4-小反刍兽疫综合防控技术
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普通RT-PCR 荧光RT-PCR RT-LAMP
普通RT-PCR方法检测病毒
1-10:不同国家PPRV分离株RNA;11:RPV-PPRV N基因重组病毒RNA; 12-15:不同RPV分离株RNA;16-17:MV,CDV分离株RNA ;18:空白 对照
实时荧光定量RT-PCR方法检测病毒
送样
低温,尽快运输,送往实验室。
包装:应符合危险微生物运输规范,不发生泄露。 采样登记表:应标明采样地点、时间、动物种类、样品种类、初
步的临床诊断结果等。
六、免疫学检测技术
抗体检测
病毒中和试验 ELISA:间接ELISA、竞争ELISA、阻断ELISA
抗原检测
琼脂凝胶免疫扩散试验 抗原捕获ELISA 对流免疫电泳
Dolphin morbillivirus 16
Canine distemper virus Porpoise morbillivirus Rinderpest virus NCa
NA
NA NA NA NA
实时荧光定量RT-PCR方法检测病毒
敏感性
小反刍兽疫实时荧光RT-PCR方法(A) 和普通RT-PCR方法(B)的敏感性比较。 1-6:8.1×106-8.1×100拷贝的标准RNA 模板。
鼻液变得粘稠,阻塞鼻孔
眼睛分泌物增加,形成干酪样
严重腹泻、下痢
出血性下痢
四、病理变化
口腔和鼻腔黏膜糜烂坏死。 支气管肺炎,肺尖肺炎。
可见坏死性或出血性肠炎,盲肠、结肠近端和直肠
出现特征性条状充血、出血,呈斑马状条纹。
可见淋巴结特别是肠系膜淋巴结水肿,脾脏肿大并
可出现坏死病变。
二是把好“管理关”,提高养殖场所生物安全
水平。 三是把好“防疫关”,确保免疫密度和质量。 小反刍兽疫可防可控,广大养殖户只要切实把 好上述“三关”,就可最大限度地预防小反刍 兽疫。
消灭的基础
1、宿主范围窄,易感动物只限于山羊、绵羊和野生小反
刍动物,野生动物在传播中的作用不明显。 2、该病的临床症状明显,易于在第一时间发现。 3、该病罕见隐性感染,发病动物康复后,不会长期携带 病原,不排毒。 4、实验室诊断方法成熟。 5、该病有可靠疫苗,疫苗保护期长。 6、发病动物康复后可获得持久的免疫力。 7、与小反刍兽疫类似的疫病—牛瘟已经在全世界成功根 除,提供了可供借鉴的经验。
一、病原
病毒分类地位与进化关系
副粘病毒科 麻疹病毒属
• •
牛瘟病毒 小反刍兽疫病毒
一、病原
PPR病毒的形态结构
PPRV粒子多呈圆形或椭圆形 病毒直径约为130-390nm 病毒外层有8.5-14.5nm的囊膜,囊膜上有5-15nm
纤突,纤突中有血凝素蛋白(H)但无神经氨酸酶。
1、免疫时间:每年于3月初和10月中旬补免新生羔羊 及新引进羊 2、疫苗名称:小反刍兽疫活疫苗(Clone9) 3、预防疾病:羊小反刍兽疫
4、免疫对象及方法:皮下注射,每只羊1ml
5、免疫期:36个月(3年)
国家兽药基础兽药库查询结果
小反刍兽疫活疫苗使用说明
防控工作建议(养殖户)
一是把好“入场关”,确保引进羊只无疫。
特异性
Virus PPRV Bangladesh/93 CT Valueb 29.99
不同疫源地 的PPRV 同属其 他病毒
PPRV Omen/86
PPRV Nigeria 75/1 PPRV Dorcas PPRV Yemen Dolphin morbillivirus
27.41
14.98 23.93 22.78 NA
Rapid Detection of PPRV antibody from Clinical Serum
小反刍兽疫病毒快速检测试纸条
1-4 Spleen 5-4 lymph node 6-8 lymph node
Schematic Diagram of Strip (Double-Mabs Sandwich)
