流式细胞术之基本原理及运用
流式细胞术原理及应用
流式细胞术原理及应用
流式细胞术是通过一种名为流式细胞仪的仪器完成的，它能够以非常
高的精确度进行分析和检测。
流式细胞仪通过一根轴，从这个轴上有三根
弹性管，细胞进行注射，从而使细胞在管中行进，细胞同时也受到外界信
号的影响，这种信号可以来自磁场、电场或光场。
当细胞运行到仪器的另
一端时，它们会被照亮，通过一台摄像机可以拍摄到高清晰度的照片，然
后在计算机上进行分析处理。
流式细胞术广泛应用于早筛检、医学诊断、药物发现、药理学实验和
抗生素耐药性研究等方面，它能够更加精确、快速地进行细胞分析。
此外，流式细胞术也可以用于分析抗原抗体，免疫细胞介导的反应，以及细胞因
子如细胞因子和表面受体等的表达情况。
这种技术还可以用来监测血液中细胞水平的变化，如血小板、红细胞、白细胞等。
简述流式细胞术的原理与应用
简述流式细胞术的原理与应用一、流式细胞术的原理介绍流式细胞术（Flow cytometry）是一种利用流式细胞术仪（Flow cytometer）对单个活细胞进行多参数分析的技术。
它基于细胞的光学性质和生物化学特性，通过探针标记、荧光染料和细胞表面抗原的相互作用，对细胞进行高速连续检测和分离。
流式细胞术的原理如下：1.细胞悬浮和样本处理：将细胞样品作为悬浮液，通过离心等方法将细胞分散在液体中，去除细胞的团块和碎片，保证单个细胞的流式检测。
2.细胞标记：采用流式细胞术特定的探针和染料对细胞进行标记，以便后续检测和分析。
常用的标记方法包括荧光染料标记、抗体标记和细胞分子探针标记。
3.细胞分离和传送：将标记的细胞悬浮液通过流式细胞术仪，以流速每秒数千个细胞的速度单个分子传送到探测点。
4.光散射与荧光探测：细胞经过流式细胞术仪后，以激光束照射细胞，通过散射光和荧光信号的检测，对细胞进行空间分布和化学信息的获得。
5.数据采集与分析：通过计算机系统采集和记录细胞经过流式细胞术仪后所产生的光散射和荧光信号，在分析软件中对数据进行处理和解读，获得有关细胞的信息。
二、流式细胞术的应用流式细胞术是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的技术，它在细胞学、免疫学、血液学、肿瘤学等领域有着重要的应用价值。
下面列举几个流式细胞术的应用示例：1.血液学研究：流式细胞术结合细胞表面标记和荧光染料标记，可以对血液中的不同细胞类型进行快速的鉴定和数量分析。
例如，通过流式细胞术可对血液中的淋巴细胞、单核细胞和粒细胞等进行分类和计数，从而判断患者的免疫状态和疾病进展。
2.癌症诊断与治疗：流式细胞术对肿瘤细胞的检测和分析有着重要的作用。
通过流式细胞术，可以检测和定量肿瘤细胞的表面抗原和细胞内信号分子，进一步了解肿瘤细胞的类型、分化程度和增殖状态，为癌症的诊断和治疗提供指导。
3.免疫学研究：流式细胞术能够对免疫系统中的各种细胞类型进行鉴定、计数和功能分析。
FCM(流式细胞术检测)原理及临床应用
流式细胞术(flow cytometry FCM)是利用流式细 胞仪对单个生物颗粒(红细胞、白细胞、各类组织细 胞、血小板、微生物等)以及人工合成微球的物理和 生物学特性进行多参数定量分析，并能对特定细胞 群体加以分选的分析技术。
FCM的工作原理
流式细胞仪组成：
1.液流系统 2.光学系统 3.数据处理系统
双标记或多标记分析：目前使用的流式细胞仪 能用一个激光束激发检测三色甚至四色荧光信 号。检测时需注意荧光补偿。
常用免疫荧光染料组合
荧光染料 FITC+PE
激发波长 （nm）
488
发射波长（nm） 525、575
颜色 绿色、橙色
FITC+PeCy5
488
525、675
绿色、红色
FITC+ECD
488
实体瘤以多倍体居多；
G0 期：DNA 合成静止期 G1 期：DNA 合成前期 S 期： DNA 合成期 G2 期：DNA 合成后期 M 期： 细胞分裂期
DNA 倍体 2N 2N
2N-4N 4N 4N
DNA非2倍体出现是鉴别良性与恶性肿瘤的特异性指 标:
良性肿瘤和正常组织良性增生不出现DNA非2倍体细 胞而恶性肿瘤常可出现异倍体细胞；
过去认为 FCM测定残存白血病细胞不可靠， 因为现用的 McAb不能鉴别正常血细胞与白血 病细胞。虽然至今尚未发现白血病细胞特异抗 原，但近来有人提出根据白血病细胞的以下特 征， FCM检测的敏感度可明显提高
白血病细胞的某些抗原表达量明显高于相应 的正常血细胞
如小儿ALL，其CDl0+细胞的荧光强度可 高达3-4个对数值，而其 CD45则为弱阳性或 阴性。
525、625
流式细胞术简介及应用进展课件
流式细胞术简介及应用进展
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▪高速度：分析细胞数：1000个/s→60000个/s ▪高灵敏度：荧光分子数/细胞：3000→100个FITC； ▪高准确度：区分两个细胞：参数：相差5% →1%； ▪高精度：CV值：7% →< 1%; ▪多参数：荧光：1个 →12个参数； ▪高纯度：分选细胞：80-90% →99.9%; ▪其 它：荧光信号：线性检测→对数检测
电子程序化单细胞分选仪——Electronically programmable individual cell sorter, EPICS (Coulter公司）
流式细胞术简介及应用进展
5
BD FACSCalibur型 FCM （单L，3F）
流式细胞术简介及应用进展
6
Coulter EPICS XL/XL-MCL （单L，4F）
流式细胞术简介及应用进展
11
BD FACSAria
BD FACSCount
CD3\4\8 专为HIV监测设计的经济普及型流式细胞仪
流式细胞术简介及应用进展
12
BD FACSCanto 2L 6C
流式细胞术简介及应用进展
