乳酸菌镜检方法及显微镜使用方法

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乳酸菌镜检方法及显微镜使用方法

・・…最新资料整理推荐……乳酸菌精简方法及显微镜使用方法第一部分：乳酸菌镜检可以釆用革兰氏染色方法。

第二部分：使用显微镜的油镜进行镜检，下面是具体的染色方法和镜检方法，请参考。

第一部分：乳酸菌革兰氏染色方法1目的在乳酸菌发放之前，利用标准的革兰氏染色法对即将发放的乳酸菌悬液或乳酸菌样品进行检测，观察乳酸菌乳酸菌在显微镜下的形态。

2原理通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。

3实验用品准备：灭菌玻片、10-lOOul移液器、10-100U1灭菌移液吸头、100ul-1000ul移液器、100ul-1000ul移液吸头、接种环、酒精灯、打火机、革兰氏染色液、吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸、计时器4操作：1涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液枪吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央，用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。

2干燥:将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。

3固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次，共约2-3秒种，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过60°C）,放置待冷后，进行染色。

4初染：在涂片薄膜上滴加草酸鞍结晶紫1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约Imino5水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。

乳酸菌的检验(9-10)

基座
能污染的细菌；也经常应用于食品加工、包装、
橡皮塞
发酵等生产过程中环境空气的除菌，而且本法也最为经济、效率亦高。
3

乳酸菌的检验操作
• 莫匹罗星锂盐（抗生素）如何灭菌？
漏斗
在实验室，过滤除菌主要用于一些不耐高温灭菌的物质如血清、酶溶液、维生素、抗生
素及药液的除菌。实验室中用于除菌的微孔滤
滤膜
膜孔径一般为0.22µm或0.45µm。在食品工业，过滤除菌广泛应用于饮料厂、
多孔玻璃板糖厂、酒厂，以除去水质、粗糖液、贮酒中可
----干热灭菌160-170℃ 1-2h
平皿可以用牛皮纸或双层报纸包扎成捆，或放入金属筒内再灭菌。
在吸管粗头顶端约 0.5cm处，塞上一小段棉花，后用45cm宽的报纸将其包好。
内部框架带盖外筒
电热恒温干燥箱
3
乳酸菌的检验操作
培养基、生理盐水
-----湿热灭菌121 ℃ 15-30min
乳酸菌的检验
专业名称：食品药品监督管理课程名称：食品微生物检测技术
3
乳酸菌的检验操作
任务一仪器试剂准备 • 小组内讨论根据检验流程，小组确定准备的试剂种类
和量，所需仪器名称及用量。（20min小组内完成） • 小组间讨论确定
任务二仪器试剂灭菌实施，仪器试剂准备灭菌
器皿3
乳酸菌的检验操作

乳酸菌鉴定

都要求无菌操作菌种的分离取lmL卤汁以10倍递增稀释方法（一份酸奶，九份无菌水，再取一份第一只管中溶液，加九份无菌水，依次类推），将其稀释至1/10～10的-10次幂（我打不上去），然后从不同浓度稀释液中分别取lmL倾注在平皿中，再倒入培养基相混合，待培养基凝固后倒置于30~C 恒温下培养48h。

挑取长势良好的单个茵落划线分纯，直至纯化(茵落单个大小一致，革兰氏染色镜检，茵体一致)。

结果分离得到3株不同菌株，分别编号为菌株1、菌株2、菌株3。

再分别转移到试管斜面上进行保存。

分离用培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1 000 mL，琼脂20g，pH7．0—7．2；保存用斜面培养基：酵母膏1％，碳酸钙2％，葡萄糖1％，琼脂2％，pH 7．0。

培养条件将分离出的菌株1、菌株2、菌株3分别接种在上述4种不同的培养基上，在30℃恒温条件下培养48h后观察并测定其培养结果。

测定方法菌落总数采用逐级稀释法来计数；pH值用pHS一2C酸度计测定；乳酸定性及含量测定依据食品检验技术1I．2．1乳酸菌的分离与筛选的试验程序自然发酵酸菜汁液一稀释一培养一挑起单菌落染色、镜检一挑选革兰氏阳性球菌单菌落一Ⅲ号培养基一挑选溶钙圈大的球菌反复在Ⅲ号培养基上几次纯化筛选一单菌落优良菌株一试管穿刺低温保存。

1．2 1．2 乳酸菌的鉴定用光学显微镜、放大镜进行乳酸菌的形态特征鉴定。

生理生化特征鉴定：产乳酸定性试验——乳酸纸层析法0- 、过氧化氢酶(接触酶)反应⋯、明胶水解反应、硫化氢反应、乳酸菌发酵营养型试验0 、耐盐、酸、温度试验。

1．2．I．3 乳酸菌的保存⋯采用定期移植低温保藏法。

培养基配方：葡萄糖1％、蛋白胨0 2％、l(}l2PQ|0．2％、琼脂20％、pH值7 0，分装试管，121。

c灭菌30min。

将使用对数生长期后期的细胞进行穿刺培养，然后密封存于冰箱玲藏室内(5qc左右)，2个月移植1次。

1．2．2 分离乳酸菌的生理特点试验1 2 2．1 最适生长温度的测定OD值以同温下不接种培养基作对照，定期取出接种培养基在721分光光度计上，用最大吸收光波长=6001RIifl测定。

