中药指纹图谱
中药指纹图谱的原理与应用
气相色谱(GC)以气体为流动相，对于含挥发性 成分中药的鉴别具有一定优势。由于裂解气相 色谱具有操作简便、样品无须化学前处理、提 供信息量大等优点而格外引人注目。该方法将 样品故人裂解器内，在一定的条件下将样品加 热使其瞬间裂解，生成可挥发性的小分子物质， 立即被载气带人气相色谱系统的分析柱上，分 离后得到具有指纹性质的裂解气相色谱图。如 果将气相色谱与质谱、傅立叶变换红外光谱联 用，则不但可以知道不同中药中挥发性成分的 差别，而且可以对这些成分进行鉴定。
高速逆流色谱指纹图谱(HSCCC fingerprintspectrum， 即调整逆流色谱法) HSCCC利用动态液-液分配原理分 离样品，其分离度和重现性与HPLC类似，但样品前处 理简单。具体地说它是一种基于液-液多级逆流萃取建 立的色谱体系，以轻巧的聚四氟乙烯螺旋管作分离柱，
在行星式运动中连续地完成整个分配、传递、分离过
中药指纹图谱，即中药身份证，主要指中 药化学指纹图谱，实际上是一种保证中药质量 的措施，是指对某种中药材或中成药等运用现 代分离分析科学的手段，得到能够标示该中药 的色谱或光谱的图谱，最终用来对中药质量评 价的科学性方式。它有两个显著特点，一是通 过指纹图谱的特征性，能有效鉴别样品的真伪 或产地。二是通过指纹图谱主要特征峰的面积 或比例的制定，能有效控制产品的质量，确保 产品质量的相对一致。
对这种中药材的分子遗传标记的研究，找到具有该种高度特异性
的片段，便可以此为基础，制备出对该种高度特异性的寡核苷酸 探针，再经分子杂交进行指纹分析，即可达到鉴别目的。DNA指 纹图具有高度的个体特异性。DNA指纹图谱技术包括AP-PCR(arb itrary primer PCR，任意引物聚合酶链式反应)和RAPD(随机扩增 多态性DNA，randomly amplified polymorphic DNA)两种指纹图谱 技术。RFLP (限制性[内切酶]片段长度多态性，restriction fragment length polymorphism)是最常用的构建DNA指纹图的方法，但该法 费时费力，使应用受到限制。随机扩增多态DNA(RAPD)标记，可 以在特异DNA序列尚不清楚的情况下，检测DNA的多态性，这是
第五章指纹图谱
S1 S2 S3 S4 S5 对照指纹图谱
1.000 0.997 0.995 0.995 0.997 0.998
0.997 1.000 0.998 0.997 0.996 0.999
0.995 0.998 1.000 0.998 0.991 0.999
0.995 0.997 0.998 1.000 0.990 0.999
♦ 液相色谱 ● 色谱柱：比较试验加以选择
流动相：至少用三种不同组成比较
流动相 1
流动相 2
流动相 3
适宜的柱温和检测波长
15 203
20
210
25
236
30
254
35
365
五、方法学验证
1. 稳定性试验
供试品溶液的稳定性
表3 川芎指纹图谱稳定性试验相似度计算结果（n=5）
对照指纹图谱 S1 S2 S3 S4 S5
红外光谱图
小蓟丁酮提取物的红外 指纹图谱
• 中国药典规定：小 蓟在开花时采。 • 根据1384cm-1处 吸收峰的有无，可 以鉴别其采集时间 是否正确。
质谱（ＭＳ）
• 按照带电粒子的质荷比（ｍ／ｚ）和其相 对丰度大小排列组成图谱。 • 中药特征提取物置质谱仪中进行轰击裂解 为不同的碎片，获得提取物中化学成分的 MS图，不同中药由于所含化学成分的种类 及组成比例的不同，所得质谱图中分子离 子峰和碎片离子峰亦不一致。
HPCE, CE/MS 光谱技术 UV IR
波谱技术 MS NMR X-射线衍射法 分子生物学技术
薄层色谱