传染源 病畜和带毒动物是本病的主要传染源,通过眼、鼻、 口腔分泌物和粪便向外排毒。 传播途径
PPRV主要以直接或间接接触传染。通过污染的空气经
呼吸道、污染的饲料饮水和垫料经消化道传染。主要通 过吸入患病动物打喷嚏和咳嗽产生的气溶胶而接触感染。
也可经精液及胎盘传播(垂直传播)。
二ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ流行病学
疫情处置工作
1. 发现疑似疫情,采取临时封锁措施; 2. 采样送检,确诊疫情; 3. 划定疫点、疫区、受威胁区,开展流行病学调查溯
源工作; 4. 成立指挥部,发布封锁令; 5. 完成疫点易感动物扑杀、无害化处理工作; 6. 完成疫点消毒灭源工作,开始计算封锁期; 7. 开展疫情排查工作,受威胁区、疫区开展紧急免疫 工作。
7-2 lymph node 11-2 lung 18-1 lymph node 14-3 swab C70swab C72swab
Packing of Test Strips Kits
Rapid Detection of PPRV from Clinical Samples
七、分子生物学诊断技术
口腔黏膜糜烂坏死
口腔黏膜糜烂坏死
肺尖出血、坏死
肠系膜淋巴结水肿
脾脏肿大、坏死、质脆
气管充血、出血
条状充血、出血,呈斑马状条纹
五、样品采集
病原学样品——棉拭子
选择发热、大量口鼻分泌物的病畜。 每只病畜采集: 眼分泌物一份
口、鼻分泌物一份
加入约0.5-1ml PBS。 每只羊可多采几个棉棒,置于同一离心管。
China_BharaTibet_08
97.5
China_Tibet_07-30
97.5
Nigeria75-1
92.7
八、防控工作重点
面临的困难
落后的饲养管理模式,中小养殖户为主; 生物安全水平普遍较低;
防疫意识差;
动物调运频繁,部分无法监管; 联防联控机制不健全; 周边国家疫情复杂。
间接免疫荧光试验、免疫组织化学染色 试纸条
小反刍兽疫阻断ELISA抗体检测试剂盒
Expression and Purification of N Gene
Development of anti-N Mabs
Establishment of Blocking ELISA Method
Packing of Blocking ELISA Kits
谱系分布示意图
一、病原
PPRV的理化特性
PPRV对外界环境因素敏感,37℃病毒感染力的半衰
期为1-3小时。
pH5.8-11.0之间稳定 病毒对酒精、乙醚、甘油和去污剂敏感。 酚类、2%NaOH等24小时可灭活病毒。 非离子去污剂可使病毒的纤突脱落降低感染力。
二、流行病学
谢谢
潜伏期 一般4~6天,范围3~10天。 《国际动物卫生法典》规定潜伏期为21天。
发病率 山羊发病率高,可达80~90%,病程可达2周以上。
病死率 • 易感山羊群病死率可达50%~100%。 • 地方性流行区持续存在低感染率;当有易感群体时, 爆发时发病率可达100%。
三、临床症状
‒ ‒ ‒ ‒ ‒ ‒
动物的免疫
先天免疫和被动免疫
不同山羊品种对PPR感染的抵抗性不一样。
据报道,母体免疫可提供3个月的保护期。
主动免疫
PPR感染后的康复动物可获得终生免疫。
免疫接种
减毒活疫苗株Nigeria 75/1广泛应用于小反刍兽疫的免疫预防。
减毒活疫苗对有3年的保护期
小反刍兽疫免疫程序
病原学样品——组织
组织病料:剖检后2-3只羊的淋巴结(肠系膜、支气管
淋巴结)、肺、脾、肠(肠粘膜)。
选择频亡、刚死的动物采样。 剖检必须做好生物安全防护。 新鲜的组织病料。
血清学样品
每只动物采集3-5ml血液,与病原学样品平行采集。 尽快分离血清。 置于微型离心管。
易感动物
家畜
山羊、绵羊是目前仅知的自然宿主。山羊比绵羊易感,