关于乳酸菌检验操作规范培训课件

▪ 1．链球菌属的形态特征 ▪ 细胞呈球形或卵圆形，成对或成链排列。革兰氏
染色阳性，无芽孢，一般不运动，不产生色素。
2．链球菌属的生物学特点
▪ 化能异养型，同型乳酸发酵产生右旋乳酸；兼性厌氧型，接触酶反应阴性，厌氧培养生长良好。
3．链球菌属的代表种
▪ 嗜热链球菌（St.thermophilus） ▪ 细胞形态呈链球状。 ▪ 能利用葡萄糖、果糖、乳糖和蔗糖进行发酵产生乳
生D－型乳酸（有酸涩味，适口性差），不能利用蔗糖。
▪ 该菌是乳酸菌中产酸能力最强的菌种。 ▪ 蛋白质分解力较弱，发酵乳中可产生香味物质
乙醛。 ▪ 最适生长温度37～45℃，温度高于50℃或低于
20℃不生长。 ▪ 常作为发酵酸奶的生产菌。
3.2嗜酸乳杆菌（L.acidophilus）
▪ 细胞形态比保加利亚乳杆菌小，呈细长杆状，能利用葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖进行同型乳酸发酵产生乳酸。
7.0，不耐酸，酸性环境（pH≤5.பைடு நூலகம்）对菌体存活不利。
3、代表种
▪ 人体肠道中共有8种，其中数量最多的5种为： ▪ 两歧双歧杆菌（B.bifidum） ▪ 婴儿双歧杆菌（B.infantis） ▪ 青春双歧杆菌（B.adolescentis） ▪ 长双歧杆菌（B.longum） ▪ 短双歧杆菌(B.breve)
▪ 最适生长温度37℃，20℃以下不生长，耐热性差。蛋白质分解力较弱。
▪ 最适生长pH 5.5～6.0，耐酸性强，能在其它乳酸菌不能生长的酸性环境中生长繁殖。
▪ 嗜酸乳杆菌是能够在人体肠道定殖的少数有益微生物菌群之一，其代谢产物有机酸和抗菌物质— 乳杆菌素可抑制病原菌和腐败菌的生长。
（二）链球菌属（Streptococcus）

乳酸菌的鉴定

乳酸菌的鉴定
1.革兰氏染色
对分离所得的菌株进行革兰氏染色
（1）制片：将一小滴水滴于载玻片中央，挑取一个菌落于水滴中，涂匀后将载玻片通过火焰2-3次后进行干燥、固定；
（2）初染：干燥、固定后，于载玻片上滴加草酸铵结晶紫，使其完全覆盖菌体，约1-2 min后，水洗载玻片至流出液完全无色；
（3）媒染：于载玻片上滴加碘液覆盖菌体约1 min左右，水洗载玻片至流出液完全无色；
（4）脱色：用滤纸将载玻片上的水吸干后，用95%的酒精滴洗约20-30 s，立即用水冲洗；
（5）复染：用滤纸将载玻片上的水吸干后，用番红复染2 min，水洗后晾干；（6）镜检：用擦镜纸擦拭油镜后，将载玻片置于100倍油镜下，滴加香柏油，观察，红色即为革兰氏阴性菌，紫色即为革兰氏阳性菌。

