20种水产养殖常用中草药体外抑菌试验研究
22种中草药体外抗菌作用的研究
22种中草药体外抗菌作用的研究中草药自古以来就被广泛应用于中医中草药体外抗菌学研究，近年来，越来越多的研究报告显示，许多中草药具有广谱抗菌活性。
本文将介绍22种中草药的体外抗菌作用研究。
1. 黄芩(Huang Qin)：黄芩具有对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等多种常见细菌的抑制作用。
2. 当归(Dang Gui)：当归可抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌等多种细菌的生长。
3. 莪术(E Zhu)：莪术对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌等具有显著的抗菌活性。
4. 丹参(Dan Shen)：丹参对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抑制作用。
5. 白芍(Bai Shao)：白芍可抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长。
6. 当归(Dang Shen)：当归对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的生长具有抑制作用。
7. 山楂(Shan Zha)：山楂具有对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的抑制作用。
8. 牛蒡子(Niu Bang Zi)：牛蒡子对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌等具有抗菌活性。
9. 郁郁葱葱(Yu Yu Cong Cong)：郁郁葱葱对白色念珠菌和大肠杆菌有明显的抑制作用。
10. 菊花(Ju Hua)：菊花可抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的生长。
11. 蓝根(Lan Gen)：蓝根对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抑制作用。
12. 萝卜(Ruo Bo)：萝卜具有对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用。
13. 桂皮(Gui Pi)：桂皮对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抑制作用。
14. 钩藤(Gou Teng)：钩藤可抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的生长。
15. 红景天(Hong Jing Tian)：红景天对白色念珠菌和金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用。
16. 金银花(Jin Yin Hua)：金银花具有对链球菌和大肠杆菌的抑制作用。
17. 藏红花(Zang Hong Hua)：藏红花对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抗菌活性。
10种复方中草药对鲟源海豚链球菌体外抑菌实验的研究
袁国尚 1,2 张安青 3 姚 丽 1,2 何柯微 1,2 吴洪臣 1,2 姜海波 1,2,4 文 明 1,4,5 邵 俭 1,2 唐 黎 1,2,4 ( 1. 贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025；2. 贵州大学特种水产研究所，贵州 贵阳 550025； 3. 铜仁市农业农村局渔业技术推广站，贵州 铜仁 554300；4. 贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验
室，贵州 贵阳 550025；5. 贵州省动物生物制品工程技术研究中心，贵州 贵阳 550025)
我国是鲟鱼养殖量最大的国家，也是鲟鱼种 类分布较多的国家，鲟鱼具有极高的经济价值和 科研价值，然而一直以来疾病是威胁众多养殖户 的一个重大问题。细菌性疾病在我国鱼类的养殖 中尤为普遍与常见，广大的养殖户都在使用抗生 素类药物进行治疗，过多和长期性地使用抗生素 类药物不仅会加剧养殖水环境的破坏，还会使病 原菌产生耐药性，不利于病害的治疗。因此，寻 找能替代抗生素且不会污染养殖水域环境的药物 成为水产养殖的一个重要研究方向。中草药不仅 具有一定的抗菌效果，而且还具有来源广泛、毒 副作用小、残留少、污染小等优点，成了替代抗 生素的优选。
一、材料与方法 1. 实验菌株 鲟源海豚链球菌为北京市水产 技术推广站提供。 2. 实验药物 选取小柴胡汤、芍药汤、玉屏 风散、痛泄要方、黄连解毒汤、升麻葛根汤、茵 陈蒿汤、小青龙汤、大承气汤和猪苓汤 10 种具有 消炎抗菌等功效的复方中草药为研究对象，实验
前将 10 种复方中的全部单味中草药分别粉碎后过 60 目筛，干燥保存备用。
4. 菌悬液的制备 取保藏菌种，接种在固体 培养基中，28℃培养 24 小时。挑取单菌落于 TSB 液体试管中进行摇床培养 24 小时(28℃，140 转/ 分)，调整菌液浓度为 2×108～3×108 CFU/毫升 ， 用于后续实验。
水产动物常见病原菌的耐药性分析及中草药体外抑菌活性的检测_张传亮
近年来, 随着水产养殖品种的增多、集约化程度 的提高和养殖环境的恶化, 各类病害亦频繁发生, 严 重制约了水产养殖业的持续发展。通过病原学研究 发现弧菌 ( V ibrio ) 、气单胞菌 ( A erom onas ) 、类志 贺邻 单胞菌 ( P lesiom onas shigelloides) 和假单胞菌 ( P seudom onas)是引起安徽省水产动物细菌性疾病常见的 4 种病原菌 [ 1] 。目前抗生素仍是防治这些细菌性疾病 的主要手段, 但是抗生素长期使用所致的细菌耐药性 问题和药 物残留 所致 的水产 品安全 问题愈 来愈 突 出 [ 2] 。因此, 加强某地区水产动 物常见病原菌的 耐
药性监测, 了解其耐药现状和耐药机制, 减缓耐药菌 株的产生, 同时研究开发既能有效防治细菌性疾病, 又能解决药物残留和细菌耐药性问题的渔用中草药
具有重要意义。本研究对安徽省水产动物常见病原 菌的耐药性进行了系统测定, 分析了其耐药现状和耐 药机制, 在此基础上选取 27种单味中草药和 5 个中 草药复方配伍测定其对常见病原菌耐药菌株的体外
aerug inosa stra ins in a ll de tected pa thogens m ight produce ESBLs and the rate of ESBL s was 8. 69% . Rh izoma cop tid is,
Rheum officinale, F los lonicerae, Sp ica p runellae, Euphorbia hum ifusa, Cortex M outan, Por tu laca oleracea L. and Fructus for-
耐药率均为 100% 。供试菌中仅检出 2株铜绿假单胞菌为 产 ESBL s株, 检出率为 8. 69% 。黄连、大黄、金银花、夏枯
浅谈中草药在水产养殖病害防治的研究与应用
浅谈中草药在水产养殖病害防治的研究与应用1. 中草药的种类与功效中草药是指经过鉴定，并具有一定药用价值的植物药材。
在水产养殖中，常用的中草药有枳实、苦参、连翘、黄连等。
这些中草药具有抗菌、抗病毒、抗炎等多种功效，可以用于预防和治疗水产养殖中的细菌、病毒等病害。
2. 中草药的提取与应用中草药的有效成分主要存在于其根、茎、叶等部位，常用的提取方法有水煎、浸泡、蒸馏等。
提取得到的中草药提取液，可以直接添加到养殖水中进行预防和治疗。
还可以制成中草药浸泡剂、水剂、粉剂等不同形式的药剂，便于养殖户的使用。
3. 中草药在水产养殖中的应用研究目前，国内外对中草药在水产养殖中的应用研究逐渐增多。
