流动相配制及色谱方法注意事项
流动相配制及色谱方法注意事项
流动相是影响液相色谱的关键因素。
一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，但是如何配制。
选择配制的方法不同，分析结果特别是保留时间，是会有显著差别的。
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，水性溶剂也常用于缓冲液。
常因资料上表示的内容和实际的配制方法不同，而产生流动相的差异，影响了色谱图和分析结果。
一般来说，溶剂的混合按体积比（V/V）或重量比（W/W）进行。
溶液的体积因温度而变化，所以按重量比混合可调制再现性较好的混合溶剂，但由于操作较麻烦，通常多用体积比混合。
只要没有特别标明，就可按体积比进行混合，但在特殊情况下，如胺类粘度高的溶液混合时，有时用重量—体积比（W/V）的方法。
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
流动相溶解度达不到要求时，尽量选用流动相中含有的比例较大的成分，以减轻进样对流动相的影响造成基线不稳。
b、流动相与样品不产生化学反应，选用流动相配置对色谱峰影响最小。
c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
流动相组成溶剂均达不到要求时，选取的溶剂应保证在设定波长内无紫外吸收。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
下面21项注意让你更懂液相流动相。
1、选择流动相应注意过滤溶剂溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。
万通离子色谱流动相配制注意事项
万通离子色谱流动相配制注意事项1.选择合适的溶剂：在配制离子色谱流动相前，首先要选择合适的溶剂。
一般来说，溶剂要具备一定的溶解能力，能够将需要分析的样品溶解，并且不能与固定相发生化学反应。
常用的溶剂包括水、乙腈、甲醇等。
2.确定适当的流速：流速是影响色谱分离的一个重要因素。
过高或过低的流速都会对分离效果产生不良的影响。
一般来说，流速过高会导致峰形变宽、尾峰扩散，流速过低会导致分离时间过长。
因此，在配制离子色谱流动相时需要根据实际需求确定适当的流速。
3.pH值的调节：pH值是离子色谱中一个非常重要的参数。
在配制离子色谱流动相时，要根据分析物的特性和分析需求来确定适当的pH值。
一般来说，pH值的调节可以通过溶剂的选择、缓冲溶液的添加等方式进行。
4.缓冲剂的选择：缓冲剂的选择也是离子色谱流动相配制的重要步骤之一、缓冲剂的选择要考虑其缓冲范围、溶解性、稳定性等因素。
常用的缓冲剂包括磷酸盐、醋酸盐等。
5.溶解气体的去除：在配制离子色谱流动相过程中，要注意去除其中的溶解气体。
溶解气体的存在会对离子色谱仪的运行产生一定的影响，包括峰形变宽、气泡生成等问题。
一般可以通过使用超声波清洗溶液、用氮气替代空气等方式去除溶解气体。
6.过滤和除气：配制离子色谱流动相前，需要对溶剂进行过滤和除气处理。
过滤可以去除其中的杂质和微粒，提高流动相的纯度；除气可以去除其中的氧气和二氧化碳，减少对离子色谱仪的影响。
7.定期检查：使用离子色谱仪前，要定期检查流动相的状态，包括pH值、流速等参数的调整，加装缓冲剂的情况等。
同时，要检查流动相中的溶解气体和杂质的情况，确保流动相的质量。
总之，配制离子色谱流动相是一个非常重要的步骤，需要注意溶剂的选择、流速的调节、pH值的调整、缓冲剂的选择等因素。
同时，要定期检查流动相的状态，确保流动相的质量。
只有做好流动相的配制，才能保证离子色谱分析的准确性和可靠性。
高效液相色谱仪流动相配置操作规程
高效液相色谱仪流动相配制标准操作规程1.目的明确高效液相色谱法流动相配制过程，保证操作过程的规范性.2.适用范围适用于实验室高效液相色谱法流动相配制。
3.职责实验室分析人员负责按本规程进行操作。
4. 内容4.1流动相批号的编写原则：流动相批号按配制日期编制,如批号20150609，代表2015年06月09日配制。
4。
2流动相配制4.2。
1含水流动相和不含水流动相的配制所用量筒应区分开，配制不含水的有机溶剂类流动相所用量筒必须是干燥状态，不得有水。
4。
2.2根据样品分析方法所规定的流动相体积比例配制,在清洁的带塞量筒中分别倒入相应的溶剂,若该流动相需加入适量的酸或碱，则戴上一次性手套，用专用注射器吸取规定体积的酸或碱，加入量筒,盖上塞子摇匀，振动过程应主要排气。
4。
2.3含盐的缓冲液类流动相的配制应根据规定比例配制，分别秤取规定重量的盐于清洁的带塞量筒中，加入适量纯水，振摇,待固体完全溶解后，再加纯水至规定刻度，盖上塞子，摇匀。
4.2。
4若该流动相对PH值有特殊要求，根据流动相配制规定的体积比例,用酸或碱调节PH值，用PH计测定直至规定范围内。
4。
3流动相抽滤4.3。
1含水流动相和不含水流动相的抽滤装置应区分,抽滤不含水的有机溶剂类流动相所用装置必须是干燥无水的.4.3。
2抽滤装置准备：将过滤器套在三角烧瓶上，用镊子夹取0。
45μm的水系或有机滤膜一张，放在砂芯过滤器上（注意：滤膜应将过滤面完全覆盖)；再将量杯压在滤膜上,量杯边缘和过滤器的边缘对齐;用配套的夹子将过滤器和量杯接头边缘固定（注意夹子位置应避开抽滤嘴)；将抽滤软管套在抽滤嘴上。
4.3.3抽滤：将少量配置好的流动相倒入量杯内，观察是否有漏液现象，若出现漏液须重新固定过滤器和量杯。
如未漏液则继续倒入流动相(注意不要超过量杯最大刻度线），开启真空泵抽滤。
抽滤结束先拔掉与抽滤嘴连接的真空软管,再关闭真空泵。
4。
3。
4脱气：将抽滤好的流动相转入流动相试剂瓶内(少量润洗一次倒入废液桶内再盛装)，盖上瓶盖（瓶盖不得拧紧），常温下超声波超声15至20分钟。
21项注意让你更懂液相流动相
21项注意让你更懂液相流动相流动相是影响液相色谱的关键因素。