我们选革兰氏阳性菌。

革兰氏阳性菌。

乳酸菌鉴定方法

乳酸菌鉴定方法嘿，你问乳酸菌的鉴定方法哈。

那我们得先从形态学方面入手。

把含有乳酸菌的样本放在显微镜下观察。

乳酸菌的形状有点特别，大多数是杆状或者球状的。

就像一个个小卫士，在微观世界里排着队。

你可以看看它们的大小，一般都比较小，得仔细观察才能看清它们的模样。

有的乳酸菌还会连在一起，像一串串小珠子似的。

再说说菌落特征。

把乳酸菌接种到固体培养基上，让它们生长繁殖。

过一段时间后，你会看到培养基上长出了一个个小菌落。

乳酸菌的菌落通常比较小，而且表面光滑、湿润。

有点像小小的露珠落在培养基上。

颜色一般是白色或者乳白色的，看起来很干净。

接着讲讲生化反应鉴定。

乳酸菌能发酵一些糖类，比如葡萄糖、乳糖等。

我们可以通过检测它们发酵糖类产生的产物来鉴定。

比如检测有没有产生乳酸，因为乳酸菌的名字可不是白叫的，它们可是产乳酸的能手。

可以用一些化学试剂来检测，要是试剂变色了，那就说明产生了乳酸。

还有一个方法是通过分子生物学技术来鉴定。

这就有点像用高科技手段来识别乳酸菌。

提取乳酸菌的DNA，然后用特定的引物进行PCR 扩增。

就像给乳酸菌的DNA 做个标记，这样就能准确地知道是不是乳酸菌了。

我给你讲个事儿哈。

在一家做酸奶的工厂里，他们很关心酸奶里的乳酸菌。

有一次，他们怀疑酸奶里的乳酸菌有点问题，就开始进行鉴定。

先把酸奶样品放在显微镜下看，发现有很多球状的小东西，看着像是乳酸菌。

然后把样品接种到培养基上，长出了好多小菌落，菌落的特征和乳酸菌的很像。

接着他们又做了生化反应测试，发现这些菌确实能发酵乳糖产生乳酸。

最后还不放心，又用分子生物学技术验证了一下，确定就是乳酸菌。

这样他们就放心了，知道自己的酸奶里有足够的、正宗的乳酸菌。

在鉴定乳酸菌的时候，每一个方法都很重要。

就像我们认识一个人，要从不同的方面去了解。

不能只看外表，还得看看他的行为、习惯等。

鉴定乳酸菌也是一样，综合运用这些方法，才能准确地鉴定出乳酸菌。

而且操作过程要仔细，不能马虎，不然就可能得出错误的结论。

显微镜观察乳酸菌实验步骤

显微镜观察乳酸菌实验步骤以显微镜观察乳酸菌实验步骤为标题，本文将介绍通过显微镜观察乳酸菌的实验步骤。

一、实验准备1. 准备所需材料：显微镜、玻璃载片、盖玻片、显微镜玻片夹、无菌培养基、无菌培养皿、无菌的移液管和吸管等。

2. 消毒操作台面和所使用的实验器材，保持无菌状态。

3. 根据实验需要，准备培养基并进行无菌检测。

二、制备乳酸菌样品1. 选择适当的乳酸菌菌株，如Lactobacillus acidophilus。

2. 从培养基中取少量乳酸菌菌液，转移到一个无菌的试管中。

3. 将试管放入低温冰箱中保存，以便后续的实验操作。

三、制备显微镜载片1. 取一张无菌的玻璃载片，将其用火焰消毒或酒精擦拭消毒。

2. 用无菌的移液管吸取少量乳酸菌菌液，滴在玻璃载片上。

3. 用另一张无菌的盖玻片将菌液封闭在载片上，避免空气污染。

四、显微镜观察1. 将制备好的显微镜载片放在显微镜平台上。

2. 调节显微镜的倍率，选择适当的增大倍率，以便更清晰地观察乳酸菌。

3. 通过显微镜镜头转动调节焦距，使乳酸菌图像变得清晰。

4. 用目镜观察显微镜载片，观察乳酸菌的形态特征，如大小、形状、颜色等。

5. 可以调整显微镜的光源，以获得最佳的观察效果。

6. 可以用显微镜配备的相机或手机拍摄乳酸菌的图像，以便后续的研究和分析。

五、实验注意事项1. 所有操作必须在无菌条件下进行，以避免外部细菌的污染。

2. 在观察前，要检查显微镜是否正常工作，并调整好焦距和光源。

3. 操作过程中，要避免在显微镜载片上产生气泡，以免影响观察效果。

4. 操作结束后，及时清洗和消毒所使用的实验器材，以防止细菌的残留。

通过以上实验步骤，我们可以使用显微镜观察乳酸菌的形态特征，了解其大小、形状和颜色等信息。

这对于乳酸菌的研究和应用具有重要意义，可以为相关领域的科研和产品开发提供参考。

同时，本实验也要求严格的无菌操作和实验技巧，以保证实验结果的准确性和可靠性。

通过实验观察，我们可以更好地了解乳酸菌的微观结构和特征，为乳酸菌的应用提供科学依据。

乳酸菌检测方法

一、乳酸菌检测方法植物乳杆菌的检验1原理植物乳杆菌能在相应的厌氧培养条件下，于MRS培养基表面生长成白色、细密、圆形光滑突起的菌落，根据长出的菌落数和稀释倍数，计算出活菌数。

2仪器与试药2.1 仪器超净工作台、高压蒸汽灭菌器、恒温干燥箱、电冰箱、恒温培养箱（60℃±1℃）、恒温水浴锅、显微镜（10x—100x）、架盘天平（0—500g，精确至0.5g）、250ml锥形瓶、250ml 盐水瓶、灭菌吸管：1ml(具0.01ml刻度）、10ml(具0.1ml刻度）、灭菌平皿（直径90mm）、灭菌试管（15mm×160mm）、灭菌L型玻璃棒等。

2.2 试药酪蛋白胨、牛肉浸膏、酵母提取物、琼脂等均为生化试剂；无水乙酸钠、柠檬酸三胺、硫酸镁、硫酸锰、葡萄糖、磷酸氢二钾、碳酸钙、吐温-80、氯化钠等均为分析纯；水为双蒸馏水，其他化学试剂均为分析纯。

2.3 MRS琼脂培养基的组成与制备2.3.1培养基的组成酪蛋白胨10g、牛肉浸膏10g、酵母提取物5g、葡萄糖20g、无水乙酸钠5g、柠檬酸三胺3g、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.2g、磷酸氢二钾2.0g、碳酸钙20g、吐温-801ml、琼脂15g、蒸馏水1000ml。