一些专家学者通过实验研究，发现了中草药对水产养殖中的常见病害具有一定的预防和治疗效果。
也探讨了中草药在水产养殖中的使用方法、用药浓度、用药时机等方面的问题，为中草药在水产养殖中的应用提供了理论依据和实践经验。
1. 中草药在鱼类细菌性病害防治中的应用细菌性病害是水产养殖中常见的病害之一，严重影响了养殖效益。
一些研究发现，枳实、苦参等中草药的提取液对鱼类细菌性病害具有一定的抑制作用，可以有效地减少病害的发生和传播。
虾蟹类病毒性病害对水产养殖业造成了严重的损失。
研究表明，连翘、黄连等中草药提取液中的有效成分具有抗病毒作用，可以显著降低虾蟹类的感染率，为虾蟹类养殖提供了新的防治方法。
1. 应用前景中草药在水产养殖病害防治中的应用前景十分广阔。
中草药具有天然、安全的特点，对水产养殖环境和生态没有负面影响。
中草药的提取方法简单，成本较低，适合于水产养殖户自行制剂使用。
中草药的多样性和多功性，为水产养殖中不同病害的治疗提供了多种选择。
2. 存在的问题中草药在水产养殖中的应用也存在一些问题。
中草药的抗菌、抗病毒机制尚不完全清楚，其有效成分的提取和利用还需要进一步研究。
中草药的质量和用药方法的标准化问题亟待解决。
中草药在长期使用中可能会出现一些副作用和毒性问题，需要进一步的临床试验和安全评估。
16种中草药提取物对2株草鱼致病菌的体外抑杀菌作用
16种中草药提取物对2株草鱼致病菌的体外抑杀菌作用李赫;胡宗云;张健;宋文华;富丽静【摘要】用纸片扩散法测定受试物的抑菌作用和二倍稀释法测定受试物最小抑菌质量浓度(MIC)及最小杀菌质量浓度(MBC)的方法,研究地肤子、小茴香、茯苓、蛇床子、牡丹皮、黄芪、陈皮、藿香、猪苓、高良姜、黄柏、苦参、昆布、肉桂、姜黄和丁香16种中草药提取物对2株草鱼致病性嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila和类志贺邻单胞菌Plesiomonas shigelloides的体外抑菌作用.结果显示,茯苓对嗜水气单胞菌的抑菌效果最好,抑菌圈直径达20mm以上,MIC为15.63 mg/mL,小茴香、昆布和姜黄次之,MIC均为31.25mg/mL;丁香对类志贺邻单胞菌的抑菌效果最好,抑菌圈直径为(18.93±0.37)mm,其MIC为31.25 mg/mL,黄芪次之,其MIC为62.5 mg/mL.%The bacteriostatic effects of 16 Chinese herbal medicines including fructus kochiae,Foeniculum vulgare,Poria cocos,fructus cnidii,Cortex moutan,astragalus root,tangerinepeel,patchouli,polyporus,galangal,phellodendron bark,flavescent sophora root,kelp,cinnamon,Curcuma longa and clove against two pathogenic bacteria Aeromonas hydrophila and Plesiomonas shigelloides from grass carp (Ctenopharyngodon idellus) in vitro were detected through disc diffusion method and via determination of minimal inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) by double dilution method.The results showed that Poria cocos had the best inhibitory effect on Aeromonas hydrophila,with the maximal inhibitory circle of over 20 mm,and MIC of 15.63 mg/mL,followed by Foenieulum vulgare,kelp and Curcuma longa,with MIC of 31.25 mg/mL.Flos caryophyllihad the best inhibitory effect on Ples iomonas shigelloides,with the maximal MIC of (18.93 ± 0.37) mm,and MIC of 31.25 mg/mL,followed by Astragalus,with MIC of 62.5 mg/mL.【期刊名称】《水产学杂志》【年(卷),期】2018(031)002【总页数】5页(P41-45)【关键词】中草药;草鱼;致病菌;最小抑菌浓度;最小杀菌浓度【作者】李赫;胡宗云;张健;宋文华;富丽静【作者单位】辽宁省淡水水产科学研究院,辽宁省水生动物病害防治重点实验室,辽宁辽阳 111000;辽宁省淡水水产科学研究院,辽宁省水生动物病害防治重点实验室,辽宁辽阳 111000;辽宁省淡水水产科学研究院,辽宁省水生动物病害防治重点实验室,辽宁辽阳 111000;辽宁省淡水水产科学研究院,辽宁省水生动物病害防治重点实验室,辽宁辽阳 111000;辽宁省淡水水产科学研究院,辽宁省水生动物病害防治重点实验室,辽宁辽阳 111000【正文语种】中文【中图分类】S948;S853.72草鱼肉质细嫩、营养价值高，倍受人们的青睐，已成为池塘高密度集约化养殖的主要种类之一。
25种中草药对普通变形杆菌的体外抑菌试验
水产科技情报 ２０１９，４６（６）
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ｄｉ）、青 皮 （ＣｉｔｒｕｓｒｅｔｉｃｕｌａｔｅＢｌａｎｃｏ）、黄 芩 （Ｓｃｕｔｅ－ ｌｌａｒｉａｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓＧｅｏｒｇｉ）、乌 梅 （Ｐｒｕｎｕｓｍｕｍｅ）、石 榴皮 （Ｐｅｒｉｃａｒｐｉｕｍ ｇｒａｎａｔｉ）、半 枝 莲 （Ｓｃｕｌｅｌｌａｒｉａ ｂａｒｂａｔａ）、覆 盆 子 （Ｒｕｂｕｓｉｄａｅｕｓ）、冬 青 （Ｉｌｅｘ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓＳｉｍｓ）、杞子（Ｆｒｕｃｔｕｓｌｙｃｉｉ）、丹参（Ｄａｎｓｈ ｅｎｒｏｏｔ）、重 楼 （Ｒｈｉｚｏｍａｐａｒｉｄｉｓ）、苏 木 （Ｌｉｇｎｕｍ ｓａｐｐａｎ）、菊 花 ［Ｄｅｎｄｒａｎｔｈｅｍａｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍ（Ｒａｍａｔ） Ｔｚｖｅｌ］、香附 （ＣｙｐｅｒｕｓｒｏｔｕｎｄｕｓＬ．）、艾叶 （Ｆｏｌｉｕｍ ａｒｔｅｍｉｓｉａｅＡｒｇｙｉ）、紫苏叶（Ｐｅｒｉｌｌａｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ）、天葵 子（Ｓｅｍｉａｑｕｉｌｅｇｉａａｄｏｘｏｉｄｅｓ）、杜仲（Ｃｏｒｔｅｘｅｕｃｏｍｎ ｎａ）、红 藤 （Ｓａｒｇｅｎｔｇｌｏｒｙｖｉｎｅｓｔｅｍ）、金 樱 子 （Ｒｏｓｅ ｌａｅｖｉｇａｔａＭｉｃｈｘ）、苍 术 （Ｒｈｉｚｏｍａａｔｒａｃｔｙｌｏｄｉｓ）、鸡 血 藤 （Ｓｐａｔｈｏｌｏｂｕｓｓｕｂｅｒｅｃｔｕｓ）、红 花 （Ｃａｒｔｈａｍｕｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓＬ．），均购于佛山市国丹堂药店。营养肉 汤、营 养 琼 脂 等 购 于 广 东 环 凯 微 生 物 科 技 有 限 公司。 １．２ 试验方法 １．２．１ 药液制备
３２８ ｄｏｉ：１０．１６４４６／ｊ．ｃｎｋｉ．１００１－１９９４．２０１９．０６．００７
水产科技情报 ２０１９，４６（６）
陈言峰１，２ 杨映１，２ 于辉１，２ 关婉婷２ 李焯莹２ 刘枫２ （１佛山科学技术学院广东省动物分子设计与精准育种重点实验室，广东佛山 ５２８２３１；
几种常见淡水鱼致病菌的药敏试验
