病毒学的几个概念PFUMOITCID50

TCID50 MOI PFU意义及其换算

/viewthread.php?tid=7423&page=1Multiplicity of infection (MOI)The multiplicity of infection (abbreviated MOI) is the average number of phage per bacterium. The MOI is determined by simply dividing the number of phage added (ml added x PFU/ml) by the number of bacteria added (ml added x cells/ml). The average number of phage per bacterium in the population could be 0.1, 1, 2, 10, etc, depending upon how you setup the experiment.Although the MOI tells you the average number of phage per bacterium, the actual number of phage that infect any given bacterial cell is a statistical function. For example, if the MOI is 1, some cells will get infected with one phage but some cells may be infected with 0 phage and other cells infected with two phage. The proportion of cells in a population infected by a specific number of phage (n) can be calculatedfrom the Poisson distribution.PFU:plaque forming unit，空斑形成单位。

TCID50与moi值的计算.doc

实验四病毒感染力的滴定（TCID的测定）50一、实验目的了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。

二、测定病毒感染力的方法( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测半数致死量LD50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测半数鸡胚感染量EID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞半数细胞培养物感染量TCID50来检测蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液（PRV）的操作步骤四、TCID501、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。

2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100µl。

3、在每孔加入细胞悬液100µl，使细胞量达到2~3×105个/ml。

4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。

（100µl生长液+100µl细胞悬液）5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。

6、结果的计算，按Reed-Muench两氏法或Karber法的计算方法五、TCID501、Reed-Muench两氏法CPE：Cytopathic effect距离比例＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数）＝（91.6-50）/（91.6-40）＝ 0.8lgTCID=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数50=0.8×(-1)+(-3)=-3.8=10-3.8/0.1mlTCID50含义：将该病毒稀释103.8接种100µl可使50%的细胞发生病变。

病毒学的几个概念：PFU MOI TCID50

病毒学的几个概念：PFU MOI TCID50之袁州冬雪创作PFU:plaque forming unit，空斑形成单位.感染性滴度的单位一般暗示为PFU/ml.由于测定pfu往往重复性较差，因此近年许多研究又开端采取TCID50方法来计算病毒的感染单位.因此建议也可以使用TCID50法.MOI :multiplicity of infection，感染复数.传统的MOI概念起源于噬菌体感染细菌的研究.其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值，也就是平均每一个细菌感染噬菌体的数量.噬菌体的数量单位为pfu.一般认为MOI是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfu number/cell.后来MOI被普遍用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量的比值.然而，由于病毒的数量单位有分歧的暗示方式，从而使MOI 发生了分歧的含义.能发生细胞裂解效应的病毒例如单纯疱疹病毒等习惯上仍用pfu暗示病毒数量，因此其MOI的含义与传统的概念相同.传统意义上的MOI的测定，其原理是基于病毒感染细胞是一种随机事件，遵循Poisson分布规律，可计算出感染一定比例的培养细胞所需的感染复数（MOI）.其公式为：P = 1- P(0) ,P(0) = e-m 或m = -InP（0）.其中：P 为被感染细胞的百分率P(0)为未被感染细胞的百分率m为MOI值例如，如果要感染培养皿中99%的培养细胞，则：P(0) = 1% = 0.01m = -In(0.01)= 4.6pfu/cell.TCID50 Protocol：1：制备96孔板单层细胞2：将病毒做系列稀释，横向接种单层细胞板，每稀释度重复3孔3：逐日观察细胞病变，记录高于50和低于50％病变孔的病毒稀释度，4：计算比距，获得TCID50计算比距：（高于50％的病变率－50％）/（高于50％病变率－小于50％病变率）＝比距；比距与接近50%病变率的病毒的稀释度的指数相加，就获得了指数.比方：比色计算或者显微镜观察病毒的TCID50在10的负7和8次方之间，那末，指数－8与比距相加，获得的新的指数，就是TCID50的指数，TCID50=10的-7.几次方TCID50与 PFU换算: PFUs＝0.7×TCID50的滴度。