幼龄动物比成年动物易感,但哺乳期的幼畜抵抗力强。 骆驼、牛和猪易感,但都不表现临床症状,不排毒。 野生动物
岩羊、野山羊、鹿、长角大羚羊、东方盘羊、瞪羚羊可感染
发病。
人 没有关于人感染PPRV的报道。
二、流行病学
吸困难、腹泻。
重要性
OIE动物卫生法典要求必须报告的动物疫病。
我国动物疫病名录一类动物疫病。
我国《中长期动物疫病防治规划(2012-2020年)》明确
重点防范的外来动物疫病。
主要内容
病原 流行病学 诊断
临床症状
病理变化 样品采集 实验室诊断 免疫学诊断技术
分子生物学诊断技术
防控工作重点
小反刍兽疫综合防控技术
定义
定义:PPR是由小反刍兽疫病毒(PPRV)引起的感染
山羊、绵羊等家养和野生小反刍动物的一种烈性、接触 性传染病。PPR与牛瘟非常相似,因此又名伪牛瘟。
山羊通常比绵羊易感,而且患病更严重。发病率和病死
率可高达100%和90%。
临床特征:发热、眼鼻流出大量分泌物、口腔糜烂、呼
病毒基因组为单股负链、无节断RNA。从3‘端到
5’端依次分布着N-P-M-F-H-L共6个基因。
一、病原
PPR病毒株可分为I、II、III、IV四个基因群。 其中三个基因群来自于非洲,一个基因群来自于亚洲。 三个非洲基因群中有一个基因群在亚洲也有发现。 这些基因群的流行病学意义与牛瘟病毒的关系还不清楚。
突然发热,第2-3天达40-42℃,持续3天左右。 发热后,口腔内膜轻度充血,继而糜烂。
初鼻液水样,随后变浓稠堵塞鼻孔,呼吸困难。 眼流分泌物,遮住眼睑,出现眼结膜炎。
严重腹泻或下痢,脱水、体重下降。 怀孕母羊流产。 特急性病例突然死亡,无其他症状。
‒ 山羊症状比较典型,绵羊症状一般较轻微。
鼻液水样、异常增多
比普通PCR提高10倍
Strain
Similarity (%)
Pakistan_SAH-PK07
99.7
Iran_R22-10
99.4
Pakistan_FSD-PK07
99.4
India_Kcch2000
98.7
Bangladesh_Mymensingh_2010
98.1
Nepal_2009
97.8
普通RT-PCR方法检测病毒
1-10:不同国家PPRV分离株RNA;11:RPV-PPRV N基因重组病毒RNA; 12-15:不同RPV分离株RNA;16-17:MV,CDV分离株RNA ;18:空白 对照
实时荧光定量RT-PCR方法检测病毒
送样
低温,尽快运输,送往实验室。
包装:应符合危险微生物运输规范,不发生泄露。 采样登记表:应标明采样地点、时间、动物种类、样品种类、初
步的临床诊断结果等。
六、免疫学检测技术
抗体检测
病毒中和试验 ELISA:间接ELISA、竞争ELISA、阻断ELISA
抗原检测
琼脂凝胶免疫扩散试验 抗原捕获ELISA 对流免疫电泳
Dolphin morbillivirus 16
Canine distemper virus Porpoise morbillivirus Rinderpest virus NCa
NA
NA NA NA NA
实时荧光定量RT-PCR方法检测病毒
敏感性
小反刍兽疫实时荧光RT-PCR方法(A) 和普通RT-PCR方法(B)的敏感性比较。 1-6:8.1×106-8.1×100拷贝的标准RNA 模板。
鼻液变得粘稠,阻塞鼻孔
眼睛分泌物增加,形成干酪样
严重腹泻、下痢
出血性下痢
四、病理变化
口腔和鼻腔黏膜糜烂坏死。 支气管肺炎,肺尖肺炎。
可见坏死性或出血性肠炎,盲肠、结肠近端和直肠
出现特征性条状充血、出血,呈斑马状条纹。
可见淋巴结特别是肠系膜淋巴结水肿,脾脏肿大并
可出现坏死病变。
二是把好“管理关”,提高养殖场所生物安全
水平。 三是把好“防疫关”,确保免疫密度和质量。 小反刍兽疫可防可控,广大养殖户只要切实把 好上述“三关”,就可最大限度地预防小反刍 兽疫。
消灭的基础
1、宿主范围窄,易感动物只限于山羊、绵羊和野生小反