2.3.2培养基制备将上述的各组分在80～90℃加热使溶解，校正pH6.2，加蒸馏水至1000ml中，摇匀，分装于盐水瓶，每瓶100ml。

在121℃高压灭菌20分钟，冷却后备用。

2.4营养琼脂平板的制备取冷至45℃左右的MCA琼脂培养基，在无菌的条件下倒入无菌的培养皿中，每平皿各约15ml，待冷却凝固后，备用。

2.5无菌生理盐水的制备称取氯化钠9.0g，用蒸馏水溶解并定容于1000ml量瓶中，摇匀，分装于250ml三角瓶中，每瓶装90ml. 在121℃高压灭菌20分钟，冷却后备用。

3供试品溶液的制备以无菌操作法取检品10.0g，加入盛有90ml无菌生理盐的三角瓶中，充分振荡10分钟，制成1﹕10样品悬液。

乳酸菌分离鉴定及试验方法

乳酸菌分离鉴定及试验方法一、引言乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，具有重要的生物学功能和应用价值。

乳酸菌可以通过发酵作用，将葡萄糖、果糖等碳源转化为乳酸和其他有机酸，同时还会产生一些对人体有益的物质，如维生素、酶、抗生素等。

乳酸菌在食品工业、医药工业、农业等领域具有重要的应用前景。

乳酸菌的分离鉴定及试验方法对于深入研究乳酸菌菌种的特性、功能以及在不同领域中的应用具有重要意义。

本文将介绍乳酸菌的分离鉴定及试验方法，旨在为相关研究人员提供参考和指导。

二、乳酸菌分离方法1. 采样乳酸菌的分离首先需要进行采样工作。

可以从发酵食品、乳制品、蔬菜、水果、土壤、肠道等多种来源进行采样。

在采样过程中应注意样品的新鲜性和卫生性，避免外部污染对实验结果造成影响。

2. 培养基的选择乳酸菌可以利用多种培养基进行分离和培养，常用的培养基有MRS培养基、乳清培养基等。

根据具体的分离目的和需求选择适合的培养基。

3. 分离将采样得到的样品进行系列稀释，取适量的稀释液均匀涂布在含有适当培养基的琼脂平板上，培养温度一般在30-37摄氏度之间，培养时间约48-72小时。

4. 纯化观察培养基上的菌落形态，选择典型的菌落进行分离单菌培养，通过多次传代稀释可以纯化获得纯种的乳酸菌。

5. 形态观察利用显微镜对分离得到的菌株进行形态学观察，包括细胞形状、大小、排列方式等。

三、乳酸菌鉴定方法1. 生理生化鉴定通过对分离得到的菌株进行生理生化特性的研究，包括乳酸发酵能力、氧耐受性、温度、pH值的适应能力等，可以初步判断乳酸菌的种属。

2. 生化试剂法利用生化试剂对乳酸菌进行鉴定，如气体发生试验、氧化还原酶试验、酶活性试验等。

3. 分子生物学鉴定通过PCR扩增乳酸菌的16S rRNA基因序列，测序后与数据库比对，确定乳酸菌的种属分类。

四、乳酸菌试验方法1. 发酵活性测定通过测定菌株在不同条件下的发酵活性，如发酵速率、产酸速率、产酶能力等。

2. 抗菌活性测定测定乳酸菌对一些有害菌的抑菌作用，判断其在抗菌方面的潜力。

实验一乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验

引言概述：乳酸菌饮料是一种富含乳酸菌的食品，乳酸菌在食品工业中广泛应用于酸奶、乳饮料等产品中。

本文将详细介绍乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验方法。

正文内容：一、样品采集和制备1.确定样品采集时机：乳酸菌饮料中的乳酸菌数量会随着储存时间的增加而增加或减少，因此需要在存储时间稳定的情况下进行采集。

2.采集样品方法：使用无菌技术采集样品，避免外部微生物的污染。

3.样品制备：将采集到的样品进行均匀搅拌，以保证样品的均匀性。

二、总菌数检验方法1.琼脂平板法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，在琼脂平板上涂布，经过一定孵育时间后，根据菌落的数量计算总菌数。

2.膜过滤法：将样品通过膜过滤器过滤，将过滤后的膜放置在琼脂平板上孵育，根据菌落的数量计算总菌数。

三、乳酸菌检验方法1.培养基选择：根据乳酸菌的生长特性选择适合的培养基，常见的培养基有MRS培养基、LBS培养基等。

2.乳酸菌的分离：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，均匀涂布在选定的培养基上。

经过一定孵育时间后，可以观察到乳酸菌形成的菌落。

3.鉴定乳酸菌：使用形态学观察、生理生化试验和分子生物学方法等进行乳酸菌的鉴定。

四、活菌数检验方法1.孵育培养基法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，均匀涂布在含有乳酸菌生长所需营养物质的培养基上。