一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，但是如何配制。
选择配制的方法不同，分析结果特别是保留时间，是会有显著差别的。
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，水性溶剂也常用于缓冲液。
常因资料上表示的内容和实际的配制方法不同，而产生流动相的差异，影响了色谱图和分析结果。
一般来说，溶剂的混合按体积比（V/V）或重量比（W/W）进行。
溶液的体积因温度而变化，所以按重量比混合可调制再现性较好的混合溶剂，但由于操作较麻烦，通常多用体积比混合。
只要没有特别标明，就可按体积比进行混合，但在特殊情况下，如胺类粘度高的溶液混合时，有时用重量—体积比（W/V）的方法。
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
流动相溶解度达不到要求时，尽量选用流动相中含有的比例较大的成分，以减轻进样对流动相的影响造成基线不稳。
b、流动相与样品不产生化学反应，选用流动相配置对色谱峰影响最小。
c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
流动相组成溶剂均达不到要求时，选取的溶剂应保证在设定波长内无紫外吸收。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
下面21项注意让你更懂液相流动相。
1、选择流动相应注意过滤溶剂溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。
液相色谱流动相的选择依据及使用注意事项
液相色谱（Liquid Chromatography, LC）是一种常用的分离和分析方法，它使用液体作为流动相，在不同组分之间进行分配和分离。
在液相色谱分析中，流动相是至关重要的，它直接影响分离效果、分析速度和结果准确度。
合理选择液相色谱流动相并注意使用时的一些问题是非常重要的。
一、液相色谱流动相的选择依据1. 样品的性质液相色谱中流动相的选择应考虑样品的性质，包括溶解性、稳定性、挥发性等。
对于极性样品，常使用极性溶剂作为流动相；对于不容易溶解的非极性样品，可以选择非极性溶剂作为流动相。
2. 柱子的选择不同的柱子需要选择不同的流动相，以保证分离效果。
对于反相色谱柱，一般使用的是乙腈或甲醇和水的混合物作为流动相；对于正相色谱柱，则需要选用不同的极性溶剂作为流动相。
3. 分离效果流动相的选择应考虑到所需的分离效果。
对于需要高分离效果的分析，流动相的组成和流速需要进行精细调控；对于一些不需要高分离效果的分析，可以适当简化流动相的组成，提高分析效率。
4. 色谱柱的保护对于某些对色谱柱有损害的物质，可以考虑在流动相中添加一些保护剂，以延长柱子的使用寿命。
二、使用注意事项1. 流动相的配制在使用液相色谱分析时，需要注意流动相的配制。
流动相的配制应准确、稳定，避免在实验中因流动相的质量问题导致结果失真。
2. 流速的控制流速的控制对于分析结果的准确性和重现性有着重要影响。
在选择流速时，需要根据分离效果的要求以及柱子的性能来进行合理的设定。
3. 流动相的贮存流动相在储存和使用过程中需要注意避免受到污染和氧化。
定期更换和清洗流动相的储存容器，保持流动相的纯净度和稳定性。
4. 流动相的回收在实验结束后，应注意对流动相进行回收和处理，避免对环境造成污染。
总结回顾：液相色谱分析中流动相的选择和使用是至关重要的。
合理选择流动相，可以提高分析的准确性和重现性；注意使用时的一些问题，可以延长柱子的使用寿命并保护环境。
需要根据样品的性质、柱子的选择以及分离效果来综合考虑流动相的配制和使用。
高效液相色谱仪1流动相的配置及其注意事项
二 配置过程的注意事项 1 取瓶子的时候要记住要拿稳，由于瓶子很高，脚下要垫台 阶才能取瓶子。 2 瓶子取下后要立即用封口膜封口，防止有灰尘进入瓶中。
5 抽滤甲醇，水和冲洗液的顺序是超纯水，冲洗液和纯甲醇。因为超纯水过滤完后会有 残留，对冲洗液的影响不大，冲洗液需要用有机系滤膜，甲醇可以继续使用该滤膜。 6 抽滤完毕后用保鲜膜将各瓶封口，放到超声洗涤机里面超声30分钟，赶出液体内的 空气。
7 超声结束后，将各瓶放在高效液相色谱仪上面，记住要对号入座，甲醇瓶放在A处， 超纯水瓶放在B处，冲洗瓶放在C处，空瓶放在D处。吸液管也要仔细查看管线上的编号， 盖住各瓶，切记不要弄错。
2 打开通风橱电源，照明，抽风，由于有机相有毒，戴手套和口罩。手套不能有破洞， 有毒液体不要滴到身上。 3 取超纯水，使用纯水机制备，一定要用超纯水。制备方法参看纯水机操作手册。超纯 水要用专用的干净的玻璃容器盛装，玻璃容器不能用作其他用途。 4安装抽滤装置，抽滤有机液选择有机系滤膜，抽滤水选择水系滤膜。冲洗液也要用水 系滤膜. 滤膜要使用镊子夹取，不要用手。每次用一张即可。
??8将一切做完之后就要清洗过滤装置和使用的仪器流动相的配置和过滤装置记住不要用任何洗涤剂进行清洗只用超纯水进行淋洗冲洗还可以浸泡于装超纯水的烧杯中然后放在超声机中进行清洗
高效液相色谱仪流动相的配 置及其注意事项
以甲醇水流动相为例
一 流动相的配置过程
1 取下色谱瓶，由于没有封盖，需要用保鲜膜迅速封口，拿到通风橱。
(最新)液相色谱使用注意事项
流动相：1. 流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2. 流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3. 含水流动相最好在临实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜。
最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。
4. 流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。