病毒学的几个概念：PFU MOI TCID50

病毒教的几个观念：PFU MOI TCID50之阳早格格创做PFU:plaque forming unit，空斑产死单位.熏染性滴度的单位普遍表示为PFU/ml.由于测定pfu往往沉复性较好，果此近些年许多钻研又启初采与TCID50要领去估计病毒的熏染单位.果此修议也可使用TCID50法.MOI :multiplicity of infection，熏染复数.保守的MOI观念起源于噬菌体熏染细菌的钻研.其含意是熏染时噬菌体与细菌的数量比值，也便是仄衡每个细菌熏染噬菌体的数量.噬菌体的数量单位为pfu.普遍认为MOI是一个比值，不单位，本去其隐含的单位是pfu number/cell.厥后MOI被一致用于病毒熏染细胞的钻研中，含意是熏染时病毒与细胞数量的比值.然而，由于病毒的数量单位有分歧的表示办法，进而使MOI爆收了分歧的含意.能爆收细胞裂解效力的病毒比圆简单疱疹病毒等习惯上仍用pfu表示病毒数量，果此其MOI的含意与保守的观念相共.保守意思上的MOI的测定，其本理是鉴于病毒熏染细胞是一种随机事变，按照Poisson分散顺序，可估计出熏染一定比率的培植细胞所需的熏染复数（MOI）.其公式为：P = 1- P(0) ,P(0) = e-m 大概m = -InP（0）.其中：P 为被熏染细胞的百分率P(0)为已被熏染细胞的百分率m为MOI 值比圆，如果要熏染培植皿中99%的培植细胞，则：P(0) = 1% = 0.01m = -In(0.01)= 4.6 pfu/cell.TCID50 Protocol：1：造备96孔板单层细胞2：将病毒干系列密释，横背交种单层细胞板，每密释度沉复3孔3：每日瞅察细胞病变，记录下于50战矮于50％病变孔的病毒密释度，4：估计比距，赢得TCID50估计比距：（下于50％的病变率－50％）/（下于50％病变率－小于50％病变率）＝比距；比距与交近50%病变率的病毒的密释度的指数相加，便赢得了指数.比圆：比色估计大概者隐微镜瞅察病毒的TCID50正在10的背7战8次圆之间，那么，指数－8与比距相加，赢得的新的指数，便是TCID50的指数，TCID50=10的-7.频频圆TCID50与 PFU换算: PFUs＝0.7×TCID50的滴度。

TCID与moi值的计算（精品）

实验四病毒感染力的滴定（TCID50的测定）一、实验目的了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。

二、测定病毒感染力的方法半数致死量LD50( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测半数细胞培养物感染量TCID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞来检测蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液（PRV）四、TCID50的操作步骤1、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。

2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100µl。

3、在每孔加入细胞悬液100µl，使细胞量达到2~3×105个/ml。

4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。

（100µl生长液+100µl细胞悬液）5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。

6、结果的计算，按Reed-Muench两氏法或Karber法五、TCID50的计算方法1、Reed-Muench两氏法CPE：Cytopathic effect距离比例＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数）＝（91.6-50）/（91.6-40）＝ 0.8lgTCID50=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数=0.8×(-1)+(-3)=-3.8TCID50=10-3.8/0.1ml含义：将该病毒稀释103.8接种100µl可使50%的细胞发生病变。

病毒滴度测定

病毒滴度测定有很多名词都用来描述病毒溶液的滴度。

1． VP（病毒颗粒）或OPV（光学颗粒单位）2． GTU（基因转移单位）或转导颗粒（BFU即蓝点形成单位，与GTU类似）3． PFU（空斑形成单位）4． TCID50（50%组织培养感染剂量）不同的概念缘于不同的滴度测定方法，这些方法包括2类：物理方法（VP）和生物学方法（GTU、PFU、TCID50）。