刍动物,野生动物在传播中的作用不明显。 2、该病的临床症状明显,易于在第一时间发现。 3、该病罕见隐性感染,发病动物康复后,不会长期携带 病原,不排毒。 4、实验室诊断方法成熟。 5、该病有可靠疫苗,疫苗保护期长。 6、发病动物康复后可获得持久的免疫力。 7、与小反刍兽疫类似的疫病—牛瘟已经在全世界成功根 除,提供了可供借鉴的经验。
一、病原
病毒分类地位与进化关系
副粘病毒科 麻疹病毒属
• •
牛瘟病毒 小反刍兽疫病毒
一、病原
PPR病毒的形态结构
PPRV粒子多呈圆形或椭圆形 病毒直径约为130-390nm 病毒外层有8.5-14.5nm的囊膜,囊膜上有5-15nm
纤突,纤突中有血凝素蛋白(H)但无神经氨酸酶。
1、免疫时间:每年于3月初和10月中旬补免新生羔羊 及新引进羊 2、疫苗名称:小反刍兽疫活疫苗(Clone9) 3、预防疾病:羊小反刍兽疫
4、免疫对象及方法:皮下注射,每只羊1ml
5、免疫期:36个月(3年)
国家兽药基础兽药库查询结果
小反刍兽疫活疫苗使用说明
防控工作建议(养殖户)
一是把好“入场关”,确保引进羊只无疫。
特异性
Virus PPRV Bangladesh/93 CT Valueb 29.99
不同疫源地 的PPRV 同属其 他病毒
PPRV Omen/86
PPRV Nigeria 75/1 PPRV Dorcas PPRV Yemen Dolphin morbillivirus
27.41
14.98 23.93 22.78 NA
Rapid Detection of PPRV antibody from Clinical Serum
小反刍兽疫病毒快速检测试纸条
1-4 Spleen 5-4 lymph node 6-8 lymph node
Schematic Diagram of Strip (Double-Mabs Sandwich)
传染源 病畜和带毒动物是本病的主要传染源,通过眼、鼻、 口腔分泌物和粪便向外排毒。 传播途径
PPRV主要以直接或间接接触传染。通过污染的空气经
呼吸道、污染的饲料饮水和垫料经消化道传染。主要通 过吸入患病动物打喷嚏和咳嗽产生的气溶胶而接触感染。
也可经精液及胎盘传播(垂直传播)。
二ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ流行病学
疫情处置工作
1. 发现疑似疫情,采取临时封锁措施; 2. 采样送检,确诊疫情; 3. 划定疫点、疫区、受威胁区,开展流行病学调查溯
源工作; 4. 成立指挥部,发布封锁令; 5. 完成疫点易感动物扑杀、无害化处理工作; 6. 完成疫点消毒灭源工作,开始计算封锁期; 7. 开展疫情排查工作,受威胁区、疫区开展紧急免疫 工作。
7-2 lymph node 11-2 lung 18-1 lymph node 14-3 swab C70swab C72swab
Packing of Test Strips Kits
Rapid Detection of PPRV from Clinical Samples
七、分子生物学诊断技术
口腔黏膜糜烂坏死
口腔黏膜糜烂坏死
肺尖出血、坏死
肠系膜淋巴结水肿
脾脏肿大、坏死、质脆
气管充血、出血
条状充血、出血,呈斑马状条纹
五、样品采集
病原学样品——棉拭子
选择发热、大量口鼻分泌物的病畜。 每只病畜采集: 眼分泌物一份
口、鼻分泌物一份
加入约0.5-1ml PBS。 每只羊可多采几个棉棒,置于同一离心管。
China_BharaTibet_08
97.5
China_Tibet_07-30
97.5
Nigeria75-1
92.7
八、防控工作重点
面临的困难
落后的饲养管理模式,中小养殖户为主; 生物安全水平普遍较低;
防疫意识差;
动物调运频繁,部分无法监管; 联防联控机制不健全; 周边国家疫情复杂。
间接免疫荧光试验、免疫组织化学染色 试纸条
小反刍兽疫阻断ELISA抗体检测试剂盒
