免疫细胞分离及其表面标志检测技术
临床医学检验技师考试辅导临床免疫学和免疫检验 第十四章 免疫细胞的分离及其表面标志检测技术练习题
第十四章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术一、A11、已知细胞中的黏附能力最大的为A、树突状细胞B、单核细胞C、B细胞D、T细胞E、红细胞2、免疫细胞检测技术中外周血单个核细胞指的是A、有核细胞B、淋巴细胞C、单核细胞D、淋巴细胞和单核细胞E、幼稚细胞3、下列关于T细胞亚群的分离，说法错误的是A、原理是根据相应细胞的不同标志加以选择性纯化B、凡根据细胞的表面标志进行纯化得到所需要的细胞群是阳性选择法C、选择去除不需要的细胞群，仅留下所需要的细胞为阴性选择法D、E花环沉降法是最先进的细胞分选技术E、尼龙毛柱分离法是常用的分离方法4、下列有关转化的淋巴细胞的形态描述中，错误的是A、细胞变大B、出现空泡C、核仁消失D、染色质疏松E、胞质扩大5、检测T细胞数量的试验是A、溶血空斑试验B、SmIg荧光抗体染色试验C、巨噬细胞或白细胞移动抑制试验D、E玫瑰花环试验E、计算盘直接计数6、溶血空斑形成试验中，空斑的大小表示A、抗体生成细胞的多少B、抗体生成细胞的种类C、细胞的大小D、抗体生成细胞产生抗体的多少E、吞噬细胞的活性7、做自然杀伤细胞毒试验，敏感而常用的是哪种细胞株A、小鼠T细胞肿瘤细胞株B、人肺癌细胞C、K562细胞系D、小鼠细胞毒T细胞系E、L929细胞株8、具有抗肿瘤效应的第一道防线是A、TC细胞B、中性粒细胞C、TH细胞D、B细胞E、NK细胞9、下列不属于自然杀伤（NK）细胞检测方法的是A、酶释法和放射性核素法B、酶释法和荧光分析法C、放射性核素法和荧光分析法D、放射性核素法和荧光分析法和酶释法E、反向溶血空斑实验和酶释法10、可刺激B淋巴细胞增殖转化的刺激物是A、PWMB、PHAC、ConAD、MHCE、BCG11、用于临床评价病人免疫状况的试验中，评价T细胞功能的试验是A、血清免疫球蛋白检测B、溶血空斑试验C、淋巴细胞转化试验D、膜表面Ig测定E、EA花环试验12、关于单个核细胞说法错误的是A、单个核细胞包括淋巴细胞、单核细胞B、单个核细胞的体积、形态、比重与其他细胞不同C、可利用单个核细胞的体积不同，按照密度梯度来分离D、在进行密度梯度分离时，单个核细胞比重比溶液的比重大E、多核粒细胞比重比单个核细胞比重大13、采用密度梯度分离法分离得到的细胞主要为A、单核细胞和粒细胞B、单核细胞C、淋巴细胞D、淋巴细胞和单核细胞E、淋巴细胞和粒细胞14、利用E花环沉降法可分离A、单核细胞和B细胞B、浆细胞和粒细胞C、B细胞和T细胞D、B细胞和粒细胞E、B细胞和吞噬细胞15、对分离细胞的保存说法错误的是A、用适量的10%～20%小牛血清的Hanks等培养液重悬B、以二甲亚砜作为保护剂C、短期保存中，放4℃保存D、短期保存中，迅速改变细胞所处的温度，以免造成温度休克E、长期保存中，放在液氮中，-196℃16、从单个核细胞悬液中分离出单核细胞的方法不包括A、E花环沉降法B、贴壁黏附法C、吸附柱过滤法D、磁铁吸引法E、Percoll分离液法17、下列关于淋巴细胞分离的说法错误的是A、进行细胞免疫的检测，一般须将待检淋巴细胞从血液中或组织中分离出来B、外周血细胞单个核细胞包括淋巴细胞、粒细胞和红细胞C、利用外周血的细胞的理化特性的差异可以分离不同的细胞群体D、淋巴细胞的理化特性与其他细胞差异很小，用简单的方法不易分离纯化E、淋巴细胞的分离利用专门的淋巴细胞分离纯化技术18、细胞活力测定常用的简便方法是A、伊红染色B、美蓝染色C、台盼蓝染色D、抗酸染色E、HE染色19、LPS可激发哪种细胞转化A、B细胞B、T细胞C、自然杀伤（NK）细胞D、杀伤细胞E、巨噬细胞20、可刺激T细胞增殖的刺激物是A、ConAB、MHCC、SPAD、AFPE、LPS21、自然杀伤（NK）细胞具有A、对TI抗原应答效应B、ADCCC、对TD抗原应答D、主要分泌细胞因子作用E、特异杀伤肿瘤细胞作用22、属于非抗原刺激物的物质是A、SRBCB、BCGC、LPSD、类毒素E、抗毒素血清23、关于溶血空斑试验的叙述错误的是A、1个空斑代表1个抗体生成细胞B、需要绵羊红细胞和补体参与C、空斑大小代表抗体产生的多少D、是可检测B淋巴细胞功能的一种体外试验方法E、只可检测IgG类抗体24、下列哪项不是T细胞表面标志的检测方法A、SmIg的检测B、抗体致敏细胞花环法C、免疫金银染色法D、免疫荧光法E、ABC法25、溶血空斑试验检测的是哪类细胞的功能A、T淋巴细胞B、巨噬细胞C、自然杀伤（NK）细胞D、B淋巴细胞E、LAK细胞答案部分一、A11、【正确答案】B【答案解析】单核细胞具有在37℃和Ca2＋存在时，能主动黏附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的特性。
免疫学研究中的新技术和方法
免疫学研究中的新技术和方法随着人们对健康的关注日益增加，医学研究也越来越重视免疫学领域的发展。
近年来，免疫学研究中出现了许多新的技术和方法，这些技术和方法对于研究免疫系统的功能机制和疾病的发生机理有着重要的作用。
下面，我们将针对免疫学研究中的新技术和方法进行阐述。
一、免疫细胞检测技术免疫细胞检测技术是一种比较成熟的方法，可以通过检测免疫细胞的表面标志物，对免疫系统的功能状态进行分析。
目前，免疫细胞检测技术已经涵盖了多种细胞类型，比如T细胞、B细胞、自然杀伤细胞等。
免疫细胞检测技术的主要应用场景包括：免疫缺陷病理学、免疫治疗、肿瘤学、传染病学等。
在免疫细胞检测技术中，单克隆抗体成为了一种重要的研究工具。
单克隆抗体具有高度的特异性，可以识别并结合细胞表面的特定分子，从而帮助研究人员对细胞进行定量和定位的分析。
此外，现在也出现了一些快速检测方法，比如流式细胞术和激光共聚焦显微镜技术等，这些方法可以大幅度提高细胞检测的精度和效率。
二、细胞之间交流的研究方法免疫系统中的细胞之间会通过分泌细胞因子来进行信息交流。
在疾病状态下，某些细胞的分泌因子水平与正常情况下有所不同，因此研究这些细胞因子的分泌机理和调控机制对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。
一些新的技术和方法被用于免疫细胞因子的研究中。
比如，ELISA技术可以用于定量测定细胞因子的含量，从而帮助研究人员评估不同状态下免疫细胞因子的分泌情况。
此外，新型的多重分析技术，例如速率显微镜、质谱分析技术等，可以帮助研究人员探测细胞因子之间的相互作用和调节机制。
三、基因工程技术基因工程技术在免疫学研究中得到了广泛的应用。
研究人员可以通过改变细胞表面分子的表达，来探究这些分子在免疫功能中的作用。
为此，研究人员可以利用基因编辑技术，通过特定的剪切核酸或CRISPR技术来精确编辑特定基因的表达。
如此可以有效地改变免疫细胞的表面表现，从而实现抗肿瘤、抗病毒等免疫治疗的目的。
此外，基因芯片和RNA测序等技术也为研究人员提供了一种有效的分析工具。
免疫细胞的分离及其表面标志检测技术试题_1