1．测定VP的方法是测定病毒颗粒在260nm处的吸光度（病毒DNA和蛋白的总吸光度中主要为DNA），1个OD值相当于1.1×1012个病毒颗粒。

用这种方法进行测定在各个实验室中都较为稳定，但它不能区分感染性和缺陷性病毒颗粒。

因此这种方法只能提供病毒的量，至于质，比如是否含有缺陷性颗粒则没有考虑在内。

2． GTU则测定感染后能表达报告基因的细胞数量。

这个过程中，病毒将DNA转入细胞，在一个感染周期结束前立即测定表达报告基因的细胞。

如果重组腺病毒含有报告基因如GFP 或LacZ等则可以用这种方法进行测定，病毒保存液通常不用这种方法来进行描述。

3． PFU是测定腺病毒滴度最早的标准方法，主要测定单层细胞培养中病毒裂解空斑的形成。

空斑形成需要许多个感染周期，得到最终结果通常需要三个星期。

一般来说，这种方法得到的结果很少能在其它实验室重复，即使在同一实验室内，不同技术员操作也很少能得到相同的结果。

4． TCID50已被用于测定许多种病毒的滴度，但以前并不用于腺病毒。

病毒稀释液与细胞在96孔板进行培养，然后监测每孔是否CPE。

TCID50方法相对PFU方法而言有几个优点，如速度是PFU的2倍，结果更具预料性，在不同操作个体间也更稳定。

所有生物学方法所得到的结果在不同实验室之间往往有所差异，它主要与病毒感染方法有关。

许多因素如加入的病毒储存液的量、管子的类型、培养的时间、细胞和培养液的量等都会影响结果。

最近，出现了两种测定病毒滴度的改良方法。

一种是用更小体积的病毒液进行感染并在感染过程中不断晃动培养板（Mittereoler等，1996）；另一种方法则在感染时将培养板进行离心（1000 RCF90分钟）（Nyberg-Hoffman等，1997）。

TCID50-MOI-PFU意义及其换算

Multiplicity of infection (MOI)The multiplicity of infection (abbreviated MOI) is the average number of phage per bacterium. The MOI is determined by simply dividing the number of phage added (ml added x PFU/ml) by the number of bacteria added (ml added x cells/ml). The average number of phage per bacterium in the population could be 0.1, 1, 2, 10, etc, depending upon how you setup the experiment.Although the MOI tells you the average number of phage per bacterium, the actual number of phage that infect any given bacterial cell is a statistical function. For example, if the MOI is 1, some cells will get infected with one phage but some cells may be infected with 0 phage and other cells infected with two phage. The proportion of cells in a population infected by a specific number of phage (n) can be calculatedfrom the Poisson distribution.PFU:plaque forming unit，空斑形成单位。

病毒感染力的滴定

二、病毒蚀斑技术病毒蚀斑（plaque) 又称空斑，指病毒在已长成的单层细胞上形
成的局限性病灶。
原理：适当稀释的病毒悬液接种经长成单层的敏感
细胞后，在覆盖的固体或半固体介质（琼脂糖、甲基纤维素）的作用下，病毒在最初感染的细胞内增殖后，只能进而感染并破坏临近的细胞，经过几个增殖周期后，形成一个局限性的肉眼可见的病变细胞区，即局
每毫升病毒悬液中所含的蚀斑数，即病毒悬液
中的感染性病毒浓度。计算方法：如用PRV接种PK-15细胞，每孔接种了0.4ml，结果10-5孔形成了208个空斑，而10-6孔形成了22个空斑，
则该病毒在PK-15细胞上的空斑形成单位（PFU）为：
22×106/0.4ml=5.5×107个/ml。
一、病毒TCID50的测定操作步骤
在青霉素瓶中将病毒作连续 10倍的稀释，从10-1-
10-10。
将稀释好的病毒接种到 96孔微量培养板中，每一
稀释度作8孔，每孔接种100µ l。
在每孔加入细胞悬液100µ l，使细胞量达到3×105 个/ml。
设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。
将培养板臵37℃ 5% CO2培养箱吸附1h，吸弃病毒液，用含钙、镁的PBS（pH7.4）洗3次。取1.6%-2%的低熔点琼脂糖，融化后降温至38-42℃，
与等量预热至38-42℃含6%-10%犊牛血清的无酚红
DMEM混合，注入细胞培养板中。
室温放臵直至琼脂糖凝固，或于4℃冰箱放臵几
分钟至琼脂糖凝固，然后于37℃ 5% CO2培养箱
获得高滴度的病毒，扩大培养后作种用。
• 筛选重组病毒：收集病变的细胞或病毒悬液，
通过PCR或其它方法进行鉴定，取阳性者再作下一轮空斑纯化。如此3-5轮空斑纯化后即可得到纯化的病毒粒子。

