黄精总多糖醇沉纯化工艺研究_朱敏
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摘要 :目的 :黄精多糖水提液醇沉工艺 的优化 。 方法 :通 过正交实验 , 用蒽酮 -硫酸法测定醇沉干膏中多糖的 含 量 , 以多糖提取率的高低来筛选黄 精多糖水提液的醇沉条件 。 结果 :黄精多糖水提液的最佳醇沉条件为 :药材 :浸 膏 (g∶ml) (1∶ 0.8), 醇沉浓 度为 85%, 醇沉 1次 。 结论 :该 最佳醇沉工艺收率 稳定 , 黄精多糖提取率 为 7.71%, 提 取率高 。 关键词 :黄精 黄精 总多糖 醇沉纯化 正交试验 中图分类号 :R 284.2 文献标识码 :A 文章 编号 :1000 -3649 (2010) 11-0059 -02
(收稿日期 2010 -07 -18)
方差来源
A
B
离差平方和 19.68
自由度
2
均方 (MS) 9.84
F
62.31
F临界值 F0.01 (2,
17.76
2 8.88 56.23 2) =99
C
D
误差 E
8.73 2
4.37 27.64
0.32
2 0.16 1.0 F0.05 (2,
0.32 2
0.16
2) =19
由表中数据可知 :醇沉浓度 、 醇沉次数和药材: 浸膏 (g∶ml)比对黄精多糖醇沉纯化影响 均显著, 醇沉纯化优化 工艺为 A3B2C3 。 即醇沉浓度 为 85%, 醇沉 1次, 药材 :浸膏 (g∶ml)比为 1∶0.ຫໍສະໝຸດ Baidu。 2 讨 论 查阅文献知 , 黄精多糖水煮提取条件的研究报 道较多 , 但未见 醇沉条件的优化工艺研 究报道 [ 3, 4] , 本研究采用正交试验优化黄精水提 液醇沉工艺, 参 照 2010年版 《中国药典 》 一部黄精项下多糖含量测 定方法测定醇沉干膏中黄精总多糖 的含量, 并计算 黄精总多糖提取率, 试验结果表明 , 优选出的最佳 醇沉工艺黄精多糖提取率收率稳定 , 黄精多糖提取 率为 7.71%, 提取率高 , 可为黄精的开发和利用提 供一定的理论和数据参考 。
D
3 1 2 2 3 1 11.31 9.96 10.37 0.45 127.87 99.30 107.64 111.60 0.32
100g黄精药材 黄精总多糖 提取量 (g)
3.72 7.71 1.53 5.82 5.57 2.98
表 4 方差分析表
1.4 黄精多糖的测定 精密称取相当于 0.3g黄精 药材的醇 沉 正交 试验 中的 各号 醇 沉干 膏, 分别 置 250ml容量瓶中 , 加水适量 , 超声 10min, 定容, 过 滤 , 取续 滤 液 1ml置 10ml具 塞 试 管 中 , 加 水 至 2.0ml, 照标准曲线的制备项下方法测定吸光度 。 1.5 黄精多 糖醇沉纯化工 艺研究实验 称取 黄精 450g, 加水煎煮 3次, 每次 8倍水 , 煮 2h, 合并煎 液 , 滤 过, 滤 液平 均分 成 9 份 (每 份相 当 于药 材 50g), 分别按照因素水平和 L9 (34)正交表所列实 验参数 浓 缩至 不 同 程度 , 冷 却, 搅 拌 下 缓慢 加 入 95%乙醇醇沉 至不同 浓度, 并 按要求 醇沉 1 ~ 3 次 后 , 静置过夜, 抽滤, 沉淀置真空干燥箱 70℃减压 干燥, 称重 , 计算干膏提取率 , 并测定干膏 中黄精 总多糖含量 (见表 2~ 4)。
2010年第 28卷第 11期 Vol.28, No.11, 2010
四 川 中 医
JournalofSichuanofTraditionalChineseMedicine
· 59·
黄精总多糖醇沉纯化工艺研究
朱 敏 1 秦秀蓉 2 刘拥军 3