●可在同板同时分析多达18个样品， ●展距局限在 10cm~20cm ，‘柱效’ 时效高 相对较低，对复杂组分 ●所用的是正相展开剂，其组成变 不提高分离度则难以提 化灵活，可适应多种成分的分离 取指纹特征的药材受到 限制。 ●离线操作，即可直观比较图谱， 又可扫描得到轮廓图和处理数据 ●开放系统，对环境温 度、相对湿度要求较高 ●占机时间短
中药、天然提取药物指纹图谱相关法规指南
中药、天然提取药物指纹图谱相关法规指南一、研究背景中药为多组分复杂体系，化学成分的多样性和复杂性是其发挥疗效的物质基础，同时也是质量评价和控制的重点和难点。
目前，中药指纹图谱作为一种基于中药化学成分信息，综合的、可量化的鉴别手段，经过多年的发展和应用，已成为国际公认的最适合天然药物、中成药质量控制的手段之一。
《国家药品标准技术规范》中规定，中药指纹图谱系指中药经适当处理后，采用一定的分析方法得到的能够体现中药整体特性的图谱。
目的在于反映中药多成分作用特点，整体控制中药质量，确保其内在质量的均一、稳定。
根据质量控制目的，可分为指纹图谱和特征图谱。
指纹图谱是基于图谱的整体信息，用于中药质量的整体评价。
特征图谱是选取图谱中某些重要的特征信息，作为控制中药质量的重要鉴别手段。
二、中药指纹图谱相关法规指南1. FDA（美国食品药品监督管理局）2016年12月颁布的Botanical Drug Development Guidance for Industry指出，在对植物药品的临床研究申请(Investigational New Drug, IND)中的化学、生产和控制(Chemical, Manufacture, Control, CMC)部分对植物原料(Botanical Raw Material)、植物药中间体(Botanical Drug Substance)和植物药产品(Botanical Drug Product)均要求提供指纹图谱(Fingerprint)，尤其是色谱指纹图谱。
2. WHO（世界卫生组织）2017年，首先颁布了《植物药中草药来源标记物选择指南》(WHO guidelines for selecting marker substances of herbal origin for quality control of herbal medicines)，提出当药效成分和相关药理学未知时，推荐借助色谱指纹图谱，进行植物药的鉴别以及含量测定方法的建立。
中药指纹图谱
指纹图谱分析：强调准确的辨认，而不是精密的计算。 图谱比较：强调的是相似性，而不是相同。 特点： (1)通过指纹图谱的特征性，能有效鉴别中药的真伪。 (2)通过指纹图谱主要特征峰的面积和比例的制定，能
有效控制中药质量，保证中药质量的相对稳定。
4.逐步建立其它类中药制剂，中药复方制剂的指纹图谱。
在国外，指纹图谱在ＦＤＡ植物药产品工业指南 （2000年草案稿）、ＷＨＯ草药评价指南（1996年）以及 英国草药典（1986）、印度草药典（1998）、美国草药典 （1999-2001，Monographs）中均将其列入。目的是解决 多数草药有效成分不明，市场商品无法有效鉴别真伪和控 制质量的问题。要求草药制剂生产商提供半成品的指纹图 谱以保证品种的真实性和产品的指纹图谱以证明其批间产 品质量的一致和稳定。
2.2.530391 2.718 3.607
4.711 5.452
6.446 7.982
200
150
100
50
11.116 12.600
0
0
2.5
5
7.5
10
12.5
15
17.5
DAD1A, Sig=270,4Ref=off (YYHZWTP\YYHZWTP000028.D)
mAU
200
175
150
2.利用指纹图谱手段表征中药注射剂的特性，表达成品的质 量，以达到控制工艺操作和原药材的目的，利用指纹图谱 追寻工艺操作中的问题和实现对原药材GAP的质量要求。