经过一定孵育时间后，观察活菌的生长情况，计算活菌数。

2.阻碍培养基法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，与含有抑制剂的培养基混合。

通过观察生长情况，计算活菌数。

五、质量指标评价方法1.pH值测定：使用pH计或试纸对乳酸菌饮料中的pH值进行测定，根据标准范围评价产品的质量。

2.乳酸浓度测定：使用乳酸测定仪器或化学试剂对乳酸菌饮料中的乳酸浓度进行测定，根据标准范围评价产品的质量。

3.品尝评价：通过专业的品尝人员进行品尝评价，评估乳酸菌饮料的口感和风味。

总结：乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验方法包括样品采集和制备、总菌数检验、乳酸菌检验、活菌数检验和质量指标评价方法。

乳酸菌检验方法

河北世翔生物有限公司乳酸菌检验方法前言1.本检验方法针对公司各种形式（固态、液态）的乳酸菌菌微生物添加剂；2.本标准的制定依据GBT 23181-2008 、SNT 1941.1-2007、GB 478935-2010等国家标准制定；3.本标准由研发部起草，经公司总经理批准，公布之日起实施。

一、检验前的准备1.培养基及其试剂1.1盛有若干玻璃珠的无菌水225ml，1.2MRS琼脂培养基：牛肉膏10g蛋白胨10g酵母膏5g121℃，灭菌15-20min1.3培养皿12个，试管12个，涂布棒1个，用报纸包扎后灭菌1.4打开超净工作台，用消毒水或者酒精喷洒，工作台台面，打开紫外灯杀菌30分钟，打开风机，5分钟后，打开照明二、取样按照GB/T14699.1进行取样：用灭菌的铲子，选取有代表性的样品适量放入取样袋中，标注好取样日期，批次备用；液体取样使用灭菌的试管，在火焰保护下进行，完成后放入低温冰箱储藏。

三、检测步骤1. 以无菌操作称取试样25g（ml），加入225ml有玻璃珠的无菌水中，放在摇床上，200r/min，摇动30min，制成1：10的初始菌悬浮液。

取1：10的初始菌悬浮液0.5ml，加入4.5ml无菌水，经充分混匀后，制成1：100的稀释液。

依次方法依次稀释到1：1082.选择107 、108 二个稀释度，用移液枪分别吸取0.1ml，接种到3个营养琼脂平板上，使用涂布棒尽可能小心快速地涂布接种液于琼脂表面，涂布棒不得接触平皿边缘，涂布好的平皿改好，置室温中放置15min使接种物完全被琼脂吸收。

翻转上述平皿置于36±1℃培养箱中培养48±2h。

从样品稀释到涂布完成要求在15分钟内完成。

3.培养后，选取菌落数在30到300个之间的平板计数，低于30 CFU 平板记录具体菌落数，大于300 CFU 的可记录为多不可计。

每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。

若平板中有较大片状菌落生长时，则不宜计数；若片状菌落步不到平板的一半，而其余一半分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。

酸奶中细菌的显微镜观察实训报告

一、实验目的1. 熟练掌握显微镜的基本操作方法。

2. 了解酸奶中细菌的基本形态和结构。

3. 通过显微镜观察，学会对细菌进行初步分类。

4. 培养无菌操作和实验记录的能力。

二、实验原理酸奶是通过乳酸菌对牛奶中的乳糖进行发酵，产生乳酸，从而降低牛奶的pH值，使牛奶凝固成凝乳状态的一种乳制品。

乳酸菌属于革兰氏阳性菌，其主要形态为杆状或球菌状。

通过显微镜观察酸奶中的细菌，可以了解其形态、结构以及生长状态。

三、实验材料与仪器实验材料：1. 新鲜酸奶2. 革兰氏染色液3. 染色载玻片4. 酒精5. 稀释液实验仪器：1. 显微镜2. 显微镜载物台3. 显微镜物镜4. 显微镜目镜5. 显微镜油镜四、实验步骤1. 样品制备- 取适量新鲜酸奶，用无菌操作将其涂布在载玻片上。

