液相柱常见问题及处理方法
液相色谱柱使用问题解析
液相色谱柱使用问题解析液相色谱柱使用疑难问题解析就液相色谱柱的安装，使用和维护知识，以及各种柱压、峰形和色谱柱寿命等问题前来提问，也欢迎液相色谱方面的高手前来交流切磋。
内容提纲：一、液相色谱柱的安装、启用和维护中的重点注意事项1、柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配2、溶剂的匹配转换3、新柱使用前的平衡和老化4、pH使用范围5、色谱柱的保存二、柱压问题1、填料破碎和使用后，有填料粉末生成2、颗粒物堵塞引起柱压上升和对策1）预防措施2）故障排除3、化学污染物引起柱压上升和对策1）预防措施2）故障排除三、峰形问题1、峰后拖2、峰前延3、其他峰形问题四、保留时间问题1、保留时间的重现性2、保留时间漂移3、柱与柱之间的重现性4、批与批之间的重现性五、寿命问题六、其他疑难的色谱技术问题一.安装、启用和维护中重点注意事项色谱柱既是液相色谱仪的最核心部件，价格相对昂贵，请牢记它是高档仪器中的高档部件，给它以足够的尊重和关怀。
如避免强烈的碰撞和震动，尽管色谱柱从1米高的实验台掉落到水泥地上不至于100%会损坏，但50%的可能损坏你也承受不起。
另外不要让柱床变干，避免在严寒环境受冻等。
1. 柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配色谱柱是消耗品，不是仪器原配的情况很多。
上图表明柱连接的6种不同方式（数字单位是英寸），如果两者类型不匹配将会产生漏液或者死体积过大的现象。
接头比柱头深度长，不易拧紧而漏液；接头比柱头深度短，柱头内留有空隙而产生死体积，使谱带展宽和峰拖尾。
2. 溶剂的匹配转换色谱柱内保存溶剂和仪器系统内存留溶剂，如果和流动相不匹配，使用前需进行转换。
特别是流动相含缓冲盐时，如保存溶剂是纯有机相或有机相比例高，直接将新柱接入使用，会导致缓冲盐在柱内结晶析出，最严重会将新柱永久不可逆地损坏。
正相柱保存溶剂一般为正己烷，如果要转换成HILIC柱模式使用，由于正己烷和甲醇乙腈的互溶性不好，转换中间需用二氯甲烷或乙酸乙酯过渡。
液相色谱柱的经典问题总结
液相色谱柱的经典问题总结1、什么是反相柱、正相柱？“反相”和“正相”的概念是液相色谱法早期提出的概念，当时键合相色谱柱尚未出现，固定相被涂覆在载体表面，极易流失，为此科学家对流动相使用给出了合理的建议：流动相极性与固定液极性应具有较大差别，以减少固定液流失。
固定相极性弱于流动相时的液相色谱法被称为反相色谱法，固定相极性强于流动相时的液相色谱法被称为正相色谱法。
尽管目前键合相色谱柱已成为主流，但这一概念在色谱方法开发、预测出峰顺序等方面具有重要意义。
由上面的介绍可知具体的色谱方法、色谱柱属于正相还是反相不仅取决于固定相极性，同时还取决于流动相极性。
C18（硅胶键合十八烷基硅烷）、C8（硅胶键合辛基硅烷）、PH（硅胶键合苯基硅烷）等色谱柱，由于固定相极性极低，比目前已知的任何流动相的极性都要低，因而是标准的反相柱；Silica（硅胶）、NH2（硅胶键合氨丙基硅烷）具有较高的极性，主要用于分离带有极性基团的化合物，所用流动相的极性通常低于这些固定相，因而是标准的正相柱。
CN（硅胶键合腈丙基）的极性适中，当流动相极性超过CN时，它属于反相柱，反之则是正相柱。
2、色谱柱规格对分析结果会产生何种影响？色谱柱内径决定载样量，载样量与内径的平方成正比；色谱柱长度与塔板数成正比，与柱压成正比；粒径影响涡流扩散相，粒径越小涡流扩散相越小，柱效越高，粒径与柱效近似成反比；粒径越小，压力也越大，压力与粒径的平方成反比。
填料孔径对分析对象的分子量有限制，当孔径为分析物尺寸的5倍以上时，分析物才能顺利通过孔隙，孔径处于60~120 Å的色谱柱适用于相对分子量小于10000的分析物，孔径为300 Å的色谱柱可以满足分子量处于10000以上的大分子化合物分析。
3、液相色谱分析中如何才能提高分离度？下式为分离度计算公式：N：柱效反映色谱柱性能，柱效越高，分离度越好。
在其他条件恒定的情况下，塔板数增加一倍，分离度仅提高40%。
高效液相色谱常见故障及解决方案
高效液相色谱常见故障及解决方案1.压力过高或过低-压力过高可能是由于柱堵塞或流动阻力增加所致。
解决方案包括更换柱、清洗柱或检查管路是否存在问题。
-压力过低可能是由于泵的磁力搅拌器不工作或进样器封堵所致。
解决方案包括检查泵的磁力搅拌器是否工作正常，清洗进样器。
2.峰形不对称-峰形不对称可能是由于进样量不均匀或柱温度过高所致。
解决方案包括确保进样量均匀和降低柱温度。
3.峰尾或前肩-峰尾可能是由于柱温度过高、流速过快或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括降低柱温度、减慢流速或调整pH值。
-前肩可能是由于流动相中存在杂质或柱堵塞所致。
解决方案包括更换流动相或清洗柱。
4.杂峰或基线噪声-杂峰可能是由于样品纯度不高、固定相老化或试剂污染所致。
解决方案包括提高样品纯度、更换固定相或检查试剂是否污染。
-基线噪声可能是由于进样器密封不良、流动相气泡或电噪声所致。
解决方案包括检查进样器密封情况、减少流动相中的气泡或检查电子设备是否存在干扰。
5.柱寿命短-柱寿命短可能是由于样品预处理不彻底、柱收尾不当或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括增加样品预处理步骤、正确收尾柱或选择合适的流动相pH值。
6.流量不稳定-流量不稳定可能是由于柱堵塞、进样器密封不良或流动相流速波动所致。
解决方案包括清洗柱、检查进样器密封情况或调整流动相流速稳定性。
7.进样量偏差-进样量偏差可能是由于进样器封堵、进样器针头磨损或进样器流速不稳定所致。
解决方案包括清洗进样器、更换进样器针头或调整进样器流速稳定性。
