病原微生物标本的临床规范化采集、分离和鉴定
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怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3d清晨痰液 送检。
深部真菌 ？
24 h内1份；脓性 2ml
唾液
带血痰
脓痰
粘液样痰
痰液 操作流程 痰液
肉眼观察
培养前处理
涂片检查
羊血琼脂平板
巧克力平板
伊红亚甲蓝/中国蓝 或 麦康凯琼脂
CO2环境需氧培养
35℃ 18-24h 观察菌落和涂片染色镜检
Leabharlann Baidu
鉴定试验
药敏试验
新鲜标本 用抗菌药物之前/<72h 确定采集时间、部位和种类 注明来源和检验目的 置于无菌容器，不能接触抑制细菌生长物质
血培养-采集时机
• 急性高热，在10分钟内在不同部位分别各采集1套血培 养，共2套； • 非急性高热疾病，在24小时内，由不同的部位抽取2-3 套的标本；
• 可疑细菌性心内膜炎时，在1～2 h内采集3份血标本， 如果24 h后阴性 ,再采集3份以上的血标本； • 不明原因发热，如隐性脓肿 ,伤寒热和波浪热，可由不 同的部位抽取2-3套的标本，每套间隔≧1小时，当培养24至 48小时后，若为阴性培养，应再送2-3套。
60%以上实验误差发生在分析前
标本质量评估－痰涂片 Garbage in！！
痰涂片的判定
分类
WBC/LF
鳞状上皮细胞/LF
5
>25
<10
4
>25
10-25
3
>25
>25
2
10-25
>25
1
<10
>25
分类中1～3类不做培养，要求重新留取标本；
4、5类为合格标本；
上呼吸道标本
咽后壁拭子 鼻拭子 鼻咽吸取液
注意事项：
采用专用拭子
拭子应避免触及舌、口 腔黏膜和唾液。
采集标本前数小时不可 用消毒药物漱口或接触 病灶局部。
鼻拭子
将1根聚丙烯纤维头的 塑料杆拭子轻轻插入鼻 道内鼻腭处，停留片刻 后缓慢转动退出。
取另1根聚丙烯纤维头 的塑料杆拭子以同样的 方法采集另一侧鼻孔。
两根拭子可浸入同一含 2ml转运液的管中，尾 部弃去，旋紧管盖。
咳痰困难者可用 3％ ～10％的无菌盐水25ml雾 化吸入，使痰液易于排出。
痰标本的采集以晨痰为准，此时患者痰量较多且 含菌量也多。
标本采集后1～2 h内必须立即进行实验室处理， 室温下延搁2 h：肺炎链球菌、流感嗜血杆菌 铜绿假单胞菌
对于普通细菌性肺炎，痰标本送检每天1次， 连续2～3d。不建议24 h内多次采集痰标本送 检，除非痰液外观性状出现改变。
采集量
时机
次数
方法
标本采集与运送
标本运送对细菌培养 结果的影响
➢ 运送时间 ➢ 运送方法
采集何种标本
PE：左、右大腿多处注射点、多发溃疡、有显著捻发音
最有价值的细菌学检测标本
血液 脑脊液 胆汁 胸腹水 关节液 其他无菌体液（尿）或分泌液
微生物标本采集原则
➢ 基本原则：采集标本注意无菌操作 ➢ 避免杂菌污染
鼻咽吸取液的收集
1. 将吸液管与真空泵相连 2. 将软管与上腭平行插入鼻孔 3. 使用真空泵 4. 缓慢的移出同时轻轻旋转 5. 使用同一个管子采集另一鼻孔的液体 6. 收集的液体用3ml VTM 冲洗出，放入
采样管中
痰标本
用湿牙刷 (勿用牙膏)轻刷口腔黏膜 、舌头和牙 龈，再用清水或凉开水漱 口，戴假牙者取出假牙 后漱口，以除去口腔内大量杂菌，用力咳出肺深 部的痰液，直接吐入无菌、清洁、干燥、不渗漏 及不吸水的广口带盖的容器中，标本量应 >1ml。
种类繁多复杂！
肺炎支原体 肺炎衣原体 嗜肺军团菌
大肠埃希菌 嗜麦芽窄食单胞菌
3
新的抗菌药物不断涌现，但感染 性疾病的发病率和病死率仍然居高不 下。
细菌耐药性不断增强—ET/TT
ESBL 肠杆菌科细菌 MDR 铜绿假单胞菌 MDR 鲍曼不动杆菌
MRSA
VRE
标本采集与运送
标本采集对细菌培养
结果的影响
血培养-采集方法
•采血前准备：穿工作服、戴口罩、洗手或用速干手消毒液按 六步洗手法擦手
•皮肤消毒
a)用安尔碘（或其它本院批准的消毒液）消毒穿刺点皮 肤30秒以上，从穿刺点向外以10cm直径画圈进行消毒；
b)对碘过敏的病人，用75％酒精消毒，消毒60秒，待穿 刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血；
•血培养瓶消毒：用75%酒精消毒血培养瓶橡胶皮塞子，作用 60s以上，在血液注入血培养瓶之前，用无菌纱布或棉签清除 橡皮塞子表面剩余的酒精。