[单选]检测NK细胞不能采用的实验方法是（）A.酶联免疫斑点实验B.酶释法C.放射性核素法D.荧光分析法E.电泳分析[单选]Ts细胞的特性不包括（）A.具有免疫调节功能的细胞B.作用方式为非特异性C.受MHC分子的限制D.抑制自身反应性T细胞克隆E.抑制机体对非己抗原的免疫应答[单选]T细胞阳性选择的主要目的是（）A.选择出对自身抗原不发生免疫应答的细胞克隆超级通 云控 微信云控 / 好用的云控 云控官网B.选择掉对自身抗原发生免疫应答的细胞克隆C.实现自身免疫耐受D.实现对自身MHC分子的限制性E.实现TCR功能性成熟[单选]可判断出淋巴细胞对有关刺激的反应性与功能状态的试验是（）A.噬菌体裂解实验B.溶血试验C.空斑形成试验D.T淋巴细胞转化试验E.T细胞表面标志检测[单选]T、B细胞表面共有的标志是（）A.CD3B.PWM－RC.绵羊红细胞受体D.补体受体E.CD80分子[单选]溶血空斑形成试验中，每一个空斑表示（）A.一种抗体B.一种抗体形成细胞C.一种细胞D.一个细胞E.一个抗体形成细胞[单选]胸腺细胞发生阴性选择时发生在（）A.双阳性期B.双阴性期C.单阳性期D.前T细胞期超级通 云控 微信云控 / 好用的云控 云控官网E.祖T细胞期[单选]以下受体中，哪一项是B细胞所特有的（）A.Fc受体B.补体受体C.SmIgD.EB病毒受体E.小鼠红细胞受体[单选]分离纯化淋巴细胞亚群的基本原理是（）A.相应细胞体积不同特点B.相应细胞具有不同的表面标志C.形态不同特点D.相应细胞贴壁生长特点E.相应细胞具有吞噬性的特点[单选]楼梯结构的一些细部构造在平面图中无法表示出来，需要绘制相同，应用的比例尺为()。
A、1:1000B、1:200C、1:00D、1:20[单选]屋顶平面图是屋顶的水平投影，可见轮廓线的投影均用()表示。
A、虚线B、中实线C、细实线D、粗实线[单选]某三层办公楼勒脚以上外围结构水平投影面积为500m2，首层车库层高为2.2m，二、三层层高均为3.2m。
石河子大学《临床检验诊断学》复试大纲
石河子大学医学院硕士研究生入学考试临床检验诊断学参考大纲概述一、检验考试科目包括：临床生物化学检验技术、临床血液学检验技术、临床检验基础检验技术及临床免疫学检验技术。
二、题型结构：名词解释题单项选择题问答题三、参考教材：人民卫生出版社本科教材《临床生物化学检验技术》、《临床血液学检验技术》、《临床检验基础检验技术》及《临床免疫学检验技术》。
四、考试内容临床生物化学检验技术一、考试目标1.掌握生物化学的研究内容及在医学中的应用。
2.掌握常用的临床生物化学实验室基本技术。
3.掌握蛋白质、糖、血浆脂蛋白、诊断酶、微量元素与维生素的代谢及其生物化学诊断。
4.掌握肝胆、肾脏、心脏、胃肠胰、骨代谢的临床生物化学诊断。
5.掌握内分泌、神经、精神疾病和妊娠的生物化学。
6. 掌握自动生物化学分析仪的应用与原理。
7.临床生物化学质量控制二、考试内容（一）绪论1. 临床生物化学检验技术的定义与范畴2.临床生物化学学科的建立、主要进展和发展趋势3.本书的主要方法与使用方法（二）临床生物化学检测方法的选择与评价1.临床生物化学检测方法的选择2.临床生物化学检测方法的评价和性能判断3.校准与溯源性4.测量不准确度（三）临床生物化学检验项目临床应用性能评价1.概述2.参考区间、分界值与医学决定水平3.检验项目诊断性能的临床评价4.检验项目诊断性能的ROC曲线分析5.检验项目诊断性能的系统评价6.联合试验的诊断性能评价（四）酶学检测技术1. 概述2.酶学测定技术3.代谢物的酶法分析4.同工酶检测（五）自动生化分析技术1. 概述2. 自动生化分析仪常用分析方法3.自动生化分析仪的参数设置4.检测系统的校准和性能评价5.自动生化分析仪的操作流程（六）血浆蛋白质与含氟化合物的生物化学检验1. 血浆蛋白质的生物化学检验2.氨基酸代谢紊乱的生物化学检验3.嘌呤核苷酸代谢紊乱的生物化学检验（七）糖代谢紊乱的生物化学检验1. 概述2. 糖代谢紊乱的生物化学检验项目与检测方法3.临床生物化学检验项目在糖代谢紊乱诊治中的应用（八）电解质与酸碱平衡紊乱的生物化学检验1. 概述2.脂代谢紊乱的生物化学检验项目与检测方法3.临床生物化学检验项目在脂代谢紊乱诊治中的应用（九）电解质与酸碱平衡紊乱的生物化学检验1.概述2.水和电解质平衡紊乱的生物化学检验项与检测方法3.血气分析与酸碱平衡紊乱的生物化学检验项目与检测方法（十）微量元素与维生素异常的生物化学检验1．微量元素的生物化学检验2.维生素异常的生物化学检验（十一）体液中酶的生物化学检验1.概述2.临床诊断中常用的酶与同工酶3.酶学检测在临床上的应用（十二）肝胆疾病的生物化学检验1. 概述2.肝胆疾病的生物化学检验项目与检测方法3.临床生物化学检验项目在肝胆疾病诊治中的应用（十三）肾脏疾病的生物化学检验1.概述2.肾脏疾病的生物化学检验项目与检测方法3.临床生物化学检验项目在肾脏疾病诊治中的应用（十四）心血管系统疾病的生物化学检验1. 概述2. 心血管疾病的生物化学检验项目与检测方法3. 临床生物化学检验项目在心血管疾病诊治中的应用（十五）骨代谢紊乱和相关元素的生物化学检验1. 概述2.钙和磷代谢紊乱的生物化学检验3.镁代谢紊乱的生物化学检验4.骨代谢紊乱的生物化学检验5.临床生物化学检验项目在骨代谢疾病诊治中的应用（十六）内分泌疾病的生物化学检验1. 概述2.内分泌功能紊乱的生物化学检验项目与检测方法3.临床生物化学检验项目在常见内分泌疾病诊治中的应用（十七）消化系统疾病的生物化学检验1. 概述2.消化系统疾病的生物化学检验项目与检测方法3.临床生物化学检验项目在消化系统疾病诊治中的应用（十八）神经及精神系统疾病的生物化学检验1.概述2.神经及精神疾病的生物化学检验项目与检测方法3.临床生物化学检验项目在神经精神疾病诊治中的应用（十九）妊娠及新生儿的生物化学检验1.概述2.妊娠相关的生物化学检验项目与检测方法3.临床生物化学检验项目在妊娠相关疾病诊治中的应用4.产前与新生儿筛查的生物化学检验（二十）治疗药物监测1.概述2.药物代谢动力学基础与主要参数的应用3.治疗药物监测的样本处理4.治疗药物浓度测定的常用方法5.需要进行治疗药物监测的主要药物（二十一）临床毒物检验1.概述2.临床毒物检验项目与检测方法3.毒物检测的临床应用临床血液学检验技术一、考查目标1.掌握临床血液学的研究内容及在医学中的应用。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在现代医学领域，对免疫细胞功能的检测是一项至关重要的工作。
免疫细胞就像是我们身体内的“卫士”，它们时刻守护着我们的健康，抵御着各种病原体的入侵。
而了解这些“卫士”的工作状态和能力，对于诊断疾病、评估治疗效果以及探索新的治疗方法都具有极其重要的意义。
接下来，让我们一起深入了解一下免疫细胞功能检测技术。
免疫细胞包括多种类型，如 T 细胞、B 细胞、NK 细胞（自然杀伤细胞）、巨噬细胞等。
每种免疫细胞都有其独特的功能和作用机制，因此针对不同类型的免疫细胞，检测技术也有所不同。
T 细胞功能检测是免疫细胞功能检测中的重要部分。
其中一种常见的方法是淋巴细胞增殖实验。
这就好比是观察 T 细胞在受到刺激后是否能积极“生长壮大”。
通过在体外给 T 细胞特定的刺激物，比如植物血凝素（PHA）等，然后观察细胞的增殖情况。
如果 T 细胞能够迅速增殖，说明它们具有较强的反应能力，反之则可能提示免疫功能存在异常。
细胞毒性 T 细胞（CTL）杀伤活性测定也是评估 T 细胞功能的重要手段。
想象一下 CTL 就像是训练有素的“杀手”，专门攻击被病原体感染的细胞或者癌细胞。
检测它们的杀伤活性，可以通过放射性核素释放法、乳酸脱氢酶释放法等。
这些方法能够直观地反映出 CTL 消灭“敌人”的能力。
再来说说 B 细胞功能检测。
B 细胞的主要功能是产生抗体。
检测血清中各类免疫球蛋白（Ig）的水平，如 IgG、IgA、IgM 等，能够间接反映 B 细胞的功能状态。