8.柱温度不稳定-柱温度不稳定可能是由于温控系统故障或环境温度变化所致。
解决方案包括检查温控系统是否工作正常或采取措施保持恒定环境温度。
这些是HPLC常见故障及其解决方案的例子。
在实际操作中，操作人员应该根据具体情况诊断和解决故障，并遵循相关的操作规程和安全操作指南。
液相常见问题及解决方法
液相常见问题及解决方法问题1：液相困扰人群广泛且珍贵液相是化学实验中常见的一种分析技术，它广泛应用于各个领域。
然而，在进行液相分析时，常常出现一些问题，影响了实验结果的准确性和稳定性。
以下是液相常见问题及解决方法的一些示例：问题1.1：样品制备不足导致分析结果不准确•问题描述：样品制备不足是液相实验中常见的问题之一。
样品制备不足可能导致分析结果偏低或波动大，影响实验结果的可靠性。
•解决方法：1.确保样品制备过程中的各个步骤严格按照标准操作进行，避免操作失误。
2.采用适当的提取方法和提取溶剂，确保样品中目标成分的充分提取。
3.样品制备前要进行充分的前处理，如过滤和稀释等，以避免可能影响分析的干扰物质。
问题1.2：柱寿命短导致分离效果下降•问题描述：在液相分析中，柱寿命是一个重要的指标。
柱寿命短可能导致分离效果下降，分析结果不准确。
•解决方法：1.使用高质量的液相色谱柱，选择具有较长寿命的柱材料和填料，以提高柱寿命。
2.避免使用过高的流速和压力，以减少对柱的损伤。
3.注意样品的准备和预处理，以减少对柱的污染。
问题1.3：溶剂残留影响结果准确性•问题描述：溶剂残留是液相实验中常见的问题之一。
溶剂残留可能会干扰分析结果，影响结果的准确性。
•解决方法：1.在制备溶剂和洗涤溶剂时，选择纯度高、溶剂残留低的溶剂。
2.采用适当的溶剂饱和度和流速，以避免溶剂残留的问题。
3.在分析前，进行合适的样品预处理，如蒸发浓缩和固相萃取等，以减少溶剂残留的影响。
问题2：常见的仪器故障及解决方法液相实验中，仪器故障是常见的问题之一。
仪器故障可能导致实验无法进行或结果不可靠。
以下是常见的仪器故障及解决方法的示例：问题2.1：泵压不稳定导致结果波动大•问题描述：泵压不稳定是液相实验中常见的问题之一。
泵压不稳定可能导致分析结果波动大，影响分析结果的可靠性。
•解决方法：1.检查液相泵的密封件是否正常，是否需要更换。
2.确保供液系统中的气泡被完全排除，以避免泵压波动。
液相色谱柱峰高降低出现峰分叉
液相色谱柱峰高降低出现峰分叉
液相色谱柱峰高降低和峰分叉的问题可能由以下几个原因引起：
1. 柱被污染：柱子可能受到前期样品或其他杂质的污染，导致分离效果下降和峰分叉。
可以尝试使用一些洗脱剂或者重修柱。
2. 柱老化/破损：柱子可能由于使用时间过长或者操作不当而
老化或者破损，导致色谱效果下降和峰分叉。
可以更换新的柱子。
3. 柱温度过高：柱温度过高会导致柱内液体的挥发和背压升高，进而导致峰形不良和峰分叉。
可以降低柱温度或者优化柱温控制方法。
4. 流速过高：流速过高可能导致分离不完全和峰形不良，进而出现峰分叉的问题。
可以降低流速或者优化流速控制方法。
5. 样品溶解度差：样品溶解度差可能导致分离不完全和峰形不良，可以尝试调整样品的溶解度或者优化样品预处理方法。
6. 色谱条件不合适：可能是流动相的配比不合适、柱温度不合适、流速不合适等导致峰分叉。
可以进行条件优化和适当调整。
需要根据具体实验条件和问题进行综合分析，逐一排查，找到导致峰高降低和峰分叉的原因，并采取相应的措施解决问题。
液相色谱柱的常见问题与解决方法及解决方案
液相色谱柱的常见问题与解决方法及解决方案液相色谱柱在使用过程中常见的问题有柱压上升、峰拖尾变宽、分别效果下降等。
一般情况下这些都是色谱柱使用时间过长引起的正常现象，只需对色谱柱进行清洗与再生便可解决。
但是假如柱压蓦地上升，则需要检查色谱柱是否显现问题。
可能的原因有以下几点：1.柱头的过滤筛板被污染解决方法：卸下柱头螺丝，将过滤筛板取下，放置在30%左右的稀硝酸中，然后用超声波清洗10分钟。
再将过滤筛板放入超纯水，超声清洗约10分钟，之后将过滤筛板重新装回色谱柱。
2.填料被污染解决方法：①卸下柱头螺丝，将前端被污染的填料用专用小匙挖出，然后重新填入相同的填料。
②选择合适的流动相，按色谱柱使用的方向冲洗，冲洗量须大于色谱柱体积的20倍，将污染物溶解并冲杰出谱柱，然后，依照色谱柱标明的箭头方向使用。
3.缓冲盐溶液碰到纯有机相析出盐结晶，堵塞色谱柱解决方法：先用冲洗色谱柱，将盐晶体溶解并冲杰出谱柱，然后换高浓度甲醇水溶液或其他有机溶剂作为流动相。
4.流动相的PH值偏差过大，造成固定相溶解或结构被破坏解决方法：此时很难将色谱柱修复通常需要直接更换色谱柱。
高效液相色谱仪常见问题及解决方法高效液相色谱仪作为一种高精密仪器，假如在使用过程中不依照正确操作的话，就简单导致一些问题。
其中常见的有柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。
一、液相色谱仪压力过低压力过低的现象一般是由于系统泄漏，处理方法：找寻各个接口处，特别是色谱柱两端的接口，把泄漏的地方旋紧即可。
当然还有一个原因就是泵里进了空气，但此时表现的往往是压力不稳，忽高忽低，更严重一点会导致泵无法吸上液体。
处理方法：打开Purge阀，用3～5ml/min的流速冲洗，假如不行，则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。
二、液相色谱仪柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要紧密注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分别效果及保留时间等紧密相关。
所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。
