增殖能力很 强,更易于培养。 2.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞,说明细 胞间的物质主要是什么成分?用胃蛋白酶行吗? 提示:用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要是蛋白 质。多数细胞培养的适宜pH为7.2~7.4,胃蛋白酶在此环境中没 有活性,而胰蛋白酶在此环境中活性较高,因此胰蛋白酶适宜用 于细胞培养时的消化。
2.动物细胞与组织培养的材料通常是动物 胚胎或出生后不久的幼龄动物的器官或 组织。
3.动物细胞与组织培养的条件包括无菌、 温度、pH、气体和营养物质等。
4.体细胞克隆的关键是细胞核移植技 术。
5.细胞融合是指在一定条件下将两个或 多个细胞融合为一个细胞的过程。
6.杂交瘤细胞是由经免疫的B淋巴细胞 和骨髓瘤细胞融合而成的,具有既能 无限增殖又能产生专一抗体的能力。
3.根据教材第58页单克隆抗体的制备过程图解思考下列问 题:
22动物细胞工程课件[可修改版ppt]
(1)请概括单克隆抗体的概念 (2)根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯勒设计的 实验
方案,思考实验过程与原理? (3)为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合?单克隆抗体制
备过程中应用哪些细胞 工程技术手段?制备过程为何要经过两 次筛选?
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“人耳”是由我国 科学家•(曹1)谊生林产教蛋授白生物制品:病毒疫苗、干 利用细扰胞素工、单程克技隆术抗体等。 复制出•(来2)的获。得大量自身的皮肤细胞,用于植
皮。
•(3)用于检测有毒物质
•(4)用于生理、病理、药理等方面的研 究,为治疗和预防疾病提供理论依据
拓展:聚乙二醇处 理后,培养液中存 在哪几种细胞?
分离
的活性较高。
50细胞
动物细胞培养
不能最终培养
细胞系
传代培养
成生物体
无限传代
如何界定原代培养和传代培养;细胞株和细胞系?
随细胞增多,细胞就会停止分裂增殖
细胞 悬浮 液
细胞株
细胞系 遗传物质改变
10代 细胞
50代 细胞
无限传 代
原代培养
传代培养
多数组织细胞固定在表面 生长和分裂。
这只老动鼠物身上细的胞培养技术的应用
脾-脾 脾-瘤 瘤-瘤
未融合的脾细胞
未融合的瘤细胞
试试身手
•已知细胞合成DNA有D和S两条途径,其中D 途径能被氨基嘌呤阻断,人淋巴细胞中有这两 种DNA的合成途径,但一般不分裂增殖。鼠 骨髓瘤细胞尽管没有S途径,但能不断分裂增 殖,将这两种细胞在试管中混合,加聚乙二醇 促融,获得杂交瘤细胞,请回答: (1)试管中除融合的杂交瘤细胞外,还有 _____________种融合细胞。 (2)设计一方法(不考虑机械方法),从培 养液中分离出杂交瘤细胞,并说明原理。
动物细胞工程教学PPT
传代培养
将原代细胞进行传代培养, 使其在体外持续增殖的过 程。
细胞冻存与复苏
通过冷冻保存细胞,以便 在需要时进行复苏和培养。
动物细胞培养的常见问题与解决方案
01 02
污染问题
动物细胞培养过程中常见的污染源包括细菌、霉菌和支原体等。解决方 案包括定期检查培养环境、严格控制培养基和器具的灭菌过程以及及时 处理污染细胞。
动物细胞工程实验技术
动物细胞融合技术
动物细胞融合技术是指将两个或多个 动物细胞融合成一个细胞的过程,是 动物细胞工程中的重要技术之一。
动物细胞融合技术需要使用特定的融 合剂或电刺激等方法,使细胞膜融合, 形成异核或多核细胞。
该技术可用于制备单克隆抗体、诱导 多功能干细胞、研究细胞分化机制等 方面。
动物染色体工程需要严格遵守 伦理和法律规定,确保实验动 物的福利和安全。
动物基因编辑技术
动物基因编辑技术是指通过特定的基 因编辑工具对动物基因进行精确的修 饰和改造的技术。
动物基因编辑技术可以采用CRISPRCas9等基因编辑系统,对目标基因进 行敲除、敲入或定点突变等操作。
该技术可用于研究基因功能、治疗遗 传性疾病、制备转基因动物等方面。
经济和社会发展
动物细胞工程的发展将带动相关产业的发展,创 造就业机会,促进经济发展和社会进步。
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动物细胞工程教学
• 动物细胞工程概述 • 动物细胞培养技术 • 动物细胞工程实验技术 • 动物细胞工程的应用案例 • 动物细胞工程的未来展望