几种常见淡水鱼致病菌的药敏试验摘要研究了强力霉素、盐酸左氧氟沙星、诺氟沙星、红霉素、甲硝唑、土霉素、氟苯尼考、氟强先锋、呋喃妥因9种抗生素和五倍子、大黄、金银花、黄芩、陈皮、黄连、板蓝根、黄柏、连翘、黄梅10种中草药对迟缓爱德华氏菌、嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、嗜麦芽寡养单胞菌和藤黄微球菌5种常见淡水鱼类致病菌的体外抑菌效果。
结果显示：抗生素中氟苯尼考、诺氟沙星、红霉素、呋喃妥因对这几种致病菌抑菌效果明显；中草药中五倍子、大黄、黄芩的抑菌效果较好。
关键词淡水鱼致病菌；中草药；抗生素；药敏试验近年来，随着水产养殖规模的扩大和集约化程度的提高，养殖环境日益恶化，近年来水产养殖病害发病率越来越高。
细菌性疾病是水产养殖动物最重要的疾病之一，2005年以来暴发的生物源性疾病中，细菌性疾病所占比例超过55%，严重制约了水产业的发展[1]。
由于渔民缺乏基本的药理知识，存在滥用抗生素类药物的现象，导致耐药菌株的产生，给细菌病的防治带来了很大的困难。
选取了迟缓爱德华氏菌、嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、嗜麦芽寡养单胞菌和藤黄微球菌5种常见淡水鱼的致病菌进行体外中西药抑菌试验，旨在为淡水鱼细菌病防治提供依据，减少致病菌耐药菌株的产生。
金黄色葡萄球菌、嗜水气单胞菌、迟缓爱德华氏菌、嗜麦芽寡养单胞菌和藤黄微球菌，均是淡水养殖动物最常见的致病菌，它们的大量繁殖给淡水鱼类养殖业带来巨大威胁。
其中金黄色葡萄球菌是毒力最强的引起化脓性疾病的化脓菌，可以产生溶血毒素、肠毒素、血浆凝固酶等毒素和酶，引起水生动物外伤化脓死亡[2]。
嗜水气单胞菌通常能够引起的疾病多为暴发性传染病，患病水生动物死亡率较高，通常导致鱼、鳖、鳗、牛蛙及蚌等水生动物的败血症及局部感染[3]。
藤黄微球菌是黄鳝出血病的主要病原，黄鳝感染后出现体表弥散性出血、肛门红肿外翻、肝脏肿大出血等症状并造成高死亡率[4]。
嗜麦芽寡养单胞菌是近年来引起斑点叉尾鮰高致死性、传染性疾病的主要病原之一，发病鱼主要出现体表褪色斑、脱肛、严重肠炎和腹水等病征，并以肠套叠为主要病理特征，其发病率和死亡率均在90%以上，造成的经济损失极其严重[5]。
100种中草药对溶藻弧菌的体外抑菌实验
100种中草药对溶藻弧菌的体外抑菌实验陈辉;张其中【摘要】为筛选有效控制水产养殖动物弧菌病的中草药,本研究采用琼脂扩散法测定100种常见中草药提取液对溶藻弧菌的抑制作用.采用t检验对其中24种有明显抑菌效果的药液pH值调至中性前后的抑菌效果进行分析比较,结果表明它们的抑菌效果下降极显著(p＜0.01).采用双倍试管稀释法测定7种中草药在pH值调至中性后的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC).结果表明,在药液pH值调至中性后,五倍子、公丁香和石榴皮能够有效抑杀溶藻弧菌.五倍子的MIC和MBC值均为7.813 mg/mL;石榴皮的MIC和MBC值均为15.625 mg/mL;公丁香的MIC和MBC值均为125mg/mL;黄连、黄精和大黄的MIC和MBC值均为500 mg/mL;五味子的MIC和MBC均为1 000mg/mL.%The inhibitory effects of 100 Chinese herbal medicines on Vibrio alginolyticus were tested with disc diffusion method and 24 herbs showed the antibacteria effects. However, the antibacterial effect dropped down very significantly (p<0.01) when the extract solution pH values of the herbs were regulated to about 7.0 from acid primary medicine solutions. The tube dilution method was used to measure the minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) of seven Chinese herbal medicines which were able to inhibit the growth of V. alginolyticus. The results showed that Rhus chinensis, Flos caiyophylli and Punica granatum had inhibitory and bactericidal effects against V. alginolyticus when the extract solution pH values were regulated to approximate 7.0, and the MIC and MBC were 7.813 mg/mL for R. cbinensis, 15.625 mg/mL for P. granatum, 125 mg/mLfor F. caryophylli, 500 mg/mL for Coptis chinensis, Polygonatum sibiricum and Rheum officinale, and 1 000 mg/mL for Schisandra chinensis, respectively.【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2012(034)006【总页数】4页(P452-455)【关键词】溶藻弧菌;中草药;抑菌试验【作者】陈辉;张其中【作者单位】暨南大学水生生物研究所热带亚热带水生态工程教育部工程研究中心/广东省高校水体富营养化与赤潮防治重点实验室,广东广州510632;暨南大学水生生物研究所热带亚热带水生态工程教育部工程研究中心/广东省高校水体富营养化与赤潮防治重点实验室,广东广州510632【正文语种】中文【中图分类】S852.61溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus）为海水养殖动物的常见致病菌，具有较强的致病性，能够引起海水鱼类、虾类、贝类的大量死亡[1]。
29种中草药在水产养殖上的应用
29种中草药在水产养殖上的应用水产动物机体免疫力下降、阴阳失衡导致多种疾病的发生，免疫功能紊乱从而导致其体内各种疾病的多发难治性，也只有从根本上调整心、肝、肾阴阳平衡，亦即机体免疫平衡，才能达到真正治疗疾病的效果。
抗病毒（或抗细菌）的中草药，从中药药理来讲，可提高免疫细胞的活力、激活水产动物体内免疫细胞，并迅速提高机体的抵抗力，其优势是对病毒（或细菌）的复制有极强的抑制、阻断和直接杀死等作用，可有效地降低肝损伤，很快改善肝功能，在短期内提高其非特异性和特异性免疫功能，对肝纤维素化有显著的抵抗作用，且无毒副作用，可提高水产动物免疫力，重建机体免疫功能，能有效的帮助病体祛邪扶正和固本，对已经损伤的机体进行修补，调节好自身的阴阳平衡，迅速恢复健康，达到治病的目的，临床研究也证明了中草药对水产动物的细菌性疾病、病毒性疾病等有特效。
各地养殖单位在实际应用中草药后，已表现出对水产动物的安神、镇静、健胃促消化、理气、活血、养精补益、驱虫、杀虫、保健、解毒排毒、抗肿瘤、治肝炎、收敛、抗创伤、抗菌、抑菌、杀灭病毒等多种药理作用，并已研制出增强水产动物免疫功能、抗应激能力、抗有害微生物、驱虫杀虫、保健健胃、促进和帮助消化、促生长、增体重、改善肉质、改进品质和风味等多种中草药营养保健剂。
现将水产鱼病预防中常用的几种中草药介绍如下：1、大黄又名锦纹、黄良，别名将军、生军、马蹄黄等，蒙科多年生草本植物。
以根及根茎入药，其有效成分为蒽醌衍生物、其中以大黄酸、大黄素及芦荟大黄素的抗菌作用最好，抗菌作用强，抗菌谱广，有收敛、泻下、清热、解毒、破积、去瘀、增加血小板、促进血液凝固等作用。
用于烂鳃病、肠炎病、出血病及白头白嘴病等。