1.四川省肿瘤医院 (四川 成都 610041) 2.四川省中医药科学院药学研究所 (四川 成都 610041) 3.四川省中西医结合医院 (四川 成都 610041)
性规律 , 可能与钦州多变的天气或寄主的经常修剪 有关。 总黄酮含量是否与桑寄生受到光照的量有关, 有待于进一步试验研究。
参考文献
[ 1] 国家药典委员 会 .中华 人民 共和 国药 典一部 [ M] .北 京: 化学工业出版社 , 2005:210 [ 2] 龚祝南 , 王铮涛 , 徐珞珊 , 等 .中国桑寄生科 Loranthaceae药用植物研究 [ J] .中国野生植物资源 , 1996, (1): 11 ~ 15 [ 3] 李永华 , 陈世 林 , 卢栋 , 等 .不 同寄主 植物 桑寄 生总黄 酮含量研究 [ J] .时珍国医国药 , 2009, 20 (12):3009 [ 4] 李永华 , 卢栋 , 赵明惠 , 等 .广 西桑寄 生科 药用 植物资 源的开发与应用研究 [ J] .广西医学, 2006, 28 (11):1695 [ 5] 马陶陶 , 张群 林 , 李俊 , 等 .三 氯化铝 比色 法测 定中药 总黄酮方法的探讨 [ J] .时珍国医国药 , 2008, 19 (1):54 ~ 56 [ 6] 何 书美 , 刘敬 兰 .茶 叶 中总 黄 酮含 量测 定 方法 的 研究 [ J] .分析化学简报 , 2007, 35 (9): 1365 ~ 1368
黄精为百合科植物滇黄精 Polygonatumkingianum Coll.etHemsl.黄精 Polygonatum sibiricum Red.或 多花黄精 PolygonatumcyrtonemaHua的干燥根茎, 是 我国传统的药、 食两用中药, 具有补气养阴、 健脾、 润肺、 益肝 、 益肾的作用 。 黄 精多糖是黄精 的主要 活性成分之一, 由葡萄糖、 甘露糖 和半乳糖醛酸等 组成, 具有降血脂 、 降血 糖、 增强记忆 、 抗 病毒和 增强机体免疫力等药理作用[ 1 ~ 2] 。 1 实验部分 1.1 原材料、 仪器与试剂 原料 :黄精 (安徽产, 购 于 成 都 药 材 公 司 )。 仪 器 设 备 :电 子 天 平、 DHG202型 电 热干 燥 箱、 水浴 锅 、 UV759S型 紫 外
定桑寄生药材的采收时间为 “ 冬季至次春采割 ” 是 合理的 。 本试验 采集的是 人工种 植的桑 寄生样 品, 在大田管理上经常对寄主桑树的枝叶进行 修煎, 使 桑寄生常年有充足的阳光 , 其所积累的养分不同季 节相差不大 , 桑寄 生药材应全年 可采收。 另 外, 试 验结果不同季节的桑寄生总黄酮含量没有表现出线
———可见分光光度 计。 试剂 、 试药 :O-无水 葡萄糖 (批号 :110833-20503)、 蒸馏水 、 乙醇 (95%)、 蒽 酮 、 浓硫酸 (均为 AR级 )。 1.2 对照品溶液的制备 参照 《中国药典 》 第一部 2010年版 P288黄精项下多糖含量测定方法测定。 精 密称 取 105℃ 干 燥 到 恒 重 的 无 水 葡 萄 糖 对 照 品 35.7mg, 置 100ml量瓶中 , 加水溶解并稀释至刻度, 摇匀, 即得 (每 1ml中含无水葡萄糖 0.357mg)。 1.3 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液 0.1ml、 0.2ml、 0.3ml、 0.4ml、 0.5ml、 0.6ml, 分别置 10ml 具塞刻度试管中 , 各加水至 2.0ml, 摇匀, 在冰水浴 中缓缓滴加 0.2%蒽酮 -硫酸溶液至刻度 , 混匀, 放