3.通过对大量注射剂的指纹图谱研究，建立系统的测定方法 和全面的指标控制参数，寻找一定的数学模型，最终达到 指纹图谱的可操作，可控，稳定，显性和量化的目的，提 高整个中药注射剂的质量控制水平。
中药指纹图谱概述
中药指纹图谱概述中国科学院兰州分院甘肃省天然药物重点实验室邸多隆中药与化学药品的根本区别在于，存在于中药中的任何一种活性成分均不能反映中医用药所体现的整体疗效。
运用先进的现代分析分离手段，将复杂的天然产物分析的越细，目标越缩小，可能离中药整体疗效的距离越远。
中医药理论和实践的非线性特点要求综合评价中药的质量。
中药的化学分析由分解、微观分析向宏观、综合分析发展将成为必然的趋势，色谱指纹图谱分析是对中药及其制剂进行宏观分析的可行手段。
在充分利用现代分离分析仪器对复杂的中药多组分体系进行分离检测和表征的同时，结合化学计量学和计算机技术，最大限度地从中抽取不同特性样本中的化学信息，以整体的、宏观的、模糊的概念表达中药的特性，是指纹图谱独具有的优势。
实现中药现代化首先要解决的问题是中药的现代化标准，即中药可控、可量化的问题，解决这一问题的有效手段便是建立中药的指纹图谱。
一、指纹图谱的涵义广义的指纹图谱包括DNA指纹图谱、波谱指纹图谱和色谱指纹图谱。
常见的指纹图谱主要指波谱或色谱指纹图谱：即采用一定的方法（如HPLC，GC，TLC，HPLC-MS，GC-MS，FTIR，X-ray，UV等），建立特定对象如中药材、提取物、饮片、中药注射液等的有特征性的相对稳定的图谱，所得到的图谱可以作为鉴别和质量控制的参照依据。
这种指纹图谱强调的是“共有特征性”，属狭义的指纹图谱范畴，也属化学指纹图谱，是研究的主要对象。
二、中药指纹图谱的提出中药学是一门历史悠久的传统学科，中药是几千年来我国人民赖以防病治病的重要药物。
随着应用面的日益扩大，许多药材已面临供不应求的状况。
面对这种情况，中药市场出现了混乱，混淆品种、伪劣药材以及人为掺杂时有出现。
如平贝充川贝，棉花根充黄芪，海马中灌水泥、石灰，金银花中掺盐等等，不一而足。
因此，如何区分真伪优劣，保证药品质量已成燃眉之急。
在中药分析和研究中发现，植物药是多种化学成分的混合体，其活性成分大部分都是生物体内次生代谢产物，少数为初生代谢产物，药材本身就有它内在的不稳定性，再加上现阶段的中药农业基本不规范现状，如种植粗放，品种资源、栽培地域以及收获时节混乱，农药和化肥残留等问题的普遍存在，造成中药材生产、质量的波动性较大，难以保证中药质量稳定、疗效可靠。
中药指纹图谱(课件)
分离效果好
GC利用气体作为流动相，能够实现中药中挥发性成分的快速、 有效分离。
分析速度快
GC分析周期短，适用于中药中大量样品的快速分析。
灵敏度高
GC检测器灵敏度高，能够检测到中药中微量的挥发性成分。
薄层色谱法（TLC）
操作简便
TLC操作简便易行，无需特殊设备，适用于中药指纹图谱的初步 分析。
分离效果好
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色谱柱选择
根据中药样品的成分特点，选择合适的色谱柱类 型及规格，确保各成分在色谱柱上得到良好的分 离。
流动相选择
根据样品的溶解性和色谱柱的特性，选择合适的 流动相组成及比例，以获得良好的色谱峰形和分 离效果。
色谱条件优化
通过调整流动相的流速、柱温等色谱条件，进一 步优化色谱分离效果，提高指纹图谱的准确性和 稳定性。
03
常见中药指纹图谱类型及 特点
高效液相色谱法（HPLC）
分离效能高
重复性好
HPLC采用高效微粒固定相，能够实现 中药复杂体系中各组分的有效分离。
HPLC方法稳定可靠，重复性好，能够 满足中药指纹图谱的批量化分析需求。
灵敏度高
采用高灵敏度的检测器，能够检测到 中药中微量甚至痕量的有效成分。
气相色谱法（GC）
指导工艺改进
根据生产工艺稳定性评 价结果，可以指导工艺 改进和优化，提高生产 效率和产品质量。