13
BD FACS Calibur 1L 4C
流式细胞术简介及应用进展
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三、流式细胞术应用的新进展
流式细胞术简介及应用进展
17
2、cytometric bead array (CBA)
微球流式芯片技术(CBA)是一种微球多参数检测分析技 术，它用一系列的微球组合来捕获并结合流式细胞术检 测溶液中被检测物质的量，其采用夹心法分析策略。用 已知的标准品和对照标准曲线就可得出被测样品的浓度。 这种检测方法，既不受样品量的限制，也可同时检测多 项指标参数；客观、省时、人为因素影响小。
流式细胞术基本原理与实用技术
流式细胞术基本原理与实用技术流式细胞术（Flow Cytometry）是一种常用的细胞分析技术，它基于光学、电子和计算机技术，能够对单个细胞进行快速、准确的多参数分析。
本文将介绍流式细胞术的基本原理和实用技术。
一、基本原理流式细胞术的基本原理是利用细胞在液体中悬浮的特性，在流动状态下通过一个细胞计数器，同时对细胞进行多参数的检测和分析。
其主要包括以下几个步骤：1. 细胞样品的制备：将待检测的细胞样品进行预处理，如离心、洗涤等，以获得单细胞悬浮液。
2. 细胞的进样：将细胞悬浮液通过微细管道进入流式细胞仪的流动系统中，形成单细胞的液体流。
3. 细胞的定位和聚焦：利用激光束对细胞进行定位和聚焦，使其逐个通过探测区域。
4. 细胞的激发和发射：通过激光束的照射，激发细胞中的荧光染料或标记物，使其发射特定波长的荧光信号。
5. 光信号的收集和处理：收集细胞发射的荧光信号，并经过光学系统进行分光、分束、分光和聚焦，最后通过光电倍增管或光电二极管转换为电信号。
6. 数据的获取和分析：将电信号转化为数字信号，并通过计算机系统进行数据采集、存储和分析，得到细胞的各项参数及相关统计学分析。
二、实用技术1. 细胞标记技术：为了能够准确地检测和分析细胞的特定性质，常常需要对细胞进行特异性的染色或标记。
常用的标记方法包括荧光染料、抗体标记和基因表达标记等。
2. 多参数分析技术：流式细胞术可以同时检测多个参数，如细胞大小、形态、表面标记物的表达、细胞周期等。
通过合理选择和配置荧光染料和滤光片组合，可以实现多重标记和多参数分析。
3. 数据分析软件：流式细胞术产生的数据量庞大，需要借助计算机软件进行数据的分析和解读。
常用的数据分析软件有FlowJo、CellQuest、ModFit等，它们可以对细胞的分布、比例、相关性等进行统计学分析和图形展示。
4. 高通量流式技术：随着科学研究的深入和技术的发展，高通量流式技术逐渐兴起。
它通过提高仪器的样品处理速度和自动化程度，实现对大量样品的快速检测和分析，广泛应用于生物医学研究和临床诊断。
流式细胞术的原理和应用
流式细胞术的原理和应用流式细胞术（Flow cytometry）是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的生物技术，它通过将单个细胞悬浮在溶液中，利用激光器照射并检测细胞表面或内部的荧光标记物，实现对细胞的定量和质量分析。
流式细胞术具有高通量、高准确性和高灵敏度的特点，被广泛应用于细胞表型分析、细胞分选、DNA含量测定、蛋白质定量、染色体分析、细胞凋亡测定等领域。
本文将对流式细胞术的原理和应用进行详细介绍。
一、流式细胞术的原理1. 细胞悬浮流式细胞术的第一步是将待检测的细胞悬浮在生理盐水或缓冲液中，以确保细胞处在单个状态，方便后续的激光检测。
2. 细胞标记细胞通常会被标记上与特定蛋白或分子结合的荧光标记物，通过特异性和高亲和力结合到细胞表面或内部的特定结构上。
这些标记物可以是荧光染料、荧光免疫球蛋白（Fluorescent-labeled antibodies）等。
3. 激光照射悬浮细胞通过流式细胞仪中的微流道单个流经，在通过激光照射后，激光与标记物产生光散射或荧光发射。
4. 光散射和荧光检测流式细胞仪通过多个检测器检测光散射和荧光发射强度，这些数据被传输到计算机中进行分析和图形呈现。
5. 数据分析通过计算机软件对检测到的数据进行图形处理和数据分析，包括各种细胞表型的区分、细胞计数、蛋白质表达水平、细胞周期分析等。
二、流式细胞术的应用1. 细胞表型分析流式细胞术可以用来分析细胞的表面标记物和内部标记物，比如CD标记、HLA标记、细胞凋亡标记等，帮助研究者深入了解细胞的功能和特性。
2. 细胞分选基于细胞表面标记物的差异，流式细胞术结合细胞分选仪可以实现对不同亚群细胞的快速纯化和分离，广泛应用于免疫学、干细胞研究等领域。
3. DNA含量测定通过DNA特异性荧光染料，流式细胞术可以对细胞的DNA含量进行测定，帮助研究细胞周期的变化、细胞增殖速率的测定等。
4. 蛋白质定量利用荧光标记的免疫球蛋白，流式细胞术可以对细胞中蛋白质的表达水平进行定量分析，比如研究细胞信号通路的活性等。
流式细胞术的原理及应用
流式细胞术的原理及应用前言流式细胞术（Flow Cytometry）是一项基于光学技术的分析和分类细胞及其组分的方法。
通过将细胞悬浮液通过流式细胞仪，实现细胞的快速高通量检测和分析。
流式细胞术在生命科学研究、临床诊断、药物研发等领域得到广泛应用。
本文将介绍流式细胞术的基本原理及其主要应用。
1. 原理1.1 细胞悬浮液的注射流式细胞术的第一步是将待检测的细胞悬浮液注入流式细胞仪。
悬浮液中的细胞会依次通过一个细胞注射口，形成细胞流。
1.2 通过激光激发荧光信号流式细胞仪利用激光束激发细胞或标记物的荧光信号。
细胞通常被染色或标记以便准确识别和分析细胞特定的特征。
1.3 接收荧光信号经过激发后，流式细胞仪会收集荧光信号，并通过各种光学和电子元件将其转化为电信号。
1.4 数据分析与可视化流式细胞仪将收集到的数据传输到计算机进行分析和可视化。