参考文献 [ 1] 吴木荣 , 李友 元, 肖洒 .黄 精多 糖调 脂作用 的实 验研 究 [ J] .中国新药杂志 , 2003, 12 (2): 108 ~ 110 [ 2] 赵小贞 , 王玮 , 康仲 涵 , 等 .黄 精口服 液对血 管性痴 呆 大鼠学习记忆与海马突触可塑性 的影响 [ J] .神 经解剖学 杂志 , 2005, 21 (2):147 ~ 153 [ 3] 夏泉 , 谢永忠 .正 交设计 优化黄 精多糖 的水提 醇沉工 艺 [ J] .中国药师 , 2006, 9 (10): 547 [ 4] 侯比菊 , 林超群 .黄精 多糖提 取工艺 的试验 研究 [J] .安 徽化工 , 2006, 142 (4):29 ~ 31
18.73
K22 167.90
K23 206.25
Qi 130.96
Si 19.68
B
1 2 3 1 2 3 10.15 15.90 5.60 3.43 103.10 252.71 31.32 129.04 17.76
C
2 3 1 3 1 2 7.71 9.31 14.62 2.30 59.46 86.72 213.87 120.01 8.73
(收稿日期 2010 -07 -21)
· 60·
四 川 中 医
JournalofSichuanofTraditionalChineseMedicine
2010年第 28卷第 11期 Vol.28, No.11, 2010
冷后置水浴中保温 10min, 取出, 立即置冰水浴中冷 却 10min, 取出 , 以相应试剂为空白。 照紫外 -可见 分光光度法 (附录 VA)在 582nm波长处测 定吸光 度 。 以吸光度为纵 坐标, 浓度 为横坐标, 绘 制标准 曲线 (见表 1和附图)。
表 1 葡萄糖 对照品溶液不同浓度吸光度
浓度 3.57
(μg/ml) 吸光度 A 0.27
7.14 10.71 14.28 17.85 0.40 0.54 0.67 0.81
21.42 0.9
续表 3
试验 序号
A
4
2
5
2
6
2
7
3
8
3
9
3
K1
4.33
K2 12.96
K3 14.36
R 3.36
K2
1
3 讨 论 3.1 试验结果表明 不同季节的桑寄生总黄酮含量 表现出一定的差异性, 在桑寄生茎枝中 , 不同季节 的桑寄生茎枝总黄酮含量为 7.63 ~ 7.86mg/g, 其中 来自 8月份的桑寄生茎枝的总黄酮含量最 高;在桑 寄生叶中, 不同寄生的桑寄生叶总黄酮含量为 31.52 ~ 32.08mg/g, 其中以 8月份的桑寄生叶黄酮含量最 高 , 桑寄生叶的总黄酮含量比桑寄 生茎枝的总黄酮 含量要高出 4倍以上 。 3.2 药典规定 桑寄生药材的采收时间为 “冬季至 次春采割” [ 1] , 但试验结果表明 , 不同季节的桑寄生 总黄酮 含量表现 出的差异 性不大 , 应可 全年采 割。 试验结果还表明冬季和春季的桑寄生无论茎枝还是 叶的总黄酮含量都不是最高 , 可能 是与桑寄生受到 光照的量有关。 在野生状态下 , 秋季寄主开始落叶, 寄生受 到的光照 开始增加 , 到冬 季寄主 完全落 叶, 寄生光照充 分, 生 长茂 盛, 此 时养分 的积 累最 多, 次春寄主始吐新芽, 寄生受到的光照开始 减少, 冬 季所积 累的养分 也开始减 少, 夏 季光照 虽然最 强, 但此时寄主枝繁叶茂, 把寄生置于绿荫下 , 这段时 间寄生有落叶的现象, 说明寄生的养分较 少。 现在 使用的桑寄生药材基本来自野生状态 , 所以药典规
水平
1 2 3
表 2 因素水平
A醇沉浓度
(%) 70 80 85
B醇沉次数
2 1 3
C药材 :浸膏
(g∶ml) 1∶ 1.2 1∶ 1.0 1∶ 0.8
试验 序号
1 2 3