05
中药指纹图谱在真伪鉴别 中应用
伪品识别与防范策略
伪品定义及危害
阐述伪品概念，分析伪品对 中药市场及患者用药安全造 成的严重影响。
常见伪品类型
列举常见的中药伪品，如以 次充好、掺杂使假、品种混 淆等。
中药指纹图谱
现阶段色谱指纹图谱的Байду номын сангаас用
• 在新药研究开发过程中，指纹图谱作用如下： 在新药研究开发过程中，指纹图谱作用如下： 原料药材的筛选 指导生产工艺的研究：考察原料、半成品、 指导生产工艺的研究：考察原料、半成品、 原料 成品的质量相关性 相关性、 成品的质量相关性、均一性和稳定性
现阶段色谱指纹图谱的作用
指纹图谱的产生
• 中国 年代开始研究化学计量学、模式识别 中国80年代开始研究化学计量学、 年代开始研究化学计量学 等 • 微量元素分析 • 80～90年代首先在薄层色谱扫描图中研究多 ～ 年代首先在薄层色谱扫描图中研究多 个斑点、斑点大小应用于药材、 个斑点、斑点大小应用于药材、中成药分析
指纹图谱的产生
指纹图谱的方法学验证
• 目的：证明采用的方法能保证指纹图 目的： 谱的整体特征， 谱的整体特征，适用于中药指纹图谱 检测的要求
指纹图谱的方法学验证
• （一）专属性：建立的中药指纹图谱能够表 专属性： 达该品种的特征，即具唯一性。 达该品种的特征，即具唯一性。 • 专属性试验：如有同属近缘品种应进行比较 专属性试验： 试验和观察，找出相互之间的区别。 试验和观察，找出相互之间的区别。 • 并分别进行试剂、辅料、药材（或原料）空 并分别进行试剂、辅料、药材（或原料） 白试验，证明指纹图谱没有干扰， 白试验，证明指纹图谱没有干扰，如某些辅 料或溶剂等成分无法除去， 料或溶剂等成分无法除去，在指纹图谱中应 予以标明。 予以标明。
• 半成品（中间体）指纹图谱的建立
优化和细化生产工艺的各技术环节和参数, 优化和细化生产工艺的各技术环节和参数, 对固定工艺条件加以说明 供试品溶液制备合理 应建立中间体与药材、中间体与成品具直 应建立中间体与药材、中间体与成品具直 接相关的色谱指纹图谱 接相关的色谱指纹图谱
中药指纹图谱相似度评价方法的比较
中药指纹图谱相似度评价方法的比较一、本文概述中药指纹图谱作为一种全面、综合地反映中药内在质量的技术手段，已经在中药质量控制、真伪鉴别以及新药研发等领域得到了广泛应用。
指纹图谱相似度评价则是评估中药指纹图谱质量、稳定性的重要指标，其评价方法的优劣直接关系到中药质量评价的准确性。
本文旨在对现有的中药指纹图谱相似度评价方法进行比较分析，探讨各种方法的优缺点，以期为提高中药质量控制水平提供理论支持和实践指导。
本文将首先介绍中药指纹图谱相似度评价的基本概念和研究意义，然后重点阐述几种常用的相似度评价方法，包括夹角余弦法、相关系数法、谱峰匹配法等。
在此基础上，本文将通过对比分析这些方法的计算原理、适用范围、优缺点等方面，为读者提供一个全面、深入的相似度评价方法比较视角。
本文将展望中药指纹图谱相似度评价方法的未来发展趋势，以期为推动中药现代化、国际化进程提供有益参考。
二、中药指纹图谱相似度评价方法概述中药指纹图谱相似度评价是中药质量控制领域的一个重要研究方向，旨在通过科学、客观的方法来评估中药的内在质量。
随着现代分析技术的不断发展，越来越多的相似度评价方法被应用于中药指纹图谱的研究中。
这些方法大致可以分为以下几类：谱图直观比较法：这是最简单直接的相似度评价方法，通过直接观察指纹图谱的峰形、峰位和峰强度等信息，对中药样品进行直观的比较和判断。
这种方法简单易行，但主观性较强，容易受到观察者的经验和技能影响。
相似度计算法：这类方法通过数学公式或算法，对中药指纹图谱进行量化分析，从而得出样品间的相似度。
常用的相似度计算法包括相关系数法、夹角余弦法、欧氏距离法等。
这些方法具有客观性强、结果可重复等优点，但也需要选择合适的计算参数和阈值。