TCID50与moi值的计算.doc

实验四病毒感染力的滴定（TCID的测定）50一、实验目的了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。

二、测定病毒感染力的方法( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测半数致死量LD50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测半数鸡胚感染量EID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞半数细胞培养物感染量TCID50来检测蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液（PRV）的操作步骤四、TCID501、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。

2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100µl。

3、在每孔加入细胞悬液100µl，使细胞量达到2~3×105个/ml。

4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。

（100µl生长液+100µl细胞悬液）5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。

6、结果的计算，按Reed-Muench两氏法或Karber法的计算方法五、TCID501、Reed-Muench两氏法CPE：Cytopathic effect距离比例＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数）＝（91.6-50）/（91.6-40）＝ 0.8lgTCID=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数50=0.8×(-1)+(-3)=-3.8=10-3.8/0.1mlTCID50含义：将该病毒稀释103.8接种100µl可使50%的细胞发生病变。

病毒滴度测定

病毒滴度测定有很多名词都用来描述病毒溶液的滴度。

1．VP（病毒颗粒）或OPV（光学颗粒单位）2．GTU（基因转移单位）或转导颗粒（BFU即蓝点形成单位，与GTU类似）3．PFU（空斑形成单位）4．TCID50（50%组织培养感染剂量）不同的概念缘于不同的滴度测定方法，这些方法包括2类：物理方法（VP）和生物学方法（GTU、PFU、TCID50）。

1．测定VP的方法是测定病毒颗粒在260nm处的吸光度（病毒DNA和蛋白的总吸光度中主要为DNA），1个OD值相当于1.1×1012个病毒颗粒。

用这种方法进行测定在各个实验室中都较为稳定，但它不能区分感染性和缺陷性病毒颗粒。

因此这种方法只能提供病毒的量，至于质，比如是否含有缺陷性颗粒则没有考虑在内。

2．GTU则测定感染后能表达报告基因的细胞数量。

这个过程中，病毒将DNA 转入细胞，在一个感染周期结束前立即测定表达报告基因的细胞。

如果重组腺病毒含有报告基因如GFP或LacZ等则可以用这种方法进行测定，病毒保存液通常不用这种方法来进行描述。

3．PFU是测定腺病毒滴度最早的标准方法，主要测定单层细胞培养中病毒裂解空斑的形成。

空斑形成需要许多个感染周期，得到最终结果通常需要三个星期。

一般来说，这种方法得到的结果很少能在其它实验室重复，即使在同一实验室内，不同技术员操作也很少能得到相同的结果。

4．TCID50已被用于测定许多种病毒的滴度，但以前并不用于腺病毒。

病毒稀释液与细胞在96孔板进行培养，然后监测每孔是否CPE。

TCID50方法相对PFU 方法而言有几个优点，如速度是PFU的2倍，结果更具预料性，在不同操作个体间也更稳定。

所有生物学方法所得到的结果在不同实验室之间往往有所差异，它主要与病毒感染方法有关。

许多因素如加入的病毒储存液的量、管子的类型、培养的时间、细胞和培养液的量等都会影响结果。

最近，出现了两种测定病毒滴度的改良方法。

一种是用更小体积的病毒液进行感染并在感染过程中不断晃动培养板（Mittereoler等，1996）；另一种方法则在感染时将培养板进行离心（1000 RCF90分钟）（Nyberg-Hoffman等，1997）。