根据不同的荧光信号特性，可以得到细胞的表型、数量、活性等信息。
2. 应用流式细胞术在许多领域有着广泛的应用，在以下几个方面得到了突出的成果和应用：2.1 免疫学流式细胞术在免疫学研究中发挥着重要的作用。
通过流式细胞术，可以对免疫细胞进行表型和功能分析，了解免疫细胞的分布、表达特征、活性等信息，为研究免疫系统的机制提供了强有力的工具。
2.2 癌症研究流式细胞术在癌症研究中广泛应用。
通过流式细胞术，可以对癌细胞进行检测、鉴定和分析，了解癌细胞的异质性、增殖速率、转移能力等特征，为癌症的诊断和治疗提供重要信息。
2.3 微生物学研究流式细胞术在微生物学研究中起到关键作用。
通过流式细胞术，可以快速准确地对微生物进行定量分析和分型鉴定，如对细菌、真菌、病毒的检测和鉴别。
2.4 细胞工程与干细胞研究流式细胞术在细胞工程领域和干细胞研究中有着广泛的应用。
可以通过流式细胞术对干细胞进行分选、分析和富集，并对细胞工程的效果进行评估和监测。
2.5 遗传学研究流式细胞术在遗传学研究中也发挥着重要作用。
流式细胞术的原理和应用
流式细胞术的原理和应用流式细胞术是一种广泛应用于生物医学领域的先进技术，它通过对细胞的特定特征进行高效、快速的检测和分析，为科学研究和临床诊断提供了强大的工具。
流式细胞术的原理和应用涉及到许多方面，包括仪器原理、标记技术、数据分析等，下面将对这些内容进行详细阐述。
一、流式细胞术的原理流式细胞术的原理基于细胞在流动液体中依次通过激光束后的单个检测区域，通过检测细胞在不同参数下的散射或荧光信号来获取关于细胞数量、大小、形态、表面标记物等信息。
流式细胞术通常包括以下步骤：1. 样本制备：将样本中的细胞进行适当的处理，如酶消化、离心、过滤等，以获得单细胞悬浮液。
2. 细胞标记：利用标记物（如荧光染料、抗体等）对待测细胞进行特异性标记，以便在流式细胞仪中对其进行检测和分析。
3. 流式细胞仪检测：将标记后的细胞悬浮液通过流式细胞仪，激光束依次照射每个细胞，并通过检测散射光和荧光信号来获得相关信息。
4. 数据分析：通过专门的流式细胞数据分析软件对获得的数据进行处理和分析，获取细胞的数量、特征等信息。
二、流式细胞术的应用1. 免疫学研究：在免疫学领域，流式细胞术可用于分析免疫细胞的类型、数量和功能，如淋巴细胞亚群的鉴定、T细胞的活化状态等，为免疫学研究提供了重要的数据支持。
2. 癌症诊断和治疗：流式细胞术可用于检测肿瘤细胞的类型和数量，分析肿瘤细胞的表面标记物，评估肿瘤的侵袭性和预后，指导临床治疗方案的选择和疗效监测。
3. 干细胞研究：流式细胞术可用于干细胞的鉴定和分离，分析干细胞的表面标记物和多能性，为干细胞研究和应用提供重要的技术支持。
4. 病原微生物检测：流式细胞术可用于检测微生物感染，分析微生物的数量、类型和毒力，评估感染的严重程度和治疗效果。
5. 血液分析：流式细胞术可用于分析血液中各类细胞的数量和功能，如白细胞亚群的鉴定、血小板的活化状态等，为临床诊断和治疗提供重要信息。
流式细胞术作为一种高效、敏感的细胞分析技术，在生物医学领域有着广泛的应用前景。
流式细胞术基本原理及应用
流式细胞术基本原理及应用流式细胞术（Flow Cytometry）是一种广泛应用于生命科学和临床医学研究的技术，能够快速、高效地分析和计数细胞，同时可以对细胞进行多参数的定位、鉴定和分离。
该技术的原理是通过激光束激发细胞中的荧光染料或标记物，然后检测细胞散射光的强度和荧光信号的强度，进而对细胞进行分析和排序。
本文将介绍流式细胞术的基本原理及其应用。
样本制备是流式细胞术的第一步，通过样本的处理来获取以细胞为基础的单细胞悬浮液。
这个过程可以通过机械或酶的方法破碎组织以获得细胞，并使用缓冲液来稀释细胞以避免细胞团。
通常，通过过滤或离心的方法，除去细胞碎片和大颗粒物质。
然后，用缓冲液沉淀细胞并冲洗细胞以去除细胞外的成分。
细胞悬浮是将细胞从红细胞和组织碎片中剥离并悬浮在缓冲液中的过程。
一种常用的方法是将细胞悬浮在含有胎牛血清等蛋白质的培养基中，以保持细胞的活力和稳定性。
细胞检测是流式细胞术的核心步骤，通过激光光束照射细胞，然后测量散射光和荧光信号来分析细胞的性状。
散射光包括前向散射（FSC）和侧向散射（SSC）。
FSC反映了细胞的大小和形态，SSC反映了细胞的复杂性和颗粒含量。
荧光信号是通过用具有荧光标记分子（如抗体或染料）标记细胞，然后用激光激发标记物并测量其荧光强度来检测的。
可以使用多个激光器和相应的滤光片来激发和检测多个荧光染料，从而实现多参数的分析。
数据分析是流式细胞术的最后一步，通过计算机软件对测量到的数据进行处理和解读。
数据分析可以根据散射光和荧光信号的特征，将细胞分类和鉴定。
可以根据亮度、大小和形状等参数来区分细胞的不同类型或亚群。
1.免疫细胞学研究：通过荧光标记的抗体，流式细胞术可以用来鉴定和分析细胞表面分子的表达情况和细胞亚群的分布。
例如，用荧光标记的CD4和CD8抗体可以区分T细胞亚群，并研究它们在疾病发展中的作用。
2.细胞周期分析：流式细胞术可以通过荧光染料标记DNA，从而实现对细胞周期的分析。
流式细胞术的工作原理及临床应用
流式细胞术的工作原理及临床应用引言流式细胞术是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的技术，其工作原理基于细胞在液体流动环境中的特定性质。
该技术广泛用于细胞表型分析、细胞计数、细胞分类和细胞排序等领域，为研究人员和医生提供了重要的工具。
一、流式细胞术的工作原理流式细胞术利用细胞在液体中的流动来实现细胞的分析和排序。
其工作原理可以分为三个主要步骤：细胞的悬浮、细胞的单独通过和细胞的检测。
1. 细胞的悬浮：首先，需要将待分析的细胞样本进行处理，使其转化为单细胞悬浮液。
这可以通过细胞培养、组织切片或体液处理等方法获得。