另外，通过检测 B 细胞对抗原的反应能力，比如测定抗体产生的量和亲和力，也可以评估B 细胞的功能是否正常。
NK 细胞作为机体天然免疫的重要组成部分，其功能检测也不容忽视。
NK 细胞具有直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞的能力。
常用的检测方法有放射性核素标记法、流式细胞术等。
这些方法可以帮助我们了解 NK 细胞的活性和数量，从而判断其在免疫防御中的作用是否正常发挥。
除了上述针对单个免疫细胞类型的检测方法，还有一些综合性的检测技术。
临床免疫学检验技术考试题库及答案(三)
临床免疫学检验技术考试题库及答案1. 免疫监视功能低下时易发生（）。
A．自身免疫病B．超敏反应C．肿瘤D．免疫缺陷病E．移植排斥反应答案C解析免疫系统的功能之一是对自身偶尔产生的有癌变倾向的细胞进行清除，此即免疫监视功能，免疫监视功能低下时易发生肿瘤。
2. 免疫自稳功能异常可发生（）。
A．病毒持续感染B．肿瘤C．超敏反应D．自身免疫病E．免疫缺陷病答案D解析免疫系统的功能之一是对自身衰老的组织细胞进行清除，此即免疫自稳功能，免疫自稳功能异常可发生自身免疫病。
3. 既具有抗原加工提呈作用又具有杀菌作用的细胞是（）。
A．树突状细胞B．巨噬细胞C．中性粒细胞D． B细胞E． T细胞答案B解析树突状细胞、巨噬细胞和B细胞都有抗原加工提呈作用，但只有巨噬细胞兼有吞噬杀菌作用。
4. 免疫应答过程不包括（）。
A． T细胞在胸腺内分化成熟B． B细胞对抗原的特异性识别C．巨噬细胞对抗原的处理和提呈D． T细胞和B细胞的活化、增殖和分化E．效应细胞和效应分子的产生和作用答案A解析免疫应答过程指免疫系统针对抗原的反应过程，不包括免疫细胞的发育过程。
5. 关于外周免疫器官的叙述，不正确的是（）。
A．包括淋巴结、脾和黏膜相关淋巴组织B．发生发育的时间晚于中枢免疫器官C．是免疫应答发生的场所D．是免疫细胞发生和成熟的场所E．是所有淋巴细胞定居的场所答案D解析免疫细胞发生和成熟的场所在中枢免疫器官，故D项不正确。
5. 在正常血清中，含量最高的补体成分是（）。
A． C1B． C3C． C4D． C5E． C4Bp答案B解析在正常血清中含量最高的补体成分是C3。
7. 细胞因子不包括（）。
A．单核因子B．淋巴因子C．生长因子D．抗体E．集落刺激因子答案D解析细胞因子是生物活性的小分子多肽，抗体不是。
8. 体内抗病毒、抗毒素、抗细菌最重要的抗体为（）。
A． IgMB． IgAC． IgGD． IgEE． IgD答案C解析IgG是体内抗感染的最主要的抗体。
免疫学及免疫学检验学题库答案
一、名词解释第1章概论1.免疫学：2.免疫分子：3.补体：4.临床免疫学：第2章抗原抗体反应5.抗原抗体反应：6.抗原抗体反应特异性7.可逆性8.比例性9.抗原抗体反应的等价带zoneofequivalence10.最适比optimalratio11.带现象zonephenomenon第3章免疫原和抗血清的制备12.免疫原immunogen13.半抗原14.免疫佐剂15.多克隆抗体polyclonal antibody, pcAb第5章凝集反应16.凝集反应17.直接凝集反应18.间接凝集反应19.明胶凝集试验第6章沉淀反应20.沉淀反应21.絮状沉淀试验22.免疫浊度测定23.凝胶内沉淀试验24.单项扩散试验25.双向扩散试验26.免疫电泳技术27.对流免疫电泳28.火箭免疫电泳29.免疫电泳30.免疫固定电泳第19章补体检测及应用31.补体32.免疫溶血法33.补体结合试验第22章感染性疾病与感染免疫检测34.感染第23章超敏反应性疾病及其免疫检测35.超敏反应36.Ⅰ型超敏反应37.Ⅱ型超敏反应38.Ⅲ型超敏反应39.Ⅳ型超敏反应第24章自身免疫性疾病及其免疫检测40.自身耐受41.自身免疫42.自身免疫病43.自身抗体44.抗核抗体第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测45.免疫增殖性疾病46.免疫球蛋白增殖病47.本周蛋白48.血清区带电泳49.免疫电泳50.免疫固定电泳第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验51.免疫缺陷病52.获得性免疫缺陷综合征第27章肿瘤免疫与免疫学检验53.肿瘤免疫学54.肿瘤抗原55.肿瘤标志物第28章移植免疫及其免疫检测56.移植57.主要组织相容性复合体58.移植排斥反应59.移植物抗宿主反应GVHR60.血清学分型法二、填空题;第1章概论1.推动现代生命科学前进的三架战车：分子生物学、免疫学、细胞生物学;2.免疫学的发展历史可分为三个时期：经验时期、免疫学科形成时期、现代免疫学时期;3.为保持机体内环境稳定,免疫系统的三大生理功能分别是：免疫防御、免疫自稳、免疫监视;4.免疫应答的过程主要分为：识别阶段、活化阶段、效应阶段5.免疫系统的组成包括三部分,分别是：免疫器官、免疫细胞、免疫分子;6.补体的三条激活途径分别是：经典途径、甘露糖结合凝集素途径、旁路途径;第2章抗原抗体反应7.在抗原抗体反应中,主要的结合力有：静电引力、范德华力、氢键、疏水作用力;8.在抗原抗体反应中,主要的特点有：特异性、可逆性、比例性、阶段性;第3章免疫原和抗血清的制备9.组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备过程中,常用的方法有：反复冻融法、超声破碎法、自溶法、酶处理法、表面活性剂处理法任写出二种均可得分;10.在免疫原和抗血清的制备过程中,可溶性抗原的纯化方法：超速离心法、选择性沉淀法、凝胶过滤法、离子交换层析法、亲和层析法等任写出二种均可得分;11.在免疫原和抗血清的制备过程中,纯化抗原的鉴定的内容主要有：蛋白含量测定、分子量测定、纯度鉴定、免疫活性鉴定;12.在免疫原和抗血清的制备过程中,抗血清的鉴定内容有：抗体特异性的鉴定、抗体效价的鉴定、抗体纯度的鉴定、抗体亲合力的鉴定;第5章凝集反应13.在凝集反应中,间接凝集反应的类型主要有：正向间接凝集反应、反向间接凝集反应、间接凝集抑制反应、协同凝集反应;14.抗球蛋白试验,又称Coombs试验,是检测抗红细胞不完全抗体的一种方法;第6章沉淀反应15.免疫电泳技术类型主要包括：对流免疫电泳、火箭免疫电泳、免疫电泳、免疫固定电泳;第14章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术16.在外周血单个核细胞分离实验中,对分离介质的基本要求有：对细胞无毒、基本等渗、不溶于血浆或分离物质、有一定密度;17.在淋巴细胞分离过程中,其中的单核细胞去除方法有：贴壁黏附法、吸附柱过滤法、磁铁吸引法、Percoll分层液法; 第15章免疫细胞功能检测技术18.在免疫细胞功能检测技术方面,针对T细胞功能检测方法有：T细胞增殖试验、 T细胞分泌功能测定、T细胞介导的细胞毒试验、体内试验;第19章补体检测及应用第22章感染性疾病与感染免疫检测19.目前公认的肝炎病毒至少有5种：甲型肝炎病毒HAV、乙型肝炎病毒HBV、丙型肝炎病毒HCV、丁型肝炎病毒HDV、戊型肝炎病毒HEV;20.在乙肝病毒检测的过程中,主要检测的五项指标有：HBsAg、抗HBs、抗HBc、HBeAg、抗HBe;21.在先天性感染中,临床上将以上4种病原菌称为“TORCH”,为产前检查的重点项目,分别是：弓形体、巨细胞病毒、风疹病毒、单纯疱疹病毒;第23章超敏反应性疾病及其免疫检测22.