5. 流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
色谱柱:1. 要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
2. 长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
3. C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
4. 一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。
否则反冲会迅速降低柱效。
5. 经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。
在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50~75ml。
6. 保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。
绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
使用注意事项：1. 使用中避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行。
2. 平衡过程中，将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡）。
3. 如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存于甲醇/乙腈中。
安捷伦1260液相色谱仪操作流程及注意事项
安捷伦1260液相色谱仪操作流程及注意事项1、配制流动相，水相置于棕色玻璃瓶中，有机相置于相应无色玻璃瓶中。
水相和有机相必须过滤，滤膜选用0.45有机系滤膜（尼龙）。
注意：过夜的流动相必须重新过滤。
2、流动相过滤后，置超声仪中超声20min。
3、将已超声的流动相轻轻换上，动作不要太剧烈，会产生气泡，注意不要把有机相和水相换反了（A是有机相，B是水相）。
4、将色谱柱接上，注意：流动相的流动方向必须和色谱柱上的箭头方向一致。
5、打开计算机电源、显示器开关，并输入密码。
6、依次从上往下打开液相色谱仪上的所有开关。
7、打开液相色谱在线工作站（online），输入密码。
8、打开的液相工作站上分为四个小部分，依次为进样器、泵、柱温箱及检测器。
在第二个部分设置流动相的体积及溶剂瓶的总体积。
9、脱气：旋开purge阀开关，右击泵部分，选择“method”，选择B相100%，流速1ml/min，选择确定；右击泵部分，选择“control”，选择pump“on”，10秒后，调节流速为3ml/min，10秒后，调节流速5ml/min，开始水相脱气3min，水相脱气结束后，将流速按照5ml/min-3ml/min-1ml/min的流程往下调。
然后开始有机相脱气，步骤同上，注意流速不可一下子从1ml/min调到5ml/min，需慢慢调节。
流动相脱气结束后，旋紧purge阀开关。
10、建立样品的色谱方法：设置进样体积，选择洗针进样，注明洗针位置；设置流动相比例、流速及梯度洗脱条件，序列进样时设置样品运行时间和后运行时间；打开柱温箱，设置柱温；打开紫外检测灯，设置检测波长。
全部设置好后，保存方法，不要覆盖别人的方法。
11、谱图保存路径的设置：View—preferences—data path（第二个选项）—remove旧的文件夹，add自己的文件夹。
再打开Sequence—Sequence parameter—选择Data path为自己的文件夹即可。
液相色谱柱的使用注意事项流动相和样品处理 液相色谱操作规程
液相色谱柱的使用注意事项流动相和样品处理液相色谱操作规程液相色谱柱的使用注意事项：流动相和样品处理 1. 色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特别说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是液相色谱柱的使用注意事项：流动相和样品处理 1. 色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特别说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很简单析出，堵塞色谱柱。
2. 流动相：1）在进行样品检测前，至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。
流动相确定要使用色谱级别的溶剂。
如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避开细菌产生。
2）流动相使用前需用微孔滤膜过滤,除去流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。
缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避开溶解度变化造成产生新的沉淀。
不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱，以免柱性能损坏（添加5％的有机溶剂冲洗色谱柱，同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。
还可以使色谱柱更简单平衡）。
3）流动相需脱气后使用，可避开因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。
假如测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区分，应当使用过度分布的形式进行平衡。
避开由于流动相的蓦地变化造成柱压加添过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。