- 将载玻片放置于空气中晾干。

2. 染色- 将涂有酸奶的载玻片放入革兰氏染色液中，染色约1分钟。

- 用水冲洗载玻片，去除多余的染色液。

- 将载玻片放入95%酒精中脱色约30秒。

- 再次用水冲洗载玻片，去除酒精。

- 将载玻片放入番红染液中复染约1分钟。

- 再次用水冲洗载玻片，去除多余的染色液。

3. 观察- 将载玻片放置于显微镜载物台上，用低倍镜观察酸奶中的细菌。

- 调整焦距，使细菌清晰可见。

- 将显微镜转换至高倍镜，观察细菌的形态和结构。

4. 记录- 记录观察到的细菌形态、结构以及生长状态。

- 对观察到的细菌进行初步分类。

五、实验结果与分析通过显微镜观察，发现酸奶中的细菌主要为革兰氏阳性菌，其形态和结构如下：1. 形态- 细菌呈杆状，部分呈球菌状。

- 细菌大小不一，有的较长，有的较短。

2. 结构- 细菌细胞壁较厚，细胞质呈均匀分布。

- 细菌无鞭毛、无荚膜、无芽孢。

3. 生长状态- 细菌生长旺盛，繁殖速度快。

根据观察结果，初步判断酸奶中的细菌为乳酸菌，其作用是将牛奶中的乳糖发酵成乳酸，使牛奶凝固成凝乳状态。

六、实验总结1. 本实验通过显微镜观察酸奶中的细菌，了解了乳酸菌的基本形态和结构。

乳酸菌检验的方法要点

乳酸菌检验的方法要点乳酸菌不是分类学上的名称，它是指一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳糖产生乳酸、需氧和兼性厌氧、多数无动力、过氧化氢酶阴性、革兰氏阳性的无芽孢杆菌和球菌。

这类细菌在自然界分布广泛，可栖居在人和各种动物的口腔、肠道等器官内，在土壤、食品、饲料、水及一些临床标本中都有乳酸菌的存在。

乳酸菌在工业、农业和医药等与人类生活密切相关的领域应用价值很高，相当多的乳酸菌对人、畜的健康起着有益的作用，但个别菌种能对人畜致病，乳酸菌主要包括23个属的细菌。

乳酸菌的检测流程：1、乳酸菌悬液的制备：将待检测的样品，准确称取0.5克，量取99.5mL无菌生理盐水稀释，（此次稀释了200倍，即0.5克样品，稀释到了100克水溶液），再加入灭菌玻璃珠20～30粒于250mL三角瓶中，置于振荡器或摇床上剧烈摇晃30分钟以上，目的是将粘连在一起的乳酸菌细胞打散从而分散开来。

2、稀释到适当倍数：根据所待检测的样品可能的乳酸菌含量，进行适当的稀释操作，例如如果估计样品的含乳酸菌活菌数为200亿/克左右，则建议稀释2亿倍，这样将来在90mm平板上培养时会长出大约100个乳酸菌落，比较便于计数，总之控制平板培养皿上的乳酸菌落数量在30～300个的范围内，比较便于计数。

3、倒制平板即“接种”：倒制平板在超净工作台上进行，养殖户可使用一盏简单的酒精灯和一个干净的操作台就可操作。

即事先配制好并灭菌处理的检测用琼脂培养基，在水浴锅内保持50℃的温度，使琼脂培养基呈溶解状态，置于操作台旁边备用。

（养殖户可先不从压力锅中取出，在压力锅维持一定的温度，从而也不会凝固。

）取事先干热灭菌处理后的90mm培养皿（也叫平板）若干、1mL移液管若干，置于操作台上备用。

（养殖户的培养皿平板可在压力锅中进行蒸汽灭菌处理。

）在无菌条件下（打开超净工作台无菌风，或养殖户点上酒精灯），将稀释了2亿倍的乳酸菌液，用移液管移取1mL，于培养皿中，再在此培养皿中倒入前述保持溶解状态的检测培养基液15mL左右（倒培养基时，估计能覆盖满平皿的液体量即可），然后，盖好培养皿盖，轻轻转动平皿，原地转几圈，使培养基液与乳酸菌液混合均匀，等数分钟后，待培养基凝固后，可移入培养箱中进行培养；4、在培养箱中进行培养：将前面倒制好的平板倒转（即盖子在下面），放于培养箱中于33℃温度下培养2～3天，待培养皿平板中长出比较明显的带有透明圈的菌落时，即可进行计数得出检测结果。

乳酸菌的检测

乳酸菌是指一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸，需氧和兼性厌氧，多数无动力，过氧化氢酶阴性，革兰氏阳性的无芽胞杆菌和球菌。

这类细菌在自然界分布广泛，可栖居在人和各种动物的口腔、肠道等器官内，在土壤、食品、饲料、水及一些临床标本中都有乳酸菌的存在。

二样本采集检样主要为含乳酸菌活菌的饮料和微生态制剂，样本应放入冰箱保存，心快检验。

三检验方法（中华人民共和国国家标准乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验GB／T 16347-1996）乳酸菌菌总数的测定：乳酸菌菌落总数是指标样在一定条件下培养后，所得1ml检样中所含乳酸菌菌落的总数。

（一）检验程序乳酸菌菌落总数检验程序如下：（二）培养基和试剂改良TJA培养基（改良番茄汁琼脂培养基）；改良MC培养基（modified Chalmers培养基）；0.1％亚甲蓝牛乳培养基；6.5％氯化钠肉汤参照；pH9.6葡萄糖肉汤；40％胆汁肉汤；淀粉水解培养基；精氨酸水解培养基；乳酸杆菌糖发酵管；七叶苷培养基；革兰氏染色液；3％过氧化氢溶液；蛋白胨水、靛基质试剂；明胶培养基；硝酸盐培养基、硝酸盐试剂；生理盐水：定量分装于三角瓶和试管内灭菌。

（三）操作步骤1．以无菌操作将经过充分摇匀的检样25ml（或25g）放入含有225ml灭菌生理盐水的来菌广口瓶内做成1：10的均匀稀释液。

2．用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1m，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液）。