液相色谱柱的清洗
新柱使用前的冲洗
新柱在使用前应先认真阅读说明书及性能测试报告, 了解柱子的性能指标。分析用的流动相往往与柱子 的保存试剂不同,故在分析样品之前,应使用合适的 试剂将柱子中的保存试剂清洗出来。要注意清洗用 的流动相与保存溶剂的相溶性。
1、反相柱如岛津C18、C8等柱保存在70%甲醇中,可
用10～20倍柱体积的甲醇或乙腈来平衡色谱柱。流 速应缓慢提高,如开始0.3mL/min,10～15min后可慢 慢加快。
色谱柱常见问题的成因
3、缓冲液中盐的析出：当流动相中含有缓冲 盐溶液，而且分析结束后,如果没有先用水进 行冲洗,而是直接用纯有机相冲洗,瞬间柱子 中的微环境是高有机相、低水相。这时流动 相中的缓冲盐溶液极易析出盐份,将柱子堵塞 ,使柱压升高,柱效下降。 4、色谱柱变干：如果对色谱柱保存不当,使 色谱柱中的保存液全部挥发,柱子内部变干, 造成色谱柱的损伤,会影响分离效果。
对色谱柱进行适当清洗的意义
以上提到的部分故障可以通过适时、适当的 清洗得到解决，恢复色谱柱的功能，延长色 谱柱的使用寿命。 下面对比较常见的几种型号的色谱柱的清洗 方法进行讨论，具体的冲洗方法要根据实际 情况作适当的选择和调整。当然，不同的用 户和色谱产品厂商对自己的色谱柱会有不尽 相同的处理方法。
色谱柱常见问题的成因
1、硅羟基的死吸附 ：硅胶粒子表面存在硅 羟基，这些硅羟基会吸附样品和流动相中的 很多物质，当吸附达到饱和时就会出现柱效 下降、峰形劣化的现象。有些吸附是可逆的， 可以通过清洗解决。 2、重金属离子：重金属以金属氧化物的形式 残存在硅胶粒子的表面,这些金属氧化物很容 易与其它化合物形成螯合物,使其被氧化,造 成峰形劣化。
反相柱日常清洗
关于纯水的问题：纯水极性很强,ODS等填料的硅烷 键是非极性的,在纯水中各键合基团会因疏水作用而 改变空间构型, 使柱效很快降低。很多公司推出可 以使用100%纯水进行冲洗的柱子,原理是键合基团互 相之间有排斥力,这类柱子一般键合相比较丰富，游 离硅羟基比较少，从而阻止了键合基团性能的改变。 能否用纯水冲洗要参考该色谱柱的说明书。
安捷伦液相色谱仪常见问题及相应的解决方法 液相色谱常见问题解决方法
安捷伦液相色谱仪常见问题及相应的解决方法液相色谱常见问题解决方法安捷伦液相色谱仪常见问题及相应的解决方法：一、安捷伦液相色谱仪常见问题柱压高原因分析以及解决方法：（1）缓冲液盐分如（乙酸铵等）沉积于柱内。
先用40～50℃的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压渐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟。
（2）样品污染沉积。
由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗柱子，换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子，再用换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，zui后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。
二、安捷伦液相色谱仪常见问题不稳定原因分析以及解决方法：原因：系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物，使得两者不能密封。
解决方法：处理工作中注意察看流动相的量，保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底，避开吸入空气，流动相要充分脱气。
如为单向阀和阀座之间夹有异物，拆下单向阀，放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。
三、安捷伦液相色谱仪常见问题指示原因分析以及解决方法：（1）泵密封垫圈磨损。
更换密封垫圈（2）大量气泡进入泵体。
在泵作用的同时，用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮忙抽出空气。
四、安捷伦液相色谱仪常见问题重复性差原因分析以及解决方法：（1）进样阀漏液。
更换进样阀垫圈（2）加样针不到位。
保证加样针插到底，注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态，以保证进样量的精准。
（3）液量不足。
五、安捷伦液相色谱仪常见问题峰分叉原因分析以及解决方法：（1）色谱柱被污染。
先用纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子（冲洗时间的长短由样品污染的情况而定），再换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，zui后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。
（2）柱头填料塌陷。
拧开柱头，检查柱填料是否硬结或塌陷。
去除硬结部分（污染的填料），装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧反复几次，直至装满填平。
液相色谱柱的使用注意事项流动相和样品处理 液相色谱操作规程
液相色谱柱的使用注意事项流动相和样品处理液相色谱操作规程液相色谱柱的使用注意事项：流动相和样品处理 1. 色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特别说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是液相色谱柱的使用注意事项：流动相和样品处理 1. 色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特别说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很简单析出，堵塞色谱柱。