使用方法：全池泼洒，常用量为2.5～3.75PPM，使用前、先将大黄用0.3％的氨水按1：20比例。
室温下浸泡12～24小时，使蒽醌衍生物游离出来，以提高疗效，将药液均匀地洒入水中。
可防治鱼粘细菌病。
使用大黄时加上0.5PPM硫酸铜，疗效更好。
20味中药提取物对无乳链球菌的体外抑菌活性研究
华南农业大学学报2014，35（4）：22-25Journal of South China Agricultural University http ：∥xuebao．scau．edu．cndoi ：10．7671/j．issn．1001-411X．2014．04．005收稿日期：2013-10-03优先出版时间：2014-06-03优先出版网址：http ：∥www．cnki．net /kcms /doi /10．7671/j．issn．1001-411X．2014．04．005．html作者简介：彭练慈（1990—），女，硕士研究生，E-mail ：penglianci@163．com ；通信作者：殷中琼（1968—），女，教授，博士，E-mail ：yinzhongq@163．com基金项目：四川省青年科技创新研究团队（2013TD0015）；“十二五”农村领域国家科技计划项目（2011BAD34B03）彭练慈，殷中琼，贾仁勇，等．20味中药提取物对无乳链球菌的体外抑菌活性研究［J ］．华南农业大学学报，2014，35（4）：22-25．20味中药提取物对无乳链球菌的体外抑菌活性研究彭练慈1，殷中琼1，贾仁勇1，2，李莉1，代如意1，曲径1，刘明辉1，陈萍1（1四川农业大学动物医学院，四川雅安625014；2四川农业大学预防兽医研究所，四川雅安625014）摘要：【目的】筛选对无乳链球菌Streptococcus agalactiae 具有良好体外抑菌效果的中药．【方法】通过乙醇回流、超声波方法提取20味中药的抗菌活性部位，采用试管二倍稀释法测定黄连Coptis chinensis 等20味中药提取物对无乳链球菌的最低抑菌浓度（Minimal inhibitory concentration ，MIC ）和最低杀菌浓度（Minimal bactericidal concentration ，MBC ），并评价抗菌活性较强的几味中药的体外联合抑菌效果．【结果和结论】乌梅Prunus mume 、黄连、黄芩Scutel-laria baicalensis 、虎杖Polygonum cuspidatum 和地榆Sanguisorba officinalis 5味中药提取物对无乳链球菌的MIC 范围为7.80 31.25mg /mL．蒲公英Taraxacum mongolicum 、茵陈Artemisia scoparia 、秦皮Fraxinus rhynchophylla 、艾叶Arte-misia argyi 、黄柏Phellodendron chinense 、鱼腥草Houttuynia cordata 、紫花地丁Violae yedoensis 和白头翁Pulsatilla chinensis 8味中药提取物的MIC 范围为62.50 125.00mg /mL．何首乌Po．multiflorum 、苦参Sophora flavescens 、穿心莲Andrographis paniculata 、杜仲Eucommia ulmoides 、连翘Forsythia suspensa 、金银花Lonicera japonica 和夏枯草Prunel-la vulgaris 7味中药提取物的MIC 范围为250.00 500.00mg /mL．联合抑菌试验结果表明，黄芩、虎杖、地榆和黄连的联合抑菌指数（FICI ）≤1，虎杖、黄芩和地榆的FICI ＞2．黄连、黄芩、虎杖和地榆对无乳链球菌均具有很强的体外抗菌活性，地榆、黄连为相加作用，黄连、黄芩和虎杖为协同作用，地榆与黄芩、虎杖为拮抗作用．关键词：无乳链球菌；中药提取物；抗菌活性中图分类号：S825．6文献标志码：A文章编号：1001-411X （2014）04-0022-04Effects of twenty traditional Chinese medicine extractsagainst Streptococcus agalactiae in vitroPENG Lianci 1，YIN Zhongqiong 1，JIA Ｒenyong 1，2，LI li 1，DAI Ｒuyi 1，QU Jing 1，LIU Minghui 1，CHEN Ping 1（1College of Veterinary Medicine ，Sichuan Agricultural University ，Ya ’an 625014，China ；2Preventive Veterinary Ｒesearch Institute ，Sichuan Agricultural University ，Ya ’an 625014，China ）Abstract ：【Objective 】Screening for the traditional Chinese medicines which have good antibacterialeffects on Streptococcus agalactiae in vitro ．【Method 】Using ethanol reflux and ultrasonic method ，ex-tracts of 20different traditional Chinese medicines were obtained．Minimal inhibitory concentration （MIC ）and minimal bactericidal concentration （MBC ）of Coptis chinensis and other 19extracts of tradi-tional Chinese medicines on St．agalactiae were detected by macrodilution broth method ，and combined antibacterial effects in vitro of them were also observed．【Ｒesult and conclusion 】The MICs of the ex-tracts obtained from Prunus mume ，Coptis chinensis ，Scutellaria baicalensis ，Polygonum cuspidatum and Sanguisorba officinalis against St．agalactiae ranged from 7.80to 31.25mg /mL．The MICs of the ex-tracts obtained from Taraxacum mongolicum ，Artemisia scoparia ，Fraxinus rhynchophylla ，Artemisia arg-yi，Phellodendron chinense，Houttuynia cordata，Violae yedoensis and Pulsatilla chinensis ranged from 62.50to125.00mg/mL．The MICs of the extracts obtained from Po．multiflorum，Sophora flavescens，Andrographis paniculata，Eucommia ulmoides，Forsythia suspensa，Lonicera japonica and Prunella vul-garis ranged from250.00to500.00mg/mL．The results of joint bacteriostatic test showed that the frac-tional inhibitory concentration index（FICI）of the extracts obtained from Sc．baicalensis，Po．cuspida-tum，Sa．