继续使用细胞培养基、酶消化或机械碎解等方法，将细胞组织分散成单个细胞，并获得细胞悬浮液。
2. 细胞的单独通过：接下来，将细胞悬浮液通过微小通道，通常是称为流式细胞仪的仪器。
在流速适中的条件下，细胞会单个通过通道，并在通过过程中因其特定特征而会发生特别的反应。
3. 细胞的检测：在细胞通过过程中，流式细胞仪能够感应细胞的数量、大小、形状和表面标记物等特征。
通过使用激光器的激光束照射细胞，并测量其散射光、荧光光谱等信息，流式细胞仪能够对细胞的特征进行定量分析。
二、流式细胞术的临床应用流式细胞术作为一种高效、灵敏和准确的细胞分析方法，在临床上有着广泛的应用，以下是一些常见的临床应用：1. 免疫学研究：流式细胞术在免疫学领域的应用非常广泛。
通过对细胞表面的抗原和抗体的特异性结合，可以对免疫细胞进行表型分析，了解不同亚群细胞的比例和功能状态。
这对于研究免疫相关疾病的发生机制、免疫细胞治疗的效果评估等方面非常重要。
2. 癌症诊断和监测：流式细胞术在癌症的诊断和监测中也起着关键作用。
通过检测癌细胞的特定标记物，可以对肿瘤进行识别、分类和判断其恶性程度。
此外，流式细胞术还可以监测肿瘤的治疗反应，评估抗癌药物的疗效，并预测患者的预后。
3. 血液学检测：流式细胞术在血液学检测中也占据重要地位。
通过检测血液中的各种细胞类型和亚群细胞的比例，可以帮助诊断和监测临床上的血液疾病，如白血病、淋巴瘤等。
流式细胞术的基本原理及其应用
流式细胞术的基本原理及其应用流式细胞术的基本原理是通过将携带荧光标记物的细胞单个穿过一个经过纳米级微孔的流动细胞仪中，在仪器静止状态下，用激光束照射细胞，测量细胞散射光强度和荧光素（荧光标记物）发射光强度，并对荧光标记物进行定量和定性分析。
流式细胞术有多个功能模块来实现这些原理，包括样本处理和采集、检测光源、光学系统、示波器、计算机控制和数据分析软件等。
应用方面，流式细胞术在免疫学、细胞生物学和药物研发等领域具有广泛的应用。
以下是几个流式细胞术的应用举例：1.免疫细胞表型分析：可以通过流式细胞术对白细胞表面的特定抗体标记物进行检测和分析，了解免疫细胞的分布、组成和功能状态。
这种技术在临床用于诊断和监测疾病，例如血液肿瘤的分型和监测、感染和免疫疾病的诊断。
2.DNA细胞周期分析：流式细胞术可以通过染色体分析来检测细胞周期的不同阶段，并评估细胞的增殖和DNA损伤。
通过分析细胞周期，可以确定干细胞、肿瘤细胞和其他细胞类型的比例，从而研究生物学和疾病发展过程中的细胞生长和增殖。
3.细胞凋亡分析：流式细胞术可以用荧光标记物来检测和分析细胞凋亡（程序性细胞死亡）的过程。
凋亡是正常生理和病理过程中的重要事件，例如生长发育和肿瘤发生。
通过分析细胞表面和内部标记物的表达和活性变化，可以了解细胞凋亡的诱导和调控机制。
4.细胞分选和分离:流式细胞术可以通过荧光标记物和细胞大小、复杂性等参数来识别和分选特定类型的细胞。
这种细胞分选技术在基因表达、单细胞转录组学、干细胞研究等领域具有重要应用，可以帮助研究者对细胞进行单个细胞水平的分析。
5.离子指示染料测定：通过使用与细胞膜融合的离子指示染料，流式细胞术可以测定细胞内离子浓度和动态变化。
例如，钙离子（Ca2+）作为重要的细胞信号分子，流式细胞术可以实时监测细胞内钙浓度的变化，并研究其与细胞功能和相应生理过程的关联。
总之，流式细胞术作为一种高通量、高灵敏度和多参数的细胞分析技术，在免疫学、细胞生物学和疾病研究中起着至关重要的作用，不仅可以提供定量的细胞信息，还可以为深入理解细胞生命活动和机制提供有效的实验手段。
流式细胞术基本原理与应用实验报告
流式细胞术基本原理与应用实验报告一、引言细胞是生命的基本单位，对于细胞的研究是生命科学的重要组成部分。
流式细胞术是一种高效、快速、准确的细胞分析技术，可以对单个细胞进行分析和排序，广泛应用于生命科学、医学、生物工程等领域。
本文将介绍流式细胞术的基本原理和应用实验。
二、流式细胞术基本原理流式细胞术是一种基于细胞荧光标记的技术，其基本原理是将细胞悬浮液通过细胞分离器，使细胞单个通过激光束，激光束照射到细胞上，激发荧光标记物，荧光信号被收集并转化为电信号，通过计算机进行分析和排序。
流式细胞术的主要组成部分包括细胞分离器、激光器、荧光探测器和计算机。
细胞分离器通过压力和速度的调节，使细胞单个通过激光束。
激光器产生激光束，激光束照射到细胞上，激发荧光标记物。
荧光探测器收集荧光信号，并将其转化为电信号。
计算机对电信号进行分析和排序，得到细胞的荧光信号和数量信息。
三、流式细胞术应用实验1.细胞表面标记物检测细胞表面标记物是细胞表面的蛋白质、糖类等分子，可以用于细胞的鉴定和分类。
流式细胞术可以通过荧光标记物检测细胞表面标记物，从而对细胞进行分类和分析。
实验步骤：（1）制备细胞悬浮液。
（2）加入荧光标记物，使细胞表面标记物与荧光标记物结合。
（3）将细胞悬浮液通过流式细胞术仪器，收集荧光信号。
（4）通过计算机对荧光信号进行分析和排序，得到细胞表面标记物的信息。
2.细胞周期分析细胞周期是细胞从一个细胞分裂到下一个细胞分裂的过程，包括G1期、S期、G2期和M期。
流式细胞术可以通过荧光标记物检测细胞DNA含量，从而对细胞周期进行分析。
实验步骤：（1）制备细胞悬浮液。
（2）加入荧光标记物，使细胞DNA与荧光标记物结合。
（3）将细胞悬浮液通过流式细胞术仪器，收集荧光信号。
（4）通过计算机对荧光信号进行分析和排序，得到细胞DNA含量的信息。
3.细胞凋亡检测细胞凋亡是细胞自我死亡的过程，是细胞生命周期的重要组成部分。
流式细胞术可以通过荧光标记物检测细胞凋亡，从而对细胞生命周期进行分析。
流式细胞术基本原理与应用实验报告
流式细胞术基本原理与应用实验报告一、引言流式细胞术（flow cytometry）是一种广泛应用于生物学、医学和临床诊断领域的高通量技术。
