免疫细胞分离及其表面标志检测技术
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免疫细胞分离及其表面标志检测技术
第四节 免疫细胞表面标志的检测及应用
➢ 免疫细胞表面标志的检测方法 ➢ 淋巴细胞表面标志检测的临床意义
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
一、免疫细胞表面标志的检测
➢ 抗体致敏细胞花环法 ➢ 免疫细胞化学法 ➢ 免疫荧光法 ➢ 流式细胞分析法
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
细胞分离基本原理
➢不同细胞密度不同 ➢不同细胞表面生物学特性不同 ➢不同细胞表面分化抗原不同
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
不同细胞密度不同
➢人的红细胞密度为1.093 ➢粒细胞密度为1.092 ➢单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为 1.075-1.090
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
不同细胞密度不同
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
用1.077±0.001的分层液可将细胞分离
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
密度梯度离心(Ficoll)离心
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
二 、淋巴细胞分离
（去单核细胞）
➢ 贴壁粘附法 ➢ 吸附柱过滤法 ➢ 磁铁吸引法 ➢ Percoll 分离液法
（连续密度梯度离心）
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
一、外周血单个核细胞分离
➢ 外周血单个核细胞（peripheral mononuclear cells, PMNC）包括淋巴细胞和单核细胞
（monocyte）。 ➢ Ficoll分离液法主要用于分离外周血中的单个核细
胞，是一种单次差速密度梯度离心的分离法。
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
三、NK细胞表面标志
人类NK细胞表面标志主要以 CD16、CD56来认定，临床上将 CD3-CD56+CD16+淋巴细胞认定为 NK细胞。
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
T细胞及NK细胞
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
第三节 其他的免疫细胞
抗原提呈类细胞表面标志
技术简单，分离可在试管中 完成。
得率高。
对细胞温和，不影响分离细 胞的后续培养。
可直接上流式细胞仪检测， 不影响散射光。 需要很强的磁场来分离细胞。
得率不高。
纯度低。
纯度高。
分离速度快。
分离速度慢。
成本低。
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
需要很强的磁场来分离细胞， 需要一次性的分离柱，不能 在普通试管进行。
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
免疫磁珠法细胞分选过程
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
免 疫 磁 珠 细 胞 分 选 装 置
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
全自动细胞分选系统
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
流式细胞分析仪
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
第二节 淋巴细胞标志及亚群分类
2.淋巴细胞有哪几类细胞？能用形态学的方法加 以区别吗？
3.将细胞分离的原理有哪些？各有什么特点？ 4.形态学相同的一类细胞为什么还要分亚群？ 5.T细胞和B细胞进一步区分亚群的依据是什么？
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
6.什么是细胞表面标志？其作用是什么？ 7.细胞表面标志的检测方法有哪些？ 8.利用细胞表面标志（CD抗原）分离细胞的方法
二、淋巴细胞表面标志检测的临床意义
➢ 淋巴细胞表面标志检测是评价免疫功 能的重要指标。
➢ 对CD4+和CD8+T细胞的测定，有助 于免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病和 移植排斥反应的监测。
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
临床常见疾病中的T 淋巴细胞的变化
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
思考题
1.免疫细胞都包括哪些细胞？为什么要将其分离 纯化？
第三章 免疫细胞的分离及其 表面标志检测技术
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
第一节 一、 二、 三、 四、
免疫细胞的分离 外周血单个核细胞分离 淋巴细胞的分离 T细胞和B细胞的分离 T细胞亚群的分离
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
第二节 淋巴细胞标志及亚群分类 一、 Ｔ细胞表面标志及亚群 二、 B细胞表面标志 三、 NK细胞表面标志