几个病毒学的基本概念MOI、TCID50、PFU

几个病毒学的基本概念: MOI、TCID50、PFUMult iplicity of infection (MOI)The multiplicity of infection (abbreviated MOI) is the average number of phage per bacterium. The MOI is determined by simply dividing the number of phage added (ml added x PFU/ml) by the number of bacteria added (ml added x cells/ml). The average number of phage per bacterium in the population could be 0.1, 1, 2, 10, etc, depending upon how you set up the experiment.Although the MOI tells you the average number of phage per bacterium, the actual number of phage that infect any given bacterial cell is a statistical function. For example, if the MOI is 1, some cells will get infected with one phage but some cells may be infected with 0 phage and other cells infected with two phage.The proportion of cells in a population infected by a specific number of phage (n) can be calculated from the Poisson distribution.PFU:plaque forming unit，空斑形成单位。

TCID50与moi值的计算

实验四病毒感染力的滴定（TCID的测定）50一、实验目的了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。

二、测定病毒感染力的方法( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测半数致死量LD50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测半数鸡胚感染量EID50（50% tissue culture infective dose)：用细半数细胞培养物感染量TCID50胞来检测蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液（PRV）的操作步骤四、TCID501、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。

2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100µl。

3、在每孔加入细胞悬液100µl，使细胞量达到2~3×105个/ml。

4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。

（100µl生长液+100µl细胞悬液）5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。

6、结果的计算，按Reed-Muench 两氏法或Karber 法五、TCID 50的计算方法 1、Reed-Muench 两氏法CPE ：Cytopathic effect距离比例＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数）＝（91.6-50）/（91.6-40）＝ 0.8lgTCID 50=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数 =0.8×(-1)+(-3) =-3.8 TCID 50=10-3.8/0.1ml含义：将该病毒稀释103.8接种100µl 可使50%的细胞发生病变。

TCID50和PFU的换算公式

1、PFU:plaqu‎e formi‎n g unit，空斑形成单‎位：感染性滴度‎的单位一般‎表示为PF‎U/ml。

由于测定p‎fu往往重‎复性较差，因此近些年‎许多研究又‎开始采用T‎CID50‎方法来计算‎病毒的感染‎单位。

因此建议也‎可使用TC‎ID50法‎。

2、MOI :multi‎p lici‎t y of infec‎t ion，感染复数：传统的MO‎I概念起源‎于噬菌体感‎染细菌的研‎究。

其含义是感‎染时噬菌体‎与细菌的数‎量比值，也就是平均‎每个细菌感‎染噬菌体的‎数量。

噬菌体的数‎量单位为p‎fu。

一般认为M‎O I是一个‎比值，没有单位，其实其隐含‎的单位是p‎fu numbe‎r/cell。

后来MOI‎被普遍用于‎病毒感染细‎胞的研究中‎，含义是感染‎时病毒与细‎胞数量的比‎值。

然而，由于病毒的‎数量单位有‎不同的表示‎方式，从而使MO‎I产生了不‎同的含义。

能产生细胞‎裂解效应的‎病毒例如单‎纯疱疹病毒‎等习惯上仍‎用p fu表‎示病毒数量‎，因此其MO‎I的含义与‎传统的概念‎相同。

传统意义上‎的MOI的‎测定，其原理是基‎于病毒感染‎细胞是一种‎随机事件，遵循Poi‎s son分‎布规律，可计算出感‎染一定比例‎的培养细胞‎所需的感染‎复数（MOI）。

其公式为：P = 1- P(0) ,P(0) = e-m 或m = -InP（0）。

其中：P 为被感染细‎胞的百分率‎P(0)为未被感染‎细胞的百分‎率m为MOI‎值例如，如果要感染‎培养皿中9‎9%的培养细胞‎，则：P(0) = 1% = 0.01m = -In(0.01)= 4.6 pfu/cell。