Expression and Purification of N Gene
Development of anti-N Mabs
Establishment of Blocking ELISA Method
Packing of Blocking ELISA Kits
谱系分布示意图
一、病原
PPRV的理化特性
PPRV对外界环境因素敏感,37℃病毒感染力的半衰
期为1-3小时。
pH5.8-11.0之间稳定 病毒对酒精、乙醚、甘油和去污剂敏感。 酚类、2%NaOH等24小时可灭活病毒。 非离子去污剂可使病毒的纤突脱落降低感染力。
二、流行病学
谢谢
潜伏期 一般4~6天,范围3~10天。 《国际动物卫生法典》规定潜伏期为21天。
发病率 山羊发病率高,可达80~90%,病程可达2周以上。
病死率 • 易感山羊群病死率可达50%~100%。 • 地方性流行区持续存在低感染率;当有易感群体时, 爆发时发病率可达100%。
三、临床症状
‒ ‒ ‒ ‒ ‒ ‒
动物的免疫
先天免疫和被动免疫
不同山羊品种对PPR感染的抵抗性不一样。
据报道,母体免疫可提供3个月的保护期。
主动免疫
PPR感染后的康复动物可获得终生免疫。
免疫接种
减毒活疫苗株Nigeria 75/1广泛应用于小反刍兽疫的免疫预防。
减毒活疫苗对有3年的保护期
小反刍兽疫免疫程序
病原学样品——组织
组织病料:剖检后2-3只羊的淋巴结(肠系膜、支气管
淋巴结)、肺、脾、肠(肠粘膜)。
选择频亡、刚死的动物采样。 剖检必须做好生物安全防护。 新鲜的组织病料。
血清学样品
每只动物采集3-5ml血液,与病原学样品平行采集。 尽快分离血清。 置于微型离心管。
易感动物
家畜
山羊、绵羊是目前仅知的自然宿主。山羊比绵羊易感,
幼龄动物比成年动物易感,但哺乳期的幼畜抵抗力强。 骆驼、牛和猪易感,但都不表现临床症状,不排毒。 野生动物
岩羊、野山羊、鹿、长角大羚羊、东方盘羊、瞪羚羊可感染
发病。
人 没有关于人感染PPRV的报道。
二、流行病学
吸困难、腹泻。
重要性
OIE动物卫生法典要求必须报告的动物疫病。
我国动物疫病名录一类动物疫病。
我国《中长期动物疫病防治规划(2012-2020年)》明确
重点防范的外来动物疫病。
主要内容
病原 流行病学 诊断
临床症状
病理变化 样品采集 实验室诊断 免疫学诊断技术
分子生物学诊断技术
防控工作重点
小反刍兽疫综合防控技术
定义
定义:PPR是由小反刍兽疫病毒(PPRV)引起的感染
山羊、绵羊等家养和野生小反刍动物的一种烈性、接触 性传染病。PPR与牛瘟非常相似,因此又名伪牛瘟。
山羊通常比绵羊易感,而且患病更严重。发病率和病死
率可高达100%和90%。
临床特征:发热、眼鼻流出大量分泌物、口腔糜烂、呼
病毒基因组为单股负链、无节断RNA。从3‘端到
5’端依次分布着N-P-M-F-H-L共6个基因。
一、病原
PPR病毒株可分为I、II、III、IV四个基因群。 其中三个基因群来自于非洲,一个基因群来自于亚洲。 三个非洲基因群中有一个基因群在亚洲也有发现。 这些基因群的流行病学意义与牛瘟病毒的关系还不清楚。
突然发热,第2-3天达40-42℃,持续3天左右。 发热后,口腔内膜轻度充血,继而糜烂。
初鼻液水样,随后变浓稠堵塞鼻孔,呼吸困难。 眼流分泌物,遮住眼睑,出现眼结膜炎。
严重腹泻或下痢,脱水、体重下降。 怀孕母羊流产。 特急性病例突然死亡,无其他症状。
‒ 山羊症状比较典型,绵羊症状一般较轻微。
鼻液水样、异常增多
比普通PCR提高10倍
Strain
Similarity (%)
Pakistan_SAH-PK07
99.7
Iran_R22-10
99.4
Pakistan_FSD-PK07
99.4
India_Kcch2000
98.7
Bangladesh_Mymensingh_2010
98.1
Nepal_2009
97.8