根据免疫反应的速度和组织损伤的机制不同,将超敏反应分为四种类型,分别是：第 I 型速发型超敏反应、第II 型细胞毒或溶细胞型超敏反应、第III型免疫复合物型超敏反应、第IV 型延缓型或迟发型超敏反应;第24章自身免疫性疾病及其免疫检测23.在抗核抗体ANA检测方法中,常见的ANA荧光图形有：周边型核膜性、均质性、斑点性、核仁型、着丝点型;第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测24.在免疫增殖性疾病中,常见的单克隆免疫球蛋白病有：多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症、重链病、轻链病、良性单克隆免疫球蛋白病;25.在免疫增殖性疾病中,免疫球蛋白异常增生常用的免疫检测方法有：血清区带电泳、免疫电泳、免疫固定电泳、血清免疫球蛋白定量、本周蛋白的检测;第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验26.在免疫缺陷性疾病中,常见的免疫缺陷病一般特征包括：反复感染、恶性肿瘤、伴发自身免疫病、遗传倾向、多系统病变;27.在免疫缺陷性疾病中,原发性免疫缺陷性疾病主要有：原发性B细胞缺陷病、原发性T细胞缺陷病、原发性联合免疫缺陷病、原发性吞噬细胞缺陷病、原发性补体系统缺陷病;28.在免疫缺陷性疾病中,继发性免疫缺陷性疾病主要有：继发性T细胞功能缺陷、继发性低丙球蛋白血症、继发性吞噬细胞功能缺陷、继发性补体缺陷;第27章肿瘤免疫与免疫学检验29.在常见肿瘤标志物中,胚胎抗原类肿瘤标志物主要有：甲胎蛋白、癌胚抗原;30.在常见肿瘤标志物中,酶类肿瘤标志物主要有：前列腺特异性抗原PSA 、神经元特异性烯醇化酶NSE、α-L-岩藻糖苷酶测定AFU;31.在常见肿瘤标志物中,激素类肿瘤标志物主要有：人绒毛膜促性腺激素 hCG、降钙素calcitonin, CT;32.在常见肿瘤标志物中,蛋白质类肿瘤标志物主要有：β2-微球蛋白β2M 、铁蛋白;第28章移植免疫及其免疫检测33.在移植免疫实验中,排斥反应类型主要包括四种,分别是：超急性排斥反应、急性排斥反应、慢性排斥反应、移植物抗宿主反应GVHR;34.常见的组织或器官移植有：肾脏移植、肝脏移植、心脏移植与心肺联合移植、骨髓与其他来源的干细胞移植;三、单项选择题1.免疫应答是一个复杂的连续过程,依次分为哪几个阶段AA. 识别阶段、活化阶段、效应阶段B. 效应阶段、识别阶段、活化阶段C. 活化阶段、效应阶段、识别阶段D. 活化阶段、识别阶段、效应阶段2.抗原抗体反应形成明显沉淀物的最佳条件为CA. 抗体略多于抗原B. 抗原略多于抗体C. 抗原抗体比例合适D. 抗体显着多于抗原3.用已知抗原或抗体检测相应的抗体或抗原,是根据抗原抗体反应的AA. 特异性B. 比例性C. 可逆性D. 阶段性4.弗氏不完全佐剂的组成包括 BA. 液状石蜡、羊毛脂、卡介苗B. 液状石蜡、羊毛脂C. 液状石蜡、卡介苗D. 羊毛脂、卡介苗5.沉淀反应中的钩状效应是因为BA. 抗体过量B. 抗原过量C. pH浓度过高D. pH浓度过低6.细胞活力测定常用的简便方法是BA. 伊红染色B. 台盼蓝染色C. HE染色D. 美蓝染色7.正常人外周血T淋巴细胞转化率为CA. <40%B. 40%～50%C. 60%～80%D. 80%8.在CH50试验中,溶血程度和补体含量之间的关系为 BA. 直线B. S形曲线C. 抛物线D. 正态分布曲线9.正常血清中,补体含量最高的是CA. C1B. C2C. C3D. C410.发生III型超敏反应性疾病的始动环节是 BA. 大分子免疫复合物沉积在毛细血管基底膜B. 中等大小分子免疫复合物沉积在毛细血管基底膜C. 小分子免疫复合物沉积在毛细血管基底膜D. 补体激活11.用免疫荧光法检测ANA有多种核型,不正确的是DA. 周边型B. 均质型C. 斑点型或颗粒型D. 原生质型12.血清中检测到M蛋白不提示下列疾病DA. 多发性骨髓瘤B. 巨球蛋白血症C. 重链病或轻链病D. 肾病13.本-周蛋白的本质是BA. 尿中微球蛋白B. 尿中游离的免疫球蛋白轻链C. 尿中游离的白蛋白D. 尿中游离的管型物14.多发性骨髓瘤属于哪种细胞异常CA. T细胞B. B细胞C. 浆细胞D. 单核细胞15.血清中免疫球蛋白含量缺乏,一般应考虑何种病 CA. 轻链病B. 重链病C. 免疫缺陷病D. 免疫增殖病16.切除胸腺的新生动物的淋巴结中缺乏何种细胞 BA. B淋巴细胞B. T淋巴细胞C. 粒细胞D. 巨噬细胞17.沉淀反应中抗体过量的现象称为AA. 前带B. 后带C. 等价带D. 带现象18.弗氏完全佐剂的组成包括AA. 液状石蜡、羊毛脂、卡介苗B. 液状石蜡、羊毛脂C. 液状石蜡、卡介苗D. 羊毛脂、卡介苗19.直接Coombs试验检测的抗体是AA. 结合在红细胞表面的IgGB. 游离的IgGC. 结合在红细胞表面的IgMD. 游离的IgM20.单项扩散试验出现双环的沉淀线是因为DA. 两种抗原B. 两种抗体C. 抗体为多克隆抗体D. 抗原为性质相同的两个组分扩散率不同21.Ficoll液单次密度梯度离心后外周血细胞分布由上至下依次为CA. 单个核细胞、血小板和血浆、粒细胞、红细胞B. 血小板和血浆、粒细胞、单个核细胞、红细胞C. 血小板和血浆、单个核细胞、粒细胞、红细胞D. 血小板和血浆、单个核细胞、红细胞、粒细胞22.淋巴细胞转化为淋巴母细胞后,其形态学特征为BA. 细胞大小由大变小B. 出现核仁1～4个C. 胞浆内空泡逐渐消失D. 细胞伪足消失23.溶血空斑试验用于检测下列何种细胞的功能BA. T细胞B. B细胞C. NK细胞D. 吞噬细胞24.Boyden小室常用于测定 BA. 白细胞吞噬功能B. 中性粒细胞趋化功能C. 白细胞杀伤功能D. 淋巴细胞抑制功能25.在溶血反应中检测试剂中,加入少量钙、镁离子的目的是CA. 使反应液保持等渗B. 抑制补体的活性C. 有助于补体激活D. 维持反应液的pH值26.乙型肝炎感染后最早出现的病毒标志物是AA. HBsAgB. HBeAgC. HBcAgD. 抗-HBs27.新生儿溶血症发生的条件是CA. 母亲Rh+、胎儿Rh+B. 母亲Rh+、胎儿Rh-C. 母亲Rh-、胎儿Rh+D. 母亲Rh-、胎儿Rh-28.造成系统性红斑狼疮病人免疫损伤的主要机制是 CA. I超敏反应B. II超敏反应C. III超敏反应D. IV超敏反应29.人类MHC位于第几对染色体上 CA. 第12对染色体短臂B. 第12对染色体长臂C. 第6对染色体短臂D. 第6对染色体长臂30.HLA交叉配型的目的是 BA. 检测供者血清有无抗受者HLA抗体B. 检测受者血清有无抗供者HLA抗体C. 检测供者淋巴细胞表面的HLA抗原D. 检测受者淋巴细胞表面的HLA抗原四、简答题第1章概论1.T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞的主要功能分别是什么2.在临床免疫学与免疫检验中,现代免疫学检验技术包括哪些方法第2章抗原抗体反应3.抗原抗体反应有哪些影响因素4.什么是标记免疫技术标记免疫技术按检测现象可分为哪些类型第3章免疫原和抗血清的制备5.常用的细胞破碎方法有哪些6.连接半抗原的载体有哪些制备半抗原性免疫原的方法有哪些7.免疫佐剂有哪些种类其作用机制是什么8.动物采血有哪些方法9.抗血清的鉴定包括哪些内容第5章凝集反应10.什么叫直接凝集反应什么叫间接凝集反应它们之间有何不同11.叙述抗球蛋白试验的类型、特点以及临床应用第6章沉淀反应12.单向扩散试验的概念和应用13.