01
动物细胞工程概述
定义与特点
定义
动物细胞工程是以动物细胞为研究对象,通过细胞培养、细胞融合、基因转移 等技术手段,实现动物细胞在数量和质量上的改变,以应用于医学、农业、生 物工程等领域的技术。
苏教版选修三 2.3 动物细胞工程的应用(Ⅰ)课件(31张)
培养的细胞 → 细胞分散 → 继续培养 养
细胞株:
从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细
胞,能传到40-50代,其遗传物质没有发生变 化。 细胞系: 传到40-50代后有部分细胞遗传物质发生了变化
,带有癌变的特点,可能在培养条件下无限制
的传代下去,这种传代细胞称为细胞系。
二、动物细胞培养条件
1、无菌、无毒的环境
相互接触,细胞分裂和生长停止,数量不再增加。
部分细胞突变 ,获得不死性 ,向癌细胞方 向发展,糖蛋 白减少。
失去接触抑 制
接触抑制 50代以后
2、为什么要对取出的动物组织进行处理,使细胞
分散? 分散的单个细胞容易摄取所需的营养,排出代 谢废物;而用大块组织培养时,内部细胞的营
养供应和代谢废物的排出都较困难。
•
过程:从动物机体中取出组织 剪碎 加 胰蛋白酶 细胞游离 加培养液 将细 胞接种到培养瓶内 培养(1—2天换一次 培养液) 细胞贴壁生长 长成单层细胞 取材(动物组织) →细胞分散→初次培养
传代培养
定义:当原代培养的细胞生长停止,这时如 果要使细胞继续生长,就要及时用胰蛋白酶 等,使细胞从瓶壁上解离下来,然后加入新 的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶 内转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培
原代培 养
传代培 养
1、动物细胞培养的概念是什么?该技术实施的 原理是什么? 从动物机体中取出相关组织,将它分散成单个
细胞,然后在适宜的培养基中,让这些细胞生
长和繁殖。
原理是细胞增殖 (有丝分裂) 。
动物细胞生长特性
接触抑制:细胞在贴壁生长过程中,随着细胞分裂
,数量不断增加,最后形成一个单层,此时细胞间
动物细胞工程ppt课件
(4)为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中,用胰_ 蛋白_酶___ 处理,然后配置成_细__胞__悬__浮__液__,再分装。
(5)在C瓶中正常培养了一段时间后,发现细胞全部 死亡。原因是_细__胞__没__有__发__生__瘤__变__________。
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二、动物体细胞核移植技术和克隆动物
概念:将动物的一个细胞的细胞核,移入一 个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组 并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终 发育成动物个体。 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物
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进一步思考:
①.植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗? 否
②.胰蛋白酶的作用是什么呢?由此可说明细胞间的物质是什
么成份?
胰蛋白酶水解蛋白质 蛋白质
③.细胞膜的主要成份是什么?胰蛋白酶能将细胞消化掉吗?
蛋白质和磷脂
能
④.既然胰蛋白酶能将细胞消化掉,那将动物组织分散成单个 细胞要注意什么问题呢?能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗? 为什么?
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3、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细 胞供体动物进行了100%的复制吗?为什么?
不是,克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞 核,但核外还有少部分DNA(如线粒体DNA) 来自受体卵母细胞
4.动物克隆实例很多,为何多莉就举世闻名呢?