正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。
4）流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水*好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
假如将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应当定期清洗或更换。
5）以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0—8.0，BDSC18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0—10.0、当必需要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立刻用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
流动相的配制和使用有哪些注意事项
流动相的配制和使用有哪些注意事项下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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高效液相色谱仪1流动相的配置及其注意事项
5 抽滤甲醇，水和冲洗液的顺序是超纯水，冲洗液和纯甲醇。因为超纯水过滤完后会有 残留，对冲洗液的影响不大，冲洗液需要用有机系滤膜，甲醇可以继续使用该滤膜。 6 抽滤完毕后用保鲜膜将各瓶封口，放到超声洗涤机里面超声30分钟，赶出液体内的 空气。
7 超声结束后，将各瓶放在高效液相色谱仪上面，记住要对号入座，甲醇瓶放在A处， 超纯水瓶放在B上的编号， 盖住各瓶，切记不要弄错。
8 将一切做完之后，就要清洗过滤装置和使用的仪器，流动相的配置和过滤装置记住不 要用任何洗涤剂进行清洗，只用超纯水进行淋洗，冲洗，还可以浸泡于装超纯水的烧 杯中然后放在超声机中进行清洗。 9 清洗干净后，水滴不能挂壁，放入烘箱中，温度控制在45度烘干。
二 配置过程的注意事项 1 取瓶子的时候要记住要拿稳，由于瓶子很高，脚下要垫台 阶才能取瓶子。 2 瓶子取下后要立即用封口膜封口，防止有灰尘进入瓶中。
3 甲醇有毒，要做好防护措施，戴手套和口罩，打开通风橱。 4 安装抽滤装置的时候要防止抽滤装置摔破。滤膜要放在正 中间，
5 抽滤顺序不能弄混，超纯水，冲洗液，甲醇。甲醇要保证 是色谱级纯甲醇，如果不能保证，就不能用。
6 超声洗涤时要确保瓶子不会倒下来，不要让溶液污染。
7 清洗过滤装置的时候不能用洗涤剂，因为洗涤剂中含有离 子和有机物，不能完全清洗干净，也不能用刷子和自来水， 因为会有颗粒物。 8 清洗后烘干时不能将温度设置过高，防止玻璃仪器高温变 形。 9 色谱瓶放在仪器上面的时候一定要记住对号放置，对号放 入吸液管，不能弄错。
高效液相色谱仪流动相的配 置及其注意事项
以甲醇水流动相为例
一 流动相的配置过程
1 取下色谱瓶，由于没有封盖，需要用保鲜膜迅速封口，拿到通风橱。
岛津液相色谱使用方法和注意事项
【转帖】岛津液相色谱仪注意事项岛津液相色谱仪注意事项1.流动相必须用HP LC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。
清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；③用10％稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的P H值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。
更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
高效液相色谱常见故障的断定及解决可能的原因及解决方法(一)保留时间变化1.柱温变化柱恒温，必要时需配置恒温箱2.等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够用》25mmol/L的缓冲液4.柱污染每天冲洗柱5.柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命采用保护柱(二)保留时间缩短1.流速增加检查泵,重新设定流速2.样品超载降低样品量3.键合相流失流动相P H值保持在3~7.5检查柱的方向4.流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加柱恒温(三)保留时间延长1.流速下降管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱3.键合相流失同前(二)34.流动相组成变化同前(二)45.温度降低同前(二)5(四) 出现肩峰或分*1.样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏更换进样器转子(五)鬼峰1.进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物处理样品3.柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TF A)氧化(肽谱) 每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相) 通过变化平衡时间检查水质量，用HP LC级的水(六) 基线噪声1.气泡(尖锐峰) 流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声) 清洗柱,净化样品,用HP LC级试剂3.检测器灯连续噪声更换氘灯4.电干扰(偶然噪声) 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾1.柱超载降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相P H值,钝化样品4.同前(四)4 同前(四)45.同前(四)3 5.同前(四)36.死体积或柱外体积过大连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)峰展宽1.进样体积过大同(四)12.在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载进小浓度小体积样品液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