平板法双向免疫扩散试验的概念和应用14.免疫固定电泳的概念及临床应用15.抗原性质分析出现哪三种结果现象结果解释第14章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术16.外周血单个核细胞分离,其分离介质的基本要求是什么17.外周血单个核细胞悬液富含淋巴细胞,但又混杂有单核细胞、红细胞和血小板,请问去除单核细胞的方法有哪些第15章免疫细胞功能检测技术18.T细胞功能检测内容有哪些19.B细胞功能检测内容有哪些20.NK细胞活性测定方法有哪些21.在检测T细胞的功能时,可选择T细胞增殖试验,请回答其基本原理第19章补体检测及应用22.在补体总活性测定中,一般采用CH50测定法,请说明其基本原理;23.在单个补体成分的测定中,一般采用免疫溶血法,请简述其概念及原理;24.请简述补体结合试验的概念、实验原理及结果解释第22章感染性疾病与感染免疫检测25.请列出目前公认的肝炎病毒种类26.乙型肝炎的诊断标志物主要检测指标有哪些27.在临床中,乙肝病毒检测常见的指标俗称：两对半有哪些28.什么叫先天性感染常见的病原菌“TORCH”只要只的是哪些病毒第23章超敏反应性疾病及其免疫检测29.试比较Ⅰ～Ⅳ型超敏反应特点30.使用青霉素可能引起哪些类型超敏反应简述其发病机制; 答：青霉素临床应用时有可能引起的超敏反应类型有：I、II、III、IV型;1I 型超敏反应：指青霉素过敏性休克,其发病机制是青霉素本身并无免疫原性,其降解产物为半抗原,与体内蛋白质结合而产生免疫原性,刺激机体产生特异性IgE,使机体处于致敏状态;当机体再次使用青霉素时,可发生过敏性休克;2II 型超敏反应：指青霉素过敏性血细胞减少症,其发病机制是青霉素降解产物能与血细胞膜蛋白或血浆蛋白结合获得免疫原性,从而刺激机体产生抗体;这种抗体与和药物结合的红细胞、粒细胞和血小板作用,引起药物性溶血性贫血、粒细胞减少症和血小板减少性紫癜;3III型超敏反应：指使用大剂量青霉素等药物可引起类似血清病样的反应,其发病机制是因为患者体内已产生特异性抗体,而大剂量药物尚未完全排除,两者结合形成中等大小免疫复合物所致;4IV型超敏反应：指青霉素引起的接触性皮炎,其发病机制是青霉素小分子半抗原与体内蛋白质结合成完全抗原,使T细胞致敏;当机体再次接触青霉素时,可发生接触性皮炎;31.血清病与血清过敏性休克分属哪型超敏反应比较发病机制;第24章自身免疫性疾病及其免疫检测32.自身免疫病都具有哪些共同特性33.什么叫自身抗体,其主要特点有哪些第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测34.在免疫增殖性疾病中,常见的单克隆免疫球蛋白病有哪些35.在免疫增殖性疾病中,免疫球蛋白异常增生常用的免疫检测方法有哪些第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验36.请列出免疫缺陷病的一般特征37.原发性免疫缺陷性疾病有哪些38.继发性免疫缺陷病有哪些39.什么叫获得性免疫缺陷综合征其临床特点及典型特征是什么第27章肿瘤免疫与免疫学检验40.什么叫肿瘤抗原,其产生的可能机制有哪些41.什么叫肿瘤标志物,理想的肿瘤标志物具有哪些特性第28章移植免疫及其免疫检测42.什么叫移植排斥反应,根据排斥反应发生的时间、免疫损伤机制和组织病理改变,如何进行分类43.常见的组织或器官移植有哪些44.排斥反应的免疫监测包括哪些方面。
细胞生物学中的细胞表面标记和检测技术
细胞生物学中的细胞表面标记和检测技术细胞表面标记和检测技术在细胞生物学研究中起到了重要的作用。
通过对细胞表面标记的引入或检测，我们可以了解细胞表面的组成、结构和功能，进而深入研究细胞的生理和病理过程。
本文将从细胞表面标记的概念、常用的细胞表面标记技术和细胞表面检测技术三个方面展开探讨，带领读者一窥细胞生物学领域中的前沿技术。
一、细胞表面标记的概念细胞表面标记是指通过特定的荧光探针、抗体或其他化合物，将目标蛋白、细胞器或其他分子与荧光分子或颜色物质结合，从而在细胞表面或内部形成特定的可视化标记。
这种标记使得研究人员可以直观地观察细胞和分子的空间分布以及相互作用关系，为细胞生物学的研究提供了便利。
二、常用的细胞表面标记技术1. 免疫染色技术免疫染色技术是利用抗体与目标蛋白或分子结合的特异性，在细胞表面形成可视化标记。
这种技术主要包括直接免疫荧光染色和间接免疫荧光染色两种方法。
直接免疫荧光染色直接将荧光探针与特异性抗体结合，间接免疫荧光染色通过首先结合一种主抗体，然后与特异性抗体结合形成荧光标记。
这些技术广泛应用于细胞免疫学研究和细胞分析。
2. 荧光探针技术荧光探针技术是利用荧光成像技术直接将特定的荧光分子引入细胞内部或细胞表面，并通过荧光显微镜观察标记物的分布和行为。
主要的荧光探针包括荧光染料、荧光蛋白和量子点。
它们可以标记蛋白、核酸、糖类等细胞内各种分子，通过对不同荧光探针组合和观察条件的选用，可以实现对复杂细胞系统的精确标记。
三、细胞表面检测技术1. 流式细胞术流式细胞术是一种基于细胞表面标记的高通量细胞分析技术。
它通过将细胞悬浮于生理盐液中，利用流式细胞术仪器对细胞进行检测。
细胞在仪器中以单个细胞的形式通过激光束，然后通过细胞表面标记物的荧光信号识别细胞类型、数量和功能状态。
这种技术广泛应用于细胞免疫学、肿瘤学以及干细胞研究等领域。
2. 切片免疫荧光技术切片免疫荧光技术是在组织切片上进行的细胞表面标记和检测技术。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在现代医学领域，免疫细胞功能检测技术正发挥着日益重要的作用。
免疫细胞如同人体的“卫士”，它们时刻监控并抵御着外界病原体的入侵，维持着身体的健康平衡。
而了解这些“卫士”的功能状态，对于疾病的诊断、治疗以及预防都具有关键意义。
免疫细胞主要包括淋巴细胞（如 T 细胞、B 细胞和自然杀伤细胞）、单核细胞、巨噬细胞等。
不同类型的免疫细胞在免疫反应中承担着不同的角色，因此检测它们的功能也就需要采用多样化的技术手段。
其中，流式细胞术是一种应用广泛的免疫细胞功能检测技术。
它通过让细胞单个地通过激光束，同时结合荧光标记的抗体，能够快速、准确地检测免疫细胞表面标志物的表达情况。
例如，通过特定的抗体标记，可以区分出不同亚型的 T 细胞，如辅助性 T 细胞（CD4+ T 细胞）和细胞毒性 T 细胞（CD8+ T 细胞），进而了解它们的比例和功能状态。
此外，还能检测免疫细胞表面活化分子的表达，如 CD69、CD25 等，以此来反映免疫细胞的活化程度。
细胞增殖实验也是常见的检测方法之一。
免疫细胞在受到刺激后会发生增殖，通过检测细胞的增殖情况，可以间接评估免疫细胞的功能。
常用的方法有 3H胸腺嘧啶掺入法和羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯（CFSE）染色法。
3H胸腺嘧啶掺入法是将放射性标记的胸腺嘧啶掺入到正在分裂的细胞中，通过检测放射性强度来反映细胞的增殖情况。
CFSE 染色法则是利用一种可穿透细胞膜的荧光染料对细胞进行标记，随着细胞的分裂，荧光强度会逐渐减半，从而可以通过流式细胞术检测细胞的分裂代数来评估增殖能力。
细胞毒性检测对于评估免疫细胞的杀伤功能至关重要。
比如，自然杀伤细胞（NK 细胞）和细胞毒性 T 细胞（CTL 细胞）能够直接杀伤肿瘤细胞或被病毒感染的细胞。
检测细胞毒性的方法包括铬释放法和乳酸脱氢酶（LDH）释放法。