模式识别法：模式识别技术，如人工神经网络、聚类分析、主成分分析等，也被广泛应用于中药指纹图谱的相似度评价中。
这些方法能够通过学习和训练，自动识别指纹图谱中的特征信息，并对中药样品进行分类和识别。
指纹图谱
＊选择试验方法及试验条件须根据供试品的特 点和需要设计合适的试验方案，在保证专属 性、重现性的前提下，宜选择简单、实用、 便于实施的方法和试验条件。
＊色谱中的参照峰由于作用不同于含量测定， 提高其分离度应以不牺牲色谱泊整体特征为 前提，所以不应孤立地苛求分离度必需达到 含量测定的要求。
中药材指纹图谱 质量控制及仪器方法
江苏省中医药研究院 钱大玮 段金廒
一、中药材指纹图谱的基本含义
定义：中药材指纹图谱是指某种(或某产地） 中药材中所共有的，具有特征性的某类 或几类成分的色谱或光谱的图谱。
特点：(1)通过指纹图谱的特征性,能有效鉴 别样品的真伪；
(2)通过指纹图谱主要特征峰的面积和比 例的制定，能有效控制样品质量，保证 样品质量的相对稳定。
2 应用实例
图9 黄连TLC指纹图谱
（六）高效毛细管电泳（HPCE）指纹图谱
1. 仪器简介
仪器装置通常包括高压电源、进样系统、 毛细管柱、检测器和记录系统5部分,其中毛细管 柱是分离的核心部分。
2. 应用实例
图 10 天麻及其伪品HPCE图 a天麻水提液 b天花粉水提液 c黄精水提液 d 商陆水提液e大九股牛水提液
（九）质谱（ MS）指纹图谱
将中药提取液置质谱仪中进行电子轰击 电离，可获得提取液中化学成分的MS图，不 同中药提取液所含成分不同，所得质谱图显 示的分子离子峰及进一步的裂解碎片峰亦不 一致，可资鉴别。但质谱法对提取液中主要 成分的含量要求较高，实验费用亦较大，能 否作为常用的检测方法尚待继续探索。
版一部119页红花项下的各项规定。
中药技术现代化技术-指纹图谱
02
发展新型检测技术和仪器
研发更精确、更灵敏的检测方法和仪器，满足指纹图谱需求。
03
强化传统理念与现代技术融合
在传承中药理念的基础上，运用现代技术手段，推动中药指纹图谱的发
展。
未来发展趋势预测
技术不断创新
随着科技的进步，中药指纹图谱技术将不断创新，提高准确性和 可靠性。
应用范围扩大
中药指纹图谱将逐渐应用于更多领域，如药品质量控制、新药研 发等。
指导。
中药生产过程监控
指纹图谱技术可以实时监控中 药生产过程中的关键环节，确 保生产过程的稳定性和可控性。
通过对生产过程中指纹图谱的 变化分析，可以及时发现生产 过程中的异常情况，避免生产 事故的发生。
指纹图谱技术还可以应用于中 药生产过程的优化和改进，提 高生产效率和产品质量。
中药疗效评价与机理研究
的快速筛选和鉴定。
03 中药指纹图谱建立方法与 流程
样品选择与制备
01
选择具有代表性的中药样品，确 保其能够反映该中药的整体质量 特性。
02
对样品进行适当的制备处理，如 粉碎、提取、浓缩等，以获得符 合指纹图谱分析要求的样品。
数据采集与处理
采用高效、灵敏的现代分析仪器，如 色谱仪、光谱仪等，对中药样品进行 全面的化学成分分析。
面临挑战
技术标准化难度大
中药成分复杂，不同药材、不同批次间存在差异，制定统一标准 面临挑战。
检测方法与仪器限制
现有检测方法和仪器精度、灵敏度等方面可能无法满足指纹图谱要 求。
传统理念与现代技术融合
如何将传统中药理念与现代技术相结合，是中药指纹图谱面临的重 要问题。
解决方案探讨
01
加强标准化建设
中药指纹图谱操作技巧指南
中药指纹图谱操作指南说明：本实验研究规程指南为在原技术要求的基础上规范中药注射剂色谱指纹图谱试验研究而制订。
本指南未能概括的内容，通过实践可自行补充调整，但申报资料或复核资料中须有相应的说明和申述。
指南中的"色谱指纹图谱"指采用柱色谱及薄层色谱等各种色谱技术实验研究的指纹图谱。
光谱指纹图谱将另行规定。