高效液相色谱仪操作注意事项
高效液相色谱仪操作注意事项
流动相：
1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和有机系膜的使用范围，并进行超声除气处理。
2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质。
样品：
1、采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体颗粒；
2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液；
泵：
1、泵在使用过程中不能把气泡泵进入仪器。
2、泵自清洗液体应该应经常更换（一般为一周）。
3、仪器在长期不使用时应把泵、流动相过滤器及管路保存在有机相溶剂条件下。
进样阀：
1、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针针，洗针液一般选择与样品液一
致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；
2、手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时，进样体积应为定量管的2倍以上；
色谱柱：
1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等；
2、使用符合要求的流动相；
3、使用保护柱；
4、如所用流动相为含盐流动相，必须先用水与有机相相同比例流动相冲洗20分钟以上再换上含盐流动相反相色谱柱使用后，使用后，先用水与有机相相同比例的流动相冲洗，再用纯有机相冲洗。
5、色谱柱在不使用时，应用有机相冲洗，取下后紧密封闭两端保存；
6、不要高压冲洗柱子；
7、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；
8、使用过程中注意轻拿轻放。
高效液相色谱法流动相的注意事项
高效液相色谱法流动相的注意事项高效液相色谱法（High-Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的分析技术。
在进行HPLC分析时，流动相的选择和使用是非常重要的。
下面将详细介绍关于HPLC流动相的注意事项。
1.流动相的选择：在选择流动相时，要考虑所分离的样品的性质，包括其溶解性、极性、酸碱性等。
一般情况下，流动相可以是纯溶剂或溶剂混合物，其中溶剂混合物可以根据需要进行优化。
常见的HPLC流动相溶剂包括水、有机溶剂（如甲醇、乙腈、二氯甲烷等）以及酸、碱溶液。
2.流动相的pH值调节：流动相的pH值对于样品的分离和检测具有重要影响。
在某些情况下，需要调节流动相的pH值以改变样品的离子状态或结构。
这可以通过加入缓冲剂来实现，一般情况下，可以根据样品的性质选择合适的缓冲剂。
3.流速的控制：流速的选择应根据需要平衡分离效果和分析时间。
流速过快可能导致峰形变宽、分离不理想，而流速过慢则会延长分析时间。
因此，需要根据样品的性质和分离要求合理选择流速，并在实验过程中进行优化。
4.流动相的净化和除气：使用之前，流动相需要经过净化处理以去除悬浮物和杂质。
此外，流动相中的气泡也会对分离效果产生干扰，因此需要除去气泡。
可以通过超声波处理、真空处理或使用气体瓶来除去气泡。
5.流动相的稳定性：流动相的稳定性对于HPLC分析至关重要。
在实验过程中，需要定期检查流动相的配制是否正确，是否出现沉淀、杂质等问题。
另外，一些样品可能会与流动相产生反应或降解，导致流动相的不稳定，需及时调整。
6.流动相的储存和保养：为了确保流动相的质量和稳定性，需要正确储存和保养。
一般情况下，流动相应避光保存，并在使用前用滤膜过滤以去除杂质。
当流动相已经使用一段时间后，可能会积聚杂质或可溶性样品残留，此时需要更换或清洗柱和系统以保持分析结果的准确性。
7.设备和仪器的选择和检查：在进行HPLC分析时，需要选择适当的设备和仪器，并定期检查和维护。
高效液相色谱法操作注意事项
高效液相色谱法操作注意事项（草案）1 实验前准备事项1.1 对照品的配制1.1.1 配制方法取干燥情况下的对照品（注意是否吸潮），每次称取量不得少于5mg，置一定容量量瓶中，加入少量溶剂，超声溶解冷却后再定容、混匀（高浓度）。
再用移液管吸取1~2ml至先配制成高浓度的对照品，一定容量量瓶中，加入溶剂定容、混匀，即得（低浓度）。
配置后的对照品均需用封口膜封好。
1.1.2 配制浓度严格按照标准配制对照品浓度（低浓度），不可超过或低于一倍。
1.1.3所需玻璃仪器和容器所需玻璃仪器和容器，尽量选用棕色容量瓶进行配制。
每次临用前需要用纯水清洗干净后，再用无水乙醇冲洗三次，阴（烤）干、冷却后方可使用。
1.1.4标签配制好的对照品标签上应注明：品名、批号、取样量、稀释倍数（浓度）、配制日期。
1.1.5 干燥器干燥器中的干燥剂每月至少处理一次。
1.2 供试品的制备1.2.1 取样方法成品：取10袋装量差异项下的样品，按照相关品种标准含量测定项下有关要求，精密称取两份，进行平行实验。