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
磁珠大小可以选择
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
大小免疫磁珠分离细胞的特点比较
比较项目 对细胞的影响
对流式细胞仪的影响 分离条件要求 收率 纯度 分离时间 分离成本
大磁珠
小磁珠
对细胞造成机械压力，影响 其生物学活性，不利于分离 后培养。 阻塞流式细胞仪的喷嘴，影 响散射光。
第三节 其他的免疫细胞 第四节 免疫细胞表面标志的检测及应用
一、 免疫细胞表面标志的检测方法 二、 淋巴细胞表面标志检测的临床意义
思考题 小结
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
Fra Baidu bibliotek一节 免疫细胞的分离
➢ 外周血单个核细胞分离 ➢ 淋巴细胞的分离 ➢ T细胞和B细胞的分离 ➢ T细胞亚群的分离
常用于鉴定和检测淋巴细胞表面标志 是簇分化抗原（Cluster of differentiation，CD）。
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
细胞表面分化抗原（CD抗原）
➢适用于T、B细胞的分离 ➢已知CD抗原细胞亚群的分离 ➢未知CD抗原细胞亚群的分离 ➢（阴性分选）
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
一、T细胞表面标志及其亚群
➢ CD3+CD4+CD8-辅助性T细胞 （help T cell,Th） ➢ CD3+CD4-CD8+细胞毒性T细胞 （cytotoxic T cell,Tc or CTL） ➢ CD4+CD25+调节性T细胞 （regulatory T cell,Tr or Treg）
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
二、B细胞表面标志
➢ SmIg、Fc受体、补体受体、EB病毒受体，部 分CD分子是B细胞的重要表面标志，其中以 SmIg为B细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指 标。
➢ CD19/CD5分子：可将B细胞区分为B1细胞和 B2细胞，B1细胞为CD19和CD5双阳性，而 B2细胞仅为CD19阳性，B2细胞为通常所指的
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
三、T细胞和B细胞的分离
➢ E花环沉降法 ➢ 尼龙毛柱分离法
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
四、T细胞亚群的分离
➢ 亲和板结合分离法 ➢ 磁性微球分离法 ➢ 荧光激活细胞分离仪分离法
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
荧光激活细胞分离仪分离法
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
第四节 免疫细胞表面标志的检测及应用
➢ 免疫细胞表面标志的检测方法 ➢ 淋巴细胞表面标志检测的临床意义
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
一、免疫细胞表面标志的检测
➢ 抗体致敏细胞花环法 ➢ 免疫细胞化学法 ➢ 免疫荧光法 ➢ 流式细胞分析法
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
细胞分离基本原理
➢不同细胞密度不同 ➢不同细胞表面生物学特性不同 ➢不同细胞表面分化抗原不同
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
不同细胞密度不同
➢人的红细胞密度为1.093 ➢粒细胞密度为1.092 ➢单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为 1.075-1.090
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
不同细胞密度不同
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
用1.077±0.001的分层液可将细胞分离
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
密度梯度离心(Ficoll)离心
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
二 、淋巴细胞分离
（去单核细胞）
➢ 贴壁粘附法 ➢ 吸附柱过滤法 ➢ 磁铁吸引法 ➢ Percoll 分离液法
（连续密度梯度离心）
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
一、外周血单个核细胞分离
➢ 外周血单个核细胞（peripheral mononuclear cells, PMNC）包括淋巴细胞和单核细胞
（monocyte）。 ➢ Ficoll分离液法主要用于分离外周血中的单个核细
胞，是一种单次差速密度梯度离心的分离法。
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
三、NK细胞表面标志
人类NK细胞表面标志主要以 CD16、CD56来认定，临床上将 CD3-CD56+CD16+淋巴细胞认定为 NK细胞。
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
T细胞及NK细胞
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
第三节 其他的免疫细胞
抗原提呈类细胞表面标志
技术简单，分离可在试管中 完成。
得率高。