officinalis and C．chinensis was less than or equal to1．The FICI of Po．cuspidatum，Sc．ba-icalensis and Sa．officinalis was more than2．C．chinensis，Sc．baicalensis，Po．cuspidatum and Sa．offi-cinalis showed a good antibacterial effect against St．agalactiae in vitro．The combination of Sa．officina-lis and C．chinensis was characterized by a additive effect，whereas the combination of C．chinensis，Sc．baicalensis and Po．cuspidatum was characterized by a synergism effect．The combination of Sa．officina-lis and Sc．baicalensis，Po．cuspidatum showed antagonism effect．Key words：Streptococcus agalactiae；traditional Chinese medicine extract；antimicrobial activity无乳链球菌Streptococcus agalactiae又称B群链球菌（GBS），可引起奶牛乳房炎，我国因无乳链球菌引起的奶牛乳房炎占总发病率的20% 40%．目前，对于奶牛乳房炎的治疗主要依赖抗生素，由于反复大量使用，造成乳汁中抗生素残留日益严重，耐药菌株不断出现，使乳房炎的治疗效果不断下降［1-2］．中草药具有调节畜禽机体免疫力、杀灭或抑制细菌和病毒等作用，并因其低毒、低残留、不易产生耐药性等特点越来越受到人们的重视［3］，从传统中草药中筛选出有效的抗无乳链球菌药物符合食品安全和公共卫生需要．本研究选取黄连Coptis chinensis 等20味中药作为研究对象，以水和乙醇对其有效成分进行提取．通过测定黄连等20味中药提取物对无乳链球菌的最低抑菌浓度（Minimal inhibitory concen-tration，MIC）和最低杀菌浓度（Minimal bactericidal concentration，MBC），筛选得到具有良好体外抗菌活性的中药提取物，然后通过棋盘稀释法［4-5］研究不同中药提取物两两联合对无乳链球菌的体外抑制效果，为进一步研制治疗奶牛乳房炎的中药组方制剂提供参考．1材料与方法1．1材料1．1．1菌株无乳链球菌编号为CVCC1886，购自中国兽药监察所．1．1．2药材黄连（产地四川，批次：080406）、黄芩Scutellaria baicalensis（产地陕西，批次：040824）、乌梅Prunus mume（产地四川，批次：120315）、虎杖Polygo-num cuspidatum（产地四川，批次：081102）、地榆San-guisorba officinalis（产地陕西，批次：040827）、蒲公英Taraxacum mongolicum（产地贵州，批次：100217）、苦参Sophora flavescens（产地云南，批次：081121）、何首乌Po．multiflorum（产地甘肃，批次：080301）、茵陈Artemisia scoparia（产地河北，批次：080923）、秦皮Fraxinus rhynchophylla（产地山西，批次：100330）、金银花Lonicera japonica（产地四川，批次：080919）、穿心莲Andrographis paniculata（产地四川，批次：100310）、黄柏Phellodendron chinense（产地四川，批次：080923）、艾叶Ar．argyi（产地甘肃，批次：080921）、鱼腥草Houttuynia cordata（产地四川，批次：100310）、杜仲Eucommia ulmoides（产地云南，批次：080916）、连翘Forsythia suspensa（产地四川，批次：100310）、白头翁Pulsatilla chinensis（产地四川，批次：100310）、夏枯草Prunella vu lg aris（产地河南，批次：101114）、紫花地丁Violae yedoensis（产地四川，批次：100310）20味中药均购于四川雅安惠民堂药业连锁有限责任公司，由四川农业大学药学系副教授范巧佳鉴定为正品．1．1．3培养基加有5%小牛血清的营养肉汤，鲜血营养琼脂培养基按照常规方法制作，用于无乳链球菌的培养．1．1．4仪器设备和试剂电热恒温培养箱、超净工作台、旋转蒸发仪、索氏提取器、微量进样器、二甲亚砜、无水乙醇、T型涂布棒、90mm玻璃培养皿．1．2方法1．2．1有效成分的提取按照文献［6-16］的方法提取黄连等20味中药的有效成分，乌梅、黄连、黄芩、虎杖、蒲公英、茵陈、秦皮、黄柏、鱼腥草、紫花地丁、白头翁、何首乌、苦参、穿心莲、杜仲、连翘、金银花和夏枯草采用乙醇回流提取法，地榆和艾叶采用超声波提取法．各自合并滤液，浓缩制成浸膏，并计算浸膏得率．使用前将浸膏用适量二甲亚砜溶解，制成生药质量浓度为1g/mL的药液，100ħ流通蒸汽灭菌30min，置于4ħ冰箱备用．32第4期彭练慈，等：20味中药提取物对无乳链球菌的体外抑菌活性研究1．2．2细菌菌悬液的制备挑取新鲜培养无乳链球菌的2个菌落接种于3mL的肉汤培养基中，置于37ħ恒温摇床中培养18 24h后取出．吸取菌液0.5mL，用生理盐水作10－1梯度稀释，取10－7、10－8、10－93个梯度的菌液0.1mL分别在6个鲜血琼脂培养基上均匀摊开，放入37ħ恒温培养箱中培养18 24h．计算出原液的细菌个数为1.6ˑ1011CFU/mL．临用前将菌原液用肉汤培养基稀释成菌液浓度为1.6ˑ109CFU/mL．1．2．3体外抑菌试验测定MIC：采用试管2倍稀释法，取18支灭菌试管，将其中16支分为试验组和阴性对照组，每组8支．18支试管分别加营养肉汤1 mL．在2组的第1管中分别加1mL药液，混匀后吸取1mL至第2管中，依次类推，直至第8管，第8管吸取1mL弃去．然后，向试验组的8支试管中加0.1 mL的稀释菌液，阴性对照组8支试管不加菌液，加0.1mL生理盐水．第17管不加药液加0.1mL菌液作为阳性对照，第18管不加药液和菌液作为空白对照．则试验组和阴性对照组的第1管至第8管的药液浓度依次为500.00、250.00、125.00、62.50、31.25、15.60、7.80、3.90mg/mL．置于37ħ恒温摇床中培养18 24h．以无菌生长的最低稀释度为MIC．测定MBC：观察药物MIC以上未见细菌生长的各管培养物，分别各取0.1mL移种至不含药物的鲜血营养琼脂平皿上，轻轻推开药液，置37ħ培养过夜，观察有无细菌生长．平皿培养基中，计数少于5个菌落者作为该药的MBC［17］．1．2．4体外联合抑菌试验根据单味中药的体外抑菌结果，选择其中抑菌活性较强的中药分别以其中2种药的4MIC，2MIC，MIC，1/2MIC，1/4MIC分别进行联合．以黄连与黄芩为例：用灭菌后的2mL EP 管50个，分为试验组和对照组．在第1 6行沿X轴（从左到右）每管中依次加入用肉汤稀释好的4MIC、2MIC、MIC、1/2MIC、1/4MIC的黄连药液各0.2mL．以同样的方法在第1 6列沿Y轴方向（从上到下）每管中依次加入用肉汤稀释好的1/4MIC、1/2MIC、MIC、2MIC、4MIC的黄芩药液各0.2mL，将两药混合均匀后加入制备好的菌液40μL，对照组加入等量的营养肉汤，其他操作同试验组．37ħ培养18 24h，观察结果．结果判断依据：联合抑菌指数（Fraction inhibito-ry concentration index，FICI）=甲药联合时的MIC/甲药单独时的MIC+乙药联合时的MIC/乙药单独时的MIC．FICI≤0．5时为协同作用，0．5＜FICI≤1时为相加作用，1＜FICI≤2时为无关作用，FICI＞2时为拮抗作用．2结果与分析2．