它可以快速地分析细胞群体的形态、数量、大小、表面分子表达和内部结构等信息，从而为科学家们提供了许多有价值的数据和见解。
本文将介绍流式细胞术的基本原理和应用实验，以期为读者提供更深入的了解。
二、流式细胞术基本原理1. 光学系统流式细胞仪主要由光源、透镜系统、光谱仪和检测器等组成。
光源可以是氩离子激光器或其他激光器，它们会发射出不同波长的激光束。
透镜系统会对激光束进行聚焦和扩散，使其能够穿过样品中的单个细胞。
光谱仪则会将激光束分成不同波长的色带，并通过探测器来检测样品中各个荧光染料或标记物的信号。
2. 样品处理在进行流式细胞术之前，需要对样品进行处理。
一般来说，样品需要进行单细胞悬浮处理，以便于在流式细胞仪中进行分析。
这个过程可以通过机械分离、酶消化或超声波破碎等方法实现。
3. 荧光标记为了使细胞的某些结构或分子能够被检测到，需要将它们标记上荧光染料或其他标记物。
这些标记物可以是抗体、蛋白质、DNA探针等。
当激光束照射到样品中时，荧光染料会发出特定波长的荧光信号，从而被检测器捕捉到。
4. 数据分析流式细胞术所得到的数据通常是一个多维度的数据集合，其中包括了每个单个细胞的大小、形态、荧光强度等信息。
为了对这些数据进行更深入的分析和解释，需要使用专业软件进行数据处理和可视化。
三、应用实验1. 细胞表面抗原检测流式细胞术可以用于检测细胞表面的抗原表达情况。
通过将适当的荧光标记物与抗体结合起来，可以快速地对细胞表面的抗原进行定量和定性分析。
这种方法在肿瘤学、免疫学和感染病学等领域中得到了广泛应用。
2. 细胞周期分析流式细胞术也可以用于细胞周期分析。
通过将DNA染料与样品中的单个细胞结合，可以对不同阶段的细胞进行分类和计数。
这种方法可以用于评估细胞增殖速率、治疗药物的效果等方面。
流式细胞术的原理和应用
流式细胞术的原理和应用一、流式细胞术的原理流式细胞术是一种在液流中快速检测细胞特性的技术。
通过将单个细胞与特异性抗体结合，实现对细胞表面和内部抗原的定量和定性分析。
抗体通常与荧光染料标记，以便在流式细胞仪中产生光信号。
细胞在流式细胞仪中通过激光束，产生的荧光信号被光电倍增管收集并转换为电信号，从而实现对细胞特性的定量分析。
二、流式细胞术的应用1. 免疫表型分析流式细胞术可用于免疫表型分析，以了解免疫细胞群体的多样性、功能和活性状态。
通过检测特定免疫细胞表面标记物的表达水平，可以评估其发育阶段、激活状态和功能特性。
这种分析对于研究免疫系统功能、疾病发生机制和疫苗开发具有重要意义。
2. 细胞功能分析流式细胞术可用于分析细胞的生理功能，如细胞增殖、凋亡和吞噬作用等。
通过向流式细胞仪中添加特定的荧光染料或抗体，可以检测细胞内关键分子如DNA、RNA、蛋白质等，从而评估细胞的增殖和凋亡状态。
此外，还可以通过检测细胞表面的吞噬标记物，研究细胞的吞噬能力。
3. 基因表达分析流式细胞术可用于基因表达分析，以了解特定基因在细胞中的表达水平。
通过将RNA与特异性抗体结合，并使用荧光染料标记，可以检测细胞中特定基因的表达水平。
这种分析有助于研究基因功能、疾病诊断和药物筛选。
4. 病原体检测流式细胞术可用于病原体检测，以快速准确地识别和计数感染性疾病的病原体。
通过将特异性抗体与病原体结合，并使用荧光染料标记，可以在流式细胞仪中实现对病原体的定量和定性分析。
这种分析对于疾病诊断和治疗具有重要意义。
5. 肿瘤诊断和治疗流式细胞术在肿瘤学中也有广泛的应用。
通过对肿瘤细胞的表面抗原、基因表达和细胞功能进行分析，有助于肿瘤的诊断、分类、预后评估和治疗策略的制定。
此外，流式细胞术还可以用于监测肿瘤细胞的耐药性和对治疗的反应，为个体化治疗提供依据。
流式细胞术的原理与应用
流式细胞术的原理与应用流式细胞术（Flow Cytometry）是一种能够对单个细胞进行分析和计数的技术，利用激光器激发细胞和细胞表面染色的标记物，然后根据细胞的标记物特性和光散射模式对细胞进行分类和计数。
流式细胞术的原理和应用十分广泛，本文将详细介绍。
流式细胞术的原理基于光散射和荧光信号的检测。
通过细胞标记物的选择和荧光染料的使用，可以在流式细胞仪中同时检测多种参数，例如细胞的大小、颜色、表面标记物和内部成分。
一般流式细胞术仪器包括激光器、光散射仪、荧光仪和计算机等。
1.免疫细胞表型分析：流式细胞术可以对免疫细胞进行表面标记物的检测，用于免疫细胞亚群的鉴定和分类。
通过体外标记和免疫荧光染色，可以检测和分析淋巴细胞、单核细胞、粒细胞等免疫细胞的表面标记物，了解细胞的分泌、激活状态和表型特征。
2.微生物学研究：流式细胞术可以用于微生物学研究，例如对细菌、酵母和微藻等微生物进行分选和分析。
通过将细菌或其他微生物染色，可以检测其不同的生长阶段和表型特征，了解微生物的组成和功能。
3.细胞周期和凋亡分析：流式细胞术可以通过核酸染料对DNA含量进行检测，从而分析细胞的周期和凋亡状态。
通过检测细胞的DNA含量，可以判断细胞的增殖能力、凋亡率和细胞周期进程，研究细胞的分裂和生长机制。
4.细胞分选和克隆：流式细胞术可以通过荧光标记物对特定细胞进行分选和克隆。
通过在细胞上标记特定的抗体或其他荧光物质，并结合流式细胞术的细胞分选功能，可以分选和获取特定细胞亚群，用于进一步研究和培养。
5.肿瘤学研究：流式细胞术可以对肿瘤细胞进行分析和分类，了解肿瘤细胞的亚群及不同细胞的表型特征。
通过标记特定的抗体和荧光染料，在流式细胞仪中对肿瘤细胞进行分选和分析，可以研究肿瘤的发生机制、转移机制和治疗反应。
流式细胞术作为一种高通量的单细胞分析方法，在生物医学研究、免疫学、癌症研究等领域有着广泛的应用。
它可以提供大量的细胞分析数据，用于研究生物学过程、细胞功能、免疫响应和疾病发展。
流式细胞术的基本原理与应用
流式细胞术的基本原理与应用1. 流式细胞术简介流式细胞术（flow cytometry）是一种广泛应用于生物医学领域的实验技术，顾名思义，它是通过流式细胞仪对细胞进行快速高效的分析和计数的一种方法。