药材：取样袋中药材全部打粉至规定目数（一般为3～4号筛），按照05年版中国药典相关品种含量测定项下有关要求，精密称取两份，进行平行实验。
1.2.2称样要求用万分之一天平称取，使用中注意天平稳定。
1.2.3量取要求均用移液管量取或刻度量管。
1.2.4 所需玻璃仪器和容器所需玻璃仪器和容器，每次临用前需要用纯水清洗干净后，再用无水乙醇冲洗三次，阴（烤）干、冷却后方可使用。
2 实验中注意事项2.1 实验仪器的准备2.1.1 仪器安装后是否存在漏液现象？压力是否稳定？柱子是否安反？2.1.2 检查完毕后，打开电脑、N2000工作站电源开关后，再打开泵电源开关、控制面板上泵开关。
先用色谱甲醇冲洗柱子，等待机器平稳后，再打开检测器电源开关、控制面板上检测器开关。
30分钟后方可进针做实验。
2.1.3 打开电脑桌面上的N2000在线工作站，选择通道，设定保存路径、波长（注意控制面板上同样需要设置）等实验信息。
流动相的配制及液相色谱仪的使用方法简介
流动相的配制及液相色谱仪的使用方法简介液相色谱仪是分析工作者最常用的“一门武器”，现今的液相软件均已具备了强大的数据处理功能，如能庖丁解牛般使用，便可将此测定做到事半功倍、轻松自如。
一、水相中的溶质溶解方式水相中需溶解的无机盐和表面活性剂等固体溶质，建议采用加热法，不建议采用振摇、超声等方式。
因此种方式的溶解，溶质可能处于“临界胶团浓度”，其后一旦遇到某特殊情形（如遇有机溶剂、温度剧降等），极易析出少量结晶；而一旦析出，便将损伤仪器和色谱柱，呈现泵头处析出“盐和白粉”的现象。
二、流动相的配制与使用1.恒度洗脱一定是将水相与有机相混合后、抽滤（使用混合型过滤膜），用一个管路（如A管）泵入仪器，这是使用的原则。
切勿因节约有机相、便于摸索色谱条件等原因而使用两个管路（一个纯水相、一个纯有机相）泵入仪器，即便配制了脱气机。
因此种情形极易造成水相中盐和表面活性剂的少量析出。
剩余流动相完全可继续使用，密封后放置阴凉处；待下次试验时与新配制的流动相混合后抽滤即可。
无需担心发霉、无机盐析出、挥发、比例不准等问题，这些皆为疑神疑鬼的表现。
实践是检验真理的唯一标准！实践吧~2.梯度洗脱流动相配制最为科学的方式是：A相为高比例的水相-低比例的有机相、B 相为低比例的水相-高比例的有机相（英国药典几乎均如此）；其次为：A相为高比例的水相-低比例的有机相、B相为纯有机相；最不科学的为：A相为纯水相、B相为纯有机相，如既有质量标准采用了此种方式，建议改为第二种或第一种方式，否则基线漂移严重，难以进行稳定的杂质检测。
梯度洗脱结束后，建议经5分钟回到初始状态，再平衡5分钟后开始下一针测定。
这10分钟的稳定极为关键。
切勿短时间内回到初始状态，会对仪器和色谱柱损伤较大。
三、色谱柱的安装。
流动相管理规程
1.目的规范高效液相色谱流动相的配制、使用、保管。
2.适用范围本标准适用于我公司高效液相色谱用流动相的管理。
3.职责组长：确保检验员了解、执行该程序，并监督其执行情况。
检验员：依从本程序的指导方针与规则执行。
4.规程4.1.配制要求配制流动相必须使用保存在密闭容器内的纯化水、尽可能使用色谱纯试剂、试药，配制好后必须用0.45μm滤膜滤过。
4.2.标识应用统一标识，配制好的流动相必须注明：名称、规格、配制日期、有效期至、配制人。
4.3.贮存4.3.1.流动相的贮液罐材料应耐腐蚀，可为玻璃、不锈钢、氟塑料或特种塑料聚醚醚酮(PEEK)。
4.3.2.贮液罐应密闭。
4.4.效期4.4.1.含盐溶液90%以上及不稳定的流动相须临用新配。
4.4.2.含盐溶液且含10%以上有机相的混合流动相效期为7天。
4.4.3.其它含10%以上有机相的混合流动相效期为三个月。
流动相管理规程SMP-QC-01-033-00 2/34.5.使用4.5.1.使用前应检查标签是否清晰完整，完好方可使用。
4.5.2.超过有效期的不得使用。
4.5.3.使用前检查瓶内流动相的状态是否正常，是否存在悬浮物、沉淀等现象，发现异常不得直接使用。
4.5.4.流动相在使用前必须进行脱气处理，以除去其中溶解的气体，并防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低产生气泡，影响检测。
4.5.5.流动相使用过程中贮液罐应密闭，防止污染，及空气中02、CO2重新溶解于已脱气的流动相中。
4.5.6.流动相使用完毕应放回专门的贮存柜中。
5.安全、健康、环境保护本规程无特殊的安全、健康、环境保护要求。
6.培训培训对象：工艺部培训课时：1课时7.附件附件：流动相标签8.修订历史R（SMP-QC-01-033-00）-001-00 1/1。
液相流动相的配制
人力资源工作及重要性此刻，愈来愈多的公司开始重视人力资源管理部门。
好多传统公司将过去的人事部牌子换掉，挂起了崭新的“人力资源部”的牌子，有些原来只有 10 来个人的小公司，也弄个“人力资源总监”的职位，只可是在这类公司的“人力资源总监”，常常还附加执行“行政”和“前台”的职责。
和人力资源部门遇到广泛的重视不一样的是，在绝大多半公司中，人力资源部门的人却常常无事可做，这个部门的职工很轻松，很自由。
他们一般仅负责在公司招聘过程中，负责招聘，和对应聘者进行早期的查核，此外一个很重要的工作就是为职工供给培训计划，而这类培训，常常还附加着很高的隐性收入，好多讲课老师都理解，和人力资源经理打成一片，常常比设计开发精选的课程更为重要，这就是我们多“重视”的人力资源部门吗？人力资源部门究竟要为公司达成哪些工作，才能够真实表现人力资源部门的业绩呢？事实上，人力资源，是公司发展的重要源泉之一，特别是在那些第三家产的公司中，因为不直接依靠对“不行重生资源”的控制，所以，人力资源和知识资源便成了公司竞争中特别重要的砝码。
而人力资源部便更是公司人材竞争力的“勘探队”和“发掘机”。
一般来说，人力资源部门有四项平时工作，才能保障公司在人材贮备和培育方面获取竞争优势。
第一项工作：洗脑。
人力资源部门负责对公司职工进行培训与教育，事实上就是一种洗脑。
让职工认可，并深深的理解、贯彻公司的文化。