在1997年2月英国罗斯林研究所维尔穆特博士科研组 公布体细胞克隆羊“多莉”培育成功之前,胚胎细胞核 移植技术已经有了很大的发展。实际上,“多莉”的克 隆在核移植技术上沿袭了胚胎细胞核移植的全部过程, 但这并不能减低“多莉”的重大意义,因为它是世界上 第一例经体细胞核移植出生的动物,是克隆技术领域研 究的巨大突破。这一巨大进展意味着:在理论上证明了,
主要成分:葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生 素和动物血清等。
动物细胞工程技术的应用
动物细胞工程技术的应用一、生产单克隆抗体和细胞因子(一)生产单克隆抗体1975年Kohler和Milstein建立B淋巴细胞杂交瘤技术以制备单克隆抗体以来,针对各种抗原的单克隆抗体已被广泛应用于生命科学的各个领域。
B淋巴细胞杂交瘤技术不但将淋巴细胞产生单一抗体的能力和骨髓瘤增生的可能性巧妙地结合起来,并且还可以通过融合进一步的筛选获得具有期望专一的抗体。
单克隆抗体的最主要的优点在于它的专一性、均质性、灵敏性以及无限量制备的可能性。
单抗在生物工程技术中占有很重要的地位,已作为商品进入市场,前景不亚于基因工程产品。
其用途有以下几方面:(1)单抗作为体外试剂:单克隆抗体最广泛的商品用途,目前仍然是用作体外诊断试剂。
(2)单抗作为体内诊断试剂:用同位素标记的单抗,在特定的组织中成像的技术,可用于肿瘤,心血管畸形的体外诊断。
(3)单抗作为导向药物的载体:单克隆抗体最大的应用前景是有可能作为导向药物的载体。
导向药物是指以具有导向能力的物质为载体的药物,据信在下一世纪导向药物将普遍取代目前的常规药,特别是抗癌药物、抗生素等。
(4)作为治疗用的单克隆抗体:它必须具有专一性高、稳定性好、亲合力强、分泌量大、针对非脱落抗原在靶细胞上的分布密度高等特点,但这是很难获得的。
(二)T淋巴细胞杂交瘤和淋巴因子T淋巴细胞在免疫系统中占有极重要的位置,它既是调节细胞又是效应细胞。
目前,使T淋巴细胞长期在体外自下而上的方法有四种:①应用外源性的T生长因子[白细胞介素2(interleukin 2,IL-2)抗原不断再刺激的方法,使T细胞系和T细胞克隆;②应用辐射白血病病毒(radiation leukemia virus)来转化T细胞,以建立永久化的T细胞培养系;③从已建立的淋巴瘤系中来筛选有用的T细胞系;④应用杂交瘤技术来建立T淋巴细胞杂交瘤。
目前,对T淋巴细胞杂交瘤还牌理论研究阶段,为进一步用于诊断和治疗打下基础。
二、生产特殊蛋白质和多肽药物蛋白质及多肽药物的基因工程是生物工程中最活跃和最有成果的领域之一。
动物细胞工程(优秀版)ppt课件
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洁心与大熊在进入高中的第一天相识,两人都是大个子,分座位的时候,老师让男女生各排一队,一队一个次第走到座位上,最后一排有六张桌子,洁心谦虚地站到一个比自己矮一点 点的女生前面,与大熊成了同桌
他们一个15岁,一个16岁,花开的季节。初学立体几何,大熊用小纸壳手工助洁心理解立体与平面的迥异,地理考试这对同桌囊括了班里两个第一,大熊94分,第一名,洁心47分, 倒数第一。大熊不知怎么就让无论如何都搞不懂季风洋流方向的洁心尤如神助,醍醐灌顶。洁心盼着上作文课,老师会朗读几篇上榜佳作,每每读到洁心的作文,大熊会看洁心一眼, 好像在说我知道这一篇是你写的,洁心也会漫不经心瞥一眼,故作平淡地回复嗯,是我。不知从何时起,他们走进彼此的心。大学毕业的第二年,他们结了婚,第三年,有了一个可爱 的孩子。