120味中药提取物对无乳链球菌的体外抑菌活性20味中药提取物对无乳链球菌的体外抑菌结果见表1．由表1可知，黄连、黄芩、乌梅、虎杖和地榆5味中药提取物的MIC的范围为7.80 31.25mg/mL，MBC≤31.25mg/mL抑菌效果最好．蒲公英、茵陈、秦皮、艾叶和紫花地丁5味中药提取物的MIC均为62.50 mg/mL，抑菌效果较好．黄柏等10味中药提取物的MIC 均大于或等于125.00mg/mL，抑菌效果较差．表120种中药提取物对无乳链球菌的体外抑菌活性Tab．1Antimicrobial activities of active ingredients extracts of twenty tradition Chinese medicines to Streptococ-cus agalactiae in vitro mg·mL－1中药提取物MIC MBC黄连31．2531．25黄芩7．807．80乌梅31．2531．25虎杖15．6015．60地榆15．6015．60蒲公英62．5062．50苦参250．00250．00何首乌250．00250．00茵陈62．5062．50秦皮62．50125．00金银花500．00500．00穿心莲500．00500．00黄柏125．00125．00艾叶62．50125．00鱼腥草125．00125．00杜仲500．00500．00连翘250．00250．00白头翁125．00125．00夏枯草500．00500．00紫花地丁62．50125．002．2黄连等4味中药提取物对无乳链球菌的体外联合抑菌活性通过单味药的体外抑菌结果，选择黄连、黄芩、虎杖和地榆进行体外联合抑菌试验，联合抑菌结果见表2．根据FICI值的判定依据，黄芩提取物与虎杖提取物、黄芩提取物与黄连提取物及黄连提取物与虎杖提取物对无乳链球菌的FICI≤0.50，为协同作用．地榆提取物与虎杖提取物及地榆提取物与黄芩提取物对无乳链球菌的FICI＞2，为拮抗作用．地榆提取物与黄连提取物对无乳链球菌的FICI=1，为相加作用（表2）．42华南农业大学学报第35卷表24味中药两两联合用药对无乳链球菌的FICI1）Tab．2The FICI to pairwise combination of four herbs against Streptococcus agalactiae联合药物黄芩虎杖黄连地榆MICAMICCMICAMICCMICAMICCMICAMICCFICI作用效应黄芩+虎杖7．800．9615．601．950．25协同黄芩+黄连7．801．9531．257．800．50协同黄芩+地榆7．8015．6015．6031．254．00拮抗虎杖+黄连15．601．9531．253．900．50协同虎杖+地榆15．6015．6015．6031．253．00拮抗黄连+地榆31．2515．6015．607．801．00相加1）MICA 、MICC分别为单药、联合用药的MIC，单位均为mg·mL－1．3讨论中药成分复杂，提取其中的有效成分对于提高其药效具有重要作用．中药提取方法众多，其中乙醇回流法、超声波提取法因操作简单方便，适合试验操作而被广泛使用．本研究根据20味中药的不同有效成分，分别采用乙醇回流法和超声波提取法对20味中药的有效成分进行提取［6-16］，沿用文献报道筛选的最佳工艺条件，使有效成分得到了极大的提取，从而保证了药效．20味中药提取物的体外抑菌活性试验结果表明，虎杖、黄连和黄芩的MIC分别为15.60、31.25、7.80mg/mL，其MBC≤31.25mg/mL说明黄连、黄芩和虎杖具有很强的抑菌作用．该结果与王庆玲等［17］和金建玲等［18］报道结果一致．抑菌活性好的地榆及抑菌活性较好的紫花地丁和蒲公英比金建玲等［18］报道的抑菌效果更优．本研究选取文献报道中筛选出的最佳提取工艺条件对黄连［6］、黄芩［7］、虎杖［8］等20味中药的有效成分进行提取，使提取物中的有效成分尽可能地多，从而达到了较好的抑菌效果．陈微等［19］报道夏枯草和黄柏对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌有很好的抑菌活性，但在本研究中对无乳链球菌的抑菌效果并不好，可能因为不同的提取方法以及中药提取物的pH不同，对不同的细菌产生不同的抑菌效果，且提取物中不溶成分偏多，对中草药抗菌活性成分有一定的影响，使得抑菌效果不那么理想．联合抑菌试验显示，黄连和黄芩、虎杖联合都产生协同作用，具有良好的抗菌作用．地榆和黄芩、虎杖联合都产生拮抗作用．地榆的有效成分是鞣质，具有大分子多元酚类结构，容易发生缩合反应或沉淀反应而失去相应的抗菌活性，与黄芩、虎杖联合后，3种有效成分发生化学反应，可能使药物的有效结构发生改变，导致联合后产生拮抗作用．本研究表明，黄连、黄芩和虎杖联合产生协同作用，增强了抑菌效果，可以组成一个复方．本研究为抗无乳链球菌的中药组方提供参考．参考文献：［1］倪春霞，蒲万霞，胡永浩，等．奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及耐药性分析［J］．西北农业学报，2010，19（2）：20-24．［2］杨锐，李英伦，李金良，等．四川雅安临床型奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及耐药性分析［J］．中国兽医杂志，2009，45（4）：41-42．［3］闫丽霞．中药制剂技术［M］．北京：化学工业出版社，2004．［4］MAＲCHETTI O，MOＲEILLON 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四种中草药对致病菌的抑菌作用测试
技术四种中草药对致病菌的抑菌作用测试文丨深圳市太丰东方海洋生物科技有限公司林炎权王康林先李秀娟广东海洋大学深圳研究院鲁义善程俊弧菌是海洋环境中最常见的细菌类群之一，广泛分布于近岸及河口海水、海洋生物的体表及肠道中，是海水、原生动物、鱼类等海洋生物的正常优势菌群。
弧菌病已成为世界性的问题，其宿主范围极广，包括养殖和野生鱼类。
据权威报道，弧菌病已侵染48种海水鱼类。
本研究筛选了4种中草药分别对4种弧 菌（溶藻弧菌、副溶血弧菌、鳗弧菌、创伤弧菌）进行体外抑菌实验，为使用中草药有效控制水产养殖动物弧菌病奠定基础。
结果 表明，在药液pH值调至中性后，五倍子和石榴皮能有效抑杀四种弧菌。
一、材料与方法1.实验菌株和药物溶藻弧菌、副溶血弧菌、鳗弧菌、创伤弧菌菌种由广东海洋大学深圳研究院赠送，中草药购自正规途径。
四种中草药分别为蓼科中的大黄（根茎）、黄连（根茎）、漆树科种的五倍子（虫瘻）、石榴科的石榴（果皮）。
2. 培养基蛋白腺5g,牛肉膏3g,酵母粉lg,氯化钠20g,加超纯水至1L,调pH至7.2-7.4,高温高压灭菌。
固体培养基为每lOOmL液体 培养基加入1.5g琼脂粉。
3.菌液制备分别将4种弧菌接种于液体培养基中. 28七震荡（200r/min）培养6~8h,采用平板计数法计数，用液体培养基稀释菌液至1x106efu/mL,于4七保存备用。
4.中草药药液的制备4种中草药干燥粉碎后各取20g,用400mL蒸憎水室温浸泡4h后煎煮，沸水煎煮40min左右，冷却，4层纱布过滤药液，药渣再用400mL蒸僧水同前法煎煮1次，冷却，4层纱布过滤药液，合并两次滤液，加热浓缩至20mL,使其终浓度为lg/m L o于保存备用。
5.药物体外抑菌实验采用琼脂扩散法测定了4种常见中草药对4种海洋鱼类致病弧菌的抑制作用。
根据 抑菌作用测定的结果，选取有抑菌作用的中草药药液，测定原液pH值，并将原液pH值调至7.0左右，测定调pH后药液的抑菌作用。
30种中草药提取物对多子水霉体外抑制作用研究及厚朴抗水霉活性成分初步分析
30种中草药提取物对多子水霉体外抑制作用研究及厚朴抗水霉活性成分初步分析水霉(Saprolegnia)是水霉病(Saprolegniasis)的主要病原菌之一。
几乎所有淡水水产动物均易感染,.对水产养殖业影响巨大。
孔雀石绿一度被认为是防治水霉病的特效药,后来发现其随食物链进入人体会造成肝细胞癌变。
随着孔雀石绿的禁用,水霉病重新成为危害养殖业健康发展的一大难题。
