手把手教你做细胞计数实验

手把手教你做细胞计数实验

实验用品

0.4% 台盼蓝溶液、无水乙醇或 95% 乙醇溶液、脱脂棉、普通显微镜、试管、吸管、毛细吸管、细胞计数板、绸布。

实验原理

在细胞培养工作中，常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活，确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度，如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别，冻存细胞复苏后的活力检测等。

细胞悬液制备后，常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色，进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高，可使染料进入细胞内而使细胞着色（蓝色）。

细胞计数一般用血细胞计数板，按白细胞计数方法进行计数，便于确定细胞的生活状

况。

实验内容与方法

（一）制备动物细胞悬液

将动物细胞用生物盐水制备成适当浓度的细胞悬液备用。

（二）细胞计数

1.计数板处理

用无水乙醇或 95% 乙醇溶液擦拭计数板后，用绸布擦净，另擦净盖玻片一张，把盖片覆在计数板上面。

2.染色

用滴管吸取 0.4% 台盼蓝染液，按1∶1 比例加入细胞悬液中。从计数板边缘缓缓滴入，使之充满计数板和盖片之间的空隙中。注意不要使液体流到旁边的凹槽中或带有气泡，否则要重做。稍候片刻，将计数板放在低倍镜下（10×10 倍）观察计数。

3.计数方法

按图计算计数板的四角大方格（每个大方格又分 16 个小方格）内的细胞数。计数时，只计数完整的细胞，若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。在一个大方格中，如果有细胞位于线上，一般计下线细胞不计上线细胞，计左线细胞不计右线细胞。二次重复计数误差不应超过±5%（图 7-1）。镜下观察，凡折光性强而不着色者为活细胞，染上蓝色者为死细胞。