(一)原理病毒感染细‎胞后，由于固体介‎质的限制，释放的病毒‎只能由最初‎感染的细胞‎向周边扩展‎。

经过几个增‎殖周期，便形成一个‎局限性病变‎细胞区，此即病毒蚀‎斑。

从理论上讲‎，一个蚀斑是‎由最初感染‎细胞的一个‎病毒颗粒形‎成的，因而该项技‎术常用于病‎毒颗粒计数‎和分离病毒‎克隆。

TCID50概念方法资料

山东畜牧兽医职业学院动物微生物及免疫教案标记★的内容为重点，标记◎的内容为难点。

第三节沉淀试验一、沉淀试验的概念沉淀试验：可溶性抗原（如细菌的外毒素、内毒素、菌体裂解液，病毒的可溶性抗原、血清、组织浸出液等）与相应的抗体结合，在适量电解质存在下, 经过一定时间，形成肉眼可见的白色沉淀，称为沉淀试验（Precipitatio n reaction test ）。

参与沉淀试验的抗原称沉淀原，抗体称沉淀素。

二、沉淀试验的类型（一）环状沉淀试验（ringprecipitation test ）用于抗原的定性试验，如诊断炭疽的Ascoli试验、链球菌的血清型鉴定、血迹鉴定。

（二）琼脂凝胶扩散试验简称琼扩，1. 概念：1%琼脂凝胶的孔径约为85nm 因为凝胶网孔中充满水分，小于孔径的抗原或抗体分子可在琼脂凝胶中自由扩散，由近及远形成浓度梯度，当二者在比例适当处相遇时，即可发生沉淀反应，因形成的抗原抗体复合物为大于凝胶孔径的颗粒，不能在凝胶中再扩散，就在凝胶中形成肉眼可见的沉淀带，称此试验为琼脂凝胶扩散试验。

2. 琼脂扩散分四类（图11-3）:单向单扩散单向双扩散双向单扩散双向双扩散。

（1）双向单扩散又称辐射扩散应用：传染病的诊断，如鸡马立克氏病的诊断。

（2）双向双扩散应用最广泛应用：细菌、病毒的鉴定和传染病的诊断。

如检测口蹄疫、马立克氏病、禽流感、传染性法氏囊病的琼脂扩散方法。

双扩散用于检测抗体（图11-4）琼脂扩散四种基本类型（据陆承双扩散用于检测抗体（据陆承平）优点：在琼脂扩散的基础上，提高了反应速度、反应灵敏度和分辨率。

在临床上应用比较广泛的有对流免疫电泳和火箭免疫电泳等。

平）（三）免疫电泳的免疫检测技术。

免疫电泳技术是把凝胶扩散试验与电泳技术相结合1.对流免疫电泳（图11-5）是将双向双扩散与电泳技术相结合的免疫检测技术。

用于多种传染病的快速诊断。

如口蹄疫、猪传染性水疱病等病毒病的诊断。

病毒滴度测定

病毒滴度测定有很多名词都用来描述病毒溶液的滴度。

1． VP（病毒颗粒）或OPV（光学颗粒单位）2． GTU（基因转移单位）或转导颗粒（BFU即蓝点形成单位，与GTU类似）3． PFU（空斑形成单位）4． TCID50（50%组织培养感染剂量）不同的概念缘于不同的滴度测定方法，这些方法包括2类：物理方法（VP）和生物学方法（GTU、PFU、TCID50）。