病原微生物标本的临床规范化 采集、分离和鉴定
准确的病原学诊断 针对性病原学治疗
正确的微生物标本采集和运送， 是准确的病原学诊断的前提！
社区呼吸道感染 致病菌监测
院内呼吸道感染 致病菌监测
肺炎链球菌 流感嗜血杆菌 卡他莫拉菌 金葡菌
金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 鲍曼不动杆菌
肺炎克雷伯菌
肺炎克雷伯杆菌
下呼吸道标本
痰标本
• 自然咳痰、诱导痰
经支气管镜采集
• 肺泡灌洗液、保护性毛刷等
气管和人工气道吸出物
咽拭子
患者清水漱口后，由检查者 将其舌外拉，用棉拭子将咽 后壁或悬雍垂的后侧反复擦 拭数次
化脓性扁桃体炎、口腔念珠 菌病时，直接用棉拭子在病 灶部位擦拭
插入运送培养基中立即送检， 防止干燥
报告
普通痰培养存在的问题
► 时效性：一般需48～72小时，而重症肺炎需要及早 针对性治疗
► 在CAP只有30%±病人可获得有意义的痰培养结果 ► 采集标本前应用抗菌药物，将降低苛养菌的阳性率 ► 在很多情况下难以排除细菌定植或污染 ► 常规培养一般分离不到厌氧菌
与病理检查相似的微生物标本留取
经气管穿刺吸引（transtracheal aspiration,TTA） 经胸壁针刺吸引（transthoracic needle aspiration, TNA） 经支气管镜采样
支气管肺泡灌洗（bronchoalveolar lavage, BAL） 经支气管镜直接吸引 防污染样本毛刷（protective specimen brush, PSB） 开胸肺活检（open-lung biopsy，OLB） 经人工气道吸引分泌物（endotracheal aspirates，ETA）
采血量：成人采血量是5～10 ml/瓶，儿童1～5 ml/瓶。
血培养-标本的运送和保存
•血培养采集后必须马上送检，在室温中不得 超过2小时，不得放入冰箱冷冻；冷藏？ •血培养可在一天24小时内的任何时间采集。
最有价值的细菌学检测标本
血液 脑脊液 胆汁 胸腹水 关节液 其他无菌体液（尿）或分泌液
深部真菌 ？
24 h内1份；脓性 2ml
唾液
带血痰
脓痰
粘液样痰
痰液 操作流程 痰液
肉眼观察
培养前处理
涂片检查
羊血琼脂平板
巧克力平板
伊红亚甲蓝/中国蓝 或 麦康凯琼脂
CO2环境需氧培养
35℃ 18-24h 观察菌落和涂片染色镜检
Leabharlann Baidu
鉴定试验
药敏试验
新鲜标本 用抗菌药物之前/<72h 确定采集时间、部位和种类 注明来源和检验目的 置于无菌容器，不能接触抑制细菌生长物质
血培养-采集时机
• 急性高热，在10分钟内在不同部位分别各采集1套血培 养，共2套； • 非急性高热疾病，在24小时内，由不同的部位抽取2-3 套的标本；
• 可疑细菌性心内膜炎时，在1～2 h内采集3份血标本， 如果24 h后阴性 ,再采集3份以上的血标本； • 不明原因发热，如隐性脓肿 ,伤寒热和波浪热，可由不 同的部位抽取2-3套的标本，每套间隔≧1小时，当培养24至 48小时后，若为阴性培养，应再送2-3套。
60%以上实验误差发生在分析前
标本质量评估－痰涂片 Garbage in！！
痰涂片的判定
分类
WBC/LF
鳞状上皮细胞/LF
5
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4
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10-25
3
>25
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10-25
>25
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分类中1～3类不做培养，要求重新留取标本；
4、5类为合格标本；
上呼吸道标本
咽后壁拭子 鼻拭子 鼻咽吸取液
注意事项：
采用专用拭子
拭子应避免触及舌、口 腔黏膜和唾液。
采集标本前数小时不可 用消毒药物漱口或接触 病灶局部。
鼻拭子
将1根聚丙烯纤维头的 塑料杆拭子轻轻插入鼻 道内鼻腭处，停留片刻 后缓慢转动退出。
取另1根聚丙烯纤维头 的塑料杆拭子以同样的 方法采集另一侧鼻孔。
两根拭子可浸入同一含 2ml转运液的管中，尾 部弃去，旋紧管盖。