目前养殖生产中常用抗生素、食盐、甲醛等药物预防和治疗水霉病,但均存在防治效果不佳,或不适宜大水面养殖用药等问题。
中草药因其来源广、成本低廉、不易产生耐药性等优点为广大科研人员所青睐。
目前在水产临床用药上使用中草药治疗水霉病还较少。
开展抗水霉中草药的筛选及主要成分的研究不仅有利于解决水霉病有效药物缺乏的临床问题,而且有利于增加我国药物种类储备及降低水产食品安全风险。
本研究通过查阅文献从中搜集整理出了三十种可以抑制水霉等真菌的中草药。
采用提取、浓缩等技术,通过测定其抗水霉活性,筛选出了对水霉有较好抑制效果的中草药。
利用系统溶剂法测定厚朴不同溶剂部位抗水霉活性,并利用不同检测方法对活性最高的提取部位进行了初步分析。
1.通过马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)培养,并经多次纯化后,从感染霉菌的草鱼体表分离到一株致病霉菌CCF1301,制作水浸片,显微镜下观察其形态学表现,进行形态学初步鉴定。
同时挑取纯化后的水霉菌丝,提取基因组DNA,利用霉菌鉴定试剂盒扩增其26SrDNAD1/D2基因和ITS基因,送测序公司进一步测序。
将获得的序列提交NCBI,利用其Blast工具进行同源性比对,同时利用Mega5.1软件进行发育树分析。
结合形态学分析结果对分离株进行综合鉴定。
结果发现：本次采集到的丝状真菌菌丝呈管状、透明、无横隔、分支较少、无性生殖过程形成棍棒状孢子囊并产生游动孢子、有性生殖过程产生球形藏卵器,依据真菌鉴定手册对水霉属真菌的描述并结合上述特征将该分离株初步划归为水霉属；利用水霉鉴定试剂盒对分离株26S rDNA D1/D2基因和ITS基因扩增,分别得到一条800bp左右的基因片段,送公司测序后发现26S rDNA D1/D2基因和ITS基因大小分别为839bp和798bp,将该序列提交NCBI,获得序列号分别为KJ577573和KF871196。
20种水产养殖常用中草药体外抑菌试验研究
20种水产养殖常用中草药体外抑菌试验研究作者：周冬仁罗毅志等来源：《现代农业科技》2013年第03期摘要采用试管倍比稀释法，选择大黄、黄芪、黄芩等20种中草药对淡水养殖常见2种主要致病菌进行体外抑菌试验，测定其最低抑菌浓度（MIC）。
试验结果表明，大黄、黄芩、穿心莲、连翘、贯众的抑菌效果最好，从而为研制水产用的中草药方剂提供理论依据。
关键词中草药；水产养殖；抑菌试验；最低抑菌浓度中图分类号 S948 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2013）03-0303-01我国水产养殖模式大部分属于高密度养殖，高密度养殖有较高的投资回报，但是容易大规模暴发病害，在实际生产中为了防治病害，大量使用化学药品及抗菌药物，进而给水产品质量带来隐患。
目前，利用我国传统中草药防治水产病害、减少抗生素使用量及提高免疫力成为兽医药理学研究热点之一[1-3]。
课题组根据2010年出版的兽药国家标准汇编中中药部分的内容结合实际应用，挑选出大黄、鱼腥草、黄芪等多种中草药进行抑菌效果测定，为增加抗菌中草药种类和制剂研发提供科学依据[4]。
1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 供试菌株。
试验菌株共有3株，分别为：标准株嗜水气单胞菌嗜水亚种菌株（购于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：cgmcc1.0927）；嗜水气单胞菌（从湖州地区患病甲鱼中分离得到）；爱德华氏菌。
后2组菌株由浙江省淡水水产研究所实验室分离鉴定[5]。
1.1.2 供试药物。
供试大黄、黄芪、黄芩、甘草、穿心莲、金银花、虎杖、大青叶、鱼腥草、板蓝根、柴胡、川楝子、黄柏、地锦草、五倍子、茵陈、连翘、陈皮、贯众、苦参，购于湖州开心人大药房。
1.1.3 培养基。
营养肉汤培养基购于杭州天和生物制剂公司，121 ℃灭菌15 min备用。
1.2 试验方法1.2.1 药液提取。
水提法，取各种单味中药50 g，粉碎后加超纯水300 mL，温室浸泡过夜，煎30 min，纱布过滤药液，重复3次，最后将过滤液蒸馏浓缩至药液内含原药1 g/mL。
20种水产养殖常用中草药体外抑菌试验研究
混 匀后 弃 去 第 ５ 管 中的 １ ｍ Ｌ 液体 ， 最 后试 管 里 的药 液 浓度
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中草药对弧菌的抑制作用研究论文
中草药对弧菌的抑制作用研究论文中草药对弧菌的抑制作用研究论文摘要：目的阐明现常用抑菌中草药在水产养殖业的用药疗效，为水产养殖细菌性疾病的防治提供用药参考。
方法采用微量肉汤稀释法测定了12种水产养殖常用的抗菌中药产品对5株常见海洋致病菌的最低抑菌浓度(MIC)。
结果NZ方与市售“虾倍健”抑菌效果最佳，对副溶血弧菌、嗜水气单胞菌、创伤弧菌、哈维弧菌、溶藻弧菌的最低抑菌浓度在0.313～1.250 g/L，而其他市售抗菌中草药大黄末、六味黄龙散、三黄散、根莲解毒散、七味板蓝根散、大蒜素、病毒速灭亡、穿梅三黄散、白头翁口服液、健肝宝和地锦草末对5种海洋致病菌抑制浓度均大于40.000 g/L。
结论给水产养殖细菌性疾病的防治提供了用药建议及使用参考。
关键词：NZ方; 弧菌; 中草药近年来，随着对虾疾病的爆发越来越频繁，我国对虾养殖业特别是华南地区的对虾养殖受病害肆虐情况严重，部分地区对虾幼体患病死亡率达100%，给殖业造成了严重的经济损失，如何有效防治对虾病害侵袭也倍受水产业界人士关注和重视[1-2]。
虾的红体、偷死、肌肉白浊、烂眼烂鳃、荧光、黑斑等症状多由弧菌及嗜水气单胞菌引起，而根据上述病症，农业部“用药指导”也给出相关的用药建议。
其中，大黄末、地锦草等被广泛推荐应用。
根据现行国家标准，抗菌类中药制剂有38种，笔者选取其中最为常用的.12种中药制剂与NZ方对5株常见的海洋致病菌进行体外抑菌作用的比较，为水产养殖细菌性疾病的防治提供用药参考。
1 材料与方法1.1 菌株标准菌株：副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticuss，V.p);溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus，V.a);哈维氏弧菌(Vibro harveyi，V.h);创伤弧菌(Vibrio vulnificus，V.v);嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila，A.h)由中国南海研究所提供。
1.2 培养基2216E 液体培养基(青岛高科园海博生物技术有限公司)。
中西药联用对柱状黄杆菌体外抑菌作用研究
中西药联用对柱状黄杆菌体外抑菌作用研究摘要：柱状病的病原是柱状黄杆菌，柱状黄杆菌可以感染草鱼、鲤鱼、斑点叉尾鮰、银龙鱼、虫纹鳕鲈等鱼类，几乎所有的淡水鱼类都易感。
感染初期鳍条顶端、吻端，皮肤鳃丝末端生长繁殖，形成黄白色点状病灶，随着病情发展，鳍条蛀烂，向基部溃烂，鳃丝溃烂。
以柱状黄杆菌为研究对象，进行了中西药单方及复方制剂的体外抑制试验。
关键词：中西药；柱状黄杆菌；体外抑菌；作用1材料方法1.1菌株柱状黄杆菌分离于发病虫纹鳕鲈Murraycod(Maccullochellapeeliipeelii);恩诺沙星、复方磺胺二甲氧嘧啶、氟苯尼考购于北京渔经公司；黄柏、黄芩、金银花、板蓝根、苦参、大黄、鱼腥草、五倍子、穿心莲、黄芪、大青叶、连翘购自甘肃省卓尼县九峰生态药业有限责任公司。
1.2方法1.2.1药品制取药物母液的制取：称取市场上选购的药物50mg,溶于50mL杀菌水，彻底融解后0.22μm滤膜过虑除菌，制取成1000mg/L的药水，4℃储存备用。
中草药材的制取：称取10g药品，添加杀菌水100mL泡浸1h,煎制0.5h,不时开展拌和，药水用尼龙沙布过虑，滤渣再度煎制、过虑，合拼药水后，水浴萃取至50mL,药水浓度值即为200mg/mL,5000rpm离心，取上清，0.22μm滤膜过虑除菌。
配置好的药品分装于1.5mL杀菌离心管中，-20℃储存备用。
1.2.1药品的初筛选用纸片蔓延法，参考杭州天和微生物菌种有限公司具体操作指南开展，黄杆菌选用Shieh培养基。