而使职工对这文化的接受与自觉地认可的过程，就是人力资源部门的一项最重要的工作。
此刻好多公司都有这样的培训项目：职工入模训练，就是让职工在最短的时间内产生与职工的认可感，可是作为人力资源部门应当特别清楚，这其实不是洗脑，而是一种逼迫。
洗脑是自觉行为，入模是被动行为，二者的差异好像天壤，同时，所谓的入模培训，还会致使职工创建力的丧失，并在为以后职工流动加大种下暗影。
所以有价值的人力资源部门的职工培训工作，是一个技巧性、方向性、针对性、阶段性都特别明显的有规划的长久工作。
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流动相是影响液相色谱的关键因素。
一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，但是如何配制。
选择配制的方法不同，分析结果特别是保留时间，是会有显著差别的。
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，水性溶剂也常用于缓冲液。
常因资料上表示的内容和实际的配制方法不同，而产生流动相的差异，影响了色谱图和分析结果。
一般来说，溶剂的混合按体积比（V/V）或重量比（W/W）进行。
溶液的体积因温度而变化，所以按重量比混合可调制再现性较好的混合溶剂，但由于操作较麻烦，通常多用体积比混合。
只要没有特别标明，就可按体积比进行混合，但在特殊情况下，如胺类粘度高的溶液混合时，有时用重量—体积比（W/V）的方法。
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
流动相溶解度达不到要求时，尽量选用流动相中含有的比例较大的成分，以减轻进样对流动相的影响造成基线不稳。
b、流动相与样品不产生化学反应，选用流动相配置对色谱峰影响最小。
c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
流动相组成溶剂均达不到要求时，选取的溶剂应保证在设定波长内无紫外吸收。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
下面21项注意让你更懂液相流动相。
1、选择流动相应注意过滤溶剂溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。
本实验室有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水溶性流动相时（如甲醇/水），先用1～2mL甲醇润湿过滤膜，有助于快速抽滤。
2、注意保持储液瓶的清洁用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。
3、注意保证溶剂的质量一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。
4、注意流动相脱气不充分流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。
可试用下列方法解决问题：流动相再脱气；采用更有效的脱气方法或两种方法配合使用；改系统内混合为系统外预混合。
HPLC所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。
系统中气泡的产生：流动相本身存在，梯度淋洗混合后放出气泡；气泡的影响：存在于管路中，系统压力不稳定，实验结果有偏差；存在于单向阀中，易造成液体回流，流量不准确，甚至是不吸液存在于检测器中，出现鬼峰，影响检测准确性。
所以做液相对流动相的气泡和杂质要求比较严格。
气泡会影响柱的分离效率，检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。
（噪声增大，基线不稳，突然跳动）。
此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）反应。
溶解气体还会引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。
溶解氧能与某些溶剂（如，甲醇、四氢呋喃）形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收（特别是在260nm以下），并导致检测灵敏度的轻微降低，但更重要的是，会在梯度淋洗时造成基线漂移或形成鬼峰（假峰）。
在荧光检测中，溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。
在某些情况下，荧光响应可降低达95%。
在电化学检测中（特别是还原电化学法），氧的影响更大。
除去流动相中的溶解氧将大大提高UV检测器的性能，也将改善在一些荧光检测应用中的灵敏度。
常用的脱气方法有：加热煮沸、抽真空、超声、吹氦等。
对混合溶剂，若采用抽气或煮沸法，则需要考虑低沸点溶剂挥发造成的组成变化。
（1）氦气脱气：氦气脱气是很有效的脱气方法。
氦气缓缓的通过流动相赶去溶入的空气，如果使用得当，在10min内可除去80%～90%的溶入气体。
由于氦气在流动相中的溶解度极低，所以用氦气脱气保护的流动相可以认为是一个无气体溶解体系。
其缺点是氦气价格比较昂贵，会增加检验成本。
一般说来有机溶剂中的气体易脱除，而水溶液中的气体较顽固。
在溶液中吹氦是相当有效的脱气方法，这种连续脱气法在电化学检测时经常使用。
但氦气昂贵，难于普及。
（2）真空脱气：也是比较常用的脱气方法。
现在多数企业都最常用这种办法，贮液器被抽成部分真空，溶入的气体蒸发形成气泡溢出，其效果仅次于氦气脱气。
象Agileng1200液相色谱使用的是在线脱气机。
在线脱气只适合脱完气之后的流动相，在使用过程中的微量脱气。
（3）超声波脱气：将配制好的流动相连容器放入超声水槽中脱气10～20min。
这种方法比较简便，又基本上能满足日常分析操作的要求，所以，目前仍广泛采用。