对细胞温和，不影响分离细 胞的后续培养。
可直接上流式细胞仪检测， 不影响散射光。 需要很强的磁场来分离细胞。
得率不高。
纯度低。
纯度高。
分离速度快。
分离速度慢。
成本低。
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
需要很强的磁场来分离细胞， 需要一次性的分离柱，不能 在普通试管进行。
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
免疫磁珠法细胞分选过程
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
免 疫 磁 珠 细 胞 分 选 装 置
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
全自动细胞分选系统
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
流式细胞分析仪
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
第二节 淋巴细胞标志及亚群分类
2.淋巴细胞有哪几类细胞？能用形态学的方法加 以区别吗？
3.将细胞分离的原理有哪些？各有什么特点？ 4.形态学相同的一类细胞为什么还要分亚群？ 5.T细胞和B细胞进一步区分亚群的依据是什么？
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
6.什么是细胞表面标志？其作用是什么？ 7.细胞表面标志的检测方法有哪些？ 8.利用细胞表面标志（CD抗原）分离细胞的方法
二、淋巴细胞表面标志检测的临床意义
➢ 淋巴细胞表面标志检测是评价免疫功 能的重要指标。
➢ 对CD4+和CD8+T细胞的测定，有助 于免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病和 移植排斥反应的监测。
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
临床常见疾病中的T 淋巴细胞的变化
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
思考题
1.免疫细胞都包括哪些细胞？为什么要将其分离 纯化？
第三章 免疫细胞的分离及其 表面标志检测技术
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
第一节 一、 二、 三、 四、
免疫细胞的分离 外周血单个核细胞分离 淋巴细胞的分离 T细胞和B细胞的分离 T细胞亚群的分离
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
第二节 淋巴细胞标志及亚群分类 一、 Ｔ细胞表面标志及亚群 二、 B细胞表面标志 三、 NK细胞表面标志
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
磁珠大小可以选择
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
大小免疫磁珠分离细胞的特点比较
比较项目 对细胞的影响
对流式细胞仪的影响 分离条件要求 收率 纯度 分离时间 分离成本
大磁珠
小磁珠
对细胞造成机械压力，影响 其生物学活性，不利于分离 后培养。 阻塞流式细胞仪的喷嘴，影 响散射光。
第三节 其他的免疫细胞 第四节 免疫细胞表面标志的检测及应用
一、 免疫细胞表面标志的检测方法 二、 淋巴细胞表面标志检测的临床意义
思考题 小结
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
Fra Baidu bibliotek一节 免疫细胞的分离
➢ 外周血单个核细胞分离 ➢ 淋巴细胞的分离 ➢ T细胞和B细胞的分离 ➢ T细胞亚群的分离
常用于鉴定和检测淋巴细胞表面标志 是簇分化抗原（Cluster of differentiation，CD）。
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
细胞表面分化抗原（CD抗原）
➢适用于T、B细胞的分离 ➢已知CD抗原细胞亚群的分离 ➢未知CD抗原细胞亚群的分离 ➢（阴性分选）
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
一、T细胞表面标志及其亚群
➢ CD3+CD4+CD8-辅助性T细胞 （help T cell,Th） ➢ CD3+CD4-CD8+细胞毒性T细胞 （cytotoxic T cell,Tc or CTL） ➢ CD4+CD25+调节性T细胞 （regulatory T cell,Tr or Treg）
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
二、B细胞表面标志
➢ SmIg、Fc受体、补体受体、EB病毒受体，部 分CD分子是B细胞的重要表面标志，其中以 SmIg为B细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指 标。
➢ CD19/CD5分子：可将B细胞区分为B1细胞和 B2细胞，B1细胞为CD19和CD5双阳性，而 B2细胞仅为CD19阳性，B2细胞为通常所指的
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
三、T细胞和B细胞的分离
➢ E花环沉降法 ➢ 尼龙毛柱分离法
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
四、T细胞亚群的分离
➢ 亲和板结合分离法 ➢ 磁性微球分离法 ➢ 荧光激活细胞分离仪分离法
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
荧光激活细胞分离仪分离法
免疫细胞分离及其表面标志检测技术