第二章 提取分离-色谱法1
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微填充柱色谱法的优点 21世纪 色谱科学将在生命科学等的前沿发挥他不
可替代的重要作用
7.色谱法（层析法、色离法）
（一）色谱法的定义 ➢ 定义：色谱法 (chromatography)，是一种物理或物
理化学的分离分析方法。 ➢ 原理：利用物质在固定相和流动相中的亲和力不同，使
混合物中的各组分分离。 ➢ 对比：以前学过的分离方法有：
1906年，Tsweet 发现色谱分离现象
碳酸钙 （固定相）
色石素油混醚合液 (流动相）
色谱柱
色带
植物色素分离图示
色谱法的发展
1、历史 30年代 茨维特分离绿叶色素，产生固液吸附色谱 40年代 液—液分配色谱法 、TLC、纸色谱 50年代 GC出现使色谱具备分离和在线分析功能 60年代 推出了色谱－质谱联用技术（GC-MS） 70年代 HPLC出现使色谱分析范围进一步扩大 80年代 出现了超临界流体色谱法、毛细管电泳法 90年代 崛起的电色谱法，兼有毛细管电泳法与微
7、结晶法的原理是（ ） A．相似相溶 B．溶解度差异 C．分配系数差异 D．温度差异 E．极性差异
第一章 总论
第三节 色谱法
【课堂目标】：
1、简述色谱法的作用，试说出其分类形式。 2、记忆色谱法中常用的术语
(相、固定相、流动相、支持剂)。 3、熟悉薄层吸附色谱的原理和色谱条件。 4、讨论、分析、记忆吸附强度与被分离成分的极性
1. 沉淀法 是利用物质溶解度的不同而进行分离。 2. 蒸馏法 是利用有机物沸点的差异进行分离。 3. 萃取法 是利用组分在水相和有机相（互不相 溶） 中的分配素数不同进行而分离。
色谱法基本术语
1、相：一种均匀的体系 2、固定相：固定在支持物（剂）上的体系
3、流动相：一种与固定相互不相溶的气体或液体。 4、支持剂（担体）：用于固定固体相，而其自身不
聚酰胺：高分子聚合物
硅 胶（SiO2·H2O）
结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构
表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心
特性：
1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性↑，吸附能力↑→强极性吸附中心，不易洗脱 吸附活性次序：活泼型>束缚型>游离型
2）吸水→失活 →105～110OC烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大 →500OC烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力
参与色谱行为的化学物质。
气相
源自文库油相
油
水相
水
氧化铝
（二）色谱分离技术的应用
1、分离混合物：适用于分离结构相近、性质相似的复杂化合物
2、定量分离：可用于检测混合物中各成分的含量 3、鉴定化合物：适于纯物质的鉴定
（三）色谱法的用途
➢用途：色谱法已广泛用于各个领域，是多组 分混合物首选的分离分析方法。以《中国药 典》2005版为例，一部收载中药1146个品 种，用薄层色谱进行鉴别或含量测定的有 1523项，用高效液相色谱进行定量分析的有 479种518项，用气相色谱进行检测的有47 种。二部收载的有1967，采用高效液相色谱 法的品种有848，现在色谱法已形成一门专 门的科学。
____、_____、____、___、____、
、
。
4、用结晶法纯化固体物质时，所选择的溶剂应该 是对欲纯化成分热时溶解度___,冷时溶解度___,而 对杂质的溶解度冷热都___或都____。
5、分馏法是利用混合物中各成分的____差异进行 分离的，适用于分离_____混合物。
6、在浓缩的水提液中加入一定量乙醇，不能除去 的成分是（ ） A．淀粉 B．树胶 C．黏液质 D．蛋白质 E．树脂
复习
1、请叙述下列名词： 分配系数 重结晶 结晶
2、两相溶剂萃取法的原理是
，
Ｋ＝Ｃw／CL公式中，Ｋ表示
，Ｃw表示 ，
ＣＬ表示
，当混合物中有Ａ、Ｂ两种成分
时， KA、KB值相差越大，分离效果越 ，
KA、KB值相差越小，则分离效果越＿＿，当
ＫＡ＝ＫＢ时，则
。
3、中药化学成分的主要分离方法有____、____、
3．按分离机制分类