这种方法只能除去30%的溶解气体，有时还会引起气体溶解度的增加。
对氧敏感的检测器不宜用此法。
超声脱气比较好，10~20分钟的超声处理对许多有机溶剂或有机溶剂/水混合液的脱气是足够了（一般500ml溶液需超声20~30min方可），关于超声时间问题众说纷纭，各实验室内5～30分钟不等，一般来说流动相组成为无机（缓冲盐溶液）时，5～15分钟即可，流动相为是水和有机容积混合时，超声时间要相对长一些，这个方法只能除去30%的溶解气体，时间的延长不和效果成正比，且其中气泡对色谱峰基线稳定性与信噪比有一定影响，一般来说影响不大，15min超声即可足够。
此法不影响溶剂组成。
超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器内液面不要高出水面太多。
（4）加热回流脱气：该方法虽然效果很好，但是适用范围较窄。
对于有机溶剂或混合流动相不适合用此法，因为挥发性组分会损失掉，改变流动相的组成。
综合来说，用真空抽滤后，再用超声脱气还是最常用的办法，用氦气的方法是效果最好的办法，而在线脱气本身也是真空脱气，但它可以放到仪器上使用，是一种保证性的办法。
A.离线（系统外）脱气法不能维持溶剂的脱气状态，在你停止脱气后，气体立即开始回到溶剂中。
在1~4小时内，溶剂又将被环境气体所饱和。
B.在线（系统内）脱气法无此缺点。
最常用的在线脱气法为鼓泡，即在色谱操作前和进行时，将惰性气体喷入溶剂中。
严格来说，此方法不能将溶剂脱气，它只是用一种低溶解度的惰性气体（通常是氦）将空气替换出来。
此外还有在线脱气机。
5、注意流动相供给不畅流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。
应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。
输液管道上装沉子沉至瓶底，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。
过滤器阻塞引起管道和泵腔空化，压力不稳。
过滤器被微粒所阻塞或长霉，去掉过滤器后如果系统运转正常，说明已找出问题，换上新的过滤器则可。
有时候换上新的过滤器仍然不畅，那就需要查查流动相的制备过程，或者换大孔径的过滤器。
不管如何，流动相都需要重新过滤。
流速过高、阻力大，造成空化现象，这是由于过滤器孔径、管道内径、流速和溶剂黏度等引起的。
如果流速大于10mL/min，常会出现这种现象。
使用下列方法解决：（1）使用低流速；（2）换大孔径的过滤器；（3）增加进液管道内径；（4）抬高或加压储液器；（5）不用过滤器，但流动相一定要先过滤；（6）储液器盖子太紧，在储液器内形成真空，打出的流动相不连续。
应松开盖子或留有1mm的缝隙；（7）进液管道阻塞或弯曲使泵抽不到液，注意调整进液管道或更换新的。
其它问题包括渗漏或接头松动、泵部件损坏等，都能引起供液不正常。
6、注意防止流动相和储液器被污染由于污染，噪音越来越大，检测器基线上升。
污染物可能被泵以稳定的浓度打入系统，而再以稳定的浓度流出来，所以在色谱图中不出多余的峰。
用梯度洗脱时弱流动相可以使污染物聚在柱顶，流动相强度增加后污染物可能被洗脱出来一个大的伪峰。
有时基线噪音突然增大或突然提高，都是因为反复加进新的流动相或系统用得太久（通宵）所造成的。
新加进的流动相有污染物或者流动相长霉，繁殖了细菌。
脏的储液器会污染清洁的流动相。
每种流动相备有专用的储液器，或者定期报废储液器。
流动相污染来自这几个方面：试剂质量不高，玻璃器皿不合格；微生物的影响；配制流动相时操作不当等，因此要求高纯度化学试剂和HPLC级溶剂。
要注意玻璃器皿按规定清洗干净；为防止微生物生长，每天要用甲醇清洗系统；怀疑系统内生长了微生物，可用稀硝酸冲洗即可（注意不要损坏柱和管道系统）；真空脱气时防止泵油带入流动相；用清洁的惰性塞子、搅棒、过滤器和玻璃器皿配制流动相；已经污染的流动相一定要废弃掉。
7、注意选择流动相应不改变填料的任何性质低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。
碱性流动相不能用于硅胶柱系统。
酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。
8、选择流动相应注意纯度色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。
9、选择流动相应注意必须与检测器匹配使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。
当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。
10、选择流动相应注意粘度要低（应<2cp）：高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长，最好选择沸点在100℃以下的流动相。
11、选择流动相应注意对样品的溶解度要适宜如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。
12、选择流动相应注意样品易于回收应选用挥发性溶剂13、选择流动相应注意由强到弱一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
14、选择流动相应注意三倍规则每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。
这是一个聪明而又省力的办法。
调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
15、选择流动相应注意粗调转微调当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
16、流动相的配制注意有机溶剂和水性溶剂的混合方法有机溶剂和水性溶剂的混合液作为流动相是经常的，但由于混合方法不同，有时分析结果相差很大。