铬释放法是将靶细胞用放射性铬标记，当免疫细胞杀伤靶细胞后，铬会释放到上清液中，通过检测上清液中的放射性强度来判断细胞毒性。
免疫学检验-免疫细胞及其功能检验技术
一、白细胞的分离 （一）自然沉降法
加抗凝血于试管中
室温或37℃中静置 （30-60min）
分层
结果示意图
（二）高分子聚合物沉降法
抗凝血与等量3%明胶或 6%右旋糖酐溶液混匀
室温或37℃中静置 （30～60min）
分层结果与自然沉降法 类似
四、吞噬细胞的分离
•吞噬细胞包括两类：一类是大吞噬细胞即单核吞 噬细胞系统（包括血液中的单核细胞以及组织器 官中的巨噬细胞）；另一类是小吞噬细胞，即中 性粒细胞。 •分离原理：主要根据其表面标志和生物学特性。
（一）单核细胞的分离
• Percoll密度梯度分离法 • 流式细胞术分离法（常用方法） • 免疫磁珠分离法：分选CD14+细胞（常用方法
） • 黏附法
黏附法会影响单核细胞的功能，仅适用于去除 单核细胞。
（二）巨噬细胞的分离
• 斑蝥敷贴法：（用于分离人巨噬细胞）
操作要点：10%斑蝥酒精浸液浸泡后的滤纸帖敷在前 臂内侧皮肤，4~5小时后见皮肤局部充血，48小时后出 现水泡，吸取渗出液（主要为巨噬细胞）、离心洗涤。
• 腹腔渗出液分离法：（用于分离动物巨噬细胞）
优点：速度快、得率高 不足：白细胞黏性增加
二、外周血单个核细胞的分离
•外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC）主要是指淋巴 细胞和单核细胞。 •PBMC是免疫学实验中最常用的细胞群 •PBMC也是T、B细胞分离纯化的细胞来源。
人外周血中各类血细胞密度
（二） Percoll分层液法
连续密度梯度分离液 （Percoll液+PBS，离
肿瘤组织中免疫细胞分离方法
肿瘤组织中免疫细胞分离方法
1.机械研磨与酶消化法：
-将新鲜或冷冻的肿瘤组织切碎并使用酶如胶原酶、胰蛋白酶和DNA酶进行消化，以破坏细胞间的连接和降解细胞外基质，释放其中的免疫细胞。
2.流式细胞术结合酶消化：
-首先通过酶消化处理将组织内的细胞分散成单细胞悬液，随后加入抗体标记肿瘤细胞和各类免疫细胞表面标志物，通过流式细胞分选机进行高精度分选，获取纯化的免疫细胞亚群。
3.免疫磁珠分选法：
-使用特异性针对免疫细胞表面抗原的抗体偶联到磁珠上，当组织细胞消化后的悬液与磁珠混合后，带有相应抗原的免疫细胞会被磁珠捕获，通过磁场作用实现免疫细胞与其它细胞的分离。
4.激光捕获显微切割技术：
-对于需要精确分析肿瘤微环境中特定区域免疫细胞的研究，可以采用LCM技术，在显微镜下直接选取包含免疫细胞的肿瘤区域，确保获取的细胞来源于特定空间位置。
5.密度梯度离心法：
-通过将组织消化液与适当的密度梯度介质（混合，离心后不同密度的细胞会分布在不同的层次，从而实现免疫细胞与其他细胞类型的分离。
15-免疫细胞的分离和保存技术
淋 T细胞：CD2、CD3、CD4、CD8、
巴
CD25等。
细 胞
B细胞：CD19、CD20、CD21、CD22、 CD29等。
1、E花环沉淀法 方法：淋巴细胞+ SRBC悬液→加入 分层液→T细胞形成E花环而沉于管→ 悬液中为B细胞。
2、尼龙毛分离法
方法：淋巴细胞→通过聚酰胺纤维管 →洗脱下来的是T细胞。
（二）斑螯敷法
•此法可从人体组织液中获取较纯的吞噬细胞。 •方法：
用滤纸蘸取10%中药斑螯酒精浸出液 → 贴敷在臂内侧皮肤表面 → 4~5小时后皮肤局部充血 → 48小时后局部形成水泡 → 吸取水泡中的组织液，内 含大量巨噬细胞。 •但此法对病人皮肤有一定损伤，有时可引起局部感 染。
• 中性粒细胞的分离
→与磁珠结合的细胞运动将受限， 未与磁珠结合的细胞将先被洗脱
→再将该柱移出磁场
→与磁珠结合的细胞将被洗脱。
5、磁性激活细胞 分离器分离法
6、淘选法 (利用 表面标志分离淋 巴细胞亚群）
五、单核巨噬细胞的分离
（一）Percoll分离法 •此法从外周血中分离出单核-巨噬细 胞，但由于此类细胞在外周血中的含 量较低，分离时所需的血量较多。
人：静脉采血，抗凝剂抗凝。 动物：颈静脉采血法、尾部采血法、
眼眶采血法、心脏采血法等。
二、外周血中白细胞的分离
血液中红细胞与白细胞比例约为600:1~1000:1， ➢ 两者的比重不同，其沉降速度也不同，通常
用两种方法加以分离。 1、自然沉降法 2、聚合物加速沉淀法 ➢ 或采用0.83%氯化铵分离法使红细胞破裂后， 洗涤得到白细胞。
2、吸附柱过滤法 •将单核 细胞吸附于玻璃柱中，洗脱下 来的主要是淋巴细胞。
免疫细胞的分离及其表面标志检测技术
细胞表面标志的检测方法有哪些？
T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞的主要生物标志是什么？ 淋巴细胞表面标志检测的临床意义是什么？
小 结
淋巴细胞并不是功能单一的群体，但其在光学显微镜下的形态基本是一样的，因此要对其进行进一步的分类和观察就不能采用形态学的方法，而要依靠对其表面标志的检测。常用于鉴定和检测计数淋巴细胞的表面标志是CD抗原。
一、外周血单个核细胞分离
不同细胞密度不同
不同细胞表面生物学特性不同 Nhomakorabea不同细胞表面分化抗原不同
细胞分离基本原理
人的红细胞密度为1.093
粒细胞密度为1.092
单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为
不同细胞密度不同
不同细胞密度不同
用1.077±0.001的分层液可将细胞分离
密度梯度离心(Ficoll)离心
抗体致敏细胞花环法 免疫细胞化学法 免疫荧光法 流式细胞分析法
淋巴细胞表面标志检测是评价免疫功能的重要指标。
对CD4+和CD8+T细胞的测定，有助于免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反应的监测。
壹
贰
二、淋巴细胞表面标志检测的临床意义
临床常见疾病中的T 淋巴细胞的变化
01
02
二 、淋巴细胞分离
贴壁粘附法
磁铁吸引法
吸附柱过滤法
Percoll 分离液法 （连续密度梯度离心） （去单核细胞）
1
2
3
4
T细胞和B细胞的分离
E花环沉降法 尼龙毛柱分离法
四、T细胞亚群的分离
亲和板结合分离法
磁性微球分离法
荧光激活细胞分离仪分离法
荧光激活细胞分离仪分离法
免疫细胞的分离技术
CD80 (B7-1)、CD86 (B7-2) 、CD267(TACI)、CD268(BAFFR)、
CD269(BCMA)、CD307(IRTA2)
髓样细胞 CD14、CD35(CR1)、CD64 (FcRI)、CD256(APRIL)、
CD257(BAFF)、CD312(EMR2)
血小板 CD36、CD41(整合蛋白IIb)、CD42aCD42d、CD51(整合蛋白v) 、
➢ 不同细胞密度不同 ➢ 不同细胞表面生物学特性不同 ➢ 不同细胞表面分化抗原不同
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免疫细胞的分离技术
根据不同的实验目的可以采取下列不同的分离方法
1、密度梯度离心法 2、黏附分离法（尼龙毛法、贴壁法、亲和板法） 3、磁性分离法 4、荧光激活分离法 5、其他分离法（花环沉降法）
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（一）外周血单个核细胞分离
加工处理抗原，将抗原肽提呈给抗原特异性淋巴细胞的 一组免疫细胞。血液中主要的APC细胞主要包括单核细 胞、树突状细胞、B细胞