分配色谱 吸附色谱 离子交换色谱 空间排阻色谱 毛细管电咏法 毛细管电色谱法
一、吸附色谱法
（一）基本原理：
以各种固体吸附剂为固定相，利用吸附剂对 样品中各成分吸附能力不同，及流动相对它们的 解吸附能力的不同，使各成分达到分离。
水
纸屑、瓜子壳
砖头、石块
吸附力类型：主要 物体表面作用力、氢键、络合、静电引力、范德华力等
（四）色谱法的分类
1．按两相分子的聚集状态分类
流动相
液体 液体
固定相
固体 液体
类型 液-固色谱 液相色谱 液-液色谱
气体 气体
固体 液体
气-固色谱 气相色谱 气-液色谱
超临界流体色谱法——流动相为超临界流体
2．按固定相的固定方式分类
柱色谱
填充柱色谱 毛细管柱色谱
纸色谱
平面色谱 薄层色谱
高分子薄膜色谱 毛细管电泳
适用：适合酸性或中性物质
商品氧化铝吸附剂分类及性能
氧化铝类型 碱性氧化铝
制法
氢氧化铝 脱水
PH 9-10
适用化合物
碱性成分 中性成分
碱性氧化 中性氧化铝 铝水洗至 7.5
中性
中性成分
酸碱不稳 定成分
工业氧化铝 酸性氧化铝 用酸、水洗 4-4.5
涤
酸性成分
中性耐酸 成分
分离实例
之间的相互关系。 5、熟记常见官能团的极性大小顺序
【教学重点】：
1. 色谱法常用术语：相，固定相，流动相，支持剂 2．色谱法的分类 3．吸附色谱法的原理及色谱条件的选择 4．常见官能团极性大小顺序
【教学难点】：
1. 色谱法常用术语：相，固定相，流动相，支持剂 2．吸附色谱法的原理及色谱条件的选择
色谱的起源
活度：分五级 （Ⅰ～Ⅴ） 一般：Ⅱ或Ⅲ
强～弱
活性级别 硅胶含水量%
氧化铝含水量
I
0
0
II
5
3
III
15
6
IV
25
10
V
38
15
概念：
活化：一定条件下，加热吸附剂除去其中的水分， 使其吸附力增强的过程。
脱活化：
极
硅胶：适用于中性和酸性成分分离
性 吸
附
氧化铝：商品氧化铝分三种规格
剂
常用吸附剂
活性炭：非极性吸附剂
结论：
吸附强度决定于吸附剂的吸附能力，还受被吸附成分 的性质影响，更与流动相的性质有关
吸附色谱的色谱条件
固定相：吸附剂
流动相：展开剂
被分离组分：
1、吸附剂
①有机类 淀粉、葡萄糖、聚酰胺、纤维素等
种类：
②无机类 氧化铝、硅胶、活性炭、碳酸钙、硅藻土等 •
选择原则：颗粒要细；有适宜的吸附力；不与成分反应
可替代的重要作用
7.色谱法（层析法、色离法）
（一）色谱法的定义 ➢ 定义：色谱法 (chromatography)，是一种物理或物
理化学的分离分析方法。 ➢ 原理：利用物质在固定相和流动相中的亲和力不同，使
混合物中的各组分分离。 ➢ 对比：以前学过的分离方法有：
1906年，Tsweet 发现色谱分离现象
碳酸钙 （固定相）
色石素油混醚合液 (流动相）
色谱柱
色带
植物色素分离图示
色谱法的发展
1、历史 30年代 茨维特分离绿叶色素，产生固液吸附色谱 40年代 液—液分配色谱法 、TLC、纸色谱 50年代 GC出现使色谱具备分离和在线分析功能 60年代 推出了色谱－质谱联用技术（GC-MS） 70年代 HPLC出现使色谱分析范围进一步扩大 80年代 出现了超临界流体色谱法、毛细管电泳法 90年代 崛起的电色谱法，兼有毛细管电泳法与微
7、结晶法的原理是（ ） A．相似相溶 B．溶解度差异 C．分配系数差异 D．温度差异 E．极性差异
第一章 总论
第三节 色谱法
【课堂目标】：
1、简述色谱法的作用，试说出其分类形式。 2、记忆色谱法中常用的术语
(相、固定相、流动相、支持剂)。 3、熟悉薄层吸附色谱的原理和色谱条件。 4、讨论、分析、记忆吸附强度与被分离成分的极性
1. 沉淀法 是利用物质溶解度的不同而进行分离。 2. 蒸馏法 是利用有机物沸点的差异进行分离。 3. 萃取法 是利用组分在水相和有机相（互不相 溶） 中的分配素数不同进行而分离。
色谱法基本术语
1、相：一种均匀的体系 2、固定相：固定在支持物（剂）上的体系
3、流动相：一种与固定相互不相溶的气体或液体。 4、支持剂（担体）：用于固定固体相，而其自身不
聚酰胺：高分子聚合物
硅 胶（SiO2·H2O）
结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构
表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心
特性：