流式细胞仪结合了光学、电子学和生物学的原理，在细胞的分析和生物标记方面发挥着重要的作用。
2. 流式细胞术的基本原理流式细胞仪通过采用一系列光学镜头和激光发射器来激发和检测细胞中的荧光标记物。
其基本原理如下：•细胞的准备：首先需要制备待测样本的单细胞悬液，并加入荧光标记物以特异性地标记感兴趣的细胞组分。
荧光标记物可以是通过特异荧光染料直接染色的，也可以是通过激活荧光分子标记的。
•光学系统：流式细胞仪内部包含多个光学系统，它们可以激发和检测荧光标记物。
通常，一台流式细胞仪至少搭载有一个激光器和多个检测器。
激光器发射的光束通过光学镜头聚焦到待测细胞上，激发细胞内的荧光标记物。
荧光标记物发出的荧光信号经过滤光片分离并收集到相应的检测器中。
•数据采集和分析：流式细胞仪通过控制细胞的流速和激发光的强度来获取细胞的相关数据。
检测到的荧光信号被转换成电信号并通过放大器进一步增强。
数据最后通过计算机进行采集和分析。
根据荧光信号的强度和特征，可以获取到细胞的表型信息、功能信息以及分子相互作用等数据。
3. 流式细胞术的应用流式细胞术广泛应用于生物医学和生命科学领域，以下是几个常见应用领域的示例：3.1 免疫学研究•细胞表型分析：流式细胞术可以检测和鉴定细胞表面和胞内的各种免疫相关分子，如免疫球蛋白、细胞表面受体、细胞凋亡标记物等，以帮助研究细胞免疫表型的变化。
•细胞亚群分析：流式细胞术可以通过多种荧光标记将细胞群体分成不同的亚群，以研究免疫细胞在某些特定疾病或独特生理状态下的数量和功能变化。
3.2 癌症研究•肿瘤细胞鉴定：流式细胞术可以帮助鉴定和分离肿瘤细胞，从而研究其特性和功能。
例如，可以通过检测特定肿瘤标记物，鉴定循环肿瘤细胞（CTCs）。
流式细胞术基本原理与实用技术
流式细胞术基本原理与实用技术
流式细胞术（FACS）是一种广泛应用于生命科学领域的高通量细胞分析和分选技术。
其基本原理和实用技术如下：
一、样品准备
在进行FACS之前，需要将细胞悬浮液或组织细胞碎片通过过滤器过滤，以得到单个细胞的悬浮液。
随后将悬浮液加入到含有一定细胞标记物的荧光染料中，使得细胞表面有区分不同群体的标记，例如细胞表面抗原。
荧光染料可以是分子量小的化合物、抗体标记分子、蛋白质标记分子等。
二、设备设置
FACS设备由荧光激发器、荧光检测器、样品流动池和高压流速控制系统等部件组成。
通过设置荧光染料所需要的激发波长和收集的荧光波长，将荧光激发器和荧光检测器调整至适当的位置。
对于每个荧光染料，需要设定收集的波长范围和门控系统。
三、样品检测
将样品导入样品流动池，以产生细胞流动并通过荧光激发器。
在每一个单独的荧光染料发射峰之前，设立门道，用于筛选荧光信号并选择相应的背景噪音水平。
样品流过荧光激发器时，所产生的荧光信号将被荧光检测器收集。
四、数据分析
利用计算机软件处理和分析获得的荧光信号数据，得到针对不同细胞类型、各种特征和功能的排序和分析。
通过流式细胞仪可以实现单个细胞的荧光测量和分类，将这些数据转化为数值和图像，并对细胞进行进一步的单个细胞功能、结构和组成分析等。
综上所述，流式细胞术已成为现代细胞学、免疫学、生物学等领域中的一种必不可少的技术。
其基本原理和实用技术结合起来，可以让科研工作者更深入地了解细胞的结构、功能、组成以及色素、蛋白
质等分子的表达规律，全面、准确地分析和研究生命体系，推进科学研究和医学进步。
流式细胞术的工作原理及其临床应用
流式细胞术的工作原理及其临床应用一、本文概述流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种在液流中快速检测和分析单个细胞的技术，广泛应用于生物学、医学和生物技术等众多领域。
本文将对流式细胞术的工作原理进行详细介绍，并探讨其在临床诊断和治疗中的广泛应用。
我们将概述流式细胞术的基本原理和技术特点，包括细胞染色、荧光信号检测和数据分析等方面。
然后，我们将深入探讨流式细胞术在免疫学、血液学、肿瘤学等领域中的临床应用，以及其在疾病诊断、预后评估、疗效监测等方面的重要作用。
我们将对流式细胞术的未来发展趋势进行展望，以期为读者提供全面而深入的了解。
二、流式细胞术的工作原理流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种在液流中快速定量分析和分选细胞的技术。
其工作原理主要基于流式细胞仪的精确设计和操作。
待检测的细胞经过预处理，如荧光标记、固定和破膜等，使其带有可检测的荧光染料或抗体。
这些细胞随后被导入到流式细胞仪中，通过喷嘴形成单细胞悬液，并以一定的流速通过检测区域。
在检测区域，细胞经过激光束的照射，激发出荧光信号。
这些信号被光电倍增管等光电转换器接收，并转化为电信号。
电信号经过放大、数字化处理后，由计算机系统进行记录和分析。
流式细胞仪可以同时检测多个参数，如细胞大小、内部结构、DNA 含量、蛋白质表达等。
这些参数的分析主要基于荧光信号的强度和波长，以及细胞的电学特性，如电阻抗。
流式细胞术还可以结合分选技术，将特定类型的细胞从混合细胞群体中分离出来。
这主要通过在流式细胞仪的出口处设置电磁场或静电场，对带有特定荧光信号的细胞进行偏转，从而实现细胞的分选。
流式细胞术的工作原理是将单个细胞在液流中快速通过激光束，通过检测和分析荧光信号，实现细胞的定量和定性分析，以及细胞的分选。
这种技术具有高灵敏度、高分辨率和高通量的特点，广泛应用于生物医学研究的各个领域。
三、流式细胞术的临床应用流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）作为一种高度灵敏且多功能的细胞分析技术，在临床医学领域的应用日益广泛。
流式细胞术原理及应用