2. 流动相：1）在进行样品检测前，至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。
流动相确定要使用色谱级别的溶剂。
如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避开细菌产生。
2）流动相使用前需用微孔滤膜过滤,除去流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。
缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避开溶解度变化造成产生新的沉淀。
不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱，以免柱性能损坏（添加5％的有机溶剂冲洗色谱柱，同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。
还可以使色谱柱更简单平衡）。
3）流动相需脱气后使用，可避开因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。
假如测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区分，应当使用过度分布的形式进行平衡。
避开由于流动相的蓦地变化造成柱压加添过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。
正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。
4）流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水*好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
假如将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应当定期清洗或更换。
5）以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0—8.0，BDSC18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0—10.0、当必需要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立刻用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
高效液相色谱常见问题原因及处理方法
高效液相色谱法一．仪器的维护与常见问题处理若液相出现规律性基线波动，长时间不平稳可能原因是什么？快速解决方法：一般为仪器系统出现气泡，最好使用纯甲醇长时间冲洗系统（不少于3小时，特殊情况要12小时左右）柱压逐渐升高可能原因是什么？快速判断①色谱柱出现堵塞②针座堵塞③进样针出现堵塞④系统管路中有未冲洗干净的盐⑤滤芯脏了解决方法①色谱柱出现堵塞：一种是将堵塞了色谱柱的位置拆卸，取出里面的筛网用水或甲醇超解（不建议采用，除非没有其他方法）另一种是将堵塞一头色谱柱链接在仪器上另一头不要链接，先用10%甲醇根据色谱柱柱压调节流速冲洗一小时左右，然后换成纯甲醇再以此方法继续冲洗，根据其柱压随时调整流速。
②针座堵塞与进样针出现堵塞：情况不严重则将它们拆卸后用水超解几分钟就可以了，若堵塞严重只有更换新的（堵塞不代表不能用，若无明显的质量损坏如：变形，滑口，开裂等，后续修好后还能做备件使用）③系统管路中有未冲洗干净的盐：用水或10%异丙醇对系统冲洗，冲洗后柱压正常，则可正常使用。
（注意不建议对系统反冲洗，会造成管路中的残留盐类物质重新回到系统中造成二次堵塞。
）④滤芯脏了：更换滤芯若出现保留时间飘移可能原因是什么？快速判断原因：①流动相混合不均匀②柱温不稳③压力不稳④密封圈松动⑤对于是四元泵的液相，其比例阀区域有堵塞情况（流动相是按比例配置，若比例阀区域堵塞，进样第一针时，可能有一个阀只进入25%另一个阀则是75%，进样第二针时则会变成一个阀进入20%，另一个阀80%）快速解决方法：①流动相重新配置，并按要求混匀②保证环境温度与仪器设定温度相差不大并稳定③系统冲洗平衡后方能实验④更换或调整密封圈⑤将出现堵塞区域的设备进行超声清洗。
1.气相检验化学残留：对照品重复性必须符合要求，但供试品重复性不做要求（上海海尼是对照品重复性必须符合要求，但配置两个供试品，各进一针不计算重复性。
目前海陵是对照品与供试品都要计算重复性）液相进样针无法正常采集?解决方法：一般为仪器机械故障，若进样器显示信号一直为红色，可能是进样针损坏或机械臂故障。
你知道液相色谱漏液原因与解决方法吗 液相色谱常见问题解决方法
你知道液相色谱漏液原因与解决方法吗液相色谱常见问题解决方法液相色谱从开始的流动相瓶到结束的废液瓶之间，其流通管路是全封闭的，虽然内部压力很高，但色谱仪的外部不会显现一滴液体。
假如显现了漏液现象，系统一般会发出报错信号，无法正常工作。
对于操作人员来说，漏液是一件让人苦恼的事情，由于有些漏液问题比较直观，简单解决，但有些漏液问题比较多而杂，需要深入排查。
一、接头处漏液接头处漏液一般发生在色谱柱接头处，此处的漏液现象比较直观，一般是液体积流在色谱柱头，造成压力波动。
通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。