匀称涂布实验菌液(1.0×108CFU/mL)于平板上，将空缺药敏纸片平贴于平板上(4片/平板),每个空缺纸滴加5μL药水，28℃培养48h,用精度1mm尺子测量抑菌环的直径，并纪录结果。
1.2.2药品的最少抑菌浓度值测定根据基本挑选结果，挑选出具备优良抗菌效果的药品，明确最少抑菌浓度值。
在1.5mL离心管中开展，第一管添加900μL液态培养基，第2至12管各自添加500μL培养基，第一管加上100μL液态，充足混和并吸出500μL第二管添加L，先后稀释液两次，直到最后一管。
浅谈中草药在水产养殖病害防治的研究与应用
浅谈中草药在水产养殖病害防治的研究与应用中草药是指从植物中提取的具有药用价值的药材，具有天然、无毒副作用等特点，因此在水产养殖病害防治中备受关注。
近年来，国内外许多科研单位对中草药在水产养殖病害防治中进行了深入研究。
他们发现，许多中草药具有较好的抗菌、抗病毒、抗氧化等功效，对水产养殖中常见的病害有良好的防治效果。
金银花、黄连、苦参等中草药被广泛用于鱼类细菌病的防治；黄芪、当归、丹参等中草药则常用于对鱼类的寄生虫病进行防治。
这些研究结果表明，中草药在水产养殖病害防治中具有广阔的应用前景。
二、中草药在水产养殖病害防治中的应用案例1. 丹参对鱼类细菌病的防治丹参是一种被广泛用于心脑血管疾病的中草药，其主要成分为丹参酮、丹参酸等。
近年来，研究人员发现丹参对鱼类细菌病也具有一定的防治效果。
他们通过实验证实，将丹参加工成饵料喂养给感染细菌病的鱼类，可以有效抑制病原菌的繁殖，加速鱼体的康复。
这为丹参在水产养殖业的病害防治中提供了新的思路与方法。
虾类寄生虫病一直是困扰养殖户的难题，长期以来一直采用化学药剂防治。
由于化学药剂的副作用与残留问题，对水产养殖环境造成了严重污染。
人们积极寻找一种天然、无污染的防治方法。
近年来，研究人员发现苦参具有良好的抗寄生虫病功效。
他们将苦参提取物加入水产养殖池中，发现可以有效减轻虾类寄生虫病的发生，并且不会对水质造成污染，对虾体健康也没有负面影响。
尽管中草药在水产养殖病害防治中具有诸多优势，但其在实际应用中仍存在一些问题。
中草药的制备过程较为复杂，需要经过提取、纯化等多个步骤，生产成本较高。
由于中草药的成分复杂多样，对其有效成分的把握也成为了一个难题。
中草药在水产养殖病害防治中的具体应用方法也需要进一步优化，以求达到最佳的防治效果。
尽管中草药在水产养殖病害防治中存在一些问题，但其在未来仍具有广阔的应用前景。
国家和科研单位对中草药在水产养殖病害防治中的研究力度逐渐加大，相关成果也在不断涌现。
20种中草药水提物的体外抑菌实验
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责任 编辑
孙 红 忠 责 任 校 对 张 士敏
２ ０种 中草药 水 提 物 的体 外抑 茵 实验
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20种水产养殖常用中草药体外抑菌试验研究摘要采用试管倍比稀释法，选择大黄、黄芪、黄芩等20种中草药对淡水养殖常见2种主要致病菌进行体外抑菌试验，测定其最低抑菌浓度（mic）。
试验结果表明，大黄、黄芩、穿心莲、连翘、贯众的抑菌效果最好，从而为研制水产用的中草药方剂提供理论依据。
关键词中草药；水产养殖；抑菌试验；最低抑菌浓度
中图分类号 s948 文献标识码 a 文章编号 1007-5739（2013）03-0303-01
我国水产养殖模式大部分属于高密度养殖，高密度养殖有较高的投资回报，但是容易大规模暴发病害，在实际生产中为了防治病害，大量使用化学药品及抗菌药物，进而给水产品质量带来隐患。
目前，利用我国传统中草药防治水产病害、减少抗生素使用量及提高免疫力成为兽医药理学研究热点之一[1-3]。
课题组根据2010年出版的兽药国家标准汇编中中药部分的内容结合实际应用，挑选出大黄、鱼腥草、黄芪等多种中草药进行抑菌效果测定，为增加抗菌中草药种类和制剂研发提供科学依据[4]。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 供试菌株。
试验菌株共有3株，分别为：标准株嗜水气单胞菌嗜水亚种菌株（购于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微
生物中心，保藏编号：cgmcc1.0927）；嗜水气单胞菌（从湖州地区患病甲鱼中分离得到）；爱德华氏菌。
后2组菌株由浙江省淡水水产研究所实验室分离鉴定[5]。
1.1.2 供试药物。
供试大黄、黄芪、黄芩、甘草、穿心莲、金银花、虎杖、大青叶、鱼腥草、板蓝根、柴胡、川楝子、黄柏、地锦草、五倍子、茵陈、连翘、陈皮、贯众、苦参，购于湖州开心人大药房。
1.1.3 培养基。
营养肉汤培养基购于杭州天和生物制剂公司，121 ℃灭菌15 min备用。
1.2 试验方法
1.2.1 药液提取。
水提法，取各种单味中药50 g，粉碎后加超纯水300 ml，温室浸泡过夜，煎30 min，纱布过滤药液，重复3次，最后将过滤液蒸馏浓缩至药液内含原药1 g/ml。
1.2.2 最小抑菌浓度（mic）测定。
采用试管倍比稀释法：1号试管加1.8 ml营养肉汤，2～6号试管加1 ml营养肉汤。
在1号试管中加入配好的药液0.2 ml，充分混匀后用移液器吸取1 ml混合液加入第2管中，依次倍比稀释至第6管，混匀后弃去第5管中的1 ml液体，最后试管里的药液浓度比依次为1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320。
第7管为生理盐水对照组[6]。
将细菌置于营养肉汤中37 ℃培养24 h，校正细菌浓度至1×106 cfu/ml，取菌液0.025 ml加到各管中，混匀后，置于37 ℃培养箱培养24 h。
mic判定：以药物最低浓度管中无细菌生长者为该试验药物的mic 值[7]。
2 结果与分析
20种中草药提取液对3种细菌的体外抑菌试验结果见表1。
除黄芪、甘草、鱼腥草、黄柏、陈皮外，其他中草药提取液对嗜水气单胞菌均有一定的抑菌效果，其中大黄、黄芩、穿心莲、连翘、贯众的抑菌效果最好，达到0.006 25～0.012 50 g/ml。
虎杖、川楝子、茵陈、苦参、五倍子、大青叶等有较好的抑菌效果。
中草药对爱德华氏菌的抑菌效果与嗜水气单胞（上接第303页）菌的结果相近。
3 结论与讨论
在本试验中发现各种中草药的抑菌效果对嗜水气单胞菌和爱德华氏菌效果相似，可能是由于这2种菌都是革兰氏阴性菌，具体原因有待进一步的论证。
本试验采用试管倍比释法研究了20种中草药对水产中常见的2种细菌的体外抑菌效果，其中大黄、黄芩、穿心莲、连翘、贯众的抑菌效果最好，达到0.006 25～0.012 50 g/ml。
但是根据我国传统的中兽药学，常见的单味药的作用要比复方制剂效果差。
根据不同的配伍，效果相差较大，不同的药物有协同或者拮抗作用。
科学配伍不同的药物组成复方制剂，能明显提高疗效[8]。
中草药具有来源广、毒性低、副作用小、不易产生抗药性等特
点，近年来，中草药在水产养殖业中的应用越来越多，如提高水产动物营养、防治疾病、提高非特异性免疫等。
2010年出版的兽药国家标准汇编中药方子有40个，其中水产用的有9种[9]。
中草药中的多种生物碱、挥发油、有机酸等有效成分既有抗菌作用也有免疫作用，能够提高水生动物的免疫力进而提高自身的抗菌能力。
本试验为研发提高水生动物免疫力的中草药复方制剂提供了一定的理
论基础[10]。
4 参考文献
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[4] 李茜，张懿瑾，华汝泉，等.23种中草药及复方对鲫肠道3种细菌的体外抑菌试验[j].淡水渔业，2007，37（4）：7-11.
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[9] 段文龙，梁先明，徐士新，等.兽药国家标准汇编[m].北京：中国农业出版社，2010.
[10] 刘春，白瑞珍.双黄连口服液杀菌效果的实验研究[j].辽宁中医学院学报，2001，3（4）：305.。