1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性↑，吸附能力↑→强极性吸附中心，不易洗脱 吸附活性次序：活泼型>束缚型>游离型
2）吸水→失活 →105～110OC烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大 →500OC烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力
参与色谱行为的化学物质。
气相
源自文库油相
油
水相
水
氧化铝
（二）色谱分离技术的应用
1、分离混合物：适用于分离结构相近、性质相似的复杂化合物
2、定量分离：可用于检测混合物中各成分的含量 3、鉴定化合物：适于纯物质的鉴定
（三）色谱法的用途
➢用途：色谱法已广泛用于各个领域，是多组 分混合物首选的分离分析方法。以《中国药 典》2005版为例，一部收载中药1146个品 种，用薄层色谱进行鉴别或含量测定的有 1523项，用高效液相色谱进行定量分析的有 479种518项，用气相色谱进行检测的有47 种。二部收载的有1967，采用高效液相色谱 法的品种有848，现在色谱法已形成一门专 门的科学。
____、_____、____、___、____、
、
。
4、用结晶法纯化固体物质时，所选择的溶剂应该 是对欲纯化成分热时溶解度___,冷时溶解度___,而 对杂质的溶解度冷热都___或都____。
5、分馏法是利用混合物中各成分的____差异进行 分离的，适用于分离_____混合物。
6、在浓缩的水提液中加入一定量乙醇，不能除去 的成分是（ ） A．淀粉 B．树胶 C．黏液质 D．蛋白质 E．树脂
复习
1、请叙述下列名词： 分配系数 重结晶 结晶
2、两相溶剂萃取法的原理是
，
Ｋ＝Ｃw／CL公式中，Ｋ表示
，Ｃw表示 ，
ＣＬ表示
，当混合物中有Ａ、Ｂ两种成分
时， KA、KB值相差越大，分离效果越 ，
KA、KB值相差越小，则分离效果越＿＿，当
ＫＡ＝ＫＢ时，则
。
3、中药化学成分的主要分离方法有____、____、
3．按分离机制分类
分配色谱 吸附色谱 离子交换色谱 空间排阻色谱 毛细管电咏法 毛细管电色谱法
一、吸附色谱法
（一）基本原理：
以各种固体吸附剂为固定相，利用吸附剂对 样品中各成分吸附能力不同，及流动相对它们的 解吸附能力的不同，使各成分达到分离。
水
纸屑、瓜子壳
砖头、石块
吸附力类型：主要 物体表面作用力、氢键、络合、静电引力、范德华力等
（四）色谱法的分类
1．按两相分子的聚集状态分类
流动相
液体 液体
固定相
固体 液体
类型 液-固色谱 液相色谱 液-液色谱
气体 气体
固体 液体
气-固色谱 气相色谱 气-液色谱
超临界流体色谱法——流动相为超临界流体
2．按固定相的固定方式分类
柱色谱
填充柱色谱 毛细管柱色谱
纸色谱
平面色谱 薄层色谱
高分子薄膜色谱 毛细管电泳
适用：适合酸性或中性物质
商品氧化铝吸附剂分类及性能
氧化铝类型 碱性氧化铝
制法
氢氧化铝 脱水
PH 9-10
适用化合物
碱性成分 中性成分
碱性氧化 中性氧化铝 铝水洗至 7.5
中性
中性成分
酸碱不稳 定成分
工业氧化铝 酸性氧化铝 用酸、水洗 4-4.5
涤
酸性成分
中性耐酸 成分
分离实例
之间的相互关系。 5、熟记常见官能团的极性大小顺序
【教学重点】：
1. 色谱法常用术语：相，固定相，流动相，支持剂 2．色谱法的分类 3．吸附色谱法的原理及色谱条件的选择 4．常见官能团极性大小顺序
【教学难点】：
1. 色谱法常用术语：相，固定相，流动相，支持剂 2．吸附色谱法的原理及色谱条件的选择
色谱的起源
活度：分五级 （Ⅰ～Ⅴ） 一般：Ⅱ或Ⅲ
强～弱
活性级别 硅胶含水量%
氧化铝含水量
I
0
0
II
5
3
III
15
6
IV
25
10
V
38
15
概念：
活化：一定条件下，加热吸附剂除去其中的水分， 使其吸附力增强的过程。
脱活化：
极
硅胶：适用于中性和酸性成分分离
性 吸
附
氧化铝：商品氧化铝分三种规格
剂
常用吸附剂
活性炭：非极性吸附剂
结论：
吸附强度决定于吸附剂的吸附能力，还受被吸附成分 的性质影响，更与流动相的性质有关
吸附色谱的色谱条件
固定相：吸附剂
流动相：展开剂
被分离组分：
1、吸附剂
①有机类 淀粉、葡萄糖、聚酰胺、纤维素等
种类：
②无机类 氧化铝、硅胶、活性炭、碳酸钙、硅藻土等 •
选择原则：颗粒要细；有适宜的吸附力；不与成分反应