但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。
假如通过略微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必需将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应当更换掉。
二、进样阀漏液1、转子密封圈磨损太厉害或者损坏，造成密封不严。
拆下六通阀，检查转子密封圈，可单独购买，依据说明书自行安装更换。
假如定子磨损比较严重的话，有必要也需更换。
2、废液管产生虹吸或者堵塞，造成废液逆流。
此时需要保持废液管高于废液液面，或者更换、疏通废液管，保证废液排放正常。
3、进样口密封松动或者进样针头尺寸不合适。
需要调整进样口的密封圈或者更换合适的进样针头。
三、泵漏液泵头漏液一般都是由于密封不好引起的，需要检查相关接口处的密封情形。
1、单向阀、接头松动。
这是首先要排查的项目，但单向阀和接头也不能拧得过紧，避开磨损。
2、柱塞杆磨损刮伤或者柱塞密封垫损坏导致的柱后漏液，这是zui常见的问题，此情况一般会显现以下三种现象，一是柱塞杆磨损导致与密封圈之间有微小缝隙；二是柱塞杆与密封圈不匹配；三是泵头紧固螺钉没有拧紧。
在确定拧紧的情况下，需要更换柱塞杆或柱塞密封垫。
3、比例阀损坏。
首先检查手紧接头，如有损坏，则立刻更换；再检查隔膜，假如发觉漏液则立刻更换。
四、检测器漏液1、流通池垫片损坏，造成漏液。
在使用过程中避开过大的压力，拆开流通池，检查垫片，损坏严重时需要更换垫片。
液相常见问题及解决方法
液相常见问题及解决方法液相技术是化学和生物学研究中常用的分离和纯化方法。
然而，在液相实验中，常常会遇到各种问题。
本文将介绍液相实验中常见的问题及其解决方法，帮助读者更好地进行实验。
1. 样品溶解不彻底问题描述：在液相实验中，有时样品无法完全溶解，导致分析结果不准确或无法得到预期的结果。
解决方法： - 加热：将样品加热到适当温度，有助于提高溶解度。
- 使用溶剂辅助溶解：使用适当的溶剂辅助样品的溶解。
可以尝试不同比例的混合溶剂。
-超声处理：使用超声波处理仪器进行样品处理，能够增加样品与溶剂之间的接触面积，促进溶解。
- 搅拌：使用磁力搅拌器或振荡器等设备进行搅拌，有助于加速样品与溶剂的混合。
2. 色谱柱压力过高问题描述：在色谱柱操作过程中，发现色谱柱的压力异常高，可能导致柱子破裂或分析结果不准确。
解决方法： - 检查进样量：减少样品进样量，避免过高的样品负荷。
- 检查流速：降低流速，可以减少柱子内部的阻力，从而降低压力。
- 更换柱头过滤器：如果柱头过滤器堵塞，也会导致压力升高。
及时更换过滤器。
- 检查固定相状况：如果固定相老化或受污染，也会导致压力升高。
及时更换固定相。
3. 色谱峰形状异常问题描述：在液相色谱分析中，有时会出现色谱峰形状异常的情况，如尾峰、分离不良等。
解决方法： - 调整流速和梯度程序：适当调整流速和梯度程序可以改善色谱峰形状。
较低的流速和合理的梯度程序可以提高分离效果。
- 更换柱子：如果柱子老化或受污染，也会导致色谱峰形状异常。
及时更换柱子。
- 检查进样量：过高的进样量可能导致色谱峰形状异常。
减少进样量可以改善峰形。
- 检查溶剂：溶剂的质量和纯度也会影响色谱峰形状。
使用高质量和纯度的溶剂。
4. 色谱峰漂移问题描述：在液相色谱分析中，有时会出现色谱峰漂移的情况，即色谱峰位置发生变化。
解决方法： - 检查流速和梯度程序：适当调整流速和梯度程序可以减少色谱峰漂移。
较低的流速和合理的梯度程序可以提高分离效果。
液相色谱常见问题与解决方法
（一）峰形及保留时间变化（二）进样阀可能发生的问题（三）压力异常问题（四）漏液问题（六）色谱柱使用前注意事项色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
1、样品的前处理：a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
2、流动相的配制：液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。
c、流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果；同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
3、流动相流速的选择：因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。
对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。
对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min为佳。
当选用最佳流速时，分析时间可能延长。
可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
注意：1．由于甲醇廉价，对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)。
液相色谱故障处理
液相色谱故障处理背景介绍液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是化学分析中常用的一种分析技术，它以液体为移动相，在色谱柱中进行化合物的分离。
液相色谱是一种高效、灵敏和精确的分离和定量分析技术，广泛应用于药物、化学、生物、环境等领域的分析试验中。
然而，在实验操作过程中，难免会出现仪器故障，下面将介绍常见液相色谱故障及其处理措施。
常见故障及处理措施流量异常1.缓冲液流量异常原因：缓冲液中的盐分浓度过高，柱子内部出现盐颗粒等堵塞物抑制缓冲液流动，或者柱子内部压力过大等等。