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其他细胞
自然杀伤(NK)细胞，肥大细胞，嗜酸性粒细胞，嗜中 性粒细胞，嗜碱性粒细胞，血小板等
NK细胞 肥大细胞 嗜酸性粒细胞 嗜中性粒细胞 嗜碱性粒细胞 血小板
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免疫细胞的特征
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方法 （以CD4+T细胞为例）
1. 羊抗兔Ig包被平皿 2. CD4 一抗培育T细胞，倒入平皿，4℃孵育1小时； 3. 收集未粘附的CD4-T细胞 4. PBS漂洗非特异吸附的CD4-T细胞 5. 收集粘附的CD4+T细胞，可以用刮板刮取并在显微
镜下观察
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免疫磁珠法 （Magnetic activated cell
CD55(DAF)、CD59、CD252(OX40L)、 CD279(PD1)、
免疫细胞表面标志Mark
辅助性T细胞的典型表面标志：CD3+CD4+CD8-。
（Th1主要分泌IL-2，IFN-γ或TNF-β等辅助细胞免疫或参与迟发型超敏反应；Th2主要分泌IL-4/5/6/10等辅助体液免疫、参与速发型超敏反应）细胞毒性T细胞的典型表面标志是CD3+CD4-CD8+。
（CD3+CD8+CD30-可认定为Tc1细胞；CD3+CD8+CD30+可认定为Tc2）调节性T细胞：自然存在的，其典型标志为CD4+CD25+Foxp3+ （最重要的分子标记是一种转录因子Foxp3）成熟B细胞均表达CD19，B1细胞CD19+CD5+，B2细胞CD19+CD5-NK细胞的典型标志：CD3-CD16+CD56+。
单核-巨噬细胞的典型表面标志为CD14。
人成熟DC的主要特征表面标志为CD1a、CD11c和CD83，但不表达MPST/B/NK细胞的典型表面标志（CD14/3/19和CD20/16/56）。
小结淋巴细胞并不是功能单一的群体，但其在光学显微镜下的形态基本是一样的，因此要对其进行进一步的分类和观察就不能采用形态学的方法，而要依靠对其表面标志的检测。
常用于鉴定和检测计数淋巴细胞的表面标志是CD抗原。
进一步区分淋巴细胞亚群可使某一类淋巴细胞的功能趋向一致和单一。
但目前看来，还很少有只通过一个CD抗原就能将某一类淋巴细胞亚群指示出来的CD抗原，CD抗原指示出来的淋巴细胞亚群多数都是相对特异。
根据T细胞的免疫效应功能和表面CD分子表达至少可以分为：辅助性T 细胞、细胞毒性T细胞和调节性T细胞；SmIg为B细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指标，以CD5和CD19为标志可将B细胞分为B1和B2两个亚群；目前多以CD3一、CD16+、CD56+作为NK细胞的典型标志。
人T细胞（CD3+CD19-）、B细胞（CD3-CD19+）、辅助T细胞（CD3+CD4+）、NK细胞（CD3-CD56+）、细胞毒性T细胞（CD3+CD8+CD28+）、DC细胞（CD80等）。
免疫细胞检测技术
免疫细胞是泛指所有参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞及其前身，包括造血干细胞、淋巴细胞、单核巨噬细胞及其他抗原提呈细胞、粒细胞、红细胞、肥大细胞等。
各种免疫细胞的分离、纯化及其功能测定对于了解其在免疫应答中的作用及相互关系有着重要意义。
免疫细胞的检测即是用体外试验对机体各种参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞进行分离、纯化鉴定、计数和功能测定，藉以了解机体的免疫状态，并对某些临床疾病的诊断、疗效观察及预后判断等也有一定意义。
本综述将就免疫细胞的分离、免疫细胞功能的检测和细胞凋亡的检测三个方面主要方法的基本原理作简要介绍。
一．免疫细胞的分离免疫细胞包括多种细胞成分，例如淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、红细胞等。
它们具有不同的形态和功能特性，这不仅是我们认识各种免疫细胞的依据，也是分离各种免疫细胞的基础。
细胞的形态特征反映在其物理性质上，如各种细胞的大小、比重、表面电荷和粘附能力等存在差异;而细胞的功能特征往往由该细胞膜表面的蛋白质(表面标记)来体现，例如各种免疫细胞执行特定功能必须表达的受体等。
根据不同形态和功能特征，可以将各种免疫细胞从混合细胞群体中分离出来。
免疫细胞分离原理基本上可以归纳为基于细胞物理性状的分离方法和基于细胞表面标记的分离方法。
基于细胞物理性状的分离方法(一)根据各种细胞比重的差异1.自然沉降法2.密度梯度离心法人外周血单个核细胞(PBMC)包括淋巴细胞和单核细胞，其体积、形状和比重与其他细胞不同，红细胞和多核白细胞比重较大，为1.00左右，而淋巴细胞和单个核细胞比重为 1.075左右。
利用密度在l.077万±0.001之间近于等渗的Ficoll-Hypque混合溶液(称为淋巴细胞分层液)作密度梯度离心时，各种血液成分将按密度梯度重新分布聚集。
血浆和血小板由于密度较低，故悬浮于分层被的上部;红细胞与粒细胞由于密度较大，故沉于分层液的底部;PBMC密度稍低于分层液，故位于分层被界面上，这样就可获得PBMC o（如图1-1所示）图1-1 淋巴细胞分离示意图3.改变细胞密度法巨噬细胞能够吞噬铁粉，增加其比重，通过密度梯度离心或磁场将其分离;T 细胞能够与绵羊红细胞形成花环，形成的花环复合物比重大，借助密度梯度离心将T细胞分离。
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3.将细胞分离的原理有哪些？各有什么特点？ 4.形态学相同的一类细胞为什么还要分亚群？ 5.T细胞和B细胞进一步区分亚群的依据是什么？
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
6.什么是细胞表面标志？其作用是什么？ 7.细胞表面标志的检测方法有哪些？ 8.利用细胞表面标志（CD抗原）分离细胞的方法
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
二、B细胞表面标志
➢ SmIg、Fc受体、补体受体、EB病毒受体，部 分CD分子是B细胞的重要表面标志，其中以 SmIg为B细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指 标。
➢ CD19/CD5分子：可将B细胞区分为B1细胞和 B2细胞，B1细胞为CD19和CD5双阳性，而 B2细胞仅为CD19阳性，B2细胞为通常所指的
细胞分离基本原理
➢不同细胞密度不同 ➢不同细胞表面生物学特性不同 ➢不同细胞表面分化抗原不同
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
不同细胞密度不同
➢人的红细胞密度为1.093 ➢粒细胞密度为1.092 ➢单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为 1.075-1.090
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