1．测定VP的方法是测定病毒颗粒在260nm处的吸光度（病毒DNA和蛋白的总吸光度中主要为DNA），1个OD值相当于1.1×1012个病毒颗粒。

用这种方法进行测定在各个实验室中都较为稳定，但它不能区分感染性和缺陷性病毒颗粒。

因此这种方法只能提供病毒的量，至于质，比如是否含有缺陷性颗粒则没有考虑在内。

2． GTU则测定感染后能表达报告基因的细胞数量。

这个过程中，病毒将DNA转入细胞，在一个感染周期结束前立即测定表达报告基因的细胞。

如果重组腺病毒含有报告基因如GFP 或LacZ等则可以用这种方法进行测定，病毒保存液通常不用这种方法来进行描述。

3． PFU是测定腺病毒滴度最早的标准方法，主要测定单层细胞培养中病毒裂解空斑的形成。

空斑形成需要许多个感染周期，得到最终结果通常需要三个星期。

一般来说，这种方法得到的结果很少能在其它实验室重复，即使在同一实验室内，不同技术员操作也很少能得到相同的结果。

4． TCID50已被用于测定许多种病毒的滴度，但以前并不用于腺病毒。

病毒稀释液与细胞在96孔板进行培养，然后监测每孔是否CPE。

TCID50方法相对PFU方法而言有几个优点，如速度是PFU的2倍，结果更具预料性，在不同操作个体间也更稳定。

所有生物学方法所得到的结果在不同实验室之间往往有所差异，它主要与病毒感染方法有关。

许多因素如加入的病毒储存液的量、管子的类型、培养的时间、细胞和培养液的量等都会影响结果。

最近，出现了两种测定病毒滴度的改良方法。

一种是用更小体积的病毒液进行感染并在感染过程中不断晃动培养板（Mittereoler等，1996）；另一种方法则在感染时将培养板进行离心（1000 RCF90分钟）（Nyberg-Hoffman等，1997）。

TCID50与moi值的计算.doc

实验四病毒感染力的滴定（TCID的测定）50一、实验目的了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。

二、测定病毒感染力的方法( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测半数致死量LD50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测半数鸡胚感染量EID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞半数细胞培养物感染量TCID50来检测蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液（PRV）的操作步骤四、TCID501、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。

2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100µl。

3、在每孔加入细胞悬液100µl，使细胞量达到2~3×105个/ml。

4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。

（100µl生长液+100µl细胞悬液）5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。

6、结果的计算，按Reed-Muench两氏法或Karber法的计算方法五、TCID501、Reed-Muench两氏法CPE：Cytopathic effect距离比例＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数）＝（91.6-50）/（91.6-40）＝ 0.8lgTCID=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数50=0.8×(-1)+(-3)=-3.8=10-3.8/0.1mlTCID50含义：将该病毒稀释103.8接种100µl可使50%的细胞发生病变。

TCID50与moi值的计算.doc

实验四病毒感染力的滴定（TCID的测定）50一、实验目的了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。

二、测定病毒感染力的方法( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测半数致死量LD50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测半数鸡胚感染量EID50（50% tissue culture infective dose)：用细胞半数细胞培养物感染量TCID50来检测蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液（PRV）的操作步骤四、TCID501、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。

2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100µl。

3、在每孔加入细胞悬液100µl，使细胞量达到2~3×105个/ml。

4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。

（100µl生长液+100µl细胞悬液）5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。

6、结果的计算，按Reed-Muench两氏法或Karber法的计算方法五、TCID501、Reed-Muench两氏法CPE：Cytopathic effect距离比例＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数）＝（91.6-50）/（91.6-40）＝ 0.8lgTCID=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数50=0.8×(-1)+(-3)=-3.8=10-3.8/0.1mlTCID50含义：将该病毒稀释103.8接种100µl可使50%的细胞发生病变。

TCID50与moi值的计算

实验四病毒感染力的滴定（TCID的测定）50一、实验目的了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。

二、测定病毒感染力的方法( 50% lethal dose)：用动物或鸡胚来检测半数致死量LD50(egg 50% infective dose)：用鸡胚来检测半数鸡胚感染量EID50（50% tissue culture infective dose)：用细半数细胞培养物感染量TCID50胞来检测蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）：用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液（PRV）的操作步骤四、TCID501、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。

2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100µl。

3、在每孔加入细胞悬液100µl，使细胞量达到2~3×105个/ml。

4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。

（100µl生长液+100µl细胞悬液）5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。

6、结果的计算，按Reed-Muench 两氏法或Karber 法五、TCID 50的计算方法 1、Reed-Muench 两氏法CPE ：Cytopathic effect距离比例＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数）＝（91.6-50）/（91.6-40）＝ 0.8lgTCID 50=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数 =0.8×(-1)+(-3) =-3.8 TCID 50=10-3.8/0.1ml含义：将该病毒稀释103.8接种100µl 可使50%的细胞发生病变。