解决方法：检查缓冲液中盐分浓度是否合适，清洁柱子。
2.流量计问题原因：流量计故障或者气泡引起的不稳定。
解决方法：检查流量计并更换或调整。
3.泵压异常原因：泵装置故障或挡板不启动。
解决方法：检查泵装置、更换出现问题的部件。
峰形异常1.前驱峰过宽原因：注入体积过大、流速过快、柱子内部存在异物等等。
解决方法：检查注射器、调整流速、清洗柱子。
2.分离不良原因：柱子老化、柱内填充物流速不匹配等等。
解决方法：检查柱子是否到期、更换柱子。
3.后峰异常原因：柱内填充物表面污秽和老化，柱子内部流速不匹配。
解决方法：更换柱子内部填充物。
噪声问题1.底噪过高原因：仪器的部分环境噪声，如压力传感器、泵装置等等。
解决方法：检查周围环境是否干净，其他仪器是否产生干扰。
2.漂移噪声原因：流动相组成不稳定，温度变化大等等。
解决方法：检查液相分离液压力、温度等。
结论液相色谱检测是化学分析中常用的测试技术，流量、峰形和噪声都是故障发生的常见原因，只有全面分析各种原因，并找到相应的解决方法，才能顺利进行实验，保证实验准确性和可靠性。
液相色谱柱选择方法及保存 液相色谱常见问题解决方法
液相色谱柱选择方法及保存液相色谱常见问题解决方法液相色谱柱选择方法及保存一、液相色谱柱选择方法液相色谱柱选择的简单思路1.确定分别目的确定你的应用是否要求高分别度、短分析时间、高灵敏度、长柱寿命，低的操纵本钱等等。
2.评估分析物的化学性质评估分析物的化学性质.诸如化学结构、溶解性、稳定性等等。
3.选择合适的色谱柱了解色谱填料的物理和化学性质。
液相色谱柱的保存1.反相色谱柱每天试验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应当在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
2.长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必需存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度*好是室温。
一）压力异常操作压力的变化往往是故障的征兆。
A、没有压力显示，没有流动相流动：原因解决方法1、电源问题接通电源，开机2、保险丝被烧坏更换保险丝3、掌控器设定不正确或设定失败实行恰当的设定、修理或更换掌控器4、柱塞杆折断更换柱塞杆5、泵头内有空气溶剂脱气、启动泵抽出空气6、流动相不足补充流动相、更换入口滤头7、单向阀损坏更换单向阀8、漏液拧紧或更换手紧接头B、流动相流动正常，但没有压力显示：原因解决方法1、仪表损坏更换仪表2、压力传感器损坏更换压力传感器C、压力持续偏高原因解决方法1、流速设定过高调整流速设定2、柱前筛板堵塞反冲色谱柱、更换筛板、更换色谱柱3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀使用恰当的流动相、冲洗柱塞杆。
4、色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱5、进样阀损坏清洗或更换进样阀6、柱温过低提高温度7、掌控器失常修理或更换掌控器8、保护柱堵塞清洗或更换保护柱9、在线过滤器堵塞清洗或更换在线过滤器D、压力持续偏低：原因解决方法1、流速设定过低调整流速2、系统漏液确定漏液位置并维护和修理3、色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱4、柱温过高降低温度5、掌控器失常维护和修理或更换掌控器E、压力波动：原因解决方法1、泵中有气体溶剂脱气、从泵中除去气体2、单向阀损坏更换单向阀3、泵密封损坏更换泵密封4、脱气不充分重新过滤一遍、溶剂脱气5、系统漏液确定漏液位置并维护和修理6、使用梯度洗脱由于流动相粘度的变化引起的压力波动二）漏液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。
高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法
高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法1色谱柱跑干了，处理方法：将贮液瓶装入重蒸水，首先按purge键，将柱前气柱排出，若无法排出，可将色谱柱前拆下，用注射器抽吸。
待柱前气体排空后，连接色谱柱，用水高低流速交替冲洗色谱柱，直至柱压稳定为止。
2.基线不稳，有静电，处理方法：检查接地是否良好。
3.峰面积变化非常大，处理方法：检查是否进样阀堵塞。
4.基线突然提高，变粗，处理方法：检查样品池能量，若低于正常值，说明检测器污染。
5.柱压变动范围较大，处理方法：多为进气泡。
高低流速交替冲洗。
6.柱效或峰形突然变差，处理方法：更换预柱。
7塔板数低：色谱柱选择不对，二次保留、峰形不好的影响8色谱柱易变性：色说柱选择不对，二次保留的影响9色谱柱寿命短：色谱柱选择不对，样品需预处理(PH 3或PH 7)10保留值变化：色谱柱平衡不够，流动相比例改变11出现新的干扰峰：初始分离不够或初始样品无代表性选择波长要从以下几个方面考虑：1.检测波长要大于溶剂截止波长。
如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。
溶剂有强吸收后，基线抬高，减小检测的线性范围而且会加大基线噪声，对溶质的检测灵敏度下降。
2.对各组分都要有适当的吸收。
一般是不可能做到的。
所以只要选择一个对大多数组分都有较大吸收的波长就可以了。
3.外标法定量时，要选择被测组份最大吸收波长。
254nm对常见的共轭结构和羰基官能团都有吸收。
对饱和基团也有弱的吸收。
而对于常见的乙腈、甲醇的透过率很高。