3．另取1ml灭菌吸管，按上述操作顺序，作10倍增稀释液，如此每递增一次，即换用1支1ml灭菌吸管。

4．选择2～3个以上适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。

乳酸菌检测国标方法

乳酸菌检测国标方法乳酸菌检测方法1 适用范围本方法适用于清谷田园食品有限公司系列产品及原料中的乳酸菌的检测。

2 设备和仪器2.1 恒温培养箱：36±1℃2.2 天平：感量为0.01g2.3 无菌吸管：1 ml、2ml、10ml2.4 无菌锥形瓶：500ml2.5 无菌培养皿：直径为90mm2.6 无菌试管：18×180mm2.9 酒精灯2.10 立式蒸汽压力灭菌器2.11 超净工作台2.12 厌氧缸3试剂3.1 无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。

3.2 MRS（Man Rogosa Sharpe）培养基3.2.1 成分蛋白胨 10.0g牛肉粉 5.0g酵母粉 4.0g葡萄糖 20.0g吐温80 1.0mLK2HPO4.7H2O 2.0g醋酸钠.3H2O 5.0g柠檬酸三铵 2.0gMnSO4.7H2O 0.2gMnSO4.4H2O 0.05g琼脂粉 15g3.2.2制法：将上述成分加于1000mL蒸馏水中，调节PH至6.2±0.2，加热煮沸溶解，分装于锥形瓶中，在121℃高压灭菌15-20min。

3.3莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）和半胱氨酸盐酸盐改良 MRS 培养基：3.3.1 莫匹罗星锂盐储备液制备：称取50mg莫匹罗星锂盐加入到50 mL蒸馏水中，用0.22 mm微孔滤膜过滤除菌。

3.3.2 半胱氨酸盐酸盐储备液制备：称取250mg莫匹罗星锂盐加入到50 mL 蒸馏水中，用0.22 mm微孔滤膜过滤除菌。

3.3.3 制法将A.1.1 成分加入到950 mL蒸馏水中，加热溶解，调节pH，分装后121 ℃高压灭菌15 min～20 min。

临用时加热熔化琼脂，在水浴中冷至48 ℃，用带有0.22 mm微孔滤膜的注射器将莫匹罗星锂盐储备液及半胱氨酸盐酸盐储备液制备加入到熔化琼脂中，使培养基中莫匹罗星锂盐的浓度为50 mg/mL，半胱氨酸盐酸盐的浓度为500 mg/mL。

乳酸菌检验操作规程

乳酸菌检验操作规程1、感官性状：取本品适量，置于非太阳光直射条件下的明亮处，目视检测，应为白色至淡黄色粉状固体，无发霉、结块。

2、水分：精密称取本品5.0g，置于经105℃烘干至恒重的扁形称量瓶中，在105℃条件下干燥至恒重，计算减失重量的百分率，应≤8.0%。

3、粒度：称取供试品100g，置于40目标准筛中，手动振筛10分钟，称取筛上物质量，应能100%通过40目筛。

4、目标菌数：4.1、试剂和培养基4.1.1、稀释液：0.85%生理盐水经121℃高压灭菌30分钟；取0.85%灭菌生理盐水9ml，置于具塞离心管中，密封，经121℃高压灭菌30分钟。

4.1.2、MRS培养基：称取蛋白胨10.0g、牛肉膏5.0g、酵母粉4.0g、葡萄糖20.0g、吐温80-1.0ml、七水磷酸氢二钾2.0g、三水醋酸钠5.0g、柠檬酸三铵2.0g、七水硫酸镁0.2g、四水硫酸锰0.05g、琼脂粉15.0g，将除琼脂粉的上述各组分置于1000ml纯化水中，加热搅拌使溶解，调pH值为7.0±0.1，加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液2.0ml，摇匀，分装于预置琼脂粉的锥形瓶中，密封，经115℃高压灭菌30分钟，在无菌条件下注入灭菌后的平皿中，每个平皿约注入15ml培养基。

4.2、检测方法：在无菌条件下操作，固体中间产品取样10.0g，置于含90ml灭菌稀释液的锥形瓶中，其中置玻璃珠数颗，超声处理2分钟，振摇使样品完全分散于溶液中，即为1:10的稀释液；移液器或灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml，置于含灭菌稀释剂9ml的离心管（或试管）中，密封，摇匀；按上述稀释次序递次稀释至适宜的稀释倍数；取2-3个适宜稀释倍数离心管，用移液器或灭菌吸管吸取0.1ml，接种至经37℃预培养24小时的MRS培养基平皿上，每个浓度接种两个以上平皿，使用灭菌后的L形涂布棒小心涂布接种液于培养基表面，涂布好的平皿盖好后室温静置15分钟，密封并倒置平皿于37±1℃培养箱中培养48小时观察。