流式细胞术原理及应用流式细胞术（flow cytometry）是一种用于分析和计数细胞的技术方法，可以对数千到数百万个细胞进行高速的检测和测定。
其原理是通过光学方法将单个细胞等离子状悬浮于液态载体中，使其以流动的方式经过激光束，激光束通过细胞时会被吸收或散射，从而测定细胞的形态、大小、表面标志物、内部结构以及细胞计数等信息。
流式细胞术的主要原理包括：激光激发和荧光检测。
首先，通过使用不同波长的激光束对悬浮的细胞进行激发。
细胞中的染料或荧光标记物受到激光束的激发后，会发出荧光信号。
然后，通过使用一系列的荧光滤光镜和光学透镜，将荧光信号分离并传递到相应的光电倍增管或光电二极管中进行检测和测定。
最后，通过计算机分析和处理这些得到的数据，可以得到细胞的相关信息。
1.免疫学研究：流式细胞术可以用于研究免疫细胞的分布、表型、功能和亚群分析等。
通过检测特定免疫标记物，可以对不同免疫细胞的数量和活性进行定量分析。
2.药物筛选和疗效评估：流式细胞术可以用于筛选和评估药物的疗效。
通过检测细胞内的标志物或荧光染料，可以对药物对细胞生长、存活和细胞周期等进行评估。
3.癌症诊断和治疗：流式细胞术可以用于检测和识别癌细胞，并对肿瘤细胞的数量、种类和表型进行定量分析。
此外，流式细胞术还可以用于评估抗肿瘤治疗的疗效。
4.微生物学研究：流式细胞术可以用于检测和鉴定微生物的数量、生长状态和代谢活性。
通过使用特定的荧光探针，可以对微生物的功能和亚群进行分析。
5.干细胞研究：流式细胞术可以用于鉴定、分离和纯化干细胞。
通过检测干细胞表面的特定标志物，可以对干细胞的种类和活性进行定量分析。
6.遗传学研究：流式细胞术可以用于评估基因突变、染色体异常和基因表达水平等。
通过使用荧光标记的探针或染料，可以对细胞的遗传信息进行定量分析。
总结起来，流式细胞术是一种非常重要的细胞分析技术，其原理简单且灵敏，可以用于检测和分析各种不同类型的细胞。
在医学、生物学、药物研发等领域都有广泛的应用，对于细胞表型、功能和数量等方面的研究具有重要的意义。
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FCM的单细胞照明技术：这种椭圆形光斑的检测区保证样 11 本中的细胞是一个一个分别受到最大光照。
（三）光收集系统
• 滤光片的组成
– 长通滤片(LP)：只允许特定波长以上的光束通过； – 短通滤片(SP)：只允许特定波长以下的光束通过； – 带通滤片(BP)：只允许一定波长范围内的光束通过。
460 500 540 460 500 540 460 500 540
FITC、Alexa Fluor 488 PE PI PE-Cy5、PerCP APC、AF647
FL3
FL4 640 FL10
• 多色标记荧光素搭配原则：每个通道只能选择一种荧光素； 各个通道之间的荧光素可以随意搭配。
B 根据抗原表达强弱合理选择 抗体
• 不同的荧光素强度有所不同； • 高表达的抗原可用不太“亮” 的染料，更“亮”的荧光素分 配给表达低的抗原：
细胞因子
核酸含量
流式细胞术在生物医学中的应用举例
• • • • • • • • 血细胞免疫分型分析 细胞群比例分析 检测基因表达 染色体倍性分析 细胞周期分析 细胞凋亡 微生物分析 细胞绝对计数等
植物倍性-DAPI
细胞周期-PI
转染GFP表达-GFP
人外周血T淋巴细胞分析
GLC细胞凋亡检测
（一）激发光源 ：激光器
激光器 氩离子 产生的激光波长（nm） 通常产生488，514，UV(351/364)
红色 氦-氖（He-Ne） 633 蓝色固体 红色二极管 488 635
– 激光特点：单波长、高能量、小发射角、高稳定性光照。 – 现在仪器常配有仪器选配2-4根激光器
（ 二） 光 束 成 行 系 统
• 实验中，常利用FSC和SSC这两种参数的组合，区分不同的 细胞群体，去除碎片、死细胞和粘连细胞的干扰。
粒细胞
单核细胞
淋巴细胞
红细胞、死细胞和碎片
（三）阈值 Threshold
• 阈值：溶液中的杂质或者死细胞，很容易产生微小的干扰 信号，所以必须设置阈值，排除杂质、细胞碎片或体积较 小的死细胞。 • FSC反映细胞体积的大小，FCM应用时常选取FSC设定阈值。
LP 500
SP 500
BP500/50
Long pass
Short pass
Band pass
1.2.3 电子系统
光信号
电信号
数字信号
（一）光电检测器(photodetector)
• 光电二极管(photodiode) 光灵敏度低，测定强信号（FSC）； • 光电倍增管(photomultiplier, PMT) 光灵敏度高，测定弱信号（SSC, FL1, FL2, FL3, FL4)。
PARTEC 分选模块PPCS
Piezo HV: 400~560
分选指标
• 分选速度、分选纯度和分选收获率，相互影响。 • 分选时间由三方面决定：进样速度、目标细胞所占比例、 需要收集的细胞数。
需要细胞数
1 104 105 106 1.7 min 16.8 min 2.8 h
目标细胞所占比例(%)
鞘液
鞘液
细胞流
激光照射点 流体动力学聚焦示意图
流式细胞仪液流系统示意图
流动室
• 流动室(flow cell, flow chamber)是流式细胞仪的核心部件。 流动室中，被测细胞逐个通过，并在此与激光正交。
进样孔
鞘液Sheath 荧光信号 激光束
流动室结构图：单细胞发生器
1.2.2 光路系统
• 通道(channel)
一个光电检测器就是一个通道，有多少个光电二极管/倍 增管，就有多少个通道： – 散射光通道: FSC通道和SSC通道； – 荧光通道 • 通道命名方式： – 以FL(fluorescence)加数字命名，如FL1、FL2、FL3等。 – 以该通道接收的主要荧光素命名，如FITC通道、PE通道、 APC通道等。 小结： 分析型流式结构 液流系统 光路系统 电子系统