表 3 L9 (34)正交实验安排及试验结果
100g黄精药材
A
B
C
D
黄精总多糖
提取量 (g)
1
1
1
1
1
2
2
2
1
3
3
3
0.62 2.62 1.09
(收稿日期 2010 -07 -18)
方差来源
A
B
离差平方和 19.68
自由度
2
均方 (MS) 9.84
F
62.31
F临界值 F0.01 (2,
17.76
2 8.88 56.23 2) =99
C
D
误差 E
8.73 2
4.37 27.64
0.32
2 0.16 1.0 F0.05 (2,
0.32 2
0.16
2) =19
由表中数据可知 :醇沉浓度 、 醇沉次数和药材: 浸膏 (g∶ml)比对黄精多糖醇沉纯化影响 均显著, 醇沉纯化优化 工艺为 A3B2C3 。 即醇沉浓度 为 85%, 醇沉 1次, 药材 :浸膏 (g∶ml)比为 1∶0.ຫໍສະໝຸດ Baidu。 2 讨 论 查阅文献知 , 黄精多糖水煮提取条件的研究报 道较多 , 但未见 醇沉条件的优化工艺研 究报道 [ 3, 4] , 本研究采用正交试验优化黄精水提 液醇沉工艺, 参 照 2010年版 《中国药典 》 一部黄精项下多糖含量测 定方法测定醇沉干膏中黄精总多糖 的含量, 并计算 黄精总多糖提取率, 试验结果表明 , 优选出的最佳 醇沉工艺黄精多糖提取率收率稳定 , 黄精多糖提取 率为 7.71%, 提取率高 , 可为黄精的开发和利用提 供一定的理论和数据参考 。
D
3 1 2 2 3 1 11.31 9.96 10.37 0.45 127.87 99.30 107.64 111.60 0.32
100g黄精药材 黄精总多糖 提取量 (g)
3.72 7.71 1.53 5.82 5.57 2.98
表 4 方差分析表
1.4 黄精多糖的测定 精密称取相当于 0.3g黄精 药材的醇 沉 正交 试验 中的 各号 醇 沉干 膏, 分别 置 250ml容量瓶中 , 加水适量 , 超声 10min, 定容, 过 滤 , 取续 滤 液 1ml置 10ml具 塞 试 管 中 , 加 水 至 2.0ml, 照标准曲线的制备项下方法测定吸光度 。 1.5 黄精多 糖醇沉纯化工 艺研究实验 称取 黄精 450g, 加水煎煮 3次, 每次 8倍水 , 煮 2h, 合并煎 液 , 滤 过, 滤 液平 均分 成 9 份 (每 份相 当 于药 材 50g), 分别按照因素水平和 L9 (34)正交表所列实 验参数 浓 缩至 不 同 程度 , 冷 却, 搅 拌 下 缓慢 加 入 95%乙醇醇沉 至不同 浓度, 并 按要求 醇沉 1 ~ 3 次 后 , 静置过夜, 抽滤, 沉淀置真空干燥箱 70℃减压 干燥, 称重 , 计算干膏提取率 , 并测定干膏 中黄精 总多糖含量 (见表 2~ 4)。
2010年第 28卷第 11期 Vol.28, No.11, 2010
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黄精总多糖醇沉纯化工艺研究
朱 敏 1 秦秀蓉 2 刘拥军 3
1.四川省肿瘤医院 (四川 成都 610041) 2.四川省中医药科学院药学研究所 (四川 成都 610041) 3.四川省中西医结合医院 (四川 成都 610041)
性规律 , 可能与钦州多变的天气或寄主的经常修剪 有关。 总黄酮含量是否与桑寄生受到光照的量有关, 有待于进一步试验研究。
参考文献