一、供试品收集供试品收集是研究指纹图谱最初也是最关键的步骤，由于不可能对一个药材的所有样本进行试验，而且生长环境条件对药材代谢产物有影响，所以要收集有代表性的供试品。
收集不少于10批供试品的含义是指样本的数和量要有足够的代表性。
(一) 原料药材：在药材的化学成分与中医临床疗效的之间的关联尚未能阐明的现阶段，基本上是在承认其传统的功能主治及临床验证的基础上进行指纹图谱的实验研究。
原料药材的指纹图谱主要是反映其自然状态的内在质量情况，研究其指纹图谱是以此作为选择原药材投料或混批提取的依据，同时作为研究注射剂成品指纹图谱相关性的基础。
由于自然条件的变化，药材个体之间指纹图谱的差异是正常的，在品种鉴定无误的基础上，力争药材有较为固定和稳定的来源，个体之间的指纹图谱主要特征大致相似即可，使成品指纹图谱特征的稳定有起码的保证。
药材的"批" 不是工业生产的"批"，是指相互独立的供试品，即不能将同一地点或同一渠道同一时间获得的供试品分成若干份供试品，以保证试验结果的代表性。
由于收集药材供试品受主观和客观的条件限制，供试验的供试品严格讲均没有统计学的意义，所以供试品数越多越好，10批是最低的要求。
供试品应保证其真实性，应有完整采样原始记录，内容包括：药材名称供试品来源（真实记录供试品来自何处：传统产地收集或是资源丰富的产地收集，或者来自GAP基地供应；还是产地购买、市场购买或委托购买，等，以便于生产原料的采购选择和测试数据的可追溯）。
收集时间（购买时间）及收集人货源情况调查（货源是否充足和稳定）基原鉴定及鉴定人：产地或GAP基地收集的药材结合植物形态鉴定品种。
中药指纹图谱研究
（二）起草说明
• 目的在于说明制定指纹图谱检测标准中各个项
目的理由，规定各项目指标的依据、技术条件
和注意事项等。
• 既要有理论解释，又要有实践工作的总结及试 验数据。
二．中药材指纹图谱研究的 一般方法
• 主要介绍与中药（新药）注射剂指纹图 谱技术申报要求有关的研究内容
样品收集
• 为了确保指纹谱的系统性，必须进行具 有广泛代表性的样品收集，尤其是不同 产地、不同采收期及加工方式的样品的 收集，只有保证了样品的代表性，才能 保证建立的指纹谱的有效性。
（一）指纹图谱的检测标准
1）通过指纹图谱的特征性，能有效 鉴别样品的真伪或产地； 2）通过指纹图谱主要特征峰的面积 或比例的制定，能有效控制样品的 质量，确保样品质量的相对稳定。
2．中药材指纹图谱的定义：
• 中药材指纹图谱系指中药材经适当 处理后，采用一定的分析手段，得到的 能够标示该中药材特性的共有峰的图谱。 • 如果原药材需经过特殊炮制（如醋 制、酒制、炒炭等），则应制定原药材 和炮制品指纹图谱的检测标准。
（三）中药指纹图谱建立的 意义与原则
• 建立于中药成分的系统研究结果之上的指 纹图谱，是现阶段可以全面的反映中药的内在 质量的一个有效手段。世界公认，中药化学成 分的多样性与复杂性是发挥其疗效的物质基础， 同时也是质量评价的重点与难点。 • 中药药效的发挥，不能为一个或一种化学 成分所体现，那么，建立全面反映所含成分的 指纹图谱， 有效地体现中药成分的复杂性，从 而更好地评价中药的质量，中药指纹图谱必将 成为中药质量评价的发展趋势。
中药指纹图谱
capillary electrophoresis
中药指纹图谱
薄层色谱（TLC） • 定义 • 原理 • 特点
中药指纹图谱
色谱法的基本原理
利用混合物中各组分在某一 物质中的吸附或溶解性能的不同， 或和其它亲和作用性能的差异， 使混合物的溶液流经该种物质， 进行反复的吸附或分配等作用， 从而将各组份分开。
中药指纹图谱
2020/11/7
中药指纹图谱
目录
• 定义 • 研究意义 • 分析技术
• 数据分析 • 应用 • 前景
中药指纹图谱
定义