不同细胞密度不同ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
技术简单，分离可在试管中 完成。
得率高。
对细胞温和，不影响分离细 胞的后续培养。
可直接上流式细胞仪检测， 不影响散射光。 需要很强的磁场来分离细胞。
得率不高。
纯度低。
纯度高。
分离速度快。
分离速度慢。
成本低。
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
需要很强的磁场来分离细胞， 需要一次性的分离柱，不能 在普通试管进行。
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第四节 免疫细胞表面标志的检测及应用
➢ 免疫细胞表面标志的检测方法 ➢ 淋巴细胞表面标志检测的临床意义
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一、免疫细胞表面标志的检测
➢ 抗体致敏细胞花环法 ➢ 免疫细胞化学法 ➢ 免疫荧光法 ➢ 流式细胞分析法
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三、NK细胞表面标志
人类NK细胞表面标志主要以 CD16、CD56来认定，临床上将 CD3-CD56+CD16+淋巴细胞认定为 NK细胞。
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
T细胞及NK细胞
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第三节 其他的免疫细胞
抗原提呈类细胞表面标志
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
免疫磁珠法细胞分选过程
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免 疫 磁 珠 细 胞 分 选 装 置
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全自动细胞分选系统
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
流式细胞分析仪
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第二节 淋巴细胞标志及亚群分类
第三节 其他的免疫细胞 第四节 免疫细胞表面标志的检测及应用
一、 免疫细胞表面标志的检测方法 二、 淋巴细胞表面标志检测的临床意义
思考题 小结
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
第一节 免疫细胞的分离
➢ 外周血单个核细胞分离 ➢ 淋巴细胞的分离 ➢ T细胞和B细胞的分离 ➢ T细胞亚群的分离
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
用1.077±0.001的分层液可将细胞分离
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
密度梯度离心(Ficoll)离心
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
二 、淋巴细胞分离
（去单核细胞）
➢ 贴壁粘附法 ➢ 吸附柱过滤法 ➢ 磁铁吸引法 ➢ Percoll 分离液法
（连续密度梯度离心）
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三、T细胞和B细胞的分离
➢ E花环沉降法 ➢ 尼龙毛柱分离法
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
四、T细胞亚群的分离
➢ 亲和板结合分离法 ➢ 磁性微球分离法 ➢ 荧光激活细胞分离仪分离法
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
荧光激活细胞分离仪分离法
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
第三章 免疫细胞的分离及其 表面标志检测技术
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
第一节 一、 二、 三、 四、
免疫细胞的分离 外周血单个核细胞分离 淋巴细胞的分离 T细胞和B细胞的分离 T细胞亚群的分离
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第二节 淋巴细胞标志及亚群分类 一、 Ｔ细胞表面标志及亚群 二、 B细胞表面标志 三、 NK细胞表面标志
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
磁珠大小可以选择
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大小免疫磁珠分离细胞的特点比较
比较项目 对细胞的影响
对流式细胞仪的影响 分离条件要求 收率 纯度 分离时间 分离成本
大磁珠
小磁珠
对细胞造成机械压力，影响 其生物学活性，不利于分离 后培养。 阻塞流式细胞仪的喷嘴，影 响散射光。
一、T细胞表面标志及其亚群
➢ CD3+CD4+CD8-辅助性T细胞 （help T cell,Th） ➢ CD3+CD4-CD8+细胞毒性T细胞 （cytotoxic T cell,Tc or CTL） ➢ CD4+CD25+调节性T细胞 （regulatory T cell,Tr or Treg）
二、淋巴细胞表面标志检测的临床意义
➢ 淋巴细胞表面标志检测是评价免疫功 能的重要指标。
➢ 对CD4+和CD8+T细胞的测定，有助 于免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病和 移植排斥反应的监测。
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
临床常见疾病中的T 淋巴细胞的变化
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
思考题
1.免疫细胞都包括哪些细胞？为什么要将其分离 纯化？
常用于鉴定和检测淋巴细胞表面标志 是簇分化抗原（Cluster of differentiation，CD）。
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
细胞表面分化抗原（CD抗原）
➢适用于T、B细胞的分离 ➢已知CD抗原细胞亚群的分离 ➢未知CD抗原细胞亚群的分离 ➢（阴性分选）
免疫细胞分离及其表面标志检测技术
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一、外周血单个核细胞分离
➢ 外周血单个核细胞（peripheral mononuclear cells, PMNC）包括淋巴细胞和单核细胞
（monocyte）。 ➢ Ficoll分离液法主要用于分离外周血中的单个核细
胞，是一种单次差速密度梯度离心的分离法。
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