基因工程试题库

二、填空或选择填空题

1.给以下质粒载体pUC18/19划线处填上其中文含义。

2.在进行琼脂糖凝胶电泳时，DNA分子从电场的（正极；负极）向极泳动，超螺环型的质粒分子比其开环构

型泳动更（快；慢）。

3.观察琼脂糖凝胶中的DNA分子带，常常以染色后在光下观察其荧光。

4.碱性磷酸酶主要有和两种，作用于DNA分子将其5’磷酸基团水解除去。

5.反转录酶的酶学活性主要有；

和三种。

6.琼脂糖凝胶常用的浓度范围在%—%之间，相应可以分离Kb— Kb的DNA分子。

7.Southern吸印（Southern blot）是指针对分子的杂交；Northern吸印是针对⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽分子的杂交。

8.通常质粒载体可以克隆Kb的DNA片断；λ插入型载体可以克隆Kb的DNA片段；λ替换型载体可以克隆Kb的

DNA片段；Cosmid可以克隆Kb的DNA片断。

9.琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，要观察到DNA条带，应加入染色，它可以在⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽光照射下发射荧光。

10.在采用超速密度梯度分离纯化质粒DNA时，在溶液中加入，使得质粒的浮力密度（大、小、等）于基因组DNA

的浮力密度。

11.DNA自动测序将Sanger的双脱氧末端终止法与技术结合起来，使DNA测序摆脱了对大量单链模版的依赖。

12.DNA化学自动合成反应进行的方向与DNA酶催化合成的反应方向（一致；不同），是从（5’3’；3’5’）。

13.与T-DNA转移起重要作用的是其两端的各bp的重复序列及位于Ti质粒上编码与T-DNA转移有关蛋白的基因，而

与T-DNA上携带的基因关系不大。

14.从细菌中经小量制备的质粒分子经电泳分离后，同一种分子由于构型不同而常产生两条带纹，其中一条为构型，另一条为

构型，电泳迁移率前者（大、小、等）于后者。

15.λ载体在完成重组连接后，通过包装蛋白的离体包装形成噬菌体颗粒。在包装蛋白进行有效的包装时，要求DNA大小在Kb

之间，而且两端有两个位点。

16.大肠杆菌质粒的复制起始于一复制的原点，用表示，其复制是（单向；双向）进行，大肠杆菌基因组DNA复制

是（单向；双向）进行的。

17.通常的电泳条件下，琼脂糖凝胶可以有效分离Kb——Kb的分子，如果采用⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽电泳的方式，也可以分离更

大的DNA片断。

18.DNA的自动合成目前主要采用法，自端至端方向进行。

19.根据质粒在宿主中的拷贝数，细菌质粒可分为质粒和质粒。pUC质粒通过对复制原点进行突变，使其在

宿主中的拷贝数大大提高，因此它属

于质粒。

20.反转录酶可以以（RNA，ssDNA，dsDNA）和⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽（RNA，ssDNA，dsDNA）为模板合成DNA互补链，

同样也需要引物。

21.植物基因工程常用的报告基因有：、、、⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽⎽等。

22.构建基因文库时，要使文库具有完整性，文库的大小有N=Ln(1-P)/Ln[1-L/G]，说明文库的大小取决于；

和从中分离某一克隆片断的期望概率。

23.大肠杆菌DNA聚合酶I具有：；和三种主要酶学活性。而Klenow酶则失去了

活性。

24.在进行分子克隆时，质粒载体构建的重组分子通过方法进入细胞中扩增；而λ噬菌体重组体通过

方法进入细胞；粘粒载体重组分子通过方式进入细胞中扩增。

25.与真核生物所有染色体一样，维持YAC（酵母人工染色体）在酵母细胞中的稳定性，Y AC必须具有三个基本结构要素：分别

是；和。

26.用冷的CaCl2处理对数生长期的大肠杆菌细胞，可诱导细胞进入称为态的生理状态进行遗传转化。

27.构建cDNA文库时，要使文库具有完整性，文库的大小有N=Ln(1-P)/Ln[1-1/n]，说明文库的大小取决于和从中分离

某一克隆片断的期望概率。

三、问答题：

1．在进行α-互补筛选重组转化菌时，为什么要采用∆M15突变的大肠杆菌作为转化受体菌？

2．下图为pUC18质粒的结构简图，简述以pUC18为载体进行DNA片断克隆的全过程。

3．在细菌宿主中表达外源蛋白，为何强调对表达基因进行调控？利用乳糖操纵子是怎样对下游基因的表达进行控制的？

4．以λgt10构建的cDNA文库在扩增时，会出现混浊和清亮两种形式的噬斑，试解释这一现象的原理。

5．细菌对噬菌体的限制和修饰现象在分子水平是如何发生的？有何生物学意义？

6．简述PCR自动DNA测序的过程和原理。

7．要使一外源基因在大肠杆菌中表达出蛋白质产物，要经过哪些基因工程步骤？请逐步加以说明。

8．怎样检测转基因植物中外源基因的存在和表达情况？列举两种方法。

9．构建基因组文库时为什么要制备DNA随机片段？怎样制备DNA随机片段？

10．简述利用根癌农杆菌进行植物遗传转化时的主要步骤。

11．你了解的基因工程的主要工具酶有哪些，请一一阐述其作用。

12．什么是融合蛋白？为什么基因工程发酵生产外源蛋白时常以融合蛋白的形式生产出目标蛋白前体？

13．以λgt11构建cDNA文库，包装的噬菌体感染大肠杆菌后形成蓝色和无色的两种噬斑，试解释其原因。

14．进行DNA克隆时，外源DNA片段有哪些主要来源。如果你完成了一个特殊蛋白的氨基酸序列测定，怎样从其序列出发分离其相应的基因。

15．Lac UV 5 突变体启动子不依赖CAP的正调控，其在基因工程中运用有何优势？

16．简述PCR技术的原理和过程。

17．多种载体中都采用α-互补的方式筛选重组子，简述利用α-互补进行重组子筛选的过程和原理。

18．什么是表达型载体？为了方便进行克隆基因的表达以及表达产物的分离与纯化，在表达型载体上采用了那些设计？

19．获得转基因植物可以采用哪些方法？选择其中一种方法详细说明其操作的过程。

20．以下是pBR322的结构图，如果利用Pst I限制性酶克隆一外源DNA片断，怎样进行这一重组过程？怎样选择重组的转化菌？

21．说明Southern吸印（Southern blot）杂交的原理和方法。

22．如何从一个文库中筛选出携带目的基因的克隆？简述其过程。

23．如果DNA片断和载体间的粘性末端不能匹配，怎样实现这两种分子的重组连接？请提出至少两种方法。

24．经过PCR扩增获得了某一特定的DNA带，怎样利用T载体将其克隆下来？

25．什么是转基因动物？试简要阐述两种获得转基因动物的方法？

26．什么是cDNA文库？欲构建水稻花药cDNA文库，简述构建该cDNA文库的基本步骤。

27．根据基因工程法利用大肠杆菌表达外源蛋白药物的过程和特点，试设计基因工程生产胰岛素的过程？