中药指纹图谱是指运用现代分析手 段对中药多维化学及其相关生物信 息以图形（图像）的方式进行表征 并加以描述。 分为三种：色谱指纹图谱，波谱指 纹图谱，生物指纹图谱
中药指纹图谱
中药指纹图谱
液相色谱仪工作流程图
中药指纹图谱
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ测器
• 功能 将被分析组在柱流出液中浓度的变化转
化为光学或电学信号； • 分类
①紫外吸收检测器 ②紫外一可见分光光度检测器 ③示差折光化学检测器 ④二极管阵列紫外检测器 ⑤荧光检测器 ⑥电化学检测器
中药指纹图谱
工作特点
优点:高压、高效、高灵敏度、分析速度快，
中药指纹图谱
工作特点
气相色谱法是一种在有机化学中对易挥发而 不发生分解的化合物进行分离与分析的色谱技 术。
气相色谱的典型用途包括测试某一特定化合 物的纯度与对混合物中的各组分进行分离，同 时测定各组分的相对含量。在微型化学实验中， 气相色谱可以用于从混合物中制备纯品。
中药指纹图谱
毛细管电泳（CE）
研究意义
作为有着悠久文明史的中药，其安全性、有效性 早已经过历史的验证。但中药的均一稳定性——即质 量可控的问题则是制约中药发展，走向国际市场的瓶 颈问题。
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§6-4 中药注射剂指纹图谱的技术要求
（一）指纹图谱的检测标准
1. 供试品的制备：选择适宜方法，使主要化学成分在图 谱中能再现。
2. 参照物的制备：根据供试品中所含化学成分的性质， 选择适宜的对照品或内标物作为参照物。
3. 测定方法：优选色谱方法，成分复杂的选用多种检测 方法，测定条件应固定 。
（二）指纹图谱与技术参数 1. 指纹图谱 ①HPLC、GC--记录时间1小时 ②TLCS—提供从原点到前沿的图谱 ③光谱法--全谱 ④成分复杂样品—建立多张指纹图谱 2. 共有峰的标定 ①根据10次以上结果标定共有峰； ②色谱法—采用相对保留时间（允许一定幅度范围）标定共有峰； ③光谱法--采用波长或波数等标定共有峰。
10. DNA：特异性强、稳定性好、微量便捷、准确。适 合于相近、易混品种及各种珍贵品种，特征性和专 属性最强、先进可行、稳定。
§6-3 中药指纹图谱建立的方法与步骤
1. 一般原则 ①系统性：指纹图谱中所反映的化学成分应包括该中药有 效部位所含大部分成分的种类，或指标性成分的全部。 ②特征性：指纹图谱中反映的化学成分信息（如保留时间） 应具有较强的选择性，这些信息的综合结果，将能特征地 区分中药真伪与优劣，成为中药自身的“化学条码”。 ③稳定性：指纹图谱在规定的方法、条件下的耐用程度， 以体现其通用性和实用性。
3.中药指纹图谱的意义
针对中药的作用特点—多成分、多用途、多靶点， 采用多种分析方法和技术进行多指标、客观的和整体 的综合评价研究，全面反映中药内在化学成分，对中 药材、中药制剂的规范化生产，对进一步研究中药的 作用机理、物质基础和量效关系，提高其质量都具有
重要意义。
§6-2 中药指纹图谱分类
1. TLC：比较TLC图谱或TLCS图谱，方法简便、快速、灵敏， 分析结果以直观的彩色图像表达是其独有特点，具有离线操作 灵活性适于推广应用。
2. HPLC：具有分离效能高、分析速度快及仪器化特点， 比较HPLC图谱的一致性，是中药指纹图谱研究广为应 用的方法之一。
3. GC：对不同产地、不同采收期的含挥发性成分中药材及其 成品进行气相色谱指纹图谱研究，可从整体上定性中药材及 其成品的品质。可靠。
4. HPCE：毛细管区带电泳（CZE）和胶束电动毛细管 电泳（MEKC）是最常用的两种模式，具有高分离效 率、高速、低耗的特点。
第六节 中药指纹图谱
前 言：