1.3.1 散射光信号
（一）前向散射光FSC
FSC信号方向与激光束平行，偏离度一般在1 -6度范围内， 亦称小角度散射光，主要反映被测细胞的体积大小和活力。
（二）侧向散射光SSC
• SSC方向与激光束和液流形成的平面相垂直，亦称90度散 射光，其信号强度反映细胞内部颗粒度和精细结构的变化。
19
（三）散射光的作用
流式细胞仪的发展及商品化
• • • • • • • • 1934 Moldavanl: First try (固定式细胞分析-流动式)； 1953 Crosland-Taylor: 鞘流系统(解决难题)； 1956 Coulter原理(血细胞计数器)； 1965 Kamentsky: 分光光度计定量细胞成分和散射光应用； 1967 Kamentsky等设计了细胞分选的装置； 1969 Vandilla等: 第一台荧光检测细胞计(鞘流聚焦、激光)； 1972 斯坦福大学: 研制出荧光激活细胞分选仪(FACS)； 1973 BD公司与斯坦福大学合作，研制生产第一台商用流 式细胞仪-FACS Ⅰ。 • 1975 Kohler和Milstein: 单克隆抗体技术(促进流式发展)。
5 20 s 3.4 min 3.4 min 50 2s 20 s 3.4 min
107
1.2 天
5.6 h
34 min
分选时间表(机器流速10000个/s时)
• 分选纯度指被分选出来的细胞所占的百分比，一般能达 99%以上。 • 分选收获率是指被分选出的细胞与原来总细胞的百分比。 • 分选纯度和收获率永远是相互矛盾的，纯度提高，收获率 降低，反之亦然。
CD4-FITC、CD25-APC、Foxp3-PE CD5
C 选择荧光波谱间光谱重叠较小的荧光染料进行组合， 同时需要正确的调节补偿。
1.5 流式分选
电荷式分选
–超声振动器(15-100kHz) lasers –液流充电系统 –高压偏转板 –收集装置(流式管、培养板)
断裂点(充电)
高压偏转板
电荷式分选装置
主要内容
• 一、流式细胞仪结构和原理
– – – – 流式细胞术简介 流式细胞仪的结构组成 流式细胞仪的光信号检测 流式分选
• 二、流式细胞术在生物医学中的应用
1.1 流式细胞术简介
• 流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是以流式 细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个 细胞(或生物学颗粒)的理化特性进行多参数定量 分析和分选的技术。
激发光波长 （nm） 490 488 发射光波长 （nm） 520 575
荧光素分子 FITC PE
中文名 异硫氰酸荧光素 藻红蛋白
PerCP
APC PE-Cy5 PE-Cy7 Alexa Flour 488 Alexa Flour 647
490
650 496/546 496/546 495 650
流式细胞仪的分类
• 分析型流式细胞仪
– 细胞样本分析后最终进入废液桶，不能回收利用。
• 分选型流式细胞仪
– 既能流式分析，还能对分析的目的细胞进行分选；
– 进样管道较长，还需要保持无菌状态，所以分选型流 式细胞仪一般只用于分选。
1.2 流式细胞仪的结构组成
• 液流系统
– 流动室 – 液流驱动系统
– 富集模式(enrich mode)
– 纯化模式(purify mode) – 单细胞模式(single cell mode)
2 流式细胞术在生物医学中的应用
FCM可检测下列细胞成分： • 表面标记物 核内抗原 • 胞浆标记物 • 核内标记物 • 可溶性成分
黏附因子 胞内抗原 表面受体 分泌到胞外的 细胞因子
675
660 670 767 519 665
多甲藻叶绿素蛋白
别藻青蛋白 藻红蛋白-花青素5 藻红蛋白-花青素7
23
（三）荧光抗体的选择
A 根据流式细胞仪选择抗体
• 流式细胞仪能检测的通道数(由激光器种类、数量和使用 的光学滤片决定)。如PARTEC CyFlow Space 分析模块：
488 FL1 FL2
• 流式细胞仪（Flow Cytometer ）是集细胞与分子 生物学、流体力学、激光技术、光电子技术、计 算机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术 为一体的一种新型高科技仪器。
流式细胞术的特点
• • • • • • 检测对象：单细胞悬液或生物颗粒； 检测参数：多参数； 检测特点：单细胞水平分析； 检测速度：高速，最高达上万个细胞/秒； 检测结果：精度高、准确性好； 可对目标细胞进行分选；
16
1.3 流式细胞术光信号检测
光信号的类型 • 散射光信号：与标记荧光素无关，
是细胞的固有参数。 – 前向散射光(forward scatter, FSC); – 侧向散射光(side scatter, SSC).
• 荧光信号
– 自发荧光 ：微弱 – 特异荧光：标记的荧光素分子发出 的荧光，比自发荧光强很多倍。
PMT
前向散射光 光电二极管
（二）电信号两种放大方式
• 由于光信号比较弱，需将其等比例放大，方便计算机分析 处理，一般信号的放大可以使用线性或对数两种方式。
线性(linear; lin) 对数(logarithmic; log)
• 一般FSC和SSC变异范围较小，故使用线性放大；荧光信号 变异范围较大，多使用对数放大。
5%
32%
默荧光信号
（一）荧光： 物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变
为高能状态，再回到低能状态时释放出的光。
激发波长 Excitation wavelength
＜
发射波长(荧光波长) Emission wavelength
（二）常用荧光素