乳酸菌实验报告

乳酸菌的分离与培养保加利亚乳杆菌组长：王小英组员：王小英郑春玲阙小琴柳洁实验目的： 1.学习并掌握普通光学显微镜油镜的使用技术及微生物形态观察；2.学习微生物制片、染色的基本技术，掌握乳酸菌的简单染色法及无菌操作接种技术；3.通过对培养基的配制，了解配制培养基的一般步骤和方法，掌握微生物实验常用的器皿的清洗与包扎、培养基的制备、消毒灭菌。

4.了解各种灭菌的基本原理和应用范围，以及实验室中常用的灭菌方法。

5.了解酸奶中乳酸菌分离原理, 观察乳酸菌的基本形态,掌握用显微镜测微尺测量微生物细胞大小、数目的测定的方法。

6.了解稀释平板计数的原理，熟练掌握混合平板培养法。

明确显微镜计数的原理并学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。

7．初步学会乳酸菌培养的基本技术，了解并掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理和方法，掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。

8.了解并掌握微生物菌种保藏的常用方法及其优缺点，并了解不同微生物对不同的生物大分子的分解利用情况，认识微生物代谢类型的多样性。

实验原理：乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称，本实验中用革兰氏染色法进行染色，革兰氏染色法是根据细菌细胞壁成分不同,脱色效果不同从而可以将细菌区分为G+和G-菌。

通过革兰氏染色以及形态学观察，乳酸菌呈紫色，为革兰氏阳性菌；乳酸菌应为乳杆菌和乳球菌的混合体。

酸奶中含有乳酸菌，而且目前市场上销售的酸奶中通常含有双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌四种菌。

细菌及其它一些微生物的大小，通常用测微计来测量，测微计分接目测微计与镜台测微计；培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组份的营养物质调制而成的营养基质；灭菌是用物理或化学的方法来杀死或除去物品上或环境中的所有微生物，包括芽孢；自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物的特性或者要大量培养或者使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这些获得纯培养的方法称为微生物的分离和纯化。

乳酸菌分离鉴定及试验方法

乳酸菌分离鉴定及试验方法
乳酸菌的分离鉴定主要包括以下步骤：
1. 菌落筛选：根据菌落的颜色、大小、光泽度和透明程度，挑取含溶钙圈的单菌落。

2. 分离纯化：在MRS或Elliker固体培养基上反复划线分离，直到分离到纯的单一菌落。

3. 革兰氏染色：镜检观察菌体颜色、大小、形状和排列方式。

4. 过氧化氢酶实验：将革兰氏染色阳性、过氧化氢酶阴性的菌株初步认定为乳酸菌。

5. 保藏：用终浓度为25%甘油冻存管进行菌株的保藏，置于-80℃冰箱中保存备用。

乳酸菌的试验方法主要包括以下步骤：
1. 耐酸性优良菌株筛选试验：将分离纯化的乳酸菌和实验室耐酸性较好的WHH544接种到MRS液体培养基中，接种量为2%，于37℃培养箱中培养24小时，连续活化2代后，以6000r/min离心10分钟，弃去上清液，沉淀菌体用灭菌生理盐水洗涤、离心2次后，通过麦氏比浊法调整菌悬液浓度为×108CFU/mL。

2. 其他试验：根据具体研究需求进行相关试验，例如通过不同条件培养，观察菌株生长情况；或通过发酵实验，测定乳酸菌的产酸能力等。

以上内容仅供参考，建议查阅专业微生物学书籍或文献获取更全面和准确的信息。

发酵乳酸中霉菌和酵母菌的检测

（8）无菌平皿：直径90mm。
（9）恒温水浴箱：46℃±1℃。
（10）显微镜：10倍至100倍。
（11）微量移液器及吸头：1.0mL。
（12）折光仪。
（13）郝氏计测玻片：具有标准计测室的特质玻片。
（14）盖玻片。
（15）测微器：具有标准刻度的玻片。
2．培养基和试剂
实
验准
马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基
1.霉菌和酵母菌菌落的鉴别
技能点（菌落计数）
2.计数方法
技
能
计数范围：10CFU—150CFU
点（
用肉眼观察，必要时可用放大镜或低倍镜，记录稀释倍数和相应的霉菌菌落数和酵
菌
母菌菌落数，以CFU表示。
落
选取菌落数在10～150CFU的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母菌。霉菌蔓
一般呈短链或长链状排列，为无芽孢的革兰氏阳性菌，兼性厌氧。链球菌属发酵葡萄糖的主要产物是乳酸，但不产气。链球菌属触酶阴性，通常溶血；生长温度为25～45℃，最适温度为37℃。
应用于发酵乳制品生产的双歧杆菌属仅有5种，即两歧双歧杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和青春双歧杆菌，它们都存在于人的肠道内。
乳制品生产与控制
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备
孟加拉红培养基
磷酸盐缓冲溶液
生理盐水二、样品制备来自制备10倍稀释系列样品匀液
技
能点
1.以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL无菌稀释液（蒸馏水或生理盐水或磷酸
（
盐缓冲液）的适宜容器内（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）或无菌均质袋中，
样
充分振摇或用拍击式均质器拍打1～2min，制成1∶10的样品匀液。
三、倾注培养