洁心的日常开始以大熊小熊为中心,辞去优渥工作,成为家庭主妇,曾经的诗情画意干练要强变成琐碎的柴米油盐酱醋茶,窈窕淑女变成自带三层救生圈的黄脸婆,大熊成为 业内认可的职业经理人,小熊也取得全国乃至世界各大数学竞赛计算机竞赛的各色奖牌。被大熊小熊的光环映着,洁心日复一日忙忙活活庸庸碌碌地快乐着。人和人之间的比较,是丢 失快乐最简单的方式。昔日的同学大多事业有成,成为各自领域的精英,而洁心日渐落伍,好像被抛弃在另一个时代。比较也是客观认识自己最直接的方式。失落带来思考,洁心终于 意识到这十几二十年的岁月她把自己搞丢了。洁心想重回轨道却无力又无助,知识陈旧,书生意气,与社会严重脱节,抱怨,她偏执地认为大熊消耗了她的青春改写了她的命运,而人 到中年的大熊再不会像过去只要听到洁心呼唤,马上放下全世界飞奔而来,事业有成的他也不再对洁心的发号施令全盘言听计从,洁心觉得自己失去了整个世界。洁心没有意识到很多 时候大熊只是在迁就她,不和她计较,也没有意识到一个企业高管若凡事对一个家庭主妇唯命是从究竟是好事还是坏事,她越来越暴躁,越来越容易愤怒,家庭气氛像一只随时会被引 爆的火药桶,说不定什么琐事就会成为导火索。大熊忙碌粗心,洁心心灰意冷,俩人之间有了罅隙,有了不满,洁心不止一次发怒时大喊分手。洁心最脆弱的时候,大熊没有及时给予 支持和关注,洁心撕心裂肺的难过,大熊忙于工作,浑然不觉,洁心认为大熊不再爱自己,痴心错付,悔不当初,对自己的婚姻感到绝望,她给自己7天的时间思考,要不要走出这曾 欣欣然冲进来的围城。一位生性爱冒险的作家本杰明,无法走出半年前的丧妻之痛,带着一个青春期一个幼儿期的两个孩子,生活一团糟。本杰明放弃了专栏写作,拒绝开始新感情, 欲带着儿女换一个崭新环境开始新生活,于是他买了新房子,未曾想这房子却是一个经济窘迫、难以维系正常运转的动物园……本杰明走投无路之时,发现妻子给留下的“冒险基金”, 妻子自知无法常相陪伴,竭尽所能给丈夫最后的成全,这份爱让人唏嘘汗颜。本杰明给一双儿女讲述他和妻子初次见面,一见钟情,自惭形秽,踌躇不前时,自己骨子里天生的冒险精 神推着自己抓住了这份非你莫属的爱情。看着本杰明和一双儿女对着阴阳相隔的妻子、妈妈,互诉衷肠,洁心百感交集,泣不成声,她想世人听过见过无数美丽的爱情故事,但都是别 人的,现实的生活总会有种种难言的苦楚不如意,“万物皆有裂痕,那是光照进来的地方。”接受人和事的缺憾不完美,才是真实的生活。发起冷战的第三天,洁心不再继续臆想徒生 闷气,她决定给彼此一个机会,和大熊进行了一次推心置腹长谈,长谈的结果是洁心庆幸失而复得的婚姻和爱情,大熊说洁心没失去过,自己一直都在,从未离开,只是不该忽视了洁 心的内心需求。洁心开始找回自己的人生旅程,列清单,定目标,开始学习、锻炼、尝试,由内而外改变自己,每晚洁心大熊两人瑜伽对望,相伴练习腹肌撕裂。假期里,大熊更多地 陪伴洁心,两人相濡以沫走遍千山万水,洁心开始一展所长,用文字记录下他们的所见所闻,所感所悟。人到中年,两人相互珍惜,共同成长,生命和爱情焕发出绚丽光彩,照亮了彼 此的人生,很多小伙伴说因为他们,自己又开始相信并渴望爱情了。一日,,麦克是校园篮球明星,他本可以因篮球特长被全额奖学金保送进大学,但因女友怀孕他放弃了关键的冠军 赛而向女友求婚。20年后,麦克穷困潦倒,事业家庭均失意,戏剧性地他重返了17岁,仍是青春闪耀,17岁的他遇到现实中的一对儿女,中年的妻子,一切重来,当他又站在可以延 续辉煌改变人生命运的关键时刻,他意识到妻子和一双儿女才是他人生最宝贵的财富,依旧做出了和20年前相同的选择。当麦克和妻子紧紧相拥时,麦克又恢复了中年的模样,妻子说,