咳痰困难者可用 3％ ～10％的无菌盐水25ml雾 化吸入，使痰液易于排出。
痰标本的采集以晨痰为准，此时患者痰量较多且 含菌量也多。
标本采集后1～2 h内必须立即进行实验室处理， 室温下延搁2 h：肺炎链球菌、流感嗜血杆菌 铜绿假单胞菌
对于普通细菌性肺炎，痰标本送检每天1次， 连续2～3d。不建议24 h内多次采集痰标本送 检，除非痰液外观性状出现改变。
采集量
时机
次数
方法
标本采集与运送
标本运送对细菌培养 结果的影响
➢ 运送时间 ➢ 运送方法
采集何种标本
PE：左、右大腿多处注射点、多发溃疡、有显著捻发音
最有价值的细菌学检测标本
血液 脑脊液 胆汁 胸腹水 关节液 其他无菌体液（尿）或分泌液
微生物标本采集原则
➢ 基本原则：采集标本注意无菌操作 ➢ 避免杂菌污染
鼻咽吸取液的收集
1. 将吸液管与真空泵相连 2. 将软管与上腭平行插入鼻孔 3. 使用真空泵 4. 缓慢的移出同时轻轻旋转 5. 使用同一个管子采集另一鼻孔的液体 6. 收集的液体用3ml VTM 冲洗出，放入
采样管中
痰标本
用湿牙刷 (勿用牙膏)轻刷口腔黏膜 、舌头和牙 龈，再用清水或凉开水漱 口，戴假牙者取出假牙 后漱口，以除去口腔内大量杂菌，用力咳出肺深 部的痰液，直接吐入无菌、清洁、干燥、不渗漏 及不吸水的广口带盖的容器中，标本量应 >1ml。
种类繁多复杂！
肺炎支原体 肺炎衣原体 嗜肺军团菌
大肠埃希菌 嗜麦芽窄食单胞菌
3
新的抗菌药物不断涌现，但感染 性疾病的发病率和病死率仍然居高不 下。
细菌耐药性不断增强—ET/TT
ESBL 肠杆菌科细菌 MDR 铜绿假单胞菌 MDR 鲍曼不动杆菌
MRSA
VRE
标本采集与运送
标本采集对细菌培养
结果的影响
血培养-采集方法
•采血前准备：穿工作服、戴口罩、洗手或用速干手消毒液按 六步洗手法擦手
•皮肤消毒
a)用安尔碘（或其它本院批准的消毒液）消毒穿刺点皮 肤30秒以上，从穿刺点向外以10cm直径画圈进行消毒；
b)对碘过敏的病人，用75％酒精消毒，消毒60秒，待穿 刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血；
•血培养瓶消毒：用75%酒精消毒血培养瓶橡胶皮塞子，作用 60s以上，在血液注入血培养瓶之前，用无菌纱布或棉签清除 橡皮塞子表面剩余的酒精。
病原微生物标本的临床规范化 采集、分离和鉴定
准确的病原学诊断 针对性病原学治疗
正确的微生物标本采集和运送， 是准确的病原学诊断的前提！
社区呼吸道感染 致病菌监测
院内呼吸道感染 致病菌监测
肺炎链球菌 流感嗜血杆菌 卡他莫拉菌 金葡菌
金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 鲍曼不动杆菌
肺炎克雷伯菌
肺炎克雷伯杆菌
下呼吸道标本
痰标本
• 自然咳痰、诱导痰
经支气管镜采集
• 肺泡灌洗液、保护性毛刷等
气管和人工气道吸出物
咽拭子
患者清水漱口后，由检查者 将其舌外拉，用棉拭子将咽 后壁或悬雍垂的后侧反复擦 拭数次
化脓性扁桃体炎、口腔念珠 菌病时，直接用棉拭子在病 灶部位擦拭
插入运送培养基中立即送检， 防止干燥
报告
普通痰培养存在的问题
► 时效性：一般需48～72小时，而重症肺炎需要及早 针对性治疗
► 在CAP只有30%±病人可获得有意义的痰培养结果 ► 采集标本前应用抗菌药物，将降低苛养菌的阳性率 ► 在很多情况下难以排除细菌定植或污染 ► 常规培养一般分离不到厌氧菌
与病理检查相似的微生物标本留取
经气管穿刺吸引（transtracheal aspiration,TTA） 经胸壁针刺吸引（transthoracic needle aspiration, TNA） 经支气管镜采样
支气管肺泡灌洗（bronchoalveolar lavage, BAL） 经支气管镜直接吸引 防污染样本毛刷（protective specimen brush, PSB） 开胸肺活检（open-lung biopsy，OLB） 经人工气道吸引分泌物（endotracheal aspirates，ETA）
采血量：成人采血量是5～10 ml/瓶，儿童1～5 ml/瓶。
血培养-标本的运送和保存
•血培养采集后必须马上送检，在室温中不得 超过2小时，不得放入冰箱冷冻；冷藏？ •血培养可在一天24小时内的任何时间采集。
最有价值的细菌学检测标本
血液 脑脊液 胆汁 胸腹水 关节液 其他无菌体液（尿）或分泌液