是在不知道用什么波长时最理想的试验波长。
(一)涡流扩散(Eddy diffusion)流动相碰到较大的固体颗粒，就像流水碰到石头一样产生涡流。
如果柱装填得不均匀，有的部分松散或有细沟，则流动相的速度就快；有的部位结块或装直紧密则流就慢，多条流路有快有慢，就使区带变宽。
因此，固相载体的颗粒要小而均匀，装柱要松紧均一，这样涡流扩散小，柱效率高。
(二)分子扩散(Molecular diffusion)分子扩散就是物质分子由浓度高的区域向浓度低的区域运动，也称纵向分子扩散。
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液相色谱常见问题及处理方法HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法1、样品量不足，解决办法为增加样品量2、样品未从柱子中流出。
可根据样品的化学性质改变流动相或柱子3、样品与检测器不匹配。
根据样品化学性质调整波长或改换检测器4、检测器衰减太多。
调整衰减即可。
5、检测器时间常数太大。
解决办法为降低时间参数6、检测器池窗污染。
解决办法为清洗池窗。
7、检测池中有气泡。
解决办法为排气。
8、记录仪测压范围不当。
调整电压范围即可。
9、流动相流量不合适。
调整流速即可。
10、检测器与记录仪超出校正曲线。
解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。
为什么HPLC柱柱压过高柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。
其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。
1、拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。
这时，如果柱压仍不下降，再检查；4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。
若柱压还高，请与厂商联系。
一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。
液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。
2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化漂移现象1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡快速变化现象1. 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。
3、流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合HPLC 仪器问题1、我的HPLC泵压明显的偏高，请问可能的原因？答：流速设定过高；流动相或进样中有机械杂质，造成保护柱、柱前筛板或在线过滤器阻塞；流动相粘度过大；柱温过低；缓冲盐结晶；压力传感器故障。
2、基线不稳，上下波动或漂移的原因是什么，如何解决？答：a.流动相有溶解气体；用超声波脱气15-30分钟或用充氦气脱气b.单向阀堵塞；取下单向阀，用超声波在纯水中超20分钟左右，去处堵塞物c.泵密封损坏，造成压力波动；更换泵密封d.系统存在漏液点；确定漏液位置并维修f.柱后产生气泡；流通池出液口加负压调整器g.检测器没有设定在最大吸收波长处；将波长调整至最大吸收波长处h.柱平衡慢，特别是流动相发生变化时；用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。
3、接头处为何经常漏液，如何处理？答：接头没有拧紧；拧松后再紧，手紧接头以手劲为限，不要使用工具，不锈钢接头先用手拧紧，再用专用扳手紧1/4-1/2圈，注意接头中的管路一定要通到底，否则会留下死体积。
接头被污染或磨损；建议更换接头。
接头不匹配，建议使用同一品牌的配件。
4、进样阀漏液是如何造成的？答：a.转子密封损坏；更换转子密封b.定量环阻塞；清洗或更换定量环c.进样口密封松动；调整松紧度d.进样针头尺寸不合适，一般是过短；使用恰当的进样针（注意针头形状）e.废液管中产生虹吸；清空废液管谱图问题1、问：造成峰拖尾的原因是什么，如何消除？答：a.筛板阻塞；反冲色谱柱、更换进口筛板b.色谱柱塌陷；填充色谱柱c.有干扰物质的存在；使用更长的色谱柱、改变流动相或更换色谱柱e.流动相PH值不合适；调整PH值，对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰f.样品与填料表面的溶化点发生反应；加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂或更改色谱柱2、问：造成峰分叉的原因是什么，如何消除？答：保护柱或分析柱污染；取下保护柱再进行分析。
如果必要更换保护柱。
如果分析柱阻塞，拆下来清洗。
如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。
如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。
样品溶剂不溶于流动相；改变样品溶剂，如果可能采取流动相作为样品溶剂。
3、问：K值增加时，拖尾更严重，这是为什么？答：反相模式，二级保留效应；a.加入三乙胺（或碱性样品）b.加入乙酸（或酸性样品）c.加入盐或缓冲剂（或离子化样品）d.更换一支柱子4、问：保留时间的波动有几种可能的原因？答：温控不当；调节好柱温。
流动相组分变化；防止流动相蒸发、反应等，做梯度时尤其要注意流动相混合的均匀。