[ 1] 国家药典委员 会 .中华 人民 共和 国药 典一部 [ M] .北 京: 化学工业出版社 , 2005:210 [ 2] 龚祝南 , 王铮涛 , 徐珞珊 , 等 .中国桑寄生科 Loranthaceae药用植物研究 [ J] .中国野生植物资源 , 1996, (1): 11 ~ 15 [ 3] 李永华 , 陈世 林 , 卢栋 , 等 .不 同寄主 植物 桑寄 生总黄 酮含量研究 [ J] .时珍国医国药 , 2009, 20 (12):3009 [ 4] 李永华 , 卢栋 , 赵明惠 , 等 .广 西桑寄 生科 药用 植物资 源的开发与应用研究 [ J] .广西医学, 2006, 28 (11):1695 [ 5] 马陶陶 , 张群 林 , 李俊 , 等 .三 氯化铝 比色 法测 定中药 总黄酮方法的探讨 [ J] .时珍国医国药 , 2008, 19 (1):54 ~ 56 [ 6] 何 书美 , 刘敬 兰 .茶 叶 中总 黄 酮含 量测 定 方法 的 研究 [ J] .分析化学简报 , 2007, 35 (9): 1365 ~ 1368
黄精为百合科植物滇黄精 Polygonatumkingianum Coll.etHemsl.黄精 Polygonatum sibiricum Red.或 多花黄精 PolygonatumcyrtonemaHua的干燥根茎, 是 我国传统的药、 食两用中药, 具有补气养阴、 健脾、 润肺、 益肝 、 益肾的作用 。 黄 精多糖是黄精 的主要 活性成分之一, 由葡萄糖、 甘露糖 和半乳糖醛酸等 组成, 具有降血脂 、 降血 糖、 增强记忆 、 抗 病毒和 增强机体免疫力等药理作用[ 1 ~ 2] 。 1 实验部分 1.1 原材料、 仪器与试剂 原料 :黄精 (安徽产, 购 于 成 都 药 材 公 司 )。 仪 器 设 备 :电 子 天 平、 DHG202型 电 热干 燥 箱、 水浴 锅 、 UV759S型 紫 外
定桑寄生药材的采收时间为 “ 冬季至次春采割 ” 是 合理的 。 本试验 采集的是 人工种 植的桑 寄生样 品, 在大田管理上经常对寄主桑树的枝叶进行 修煎, 使 桑寄生常年有充足的阳光 , 其所积累的养分不同季 节相差不大 , 桑寄 生药材应全年 可采收。 另 外, 试 验结果不同季节的桑寄生总黄酮含量没有表现出线
———可见分光光度 计。 试剂 、 试药 :O-无水 葡萄糖 (批号 :110833-20503)、 蒸馏水 、 乙醇 (95%)、 蒽 酮 、 浓硫酸 (均为 AR级 )。 1.2 对照品溶液的制备 参照 《中国药典 》 第一部 2010年版 P288黄精项下多糖含量测定方法测定。 精 密称 取 105℃ 干 燥 到 恒 重 的 无 水 葡 萄 糖 对 照 品 35.7mg, 置 100ml量瓶中 , 加水溶解并稀释至刻度, 摇匀, 即得 (每 1ml中含无水葡萄糖 0.357mg)。 1.3 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液 0.1ml、 0.2ml、 0.3ml、 0.4ml、 0.5ml、 0.6ml, 分别置 10ml 具塞刻度试管中 , 各加水至 2.0ml, 摇匀, 在冰水浴 中缓缓滴加 0.2%蒽酮 -硫酸溶液至刻度 , 混匀, 放
参考文献 [ 1] 吴木荣 , 李友 元, 肖洒 .黄 精多 糖调 脂作用 的实 验研 究 [ J] .中国新药杂志 , 2003, 12 (2): 108 ~ 110 [ 2] 赵小贞 , 王玮 , 康仲 涵 , 等 .黄 精口服 液对血 管性痴 呆 大鼠学习记忆与海马突触可塑性 的影响 [ J] .神 经解剖学 杂志 , 2005, 21 (2):147 ~ 153 [ 3] 夏泉 , 谢永忠 .正 交设计 优化黄 精多糖 的水提 醇沉工 艺 [ J] .中国药师 , 2006, 9 (10): 547 [ 4] 侯比菊 , 林超群 .黄精 多糖提 取工艺 的试验 研究 [J] .安 徽化工 , 2006, 142 (4):29 ~ 31