中药产业现代化的瓶颈是质量不可控!安全不可靠。后者 是指重金属!农药!微生物!化学物质的污染;前者虽然有中国药 典的质量标准模式和指标,但与国外的植物药药典一样,均是模 仿化学药品的质量控制模式,选定1,2个有效成分!活性成分或指 标成分进行鉴别和含量测定。然而这种以单一化学成分分析的 观点,导致人们力求把中药(天然药物)这一综合的复杂的“整体” 分解成便于观察和研究的简单“单元”或“分子”,以便于清 楚明确的研究。分析工作者沿着这条思路力求运用各种分析检 测手段测定某种有效成分，或某一活性成分含量的多少来判断 某种药材的质量,对复方制剂也以同样的观点和方法制订其质 量标准。
3. 共有指纹峰面积比值： ①以对照品为参照物：参照物面积为1，计算共有峰
与参照物峰面积比；
②以内标为参照物：共有峰中面积相对较大、较稳定 的一个峰为1，计算其它峰与其比值；
③共有峰面积相对固定，允许一定幅度。
4. 非共有峰面积：控制在一定范围内。
5. 中药材、有效部位、中间体和注射剂指纹图谱的相关性： 根据中药材、有效部位、中间体和注射剂的指纹图谱，标 定各指纹图谱之间的相关性
2. 样品的收集：具有代表性，不少于10批，提取共有息。
3. 样品的制备：选用适宜的溶剂和提取方法，尽量使其 成分较多地在指纹图谱中反映出来，并达到较好的分 离效果。
4. 条件的选择：根据分析试样中所含化学成分的理化性 质，选择适宜的测定方法。试验条件应能满足指纹图 谱的需要。
5.指纹图谱的建立和辨认：①直观比较；②计算量化参 数，比较相似度；③计算机处理。
§6-5 中药指纹图谱的应用、研究现状及发展趋 势
1. 中药指纹图谱的应用
①以指纹图谱作为控制方法已成为目前国际共识，美国食 品与药品管理局（FDA）、世界卫生组织（WHO）、 欧盟都已有相关规定，允许以指纹图谱证明产品质量。
②我国对中药注射剂也做出了必须检测指纹图谱的规定
2. 中药指纹图谱的研究现状
就目前而言，指纹图谱的研究还尚处于起步阶 段。虽然，经过数十年的研究和发展，中药包括中药 材，中药饮片，中成药等等均得到了大量研究，对于 其中物质的分离和成分测定积累了大量数据，在一定 程度上，为中药的整体性说明打下了较好的基础。不 过，从对中药全面质量控制的角度，还需要进一步深 入探讨。
3. 中药指纹图谱的发展趋势
5. UV：专属性差，适合成分简单的中药材及其制剂，也 可作为一种辅助手段。
6. IR：专属性强于UV法。
7. NMR：可以反映出有机分子中氢或碳的类型。与UV、 IR法比较，信息量大，重现性更好。
8.MS：要求样品供试液中主成分含量高，实验费用较大。
9. X-射线衍射：快速、简便、图谱稳定可靠，指纹性强。
实际上对于中医理论指导下的中药,尤其是复方制剂,任何 一种活性成分均不能反映中医用药所体现的整体疗效,这是中 药与化学合成药品质量标准的根本区别。所以宏观地综合分 析成为必然的发展趋势,事实上这也是在人类进入系统科学时 代以后,人们的科学认识观念更新,综合分析与整体分析成为分 析化学发展的必然的反映。在寻求综合评价中药质量的过程 中,值得注意的趋势是色谱指纹图(chromatographic fingerprint)的应用。近来此类研究和文章日益增多,因为它提 供的有关质量的综合信息比单一成分的含量要丰富和有用的 多。
§6-1 中药指纹图谱的概念、特点及意义
1.中药指纹图谱的概念 某种（或某产地）中药材或中药制剂经适当处理后，
采用一定的分析手段，得到的能够标示其特性的色谱或 光谱图。
2.中药指纹图谱的特点 ①一种综合的、可量化的鉴定手段； ②用于鉴别真伪、评价原药材、半成品及其制剂质
量的均一性和稳定性； ③基本指纹图谱的研究进行到一定阶段，得到 相对完备的指纹图谱数据，相对合理的数学模型后， 指纹图谱的研究就应进入研究的高级阶段了，即指纹 特征和药效相关性研究，指纹图谱的生物等效性研究。 采用多种分析仪器联用的模式，建立多维指纹图谱， 引入有效部位的概念，使中药的特征谱努力做到包括 化学和药效两方面的信息。