色谱柱没有平衡；在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。
液相色谱常用符号与术语表ACN 乙腈AcetonitrileAUFS 满量程的吸光度单位Absorbance units, full scaleAs 峰不对称因子B 二元流动相中的强溶剂；例如：反相HPLC的甲醇/水混合液中的甲醇BSA 牛血清白蛋白（一种蛋白质）Bovine serum albuminCAF 咖啡因（中性溶质）CaffeineCRF 色谱响应因子Chromatographic response function；色谱图总分离度的定量指标dc 色谱柱内径（cm）DMOA 二甲基辛胺DimethyloctylamineDNB 2,4-二硝基甲酰（基）2，4-Dinitrobenzoyldp 色谱柱填料的粒度（cm）DRYLAB 液相资源公司（LC Resources INC.)的计算机模拟软件。
DRYLAB I用于等度预测，DRYLAB G用于梯度预测F 流动相的流速（ml/min）FC-113 1，1，2-三氟-1，2，2-三氯乙烷GPC 凝胶渗透色谱法Gel-permeation chromatographyHA 酸性溶质，能电离出A-Hex 己烷HexaneHr 二相邻谱带之间的谷高HV A 高香草酸Homovanillic acidh’ 峰高h1,h2 相邻谱峰1和谱峰2的峰高IEC 离子交换色谱法Ion-exchange chromatographyIP 离子对Ion-pairIPC 离子对色谱法Ion-pair chromatographyJ 色谱峰强度参数K’ 所给谱峰的容量因子，k’=(tR-t0)/t0=tR’/t0，tR=t0(1+k’)k 梯度洗脱过程中，某溶质的k’的平均值或有效值kw 以水做流动相k’的外推值k1,k2 相邻谱峰1和谱峰2的容量因子L 色谱柱长度（cm）Lc 检测器流动池光路的长度（cm）M 溶质的分子量MC 二氯甲烷Methylene chlorideMDST 混合设计统计技术Mixture-design statistical technique；一种优化流动相的软件MeOH 甲醇MethanolMTBE 甲基叔丁醚Methyl-t-butyl etherMW 溶质的分子量N 色谱柱塔板数NAPA N-乙酰普鲁卡因胺N-Acetylprocainamide（碱性溶质）N0 检测器的基线噪音ODS 十八烷基硅烷OctadecylsilylP 色谱柱的压力降[通常以巴（bar）表示，也用psi；另外，也用作柱极性参数PA 普鲁卡因胺Procainamide（碱性物质）PAH 聚芳香烃Polyaromatic HydrocarbonPESOS 优化流动相的计算机软件（美国Perkin-Elmer产品）pKa 溶质酸性常数的负对数；当pH=pKa时，溶质中有一半是电离的Rk 保留值范围，Rk=（最末谱峰k’）/（最初谱峰k’）RRM 相对分离度图（通常N=10000）Rs 相邻二谱峰的分离度S 当流动相中的%B改变时，测量溶质保留值的变化速率的参数SAL 水杨酸Salicylic AcidSEC 尺寸排阻色谱法Size-exclusion chromatographyS/N 信噪比Signal to noise ratiot 分离时间（min）（样品进样时t=0）tp 梯度系统的滞后时间（min）TBA 四丁基铵离子Tetrabutylammonium ionTEA 三乙胺TriethylamineTHF 四氢呋喃Tetrahydrofurantk 在用于校正等度洗脱溶剂强度的流动相离开梯度混合器时，梯度洗脱的时间TLC 薄层色谱法Thin-layer chromatographyTMA 四甲基铵Tetramethylammonium（盐）TMS 三甲基硅烷TrimethylsilyltO 色谱柱的死时间（min）tR 溶质的保留时间（min）tG 梯度时间（min），即梯度开始至结束的时间t1,t2 相邻谱峰1和谱峰2的保留时间（min）ti 色谱图中第一峰的保留时间（min）tf 色谱图中最末峰的保留时间（min）△tg tf-titx (tf-ti)/2UV 紫外光Vm 色谱柱的死体积（mL），Vm=t0FVMA 香草扁桃酸Vanillymandelic acidwm 化合物的进样量w1,w2 相邻谱峰1和谱峰2于半峰高处（W1/2）的宽度（min）W1,W2 相邻谱峰1和谱峰2的基线宽度（min）W1/2 半峰高处的谱带宽度xd,xe,xn 溶剂选择参数，分别用于测定溶剂的酸度、碱度和偶极性的程度? 分离因子，?=k2/k1△? 梯度洗脱期间流动相成分的变化?o 溶剂强度参数? 化合物的克分子吸收系数? 流动相的粘度（Pa?s)? 流动相中强溶剂的体积份数%B 二元流动相中强溶剂的体积百分比（%v）液相色谱法简介气相色谱不能由色谱图直接给出未知物的定性结果，而必须由已知标准作对照定性。
当无纯物质对照时，定性鉴定就很困难，这时需借助质谱、红外和化学法等配合。
另外大多数金属盐类和热稳定性差的物质还不能分析。
此缺点可高效液相色谱法来克服。
在经典液相色谱的基础上，引入了气相色谱的理论与技术，在70年代初建立了高效液相色谱分析法（以HPLC表示）。
在常压下操作的液相色谱，分离一个样品往往长达几小时至几十小时，因此工作效率很低。
人们曾对这种经典液相色谱法试用了柱前加压或柱后减压的办法来提高流速，以缩短分离时间，但是结果失败了。
根据液相色谱理论，因为随着载液（流动相）流速的提高，板高则增大，所以柱效会显着降低。
随着生产技术的提高，人们制成了细小（<10?m）而高效的填充物，从而使柱效大大提高。
但是随着填充物粒度的减小，柱压降显着增大，为了得到合理的载液流速，使用了高压；输液泵，使流速达到1~10mL/min。