18.73
K22 167.90
K23 206.25
Qi 130.96
Si 19.68
B
1 2 3 1 2 3 10.15 15.90 5.60 3.43 103.10 252.71 31.32 129.04 17.76
C
2 3 1 3 1 2 7.71 9.31 14.62 2.30 59.46 86.72 213.87 120.01 8.73
(收稿日期 2010 -07 -21)
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2010年第 28卷第 11期 Vol.28, No.11, 2010
冷后置水浴中保温 10min, 取出, 立即置冰水浴中冷 却 10min, 取出 , 以相应试剂为空白。 照紫外 -可见 分光光度法 (附录 VA)在 582nm波长处测 定吸光 度 。 以吸光度为纵 坐标, 浓度 为横坐标, 绘 制标准 曲线 (见表 1和附图)。
表 1 葡萄糖 对照品溶液不同浓度吸光度
浓度 3.57
(μg/ml) 吸光度 A 0.27
7.14 10.71 14.28 17.85 0.40 0.54 0.67 0.81
21.42 0.9
续表 3
试验 序号
A
4
2
5
2
6
2
7
3
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3
9
3
K1
4.33
K2 12.96
K3 14.36
R 3.36
K2
1
3 讨 论 3.1 试验结果表明 不同季节的桑寄生总黄酮含量 表现出一定的差异性, 在桑寄生茎枝中 , 不同季节 的桑寄生茎枝总黄酮含量为 7.63 ~ 7.86mg/g, 其中 来自 8月份的桑寄生茎枝的总黄酮含量最 高;在桑 寄生叶中, 不同寄生的桑寄生叶总黄酮含量为 31.52 ~ 32.08mg/g, 其中以 8月份的桑寄生叶黄酮含量最 高 , 桑寄生叶的总黄酮含量比桑寄 生茎枝的总黄酮 含量要高出 4倍以上 。 3.2 药典规定 桑寄生药材的采收时间为 “冬季至 次春采割” [ 1] , 但试验结果表明 , 不同季节的桑寄生 总黄酮 含量表现 出的差异 性不大 , 应可 全年采 割。 试验结果还表明冬季和春季的桑寄生无论茎枝还是 叶的总黄酮含量都不是最高 , 可能 是与桑寄生受到 光照的量有关。 在野生状态下 , 秋季寄主开始落叶, 寄生受 到的光照 开始增加 , 到冬 季寄主 完全落 叶, 寄生光照充 分, 生 长茂 盛, 此 时养分 的积 累最 多, 次春寄主始吐新芽, 寄生受到的光照开始 减少, 冬 季所积 累的养分 也开始减 少, 夏 季光照 虽然最 强, 但此时寄主枝繁叶茂, 把寄生置于绿荫下 , 这段时 间寄生有落叶的现象, 说明寄生的养分较 少。 现在 使用的桑寄生药材基本来自野生状态 , 所以药典规
水平
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表 2 因素水平
A醇沉浓度
(%) 70 80 85
B醇沉次数
2 1 3
C药材 :浸膏
(g∶ml) 1∶ 1.2 1∶ 1.0 1∶ 0.8
试验 序号
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表 3 L9 (34)正交实验安排及试验结果
100g黄精药材
A
B
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黄精总多糖
提取量 (g)
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